Name: medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm
Uploaded: 2019-03-01T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Los autores desean reconocer el laboratorio del Timo Strünker de control de AR y DLE durante sus estadías en su laboratorio. Además, nos gustaría agradecer a nuestros colegas en el Departamento de crecimiento y reproducción, Hospital de la Universidad de Copenhague, Rigshospitalet por su ayuda con la configuración de estos dos ensayos. Este trabajo fue financiado por donaciones desde el fondo de innovación de Dinamarca (números de concesión 005-2010-3 y 14-2013-4).

La recogida y análisis de muestras de semen humano en los protocolos sigue las directrices de la Comisión de ética de investigación de la región Capital de Dinamarca. Todas las muestras de semen se han obtenido después de consentimiento informado de los donantes voluntarios. Después de la entrega, las muestras fueron totalmente anonimizadas. Por sus molestias, cada donante recibió un honorario de 500 coronas danesas (unos 75 dólares) por muestra. Las muestras fueron analizadas en el día de la entrega y luego de...

El rendimiento medio Ca2 + señalización de ensayo se basa en las mediciones de fluorescencia de solo micropocillos que contiene unos 250.000 células de la esperma. La señal capturada es un promedio de todas las células individuales de la esperma en el pozo. El ensayo proporciona así que ninguna información espacial acerca de dónde específicamente en la célula de la esperma [Ca2 +] es cambiada, en gran proporción de las células de esperma un cambio en la [Ca2 +]...

