Name: medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm
Uploaded: 2019-03-01T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Os autores gostaria de reconhecer o laboratório de Timo Strünker para supervisão de AR e DLE durante suas estadias em seu laboratório. Além disso, gostaríamos de agradecer aos nossos colegas do departamento de crescimento e reprodução, Hospital Universitário de Copenhaga, Rigshospitalet por sua ajuda com a criação destes dois ensaios. Este trabalho foi financiado por doações da Dinamarca fundo de inovação (concessão números 005-2010-3 e 4-14-2013).

A recolha e análise de amostras de sêmen humano nos protocolos segue as diretrizes do Comitê de ética de pesquisa da região Capital da Dinamarca. Todas as amostras de sêmen foram obtidas após consentimento informado de doadores voluntários. Após o parto, as amostras foram totalmente anónimos. Por sua inconveniência cada doador recebeu uma taxa de 500 coroas dinamarquesas (cerca US $75 dólares americanos) por amostra. As amostras foram analisadas no dia da entrega e então destruídas imediatamente após os ex...

A taxa de transferência média Ca2 + sinalização ensaio baseia-se em medições da fluorescência do único micropoços cada contendo cerca de 250.000 células de esperma. O sinal capturado é em média de todas as células de esperma individuais no poço. O ensaio fornece, portanto, que nenhuma informação espacial sobre onde especificamente na célula de esperma [Ca2 +] é alterada, como grandes numa proporção das células de esperma, uma mudança no [Ca2 +]i...

