Name: initial 3d cell cluster control in a hybrid gel cube device for repeatable pattern formations
Uploaded: 2019-03-21T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Initial 3D Cell Cluster Control in a Hybrid Gel Cube Device for Repeatable Pattern Formations at JoVE.com

यह काम आर्थिक रूप से JSPS KAKENHI (18H04765) और कार्यक्रम के कार्यकाल ट्रैक प्रणाली, MEXT, जापान के प्रसार के द्वारा समर्थित किया गया ।

1. संकर जेल घन उपकरण का निर्माण
<ol><li>एक मशीनिंग प्रक्रिया या एक 3 डी प्रिंटर का उपयोग करके या तो एक पॉलीकार्बोनेट (पीसी) घन फ्रेम तैयार करें । PC फ़्रेम का आकार नमूना आकार पर निर्भर करता है । इस अध्ययन में, हम ह...

<ol>
	<li>Baker, B. M., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deconstructing+the+third+dimension+-+how+3D+culture+microenvironments+alter+cellular+cues.">Deconstructing the third dimension - how 3D culture microenvironments alter cellular cues.</a> Journal of Cell Science. 125 (13), 3015-3024 (2012).</li><li>Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosystems+dynamics+in+self-organization+of+tissue+architecture.">Cytosystems dynamics in self-organization of tissue architecture.</a> Nature. 493 (7432), 318-326 (2013).</li><li>Shamir, E. R., Ewald, A. 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M. P., O&#8217;Brien, L. E., Yu, W., Datta, A., Mostov, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+polarity+and+tubulogenesis+in+vitro.">Epithelial polarity and tubulogenesis in vitro.</a> Trends in Cell Biology. 13 (4), 169-176 (2003).</li><li>Affolter, M., Bellusci, S., Itoh, N., Shilo, B., Thiery, J. 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B., Homan, K. A., Skylar-Scott, M. A., Lewis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+bioprinting+of+thick+vascularized+tissues.">Three-dimensional bioprinting of thick vascularized tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (12), 3179-3184 (2016).</li><li>Mironov, V., Visconti, R. P., Kasyanov, V., Forgacs, G., Drake, C. J., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+Tissue+spheroids+as+building+blocks.">Organ printing: Tissue spheroids as building blocks.</a> Biomaterials. 30 (12), 2164-2174 (2009).</li><li>Onoe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metre-long+cell-laden+microfibres+exhibit+tissue+morphologies+and+functions.">Metre-long cell-laden microfibres exhibit tissue morphologies and functions.</a> Nature Materials. 12 (6), 584-590 (2013).</li><li>Miller, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+casting+of+patterned+vascular+networks+for+perfusable+engineered+three-dimensional+tissues.">Rapid casting of patterned vascular networks for perfusable engineered three-dimensional tissues.</a> Nature Materials. 11 (9), 768-774 (2012).</li><li>Hagiwara, M., Nobata, R., Kawahara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+repeatability+from+3D+experimental+platform+for+quantitative+analysis+of+cellular+branch+pattern+formations.">High repeatability from 3D experimental platform for quantitative analysis of cellular branch pattern formations.</a> Integrative Biology. 10, 306-312 (2018).</li><li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+imaging+with+single-cell+resolution+by+tissue+decolorization.">Whole-body imaging with single-cell resolution by tissue decolorization.</a> Cell. 159 (4), 911-924 (2014).</li><li>Murray, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scalable+Proteomic+Imaging+for+High-Dimensional+Profiling+of+Intact+Systems.">Scalable Proteomic Imaging for High-Dimensional Profiling of Intact Systems.</a> Cell. 163 (6), 1500-1514 (2015).</li></ol>

इस पत्र में प्रस्तुत विधि सरल है और उच्च प्रौद्योगिकी उपकरणों के बिना किया जा सकता है । समवर्ती, हाइड्रोजेल के 3 डी अंतरिक्ष में एक सटीक सेल क्लस्टर आकार नियंत्रण परिणाम प्राप्त किया जा सकता है । प्रारं...

