Name: initial 3d cell cluster control in a hybrid gel cube device for repeatable pattern formations
Uploaded: 2019-03-21T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Initial 3D Cell Cluster Control in a Hybrid Gel Cube Device for Repeatable Pattern Formations at JoVE.com

Эта работа была финансово поддержана JSP-страницы KAKENHI (18H 04765) и программу для распространения системы землевладения трек, МПКСНТ, Япония.

1. Изготовление гибрид геля куб устройства
<ol><li>Подготовьте кубических кадр поликарбонат (PC), либо с помощью обработки или 3D-принтер. Размер кадра ПК зависит от размера выборки. В этом исследовании мы использовали кадр 5 мм на каждой стороне, так что ветви было достаточно пространства дл?...

<ol>
	<li>Baker, B. M., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deconstructing+the+third+dimension+-+how+3D+culture+microenvironments+alter+cellular+cues.">Deconstructing the third dimension - how 3D culture microenvironments alter cellular cues.</a> Journal of Cell Science. 125 (13), 3015-3024 (2012).</li><li>Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosystems+dynamics+in+self-organization+of+tissue+architecture.">Cytosystems dynamics in self-organization of tissue architecture.</a> Nature. 493 (7432), 318-326 (2013).</li><li>Shamir, E. R., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organotypic+culture:+Experimental+models+of+mammalian+biology+and+disease.">Three-dimensional organotypic culture: Experimental models of mammalian biology and disease.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 15 (10), 647-664 (2014).</li><li>Frantz, C., Stewart, K. M., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix+at+a+glance.">The extracellular matrix at a glance.</a> Journal of Cell Science. 123 (24), 4195-4200 (2010).</li><li>Choquet, D., Felsenfeld, D. P., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+rigidity+causes+strengthening+of+integrin-+cytoskeleton+linkages.">Extracellular matrix rigidity causes strengthening of integrin- cytoskeleton linkages.</a> Cell. 88 (1), 39-48 (1997).</li><li>Hannezo, E., Prost, J., Joanny, J. -. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+of+epithelial+sheet+morphology+in+three+dimensions.">Theory of epithelial sheet morphology in three dimensions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (1), 27-32 (2014).</li><li>Tawk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mirror-symmetric+cell+division+that+orchestrates+neuroepithelial+morphogenesis.">A mirror-symmetric cell division that orchestrates neuroepithelial morphogenesis.</a> Nature. 446 (7137), 797-800 (2007).</li><li>Eiraku, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-organizing+optic-cup+morphogenesis+in+three-dimensional+culture.">Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture.</a> Nature. 472 (7341), 51-58 (2011).</li><li>Zegers, M. M. P., O&#8217;Brien, L. E., Yu, W., Datta, A., Mostov, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+polarity+and+tubulogenesis+in+vitro.">Epithelial polarity and tubulogenesis in vitro.</a> Trends in Cell Biology. 13 (4), 169-176 (2003).</li><li>Affolter, M., Bellusci, S., Itoh, N., Shilo, B., Thiery, J. P., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tube+or+not+tube:+Remodeling+epithelial+tissues+by+branching+morphogenesis.">Tube or not tube: Remodeling epithelial tissues by branching morphogenesis.</a> Developmental Cell. 4 (1), 11-18 (2003).</li><li>Denk, W., Strickler, J., Webb, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li><li>Huisken, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+Sectioning+Deep+Inside+Live+Embryos+by+Selective+Plane+Illumination+Microscopy.">Optical Sectioning Deep Inside Live Embryos by Selective Plane Illumination Microscopy.</a> Science. , 1007-1009 (2004).</li><li>Hagiwara, M., Kawahara, T., Nobata, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+in+Cube:+In+Vitro+3D+Culturing+Platform+with+Hybrid+Gel+Cubes+for+Multidirectional+Observations.">Tissue in Cube: In Vitro 3D Culturing Platform with Hybrid Gel Cubes for Multidirectional Observations.</a> Advanced Healthcare Materials. 5 (13), 1566-1571 (2016).</li><li>Hagiwara, M., Nobata, R., Kawahara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+Scale+Imaging+by+Fine+Spatial+Alignment+of+Multi-Scanning+Data+with+Gel+Cube+Device.">Large Scale Imaging by Fine Spatial Alignment of Multi-Scanning Data with Gel Cube Device.</a> Applied Sciences. 8 (235), (2018).</li><li>Kolesky, D. B., Homan, K. A., Skylar-Scott, M. A., Lewis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+bioprinting+of+thick+vascularized+tissues.">Three-dimensional bioprinting of thick vascularized tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (12), 3179-3184 (2016).</li><li>Mironov, V., Visconti, R. P., Kasyanov, V., Forgacs, G., Drake, C. J., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+Tissue+spheroids+as+building+blocks.">Organ printing: Tissue spheroids as building blocks.</a> Biomaterials. 30 (12), 2164-2174 (2009).</li><li>Onoe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metre-long+cell-laden+microfibres+exhibit+tissue+morphologies+and+functions.">Metre-long cell-laden microfibres exhibit tissue morphologies and functions.</a> Nature Materials. 12 (6), 584-590 (2013).</li><li>Miller, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+casting+of+patterned+vascular+networks+for+perfusable+engineered+three-dimensional+tissues.">Rapid casting of patterned vascular networks for perfusable engineered three-dimensional tissues.</a> Nature Materials. 11 (9), 768-774 (2012).</li><li>Hagiwara, M., Nobata, R., Kawahara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+repeatability+from+3D+experimental+platform+for+quantitative+analysis+of+cellular+branch+pattern+formations.">High repeatability from 3D experimental platform for quantitative analysis of cellular branch pattern formations.</a> Integrative Biology. 10, 306-312 (2018).</li><li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+imaging+with+single-cell+resolution+by+tissue+decolorization.">Whole-body imaging with single-cell resolution by tissue decolorization.</a> Cell. 159 (4), 911-924 (2014).</li><li>Murray, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scalable+Proteomic+Imaging+for+High-Dimensional+Profiling+of+Intact+Systems.">Scalable Proteomic Imaging for High-Dimensional Profiling of Intact Systems.</a> Cell. 163 (6), 1500-1514 (2015).</li></ol>