O objetivo dos dois ensaios aqui descritos é examinar efeitos na Ca2 +-reação do acrossoma e sinalização no esperma humano, como foi demonstrado por vários compostos em diversas publicações, empregando estes ensaios1,2, 3,4,5,6,7. CA2 +-sinalização e a reacção acrossómica são função da célula de esperma humano vital ao normal e a fertilidade masculina.
O objectivo geral de uma célula de esperma humano é para fecundar o óvulo. Para ser capaz de com êxito e, naturalmente, fecundar o óvulo, as funções da célula de esperma devem ser reguladas firmemente durante a viagem da célula de esperma através do trato reprodutivo feminino8,9. Muitas das funções de células de esperma são regulamentadas através do intracelular Ca2 +-concentração [Ca2 +]eu (por exemplo, esperma motilidade, quimiotaxia e acrossoma reação)10. Também, um processo de maturação chamado capacitação, o que torna a célula de esperma capaz de fertilizar o óvulo, é parcialmente regulamentado pelo [Ca2 +]eu10. CA2 +-extrusão de Ca2 +-ATPase bombas11 manter um Ca dobra aproximadamente 20.0002 +-gradiente ao longo da membrana da célula de esperma humano, com um descanso [Ca2 +]eu de 50-100 nM. Se Ca2 + é permitido atravessar a membrana celular (por exemplo, através da abertura de Ca2 +-canais), ocorre um afluxo considerável de Ca2 + , dando origem a uma altitude de [Ca2 +]eu. No entanto, o espermatozoide que carrega também intracelular Ca2 +-lojas, que podem liberar Ca2 + e, portanto, também dá-se uma elevação de [Ca2 +]i12. Curiosamente, todos mediada por canal Ca2 +-influxo em células de esperma humanas até agora foi encontrado para ocorrer através de CatSper (gatocanal iônico de Sperm), que só é expressa em células de esperma11. Nas células de esperma humanas, CatSper é ativado pela progesterona ligantes endógenos e prostaglandinas através de distinta ligand binding sites13,14,15, levando a uma rápida Ca2 +-afluxo em a célula de esperma. Duas fontes principais perto do ovo fornecem altos níveis destes ligantes endógenos. Um é o fluido folicular que contém altos níveis de progesterona16. O fluido folicular é liberado do folículo maduro juntamente com o óvulo na ovulação e se mistura com o fluido dentro os ovidutos17. A outra fonte principal é as células do cumulus que cercam o ovo e liberar a altos níveis de progesterona e prostaglandinas. A progesterona induzida por Ca2 +-influxo nas células de esperma tem sido mostrado para mediar a quimiotaxia para o ovo de9,18, controlar esperma motilidade19,20 e estimular a acrossoma reação de21. Acionamento destes individuais [Ca2 +]eu-funções de esperma regulamentado na ordem correta e no momento correto é crucial para a fertilização do ovo8. Dessa forma, uma qualidade inferior induzida pela progesterona Ca2 +-influxo foi encontrado ser associado com reduzida fertilidade masculina22,23,24,25,26 ,,27,28,29 e CatSper funcional é essencial para a fertilidade masculina26,30,31,32, 33,34,35,36.
Como as células de esperma alcançar o ovo, uma sequência de eventos deve ocorrer para fertilização ocorra: 1) as células de esperma deve penetrar a camada de células cumulus circundante, 2) ligar a zona pelúcida, 3) exocytose o conteúdo acrossomal, a reação do acrossoma chamados 37, 4) penetrar a zona pelúcida e 5) se fundem com a membrana do ovo para completar a fertilização38. Para ser capaz de passar por estas etapas e fecundar o óvulo, o espermatozoide que primeiro devem ser submetidos a capacitação11, que começa como as células de esperma sair o líquido seminal que contém "decapacitating" fatores39 e nadam para os fluidos da fêmea trato reprodutivo com altos níveis de bicarbonato e albumina37. Capacitação processa as células de esperma capazes de submeter-se hyperactivation, uma forma de mobilidade com uma surra vigorosa do flagelo e de reação do acrossoma37. Hiperactivos motilidade é necessária para a penetração da zona pelúcida40, e a acrossoma contém várias enzimas hidrolíticas que auxiliam neste processo de penetração41. Além disso, a reacção acrossómica processa os espermatozoides capazes de fundir-se com o ovo, expondo-as proteínas específicas da membrana na superfície de esperma necessária para a fusão de esperma-ovo42. Consequentemente, a capacidade de sofrer reação hyperactivation e acrossoma são ambos necessários para uma fecundação bem sucedida do ovo40,42. Ao contrário do que tem sido visto por rato espermatozoides43,44,45, apenas humanos espermatozoides que são acrossoma intacto pode ligar para a zona pelúcida46. Quando as células de esperma humanas são vinculadas a zona pelúcida têm que submeter-se a reacção acrossómica tanto para penetrar a zona pelúcida41 e expor as proteínas de membrana específicos que são necessários para a fusão com o ovo,38. O momento da reacção acrossómica no esperma humano, portanto, é fundamental para fertilização ocorra.
Conforme descrito acima, Ca2 +-sinalização é vital para a célula de esperma normal função8, e é, portanto, de grande interesse para ser capaz de grandes números de tela de compostos para efeitos na Ca2 +-sinalização em células de esperma humanas. Da mesma forma, como células de esperma humanas só que se submetem a reacção acrossómica no momento certo e no lugar pode penetrar a zona pelúcida e fertilizar o ovo46,47, é também de grande interesse para poder testar compostos por sua capacidade de afecta a reacção acrossómica no esperma humano. Para este fim, são descritos dois ensaios de rastreio com throughput médio: 1) um ensaio para efeitos na Ca2 +-sinalização em células de esperma humanas e 2) um ensaio para a capacidade de induzir a reacção acrossómica em células de esperma humanas.
Ensaio 1 é médio-taxa de transferência Ca2 +-ensaio de sinalização. Esta técnica de baseado no leitor de placa de fluorescência monitora alterações em fluorescência em função do tempo simultaneamente em vários poços. O Ca2 +-tintura fluorescente sensível, Fluo-4 tem um Kd de Ca2 +≈ 335 nM e é célula-permeant sob a forma de éster de AM (acetoximetil). Usando Fluo-4, é possível medir mudanças na [Ca2 +]i , ao longo do tempo e após a adição de compostos de interesse para as células de esperma. O ensaio foi desenvolvido pelo laboratório de Timo Strünker em 201113 e desde então tem sido utilizado em diversos estudos para compostos de tela para efeitos na Ca2 +-sinalização no esperma humano1,2,3, 4,5. Também utilizou-se um método semelhante para a tela de múltiplas drogas candidatos48. Além disso, este ensaio também é útil para avaliar o modo farmacológico de ação1,2,3,4,5, de curvas dose-resposta1, 2,3,4,5, inibição competitiva1,2, aditividade1,2e sinergismo3 de compostos de interesse.
Ensaio 2 é um ensaio de reação do acrossoma médio-taxa de transferência. Esta técnica de imagem baseada em citômetro mede a quantidade de viável acrossoma reagiu espermatozoides em uma amostra, usando três corantes fluorescentes: iodeto de propidium (PI), FITC-acoplado lectina de Pisum sativum (FITC-PSA) e Hoechst 33342. O ensaio foi modificado de um método similar de baseados em citometria de fluxo por Zoppino et al.49 e tem sido utilizado em diversos estudos6,7. Quanto ao Ca2 +-sinalização ensaio, este ensaio de reação do acrossoma também poderia ser utilizado para avaliar as curvas dose-resposta, inibição, aditividade e sinergismo de compostos de interesse.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#181;m pore filter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>296-4545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L measuring cylinder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>3662-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4 and 2 mL plastic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>30120086 and 0030120094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4861000813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384 multi-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One, Germany</td>
			<td>781096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 and 50 mL platic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>0030122151 and 30122178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A2-slide</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>942-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic repeater pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4987000010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean wide-mouthed plastic container for semen sample</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-coupled lectin of Pisum sativum (FITC-PSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>L0770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4 AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar OMEGA fluorescence microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose anhydrous</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst-33342</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human serum albumin (HSA)</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>For addition to HTF+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilizing solution containing 0.6 M NaHCO3 and 0.37% (v/v) formaldehyde in distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Lactate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NC-3000 image cytometer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>970-3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes and piptting tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propidium iodide (PI)</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack for placing 50 mL plastic tubes in 45&#176; angle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S100 buffer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP1-cassette</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>941-0006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumetric flasks of appropriate sizes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm

CA2 +-sinalização é essencial para a função celular normal do esperma e a fertilidade masculina. Da mesma forma, a reação do acrossoma é vital para a capacidade de uma célula de esperma humana para penetrar a zona pelúcida e fecundar o óvulo. Portanto, é de grande interesse para testar compostos (por exemplo, produtos químicos ambientais ou candidatos a fármacos) para seu efeito no Ca2 +-reação do acrossoma e sinalização no esperma humano ou para examinar os potenciais efeitos adversos sobre a função da célula de esperma humano ou para investigar um possível papel como um contraceptivo. Aqui, dois ensaios de rendimento médio são descritos: 1) um ensaio baseado em fluorescência para avaliação dos efeitos de Ca2 +-sinalização no esperma humano e 2) um ensaio de cytometric de imagem para avaliação de Reacção acrossómica no esperma humano. Estes ensaios podem ser usados para um grande número de compostos para efeitos na Ca2 +de tela-reação do acrossoma e sinalização no esperma humano. Além disso, os ensaios podem ser usados para gerar as curvas dose-resposta altamente específica de compostos individuais, determinar potencial aditividade/sinergismo para dois ou mais compostos e estudar o modo farmacológico de ação através da inibição competitiva experimentos com inibidores de CatSper.

Representante resulta de uma experiência para testar o efeito de 4 compostos de (A, B, C e D) juntamente com um positivo (progesterona) e negativo (tampão) na [Ca2 +]i no esperma humano usando médio-taxa de transferência Ca2 +-sinalização ensaio pode ser visto na figura 4a. Na figura 4b, uma curva de resposta de dose de progesterona é mostrada, que foi derivado de pico ΔF/F0 (%)...

Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Ensaios de triagem para avaliação dos efeitos de Ca2 +médio-produção-sinalização e reacção acrossómica no esperma humano

Aqui, dois ensaios de rendimento médio para avaliação dos efeitos de Ca2 +-reação do acrossoma e sinalização no esperma humano são descritos. Estes ensaios podem ser usados para facilmente e rapidamente grandes quantidades de compostos para efeitos na Ca2 +de tela-reação do acrossoma e sinalização no esperma humano.