एक 3 डी संस्कृति है, जो बेहतर जैविक वातावरण mimics से एक 2d संस्कृति का महत्व है, काफी सेल में बल दिया/ कोशिकाओं और extracellular मैट्रिक्स (ecm) के बीच बातचीत के लिए महत्वपूर्ण cues प्रदान करता है संरचनाविकास4,5. कई ऊतक संरचनाओं केवल 3 डी वातावरण के तहत उभर सकते हैं, जैसे तह प्रक्रिया6,7,8अंतर्वलन, और ट्यूबलर गठन9,10. हालांकि, कई कठिनाइयों एक डिश पर 2D प्रयोगों से 3 डी प्रयोगों के लिए स्थानांतरण से शोधकर्ताओं को रोकने के । 3 डी प्रयोगों में प्रमुख कठिनाइयों में से एक इमेजिंग 3D नमूनों का मुद्दा है । समतलाकार प्रयोगों के साथ तुलना में, उपयुक्त 3 डी छवियों का अधिग्रहण अभी भी कई मामलों में चुनौतीपूर्ण है । विशेष रूप से, एक उपयुक्त 3 डी छवि प्राप्त करना एक मुश्किल काम है जब नमूना आकार कम-आवर्धन लेंस की बड़ी फोकल गहराई के कारण मिलीमीटर रेंज तक पहुंचता है । उदाहरण के लिए, फोकल गहराई ५० μm से अधिक तक पहुंचती है जब एक 10x आवर्धन लेंस का प्रयोग किया जाता है जबकि एकल कोशिका का आकार सामान्य रूप से 10 μm से कम होता है । इमेजिंग गुणवत्ता बढ़ाने के लिए, उच्च प्रौद्योगिकी माइक्रोस्कोपी सिस्टम विकसित किया जा रहा है (जैसे, दो photon माइक्रोस्कोपी11 और प्रकाश-शीट माइक्रोस्कोपी प्रणाली12), लेकिन उनकी उपलब्धता उनके महंगे मूल्य के कारण सीमित है । एक विकल्प के रूप में, हम पहले एक संकर जेल घन (HGC)13डिवाइस विकसित की है । डिवाइस hydrogels के दो प्रकार के होते हैं: एक समर्थन जेल और ऐसे कोलेजन या एक संस्कृति जेल के रूप में matrigel के रूप में एक ecm के रूप में ऐगेरोस । hgc हमें संवर्धन के दौरान नमूना इकट्ठा करने के लिए और घन घुमाएगी बहु-दिशात्मक इमेजिंग, जो फोकल गहराई समस्या14पते को प्राप्त करने की अनुमति देता है ।
3 डी प्रयोगों में एक और कठिनाई उनके कम repeatability 3 डी वातावरण के गरीब नियंत्रणीयता के कारण है । एक प्लास्टिक की डिश पर एक समतलता संस्कृति के विपरीत, प्रारंभिक संस्कृति की स्थिति में बदलाव आसानी से एक नरम सामग्री से घिरा हुआ एक 3 डी अंतरिक्ष में होते हैं । प्रयोगात्मक परिणामों में एक महत्वपूर्ण भिंनता निंनलिखित विश्लेषण बिगड़ती है और अंतर्निहित तंत्र मास्क । कई इंजीनियरिंग प्रौद्योगिकियों स्थानिक15,16, फाइबर बुनाई17के रूप में एकल कोशिकाओं, संरेखित करने के लिए विकसित किया गया है, और मचान18, लेकिन वे जटिल preprocessing की आवश्यकता होती है या विशेष रूप से उपकरण तैयार किया । इसके विपरीत, हम एक HGC19में 3 डी सेल संरेखण को प्राप्त करने के लिए एक पद्धति विकसित की है ।
इस प्रोटोकॉल में, हम एक HGC में 3 डी प्रारंभिक सेल क्लस्टर आकार को नियंत्रित करने के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया उपकरणों के साथ एक सरल प्रक्रिया सचित्र । सबसे पहले, HGC के निर्माण की प्रक्रिया का प्रदर्शन किया गया । फिर, एक ECM में एक मनमाने ढंग से आकार के साथ एक जेब का उत्पादन करने के लिए HGC में रखा गया था, फोटोनोग्राफी या मशीनिंग प्रक्रिया द्वारा निर्मित माइक्रोबूल्ड्स । बाद में, अत्यधिक घने कोशिकाओं के बाद केंद्रापसारक पॉकेट में इंजेक्शन के लिए HGC में प्रारंभिक सेल क्लस्टर आकार नियंत्रित किया गया । ठीक से नियंत्रित सेल क्लस्टर HGC के कारण कई दिशाओं से imaged हो सकता है । सामान्य मानव ब्रोंशियल उपकला (NHBE) कोशिकाओं इमेजिंग गुणवत्ता बढ़ाने के लिए कई दिशाओं से प्रारंभिक सेल क्लस्टर आकार और शाखाओं की इमेजिंग के नियंत्रण को प्रदर्शित करने के लिए इस्तेमाल किया गया ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:673px;" width="673">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">12-well-plate</td>
			<td style="width:124px;">Corning&#160; Inc.</td>
			<td align="right" style="width:132px;">3513</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:251px;">2-Methoxy-1-methylethyl Acetate</td>
			<td style="width:124px;">FUJIFILM Wako Pure Chemical Co.</td>
			<td style="width:132px;">130-10505</td>
			<td>PGMEA, CAS: 108-65-6&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:251px;">4% paraformaldehyde</td>
			<td style="width:124px;">FUJIFILM Wako Pure Chemical Co.</td>
			<td style="width:132px;">161-20141</td>
			<td>CAS: 30525-89-4</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:251px;">Agarose, low gelling temperature&#160; BioReagent</td>
			<td style="width:124px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Alexa fluor 488 phalloidin</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">AZ1512</td>
			<td>Merck</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">BEGM bullet kit</td>
			<td style="width:124px;">Lonza</td>
			<td style="width:132px;">CC-3170</td>
			<td>Specialized medium for NHBE cells</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Bovine Serum Albumin solution (10 %)</td>
			<td style="width:124px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A1595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">EGM-2 bullet kit</td>
			<td style="width:124px;">Lonza</td>
			<td style="width:132px;">CC-3162</td>
			<td>Specialized medium for endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Lipidure</td>
			<td style="width:124px;">NOF co.</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td>MPC polymer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Matrigel growth factor reduced basement membrane matrix</td>
			<td style="width:124px;">Corning&#160; Inc.</td>
			<td style="width:132px;">354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Normal Goat Serum (10%)</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">50197Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Normal human bronchial epithelial cells</td>
			<td style="width:124px;">Lonza</td>
			<td style="width:132px;">CC-2541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">SILPOT 184 W/C</td>
			<td style="width:124px;">Dow Corning Co.</td>
			<td style="width:132px;">3255981</td>
			<td>Base resin and catalyst for PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:251px;">SUEX D300</td>
			<td style="width:124px;"></td>
			<td style="width:132px;">DJ MicroLaminates, Inc</td>
			<td>Thick negative photoresist (thichness: 300 mm)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Triton X-100 (1%)</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">HFH10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">TWEEN 20</td>
			<td style="width:124px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