El propósito de los dos ensayos descritos aquí es examinar los efectos sobre la Ca2 +-reacción señalización y acrosómica en espermatozoides humanos, como ha sido demostrado por múltiples compuestos en varias publicaciones que emplean estos ensayos de1,2, 3,4,5,6,7. CA2 +-señalización y la reacción del acrosoma son función de las células de esperma humano vital para normal y la fertilidad masculina.
El objetivo general de una célula de la esperma humana es fertilizar el óvulo. Para poder naturalmente y con éxito fertilizar el óvulo, las funciones de la célula de la esperma deben regularse bien durante el viaje de la célula de la esperma a través del tracto reproductor femenino8,9. Muchas de las funciones de la célula de la esperma son regulados por el Ca intracelular2 +-concentración [Ca2 +] (por ejemplo, esperma motilidad, quimiotaxis y acrosoma reacción)10. También, un proceso de maduración llamado capacitación, que hace el espermatozoide capaz de fecundar el óvulo, es regulada en parte por [Ca2 +]10. CA2 +-extrusión de Ca2 +-ATPase bombas11 mantener un doblez de aproximadamente 20.000 Ca2 +-gradiente sobre la membrana del espermatozoide humano, con un descanso [Ca2 +] de 50-100 nM. Si Ca2 + se permite cruzar la membrana celular (por ejemplo, mediante la apertura de Ca2 +-canales), se produce una considerable afluencia de Ca2 + , dando lugar a una elevación de la [Ca2 +]. Sin embargo, la célula de la esperma también lleva intracelular Ca2 +-tiendas, las cuales pueden liberar Ca2 + y, por lo tanto, también dan una elevación de la [Ca2 +]i12. Curiosamente, todas mediadas por canales Ca2 +-afluencia en espermatozoides humanos hasta ahora se ha encontrado para ocurrir a través de CatSper (Catcanal iónico de rm de Spe), que se expresa sólo en células de la esperma11. En las células de esperma humanas, CatSper es activado por los ligandos endógenos progesterona y prostaglandinas a través de distinta ligando vinculante sitios13,14,15, llevando a una rápida Ca2 +-afluencia en la célula de la esperma. Dos fuentes principales cerca de los huevos proporcionan altos niveles de estos ligandos endógenos. Uno es el líquido folicular que contiene altos niveles de progesterona16. Se libera el líquido folicular de folículos maduros junto con el óvulo en la ovulación y se mezcla con el líquido dentro de los oviductos17. La otra fuente principal es las células del cúmulo que rodean el huevo y liberan altos niveles de progesterona y prostaglandinas. La progesterona inducida por Ca2 +-afluencia en las células de esperma se ha demostrado para mediar la quimiotaxis hacia el huevo9,18, control de esperma motilidad19,20 y estimular el acrosoma reacción21. El accionar de estos individuales [Ca2 +]-funciones de esperma regulado en el orden correcto y en el momento correcto es crucial para la fertilización del huevo8. En consonancia con esto, un subóptimo inducida por la progesterona Ca2 +-afluencia se ha encontrado asociada con reducir la fertilidad masculina22,23,24,25,26 ,27,28,29 y funcional CatSper es esencial para la fertilidad masculina26,30,31,32, 33,34,35,36.
Como los espermatozoides alcanzar el óvulo, una secuencia de eventos debe ocurrir para que ocurra la fertilización: 1) los espermatozoides deben penetrar la capa circundante de células cumulus, 2) se unen a la zona pelúcida, 3) exocytose el contenido acrosómica, la reacción de acrosoma supuesto 37, 4) penetrar la zona pelúcida y 5) se fusionan con la membrana del huevo para completar la fertilización38. Para poder pasar por estos pasos y fertilizar el óvulo, la célula de la esperma primero debe someterse a capacitación11, que comienza cuando las células de esperma salir el fluido seminal contiene factores "decapacitating"39 y nadar en los fluidos de la mujer tracto reproductivo con altos niveles de bicarbonato y albúmina37. Capacitación hace que los espermatozoides capaces de someterse a hyperactivation, una forma de movilidad con una enérgica paliza de flagelo y reacción de acrosoma37. Ligerament la motilidad es necesaria para la penetración de la zona pelúcida40, y el acrosoma contiene diversas enzimas hidrolíticas que ayudan a este proceso de penetración41. Además, la reacción de acrosoma representa los espermatozoides capaces de fusionarse con el huevo mediante la exposición de proteínas de membrana específicas en la superficie de espermatozoides necesaria para la fusión de esperma huevo42. En consecuencia, la capacidad de experimentar la reacción hyperactivation y acrosoma son ambos necesarios para la fertilización exitosa de los huevos40,42. Contrario a lo que se ha visto para las células espermáticas de ratón43,44,45, sólo humanas células de esperma que son acrosoma intacto puede enlazar a la zona pelúcida46. Cuando las células de esperma humanas están limitadas a la zona pelúcida tienen que sufrir la reacción acrosómica para penetrar la zona pelúcida41 y exponer proteínas de membrana específicas que son necesarias para la fusión con el huevo38. El momento de la reacción acrosómica en espermatozoides humanos así es crítico para que ocurra la fertilización.
Como se describió anteriormente, Ca2 +-señalización es vital para espermatozoides normales la célula función8, y es, por tanto, de gran interés para poder a un gran número de pantalla compuestos por efectos sobre la Ca2 +-señalización en las células de esperma humanas. Del mismo modo, como único humanos espermatozoides que sufren la reacción acrosómica en el lugar y momento adecuado pueden penetrar la zona pelúcida y fertilizar el huevo46,47, también es de gran interés para poder probar los compuestos por su capacidad para afectan la reacción acrosómica en espermatozoides humanos. Para ello, se describen dos ensayos de cribado de mediano rendimiento: 1) un análisis de efectos sobre la Ca2 +-señalización en las células de esperma humanas y 2) un ensayo para determinar la capacidad de inducir la reacción acrosómica en espermatozoides humanos.
Ensayo 1 es a medio rendimiento Ca2 +-ensayo de señalización. Esta técnica basada en el lector de fluorescencia placa controla los cambios en la fluorescencia como una función de tiempo simultáneamente en varios pozos. El Ca2 +-colorante fluorescente sensible, Fluo-4 tiene una Kd de Ca2 +≈ 335 nM y es florescente de la célula en forma de éster de AM (acetoxymethyl). Utilizando Fluo-4, es posible medir los cambios en la [Ca2 +]i con el tiempo y después de la adición de compuestos de interés para los espermatozoides. El análisis fue desarrollado por el laboratorio de Timo Strünker en 201113 y desde entonces se ha utilizado en varios estudios a compuestos de la pantalla de efectos sobre la Ca2 +-señalización en espermatozoides humanos1,2,3, 4,5. También se ha utilizado un método similar para múltiples drogas candidatos48. Además, este ensayo también es útil para evaluar el modo farmacológico de acción1,2,3,4,5, las curvas de dosis-respuesta1, 2,3,4,5, inhibición competitiva1,2, aditividad1,2y3 de la sinergia de compuestos de interés.
2 el análisis es un análisis de la reacción acrosómica de mediano rendimiento. Esta técnica basada en la citometría de imagen mide la cantidad de viable acrosoma reaccionado espermatozoides en una muestra, usando tres colorantes fluorescentes: yoduro de propidio (PI), acoplado a FITC lectina Pisum sativum (PSA-FITC) y Hoechst 33342. El ensayo fue modificado de un método basado en la citometría de flujo similar por Zoppino et al49 y ha sido utilizado en varios estudios6,7. En cuanto a la Ca2 +-señalización ensayo, este análisis de la reacción de acrosoma también podrían usarse para evaluar las curvas dosis-respuesta, inhibición, aditividad y sinergia de los compuestos de interés.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#181;m pore filter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>296-4545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L measuring cylinder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>3662-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4 and 2 mL plastic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>30120086 and 0030120094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4861000813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384 multi-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One, Germany</td>
			<td>781096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 and 50 mL platic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>0030122151 and 30122178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A2-slide</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>942-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic repeater pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4987000010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean wide-mouthed plastic container for semen sample</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-coupled lectin of Pisum sativum (FITC-PSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>L0770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4 AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar OMEGA fluorescence microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose anhydrous</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst-33342</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human serum albumin (HSA)</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>For addition to HTF+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilizing solution containing 0.6 M NaHCO3 and 0.37% (v/v) formaldehyde in distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Lactate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NC-3000 image cytometer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>970-3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes and piptting tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propidium iodide (PI)</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack for placing 50 mL plastic tubes in 45&#176; angle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S100 buffer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP1-cassette</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>941-0006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumetric flasks of appropriate sizes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm