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

Nossos ensaios podem ser usados para testar compostos para seus efeitos na função celular humana. Especificamente, esses métodos podem ser usados para rastrear rapidamente e facilmente um grande número de compostos para seus efeitos na sinalização de cálcio e reação acrosma em células de esperma humanos. Demonstrações visuais deste método tornarão mais fácil para outros configurar experimentos semelhantes em seus próprios laboratórios.Comece colocando um tubo de 50 mililitros por um mililitro de amostra de sêmen bruto em um rack de tubo em um ângulo de 45 graus e adicionando quatro mililitros de fluido tubal humano de 37 graus Celsius ou meio positivo HTF para cada tubo. Em seguida, pipeta cuidadosamente um mililitro de amostra de sêmen liquefeito para o fundo de cada tubo e coloque os tubos a 37 graus Celsius por uma hora. No final da incubação, use uma ponta de pipeta modificada mantida em um ângulo de 45 graus para transferir suavemente o máximo da fração superior de célula de espermatozoides que contém o meio positivo HTF possível em um novo tubo plástico de 15 mililitros.Para contar as células coletadas de esperma, diluir uma alíquota de 20 microliter a um fator de 10, 20, 30, 50 ou 90 em tampão S100 em um tubo de dois mililitros de fundo redondo de acordo com a concentração esperada. Vórtice as células de esperma diluídas por 10 segundos a 700 rotações por minuto. Em seguida, mergulhe uma fita SP1 na amostra e deprimi o êmbolo branco para aspirar uma alíquota da amostra no.Em seguida, coloque o na bandeja do citômetro de imagem e execute o ensaio do esperma humano manchado de PI de acordo com o fator de diluição aplicado. Para medir as mudanças na concentração de cálcio intracelular livre, pipeta suavemente a amostra de esperma uma vez e use uma pipeta repetidora automática para aliquot 50 microliters de células de esperma manchadas de fluoróforo para 24 poços de uma fileira de uma placa de 384 micro poços. Coloque a placa de micro poço no leitor de placa de fluorescência a 30 graus Celsius e selecione o protocolo apropriado para fluoróforo.Selecione um poço na linha de células espermatozoides e ajuste o ganho para um valor-alvo de 20% Em seguida, inicie a medição. Após 10 ciclos de linha de base, pausa o experimento e ejete a gaveta com a placa de micro poço. Usando uma pipeta de 12 canais, adicione rapidamente 25 microliters das soluções preparadas de compostos e controles de interesse nos 12 poços duplicados da linha e devolva imediatamente a placa ao leitor para continuar a medição o mais rápido possível.Quaisquer alterações na fluorescência em resposta à adição dos compostos ou controles serão capturadas pelo instrumento. Para análise de reação acrosma, após a incubação das células de esperma capacitadas com os corantes fluorescentes, compostos ou controles fluorescentes apropriados, misture as amostras por pipetação e adicione 50 microliters de cada amostra de teste a 100 microliters de solução imobilizadora. Misture as amostras novamente e carregue as câmaras de um slide A2 por amostra com aproximadamente 30 microliters de amostra por câmara.Em seguida, coloque o primeiro slide carregado na bandeja do citômetro de imagem. Selecione o Protocolo FlexiCyte e pressione Executar. Aqui resultados representativos de um experimento testando o efeito de quatro compostos, um controle positivo de progesterona e um controle tampão negativo usando o ensaio de sinalização de cálcio de rendimento médio como demonstrado pode ser observado.Neste gráfico, mostra-se uma curva de resposta de dose de progesterona derivada de alterações de pico de porcentos na concentração de cálcio livre intracelular induzida pela concentração diluída em série de progesterona. Esses dados ilustram os efeitos de um negativo ou um dos dois controles positivos sobre a indução de uma reação acrosuma em células de esperma humano capacitadas em um ensaio de reação acrosum. Para evitar perder os picos dos sinais induzidos, é fundamental adicionar os produtos químicos rapidamente aos poços de replicação e continuar imediatamente a medição posteriormente.Ao alterar o tipo de fluoroforos e corantes, nossos ensaios podem ser facilmente modificados para responder a diferentes questões científicas. Esses ensaios já foram usados em vários estudos para testar grandes grupos de compostos por seus efeitos na função do esperma humano.

Research

JoVE Journal

Biology

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Monitoramento Effects Acupuntura em Cérebro Humano por fMRI

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

Biologia

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Fluorescência In situ Hybridization (FISH) Protocolo no esperma humano

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Técnicas de imagem Ca 2 + Sinalização no esperma humano

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Two Types of Assays for Detecting Frog Sperm Chemoattraction

Dois tipos de ensaios para detecção de quimiotaxia Sapo Sperm

Sperm chemoattraction in invertebrates can be sufficiently robust that one can place a pipette containing the attractive peptide into a sperm suspension ...

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualização dos Vascular Ca 2 + Sinalização Disparado por parácrina ROS Derivado

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative ...

Mapping the After-effects of Theta Burst Stimulation on the Human Auditory Cortex with Functional Imaging

Mapear as sequelas de Theta Explosão Estimulação no córtex auditivo humano com Imagem Funcional

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent ...

Toxicological Assays for Testing Effects of an Epigenetic Drug on Development, Fecundity and Survivorship of Malaria Mosquitoes

Os ensaios toxicológicos para efeitos de teste de uma droga epigenética no desenvolvimento, fecundidade e sobrevivência das mosquitos de malária

Insecticidal resistance poses a major problem for malaria control programs. Mosquitoes adapt to a wide range of changes in the environment quickly, making ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Método de Avaliação de efeitos de uma gama de comprimentos de onda e intensidades de Terapia da Luz Vermelha / near-infrared sobre o estresse oxidativo<em&gt; In Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

A quantificação da Adesividade celular endotelial<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Gap juncional intercelular comunicação: um biomarcador funcional para avaliar os efeitos adversos de tóxicos e toxinas, e Benefícios para a saúde de produtos naturais

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...