initial 3d cell cluster control in a hybrid gel cube device for repeatable pattern formations

इन विट्रो 3D संस्कृतियों के महत्व को कोशिका/ऊतक संवर्धन में काफी बल दिया जाता है । हालांकि, प्रयोगात्मक repeatability की कमी इसके प्रतिबंधों में से एक है । पैटर्न के गठन के कुछ repeatable परिणाम उत्पादन स्वयं संगठन अंतर्निहित तंत्र के विश्लेषण को कमजोर करता है । प्रारंभिक संस्कृति की स्थिति में भिन्नता को कम करने, जैसे कोशिका घनत्व और बाह्य मैट्रिक्स (ECM) में वितरण, एक 3 डी संस्कृति के repeatability को बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण है. इस अनुच्छेद में, हम एक 3 डी extracellular मैट्रिक्स में प्रारंभिक सेल क्लस्टर आकार को नियंत्रित करने के लिए अत्यधिक repeatable पैटर्न संरचनाओं को प्राप्त करने के लिए एक सरल लेकिन मजबूत प्रक्रिया का प्रदर्शन । एक वांछित आकार के साथ एक माइक्रोओल्ड photolithography या मशीनिंग प्रक्रिया का उपयोग करके निर्मित किया गया था, और यह एक संकर जेल घन में निहित ECM में एक 3 डी जेब का गठन (HGC). उच्च केंद्रित कोशिकाओं तो जेब में इंजेक्शन थे कि सेल क्लस्टर आकार गढ़े मोल्ड आकार के साथ मिलान किया । कार्यरत HGC बहु अपने रोटेशन है, जो उच्च संकल्प इमेजिंग सक्षम और पूरे ऊतक संरचना का कब्जा भले ही एक कम इज़ाफ़ा लेंस इस्तेमाल किया गया था द्वारा दिशात्मक स्कैनिंग की अनुमति दी । सामान्य मानव ब्रोनियल उपकला कोशिकाओं की कार्यप्रणाली को प्रदर्शित करने के लिए इस्तेमाल किया गया.