CA2 +-señalización es esencial para la función normal de la célula de la esperma y la fertilidad masculina. Del mismo modo, la reacción acrosómica es vital para la capacidad de un espermatozoide humano penetrar la zona pelúcida y fertilizar el óvulo. Por lo tanto es de gran interés para probar compuestos (por ejemplo, químicos ambientales o medicamentos) para su efecto sobre el Ca2 +-reacción señalización y acrosómica en espermatozoides humanos para examinar los posibles efectos adversos en función de las células de esperma humano o investigar un posible papel como un anticonceptivo. Aquí, se describen dos ensayos de mediano rendimiento: 1) un análisis basado en la fluorescencia para la evaluación de efectos sobre la Ca2 +-señalización en espermatozoides humanos y 2) un análisis de citometría de imagen para la evaluación de la reacción acrosómica en espermatozoides humanos. Estos ensayos pueden utilizarse para un gran número de compuestos de efectos sobre la Ca2 +de la pantalla-reacción señalización y acrosómica en espermatozoides humanos. Además, el análisis pueden ser utilizados para generar las curvas dosis-respuesta altamente específica de compuestos individuales, determinar la posible aditividad/sinergismo de dos o más compuestos y estudiar el modo farmacológico de acción mediante la inhibición competitiva experimentos con los inhibidores de CatSper.

Representante de los resultados de un experimento que prueba el efecto de 4 compuestos (A, B, C y D) con un positivo (progesterona) y un control negativo (tampón) de [Ca2 +]i en espermatozoides humanos con rendimiento medio Ca2 +-señalización Análisis puede verse en la figura 4a. En la Figura 4b, se muestra una curva de respuesta de dosis de progesterona, que se deriva de pico ΔF/F0</sub...

Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Rendimiento medio de selección de ensayos para la evaluación de efectos sobre la Ca2 +-señalización y reacción acrosómica en espermatozoides humanos

Aquí, dos ensayos de rendimiento medio para la evaluación de efectos sobre la Ca2 +-reacción señalización y acrosómica en espermatozoides humanos se describen. Estos ensayos se pueden utilizar para rápidamente y fácilmente grandes cantidades de compuestos de efectos sobre la Ca2 +-reacción señalización y acrosómica en espermatozoides humanos.