Метод, представленный в настоящем документе проста и может выполняться без высокотехнологичного оборудования. Одновременно можно получить точное ячейки кластера форму управления результат в 3D пространстве гидрогеля. После первоначального контроля клетки могут расти в КГЧ как они ку...

Значение 3D культуры, который лучше имитирует биологических сред, чем 2D культуры, значительно подчеркнул в ткани клеток культуры1,2,3. Взаимодействие между клетками и внеклеточного матрикса (ECM) предоставляет важные подсказки относительно морфогенеза4,5. Многие ткани образований может возникнуть только в 3D средах, таких как складной процесса6,7, invagination8и трубчатых формирования9,10. Однако многочисленные трудности предотвратить исследователей от перехода к 3D эксперименты 2D экспериментов на блюдо. Одна из основных трудностей в 3D экспериментов является вопрос о визуализации 3D образцов. По сравнению с плоской эксперименты, приобретения соответствующей 3D изображения по-прежнему сложным во многих случаях. В частности получение соответствующей 3D изображения является трудной задачей, когда размер выборки достигает миллиметрового диапазона из-за большой глубины очага низкой увеличение линз. К примеру глубины очага достигает более чем 50 мкм, когда 10 x увеличение объектива используется в то время как размер одной ячейки составляет обычно менее 10 мкм. Для повышения качества изображения, в настоящее время разрабатываются высокими технологиями микроскопии систем (например, два Фотон микроскопии11 и свет лист микроскопии системы12), но их доступность ограничена ввиду их дорогой ценой. В качестве альтернативы мы разработали ранее гибрид геля устройства куб (КГЧ)13. Устройство состоит из двух видов гидрогели: как гель поддержки и ECM как коллаген или Matrigel как культура гель агарозы. HGC позволяет нам собирать образца при культивировании и вращать куб для достижения многоцелевые изображений, который устраняет проблему глубины очага14.
Еще одна трудность в 3D экспериментов является их низкая воспроизводимость вследствие плохой управляемости 3D средах. В отличие от плоской культуры на пластиковые блюдо вариации в условиях первоначальной культуры легко произойти в трехмерном пространстве, окруженный мягким материалом. Значительные различия в результатах экспериментальной ухудшается после анализа и маски основных механизмов. Многие инженерные технологии были разработаны пространственно выровнять единичных клеток, таких как подложке15,16, волокна, ткачество17и18леса, но они требуют сложной предварительной обработки или специально Дизайн оборудования. В отличие от этого мы разработали методологию для достижения 3D клеток выравнивания в КГЧ19.
В этом протоколе мы иллюстрируется простая процедура с часто используемым оборудованием для контроля 3D первоначальная клеточная форма кластера в КГЧ. Во-первых был продемонстрирован процесс изготовления КГЧ. Затем micromolds сфабрикованы фотолитографии или процесс обработки были помещены в КГЧ производить карман с произвольной формы в ECM. Впоследствии весьма плотной клетки после центрифугирования вводили в карман, чтобы контролировать форму первоначальная клеточная кластера в КГЧ. Точно контролируемой клеток кластера может образы из многих направлений благодаря КГЧ. Нормальные человеческие бронхиальной эпителиальных клеток (NHBE) были использованы для демонстрации элемента управления формы кластера первоначальная клеточная и изображений ветвей с нескольких направлений повышения качества изображений.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:673px;" width="673">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">12-well-plate</td>
			<td style="width:124px;">Corning&#160; Inc.</td>
			<td align="right" style="width:132px;">3513</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:251px;">2-Methoxy-1-methylethyl Acetate</td>
			<td style="width:124px;">FUJIFILM Wako Pure Chemical Co.</td>
			<td style="width:132px;">130-10505</td>