सामान्य मानव ब्रोंशियल उपकला (NHBE) कोशिकाओं को सचित्र पद्धति को प्रदर्शित करने और एक ECM वातावरण में क्रमशः एक सिलेंडर आकार और एक चश्मे के आकार को प्राप्त करने के लिए प्रारंभिक सामूहिक कोशिका ...

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Initial 3D Cell Cluster Control in a Hybrid Gel Cube Device for Repeatable Pattern Formations

Repeatable पैटर्न संरचनाओं के लिए एक संकर जेल घन डिवाइस में प्रारंभिक 3 डी सेल क्लस्टर नियंत्रण

हम एक repeatable पैटर्न गठन प्राप्त करने के लिए एक 3 डी extracellular मैट्रिक्स में प्रारंभिक सेल क्लस्टर आकार को नियंत्रित करने के लिए एक प्रक्रिया मौजूद है । ऊतक पैटर्न के गठन के लिए बहु-दिशात्मक इमेजिंग को प्राप्त करने के लिए दो विभिन्न hydrogels युक्त एक घन डिवाइस कार्यरत है ।

The importance of in vitro 3D cultures is considerably emphasized in cell/tissue culture. However, the lack of experimental repeatability is one of its ...

यह प्रोटोकॉल किसी भी विशेष उपकरण के उपयोग के बिना 3 डी सेल संस्कृति मॉडल की विश्वसनीयता को बढ़ाने के लिए एक सरल विधि का उपयोग करता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि हम घन डिवाइस के भीतर प्रारंभिक संस्कृति की स्थिति को नियंत्रित करके दोहराने योग्य 3 डी संस्कृति प्रयोग का संचालन कर सकते हैं। पांच बाय पांच मिलीमीटर पॉलीकार्बोनेट क्यूबिक फ्रेम तैयार करने के बाद, फ्रेम को प्री कूल्ड स्लाइड और आइस बॉक्स पर रखें और क्यूबिक फ्रेम के ऊपरी चेहरे से नीचे की सतह पर प्रीहीटेड 1.5% एग्राम के 12 माइक्रोलीटर जोड़ने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें।एक सपाट सतह प्राप्त करने और बहुलक को इलाज करने की अनुमति देने के लिए एगर उठे फैलाएं। फ्रेम को ग्लास के किनारे पर स्लाइड करने के लिए चिमटी का उपयोग करें और फ्रेम को घुमाएं ताकि फ्रेम को स्लाइड पर वापस रखने से पहले खुले पक्ष को नीचे का सामना करना पड़े। अधिक एगर उठे के साथ फ्रेम की अगली दो सतहों को भरने के बाद, जैसा कि अभी प्रदर्शित किया गया है, चौथे और पांचवें पक्ष पर एक अग्र उठे दीवार बनाने के लिए एक खुले चेहरे से एक कंटेनर में एग्राम को छोड़ दें।एक प्रारंभिक सेल क्लस्टर आकार स्थापित करने के लिए हाइब्रिड जेल घन संस्कृति अंतरिक्ष में ब्याज की सेल संस्कृति के लिए एक उपयुक्त बाहुलीय मैट्रिक्स इंजेक्ट करें और घन पर एक गढ़े हुए माइक्रो मोल्ड सेट करें। इसके बाद क्यूब को 37 डिग्री सेल्सियस पर 25 मिनट के लिए कार्बन डाई ऑक्साइड इनक्यूबेटर में रखें। जब एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स ठीक हो जाए तो माइक्रो मोल्ड को सावधानी से उठाएं ताकि मैट्रिक्स खराब न हो।वांछित मोल्ड आकार में एक जेब बाहुलर मैट्रिक्स में निर्मित किया जाएगा। कोशिकाओं को लोड करने के लिए उपयुक्त प्रयोगात्मक कोशिका संस्कृति माध्यम में अपकेंद्रित्र के बाद प्रायोगिक कोशिका निलंबन को केंद्रित करें और बाहेल मैट्रिक्स के भीतर कोशिकाओं को जेब में इंजेक्ट करें। कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर में रखें कोशिकाओं को एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स जेब में गिरने की अनुमति देने के लिए, माइक्रो मोल्ड द्वारा बनाई गई जगह को भरने।