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

Nuestros ensayos se pueden utilizar para probar compuestos para sus efectos sobre la función de los espermatozoides humanos. Específicamente, estos métodos se pueden utilizar para examinar rápida y fácilmente un gran número de compuestos para sus efectos sobre la señalización de calcio y la reacción acrosoma en las células espermáticas humanas. Las demostraciones visuales de este método facilitarán a otros la configuración de experimentos similares en sus propios laboratorios.Comience colocando un tubo de 50 mililitros por mililitro de muestra de semen crudo en un portatubos en un ángulo de 45 grados y agregando cuatro mililitros de 37 grados Celsius Human Tubal Fluid o HTF positivo medio a cada tubo. A continuación, pipetee cuidadosamente un mililitro de muestra de semen licuado en la parte inferior de cada tubo y coloque los tubos a 37 grados centígrados durante una hora. Al final de la incubación, utilice una punta de pipeta modificada sostenida en un ángulo de 45 grados para transferir suavemente la mayor parte de la fracción superior de la célula de esperma móvil que contiene el medio positivo HTF como sea posible en un nuevo tubo de plástico de 15 mililitros.Para contar las células espermáticas recogidas, diluya una alícuota de 20 microlitios a un factor de 10, 20, 30, 50 o 90 en tampón S100 en un tubo redondo inferior de dos mililitros de acuerdo con la concentración esperada. Vórtice de las células espermáticas diluidas durante 10 segundos a 700 rotaciones por minuto. A continuación, sumerja un cassette SP1 en la muestra y presione completamente el émbolo blanco para aspirar una alícuota de la muestra en el cassette.A continuación, coloque el cassette en la bandeja del citometro de imagen y ejecute el ensayo de células espermáticas humanas manchadas de PI de acuerdo con el factor de dilución aplicado. Para medir los cambios en la concentración de calcio intracelular libre, pipetee suavemente la muestra de espermatozoides una vez y utilice una pipeta repetidor automática para alícuota de 50 microlitros de espermatozoides manchados de fluoróforo a 24 pozos de una fila de una placa de micro pozo 384. Coloque la placa de micro pozo en el lector de placas de fluorescencia a 30 grados Celsius y seleccione el protocolo adecuado para el fluoróforo.Seleccione un pozo en la fila de células espermáticas y ajuste la ganancia a un valor objetivo de 20%Luego inicie la medición. Después de 10 ciclos de línea base, detenga el experimento y expulse el cajón con la placa del micro pozo. Usando una pipeta de 12 canales, agregue rápidamente 25 microlitros de las soluciones preparadas de compuestos y controles de interés en los 12 pozos duplicados en la fila y devuelva inmediatamente la placa al lector para continuar la medición lo más rápido posible.Cualquier cambio en la fluorescencia en respuesta a la adición de los compuestos o controles será capturado por el instrumento. Para el análisis de reacción acrosoma, después de incubar las células espermáticas capacitadas con los tintes fluorescentes, compuestos o controles apropiados, mezcle las muestras pipeteando y agregue 50 microlitros de cada muestra de ensayo a 100 microlitros de solución inmovilizadora. Mezcle las muestras de nuevo y cargue las cámaras de una diapositiva A2 por muestra con aproximadamente 30 microlitros de muestra por cámara.A continuación, coloque la primera diapositiva cargada en la bandeja del citometro de imagen. Seleccione el protocolo FlexiCyte y pulse Ejecutar. Aquí se pueden observar los resultados representativos de un experimento que prueba el efecto de cuatro compuestos, un control positivo de la progesterona y un control de búfer negativo utilizando el ensayo de señalización de calcio de rendimiento medio, tal como se ha demostrado.En este gráfico, se muestra una curva de respuesta a la dosis de progesterona derivada de los cambios porcentuales máximos en la concentración de calcio libre intracelular inducida por la concentración diluida en serie de progesterona. Estos datos ilustran los efectos de uno negativo o uno de los dos controles positivos sobre la inducción de una reacción acrósoma en células espermatozoides humanas capacitadas en un ensayo de reacción acrosoma de rendimiento medio. Para evitar perder los picos de las señales inducidas, es fundamental añadir los productos químicos rápidamente a los pozos de réplica y continuar inmediatamente la medición a partir de entonces.Al cambiar el tipo de fluoróforos y tintes, nuestros ensayos se pueden modificar fácilmente para responder a diferentes preguntas científicas. Estos ensayos ya se han utilizado en varios estudios para probar grandes grupos de compuestos para sus efectos sobre la función de los espermatozoides humanos.

Research

JoVE Journal

Biology

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Efectos de la acupuntura en vigilancia por fMRI del cerebro humano

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

Investigación

Biología

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Fluorescencia In situ</emHibridación> (FISH) Protocolo en el esperma humano

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Técnicas de Imagen Ca 2 + Señalización en el esperma humano

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Two Types of Assays for Detecting Frog Sperm Chemoattraction

Dos tipos de ensayos para la detección de espermatozoides quimioatracción rana

Sperm chemoattraction in invertebrates can be sufficiently robust that one can place a pipette containing the attractive peptide into a sperm suspension ...

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualización de Ca Vascular 2 + Señalización desencadenada por paracrina derivados ROS

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative ...

Mapping the After-effects of Theta Burst Stimulation on the Human Auditory Cortex with Functional Imaging

Mapeo de las secuelas de la theta ráfaga de estimulación sobre la corteza auditiva humana con imágenes funcionales

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent ...

Toxicological Assays for Testing Effects of an Epigenetic Drug on Development, Fecundity and Survivorship of Malaria Mosquitoes

Los ensayos toxicológicos para efectos de prueba de un epigenética de Drogas sobre el Desarrollo, Fecundidad y Sobrevivencia de los mosquitos de malaria

Insecticidal resistance poses a major problem for malaria control programs. Mosquitoes adapt to a wide range of changes in the environment quickly, making ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Método para la Evaluación de los efectos de un rango de longitudes de onda e intensidades de / Terapia de luz del infrarrojo cercano Red sobre el estrés oxidativo<em&gt; In Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

La cuantificación de la adhesividad de la célula endotelial<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Brecha ocasiones intercelular de comunicación: un biomarcador funcional para evaluar los efectos adversos de las sustancias tóxicas y toxinas, y de Salud Beneficios de Productos Naturales

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...