			<td>PGMEA, CAS: 108-65-6&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:251px;">4% paraformaldehyde</td>
			<td style="width:124px;">FUJIFILM Wako Pure Chemical Co.</td>
			<td style="width:132px;">161-20141</td>
			<td>CAS: 30525-89-4</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:251px;">Agarose, low gelling temperature&#160; BioReagent</td>
			<td style="width:124px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Alexa fluor 488 phalloidin</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">AZ1512</td>
			<td>Merck</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">BEGM bullet kit</td>
			<td style="width:124px;">Lonza</td>
			<td style="width:132px;">CC-3170</td>
			<td>Specialized medium for NHBE cells</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Bovine Serum Albumin solution (10 %)</td>
			<td style="width:124px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A1595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">EGM-2 bullet kit</td>
			<td style="width:124px;">Lonza</td>
			<td style="width:132px;">CC-3162</td>
			<td>Specialized medium for endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Lipidure</td>
			<td style="width:124px;">NOF co.</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td>MPC polymer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Matrigel growth factor reduced basement membrane matrix</td>
			<td style="width:124px;">Corning&#160; Inc.</td>
			<td style="width:132px;">354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Normal Goat Serum (10%)</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">50197Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Normal human bronchial epithelial cells</td>
			<td style="width:124px;">Lonza</td>
			<td style="width:132px;">CC-2541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">SILPOT 184 W/C</td>
			<td style="width:124px;">Dow Corning Co.</td>
			<td style="width:132px;">3255981</td>
			<td>Base resin and catalyst for PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:251px;">SUEX D300</td>
			<td style="width:124px;"></td>
			<td style="width:132px;">DJ MicroLaminates, Inc</td>
			<td>Thick negative photoresist (thichness: 300 mm)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Triton X-100 (1%)</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">HFH10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:251px;">Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td style="width:124px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">TWEEN 20</td>
			<td style="width:124px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

initial 3d cell cluster control in a hybrid gel cube device for repeatable pattern formations

В пробирке 3D культур значительно подчеркнуто в культуре ткани клеток. Однако отсутствие экспериментальных повторяемость является одним из его ограничений. Несколько повторяемые результаты формирования шаблона ухудшается анализ механизмов, лежащих в основе самоорганизации. Сокращение различий в условиях первоначальной культуры, таких как плотность клеток и распределения в внеклеточного матрикса (ECM), имеет решающее значение для улучшения повторяемости 3D культуры. В этой статье мы демонстрируем простые, но надежные процедуры для контроля первоначальная клеточная кластера фигуру в 3D внеклеточной матрицы для получения высокой повторяемости шаблон образований. Micromold с желаемой формы производилась с помощью фотолитографии или процесс обработки, и он сформировал 3D карман в ECM, содержащихся в Кубе гибрид геля (КГЧ). Высококонцентрированных клетки затем вводили в кармане, так что форма ячеек кластер соответствует сфабрикованные плесень формы. Занятых КГЧ допускается многоцелевые сканирование его вращения, которая позволила изображений с высоким разрешением и захват структуры всей ткани, хотя низкий увеличение объектива была использована. Нормальные человеческие бронхиальной эпителиальные клетки были использованы для демонстрации методологии.