इनक्यूबेशन के अंत में, घन को 24 अच्छी तरह से प्लेट के एक कुएं में रखें और उचित सेल संस्कृति माध्यम के 100 माइक्रोलीटर को अच्छी तरह से जोड़ें। जेब बंद करने के लिए अतिरिक्त एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स इंजेक्ट करें और क्यूब को इनक्यूबेटर में 25 मिनट के लिए वापस करें। जब एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स ठीक हो जाता है तो सतह को बंद करने और 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 से 20 मिनट के लिए ड्रॉप को ठीक करने के लिए 20 डिग्री सेल्सियस के लगभग 10 माइक्रोलीटर को क्यूब के शीर्ष सतह पर गिर जाता है।फिर घन के भीतर कोशिकाओं को पोषण के हस्तांतरण की सुविधा के लिए ऑस्मोटिक दबाव को बढ़ावा देने के लिए ताजा माध्यम के साथ पूरे घन को कवर करें। बहुदिशात्मक अवलोकन द्वारा noninvasive 3 डी आकार मान्यता के लिए, प्लेट को माइक्रोस्कोप चरण पर रखें और उज्ज्वल क्षेत्र या चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी द्वारा घन के प्रत्येक पक्ष की छवियों को प्राप्त करें, ट्वीज़र का उपयोग करके क्यूब सेवा को कैप्चर के बीच इमेज्ड करने के लिए घुमाएं। बहुदिशात्मक अवलोकन द्वारा इम्यूनोफ्लोरोसेंट इमेजिंग के लिए, पहले घन युक्त कुएं से सुपरनेट को एस्पिरेट करें और घन को कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड में ठीक करें।निर्धारण के अंत में, प्रति वॉश 10 मिनट के लिए पीबीएस के साथ दो बार घन धोएं। 0.5% ट्राइटन एक्स-100 और पीबीएस के साथ क्यूब को चार डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए अभेद्य करें। इसके बाद, कमरे के तापमान पर 60 मिनट के लिए बकरी सीरम और इम्यूनोफ्लोरेसेंस बफर के साथ किसी भी गैर-विशिष्ट संबंध को अवरुद्ध करने से पहले, प्रति धोने 10 मिनट के लिए पीबीएस में तीन बार घन धोएं।फिर मानक एंटीबॉडी धुंधला प्रोटोकॉल के अनुसार ब्याज की उचित प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ कोशिकाओं को दाग। फिर एक लेजर या फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप पर घन के सभी छह पक्षों की छवि के रूप में सिर्फ प्रदर्शन किया । इस प्रतिनिधि प्रयोग में हाइब्रिड जेल क्यूब्स की बहुदिशात्मक इमेजिंग, सामान्य मानव ब्रोंकियल एपिथेलियल कोशिकाओं के साथ सुसंस्कृत, संस्कृतियों के चरण विपरीत और इम्यूनोफ्लोरोसेंट इमेजिंग द्वारा प्रारंभिक बेलनाकार या चश्मे के आकार की कोशिका संस्कृति की पीढ़ी को दर्शाता है।यहां सामान्य मानव एपिथेलियल कोशिकाओं की इम्यूनो धुंधला शुरू में हाइब्रिड जेल घन में एक बेलनाकार आकार के लिए नियंत्रित, ब्रोंकियल पेड़ की पीढ़ी के बाद दिखाया गया है । शाखाएं बेलनाकार धुरी के लंबवत प्रदर्शन करती हैं, जैसा कि बहुआयामी इमेजिंग से पता चला है। कोशिकाओं के उच्च घनत्व को बाहीय मैट्रिक्स जेब में इंजेक्ट करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि कोशिकाओं के कम घनत्व के परिणामस्वरूप इनक्यूबेशन के बाद उस कोशिका की गुणवत्ता में गिरावट आ सकती है।यह विधि पैटर्न डिश विकास के तंत्र का अध्ययन करने के लिए बहुदिशात्मक इमेजिंग द्वारा मात्रात्मक माप के साथ 3 डी सेलुलर पैटर्न का दोहराने योग्य गठन है।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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