Нормальные человеческие бронхиальной эпителиальных клеток (NHBE) были использованы для демонстрации иллюстрируется методологии и контроля геометрии первоначального коллективного клеток для достижения цилиндрической формы и формы Призма, соответственно в среде ECM. М?...

Watch this Scientific Journal Video about Initial 3D Cell Cluster Control in a Hybrid Gel Cube Device for Repeatable Pattern Formations at JoVE.com

Initial 3D Cell Cluster Control in a Hybrid Gel Cube Device for Repeatable Pattern Formations

Управление кластером первоначальный 3D клеток в гибрид геля куб устройство для повторяющихся шаблон образований

Мы представляем процедуру для контроля первоначальная клеточная кластера фигуру в 3D внеклеточного матрикса получить воспроизводимые модели формирования. Кубических устройство, содержащее два разных гидрогели, используемых для достижения многоцелевые изображения для формирования узор ткани.

The importance of in vitro 3D cultures is considerably emphasized in cell/tissue culture. However, the lack of experimental repeatability is one of its ...

В этом протоколе используется простой метод повышения надежности модели культуры 3D-клеток без использования какого-либо специального оборудования. Основным преимуществом этого метода является то, что мы можем провести повторяемый эксперимент 3D культуры, контролируя начальное состояние культуры в кубическом устройстве. После подготовки пяти на пять миллиметров поликарбонатной кубической рамы, поместите раму на предварительно охлаждено слайд и ледяной ящик и использовать пипетку, чтобы добавить 12 микролитров разогретой 1,5%agarose от верхней стороны кубической рамы до нижней поверхности.Распространение агарозы, чтобы получить плоскую поверхность и позволить полимера вылечить. Используйте пинцет, чтобы сдвинуть раму к краю стекла и повернуть раму так, чтобы открытая сторона обращена вниз перед размещением рамы обратно на слайд. После заполнения следующих двух поверхностей рамы с более агарозы, как только что продемонстрировали, падение агарозы в контейнер с открытым лицом, чтобы сформировать стенку агарозы на четвертой и пятой сторон.Для настройки начальной формы клеточного кластера ввеже вводится соответствующая внеклеточная матрица для клеточной культуры, представляющих интерес, в пространство культуры гибридного геля и устанавливается сфабрикованная микроформа на куб. Затем поместите куб в инкубатор двуокиси углерода в течение 25 минут при 37 градусах по Цельсию. Когда внеклеточная матрица вылечится, осторожно поднимите микро-форму, чтобы матрица не ухудшалась.Карман в желаемой форме формы будет изготовлен во внеклеточной матрице. Для загрузки клеток концентрируется экспериментальная подвеска клетки после центрифугации в соответствующей экспериментальной среде клеточной культуры и впрыскивает клетки в карман в пределах внеклеточной матрицы. Поместите куб в инкубатор двуокиси углерода в течение 20 минут при 37 градусах по Цельсию, чтобы клетки упали во внеклеточный матричный карман, заполнив пространство, созданное микроформой.В конце инкубации поместите куб в один колодец из 24 хорошо пластины и добавить 100 микролитров соответствующей среды культуры клеток в колодец. Ввесь дополнительную внеклеточную матрицу, чтобы закрыть карман и вернуть куб в инкубатор на 25 минут. Когда внеклеточная матрица вылечена падение примерно 10 микролитров 20 градусов по Цельсию агарозы на верхней поверхности куба, чтобы закрыть поверхность и вылечить падение в течение 10 до 20 минут при 37 градусов по Цельсию.Затем накройте весь куб свежей средой для содействия осмотическому давлению для облегчения передачи питания клеткам в кубе. Для неинвазивного распознавания 3D-формы путем многонаправленного наблюдения поместите пластину на сцену микроскопа и получите изображения каждой стороны куба с помощью яркой полевой или фазовой контрастной микроскопии, используя пинцет для вращения кубиной службы, которая будет изображена между захватами. Для иммунофлуоресцентной визуализации путем многонаправленного наблюдения, сначала аспирировать супернатант из хорошо содержащего куб и исправить куб в 4%paraformaldehyde в течение 20 минут при комнатной температуре.В конце фиксации, мыть куб два раза с PBS в течение 10 минут за стирку. Impermeabilize куб с 0,5%triton x-100 и PBS в течение 10 минут при четырех градусах по Цельсию. Затем, мыть куб три раза в PBS в течение 10 минут за стирку, прежде чем блокировать любые неспецифические связи с козьей сыворотки и иммунофторесценции буфера в течение 60 минут при комнатной температуре.Затем испачкать клетки с соответствующими первичными антителами интерес в соответствии со стандартными протоколами окрашивания антител. Затем изображение всех шести сторон куба на лазерный или флуоресцентный микроскоп, как только что продемонстрировано. В этом репрезентативном эксперименте многонаправленная визуализация гибридных кубиков геля, культурных с нормальными человеческими бронхиальными эпителиальными клетками, демонстрирует генерацию начальной цилиндрической или призмообразной клеточной культуры путем фазового контраста и иммунофлуоресцентной визуализации культур.Здесь иммуноокрашивание нормальных эпителиальных клеток человека изначально контролировалось до цилиндрической формы в гибридном гелевом кубе, после генерации бронхового дерева. Ветви демонстрируют перпендикулярно цилиндрической оси, о чем свидетельствует многомерная визуализация. Важно вводить высокую плотность клеток во внеклеточный матричный карман, так как низкая плотность клеток может привести к ухудшению качества клеток после инкубации.Этот метод шаблона является повторяемым образованием 3D клеточного узора с количественным измерением с помощью многонаправленной визуализации для изучения механизма развития блюда.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microfluidic Device for Recreating a Tumor Microenvironment in Vitro

Microfluidic Device for Recreating a Tumor Microenvironment in Vitro

Микрофлюидных устройство для воссоздания микроокружение опухоли<em&gt; В Vitro</em

We have developed a microfluidic device that mimics the delivery and systemic clearance of drugs to heterogeneous three-dimensional tumor tissues in ...

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Создание двумерных рисунком Подложки для конфайнмента белков и клеточных

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Ordering Single Cells and Single Embryos in 3D Confinement: A New Device for High Content Screening

Заказ отдельных клеток и Single зародышами в 3D конфайнмента: Новое устройство для высокого содержания скрининга

Biological cells are usually observed on flat (2D) surfaces. This condition is not physiological, and phenotypes and shapes are highly variable. Screening ...

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

Preparation of 3D Collagen Gels and Microchannels for the Study of 3D Interactions In Vivo

Подготовка 3D Коллаген Гели и микроканалов для изучения 3D взаимодействий<em&gt; В Vivo</em

Historically, most cellular processes have been studied in only 2 dimensions.  While these studies have been informative about general cell signaling ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning и сборка 3D микрососудов

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Ligand Nano-cluster Arrays in a Supported Lipid Bilayer

Лигандом Нано-кластер Массивы в поддерживаемому липидный бислой

Currently there is considerable interest in creating ordered arrays of adhesive protein islands in a sea of passivated surface for cell biological ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

Настраиваемый гидрогели от легочного внеклеточной матрицы для 3D клеточных культур

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

A Microcontroller Operated Device for the Generation of Liquid Extracts from Conventional Cigarette Smoke and Electronic Cigarette Aerosol

Микроконтроллер работает устройство для генерации жидких экстрактов из обычных сигарет курить и электронных сигарет аэрозоля

Electronic cigarettes are the most popular tobacco product among middle and high schoolers and are the most popular alternative tobacco product among ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

Человек 3D Экстраклеточная матрица-Адипоцит Культура Модель для изучения Матрица-Клеточная метаболический перекрестный разговор

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

Поколение динамических экологических условий с использованием микрофлюидного устройства с высокой пропускной способностью

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...