Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من خلال تمويل البحوث الناشئة لإدوارد نارايان من خلال جامعة سيدني الغربية، كلية العلوم والصحة. ويشكر المؤلفون جاك نخول على مساعدته في معالجة العينات.

وقد تم تنفيذ هذا المشروع في إطار مبادئ توجيهية صارمة لرعاية الحيوانات والبشر. منحت أخلاقيات الحيوان من قبل جامعة سيدني الغربية (A12373). بالإضافة إلى ذلك، تم تقديم تقييم المخاطر المختبرية والسلامة البيولوجية ونموذج الإشعاع وقبلت من قبل جامعة سيدني الغربية لإجراء هذا البحث بأمان (B12366).
<p class...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

هناك عدد من الدراسات التي تستخدم مجموعة من التقنيات للكشف عن الكورتيزول في الفراء الثدييات. تعرض هذه الدراسة نتائج للكشف عن الكورتيزول في الفراء الذي تم جمعه من كوالا البرية المعرضة للإجهاد البشري الحالي. استخدمت هذه الدراسة الرائدة الفراء لاختبار أي من المذيبات الثلاثة شائعة الاستخدام ...

النظم الإيكولوجية الأسترالية تحافظ على حياة الإنسان من خلال توفير الخدمات بما في ذلك الغذاء والألياف من بين العديد من التفاعلات الدينامية الأخرى1. ومن المفارقات أن النشاط البشري هو الذي يعمل كمحرك مهيمن لاضطراب النظم الإيكولوجية من خلال تغيير التنوع البيولوجي2. إن تجزئة الموائل، المعروفة باسم عملية تقسيم الموائل المستمرة الكبيرة إلى بقع صغيرة من الأراضي، معزولة عن بعضها البعض، هي التغير الرئيسي في التنوع البيولوجي البشري المنشأ الذي يهدد النظم الإيكولوجية الأسترالية2. ويغير تجزؤ الموئل هيكل وتنوع تكوين الأنواع في أي منطقة معينة، مما يقلل من مساحة الموائل اللازمة لهذه الأنواع للحفاظ على تجمعات قابلة للحياة2. ونتيجة لذلك هو زيادة المنافسة بين الأنواع للموارد بما في ذلك الغذاء والوقود والألياف والمياه3. إن تدمير النظم الإيكولوجية الأسترالية من خلال تغيير التنوع البيولوجي له عواقب كارثية على العديد من الأنواع الأسترالية الأصلية1.
الأنواع المريخية الأكثر شهرة في أستراليا، والكوالا(Phascolarctos cinereus)،يعتمد على النظم الإيكولوجية الأسترالية تبقى صحية لبقائها4. وأدى إدخال التسوية الأوروبية إلى انخفاض سريع في عدد السكان الأستراليين من الكوالا، حيث ذبحوا بسبب رشقاتهم سعيا وراء الربح في تجارة تصدير ية كبيرة5. وقد حظرت هذه الممارسة في الثمانينات، ثم تمكن سكان الكوالا من تحقيق الاستقرار5. ومع ذلك، أدى النمو الأسي للسكان البشر في هذا النوع تتنافس على جزء كبير من بيئتها، وبقاءها هو مرة أخرى تحت التهديد6. ووفقا للاتحاد الدولي لحفظ الطبيعة، فإن جميع سكان الكوالا الأستراليين مدرجون في قائمة عرضة للانقراض مع انخفاض الاتجاه السكاني7. وتعزى هذه القائمة إلى عدم اليقين بشأن البارامترات السكانية ذات الصلة والتباين الملحوظ في الاتجاهات السكانية لهذا النوع7. وباعتبارها أكثر الحيوانات شهرة ومتوطنة، فإن الكوالا تعود بالفائدة إلى حد كبير على الاقتصاد الأسترالي من خلال السياحة (مكتب البيئة والتراث في نيو ساوث ويلز 2018). ويشير تقدير إلى أن السياحة ذات الصلة بالكوالا قد ولدت حوالي 9000 فرصة عمل وتسهم بما يتراوح بين 1.1 و2.5 مليار دولار في الاقتصاد (مكتب البيئة والتراث في نيو ساوث ويلز 2018). إزالة أي نوع واحد لديه القدرة على أن تكون كارثية، ويمكن أن ينظر إليها في الانخفاض المطرد للحياة البرية الأسترالية الأصلية6. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الاقتصاد الأسترالي سوف يشعر العواقب إذا استمر سكان الكوالا الأسترالية في الانخفاض بمعدل6.
ويُقترح أن انتشار الوفيات والأمراض استجابة لتجزؤ الموائل هو نتيجة للإجهاد المزمن8. وبالفعل، أُعلن عن انقراض أربعة وعشرين نوعاً من الأنواع المريخية في أستراليا بسبب تجزؤ الموائل، مع اتباع الكوالا اتجاهاً مماثلاً8. إن تعقيد تجزؤ الموائل والنظم البيولوجية هو أمر تآزري ولكن يمكن تفكيكه من خلال تحليل الاستجابة للإجهاد6. عموما، أي اضطراب في محيط الحيوانات الطبيعية ينشط سلسلة معقدة من الأحداث العصبيةالهرمونية، والمعروفة باسم "القتال أو الطيران" استجابة 9،10. هذه الاستجابة للإجهاد هي العملية التي تبدأ في الدماغ حيث يتم تنشيط محور الغدة النخامية الغدة النخامية الغدة الكظرية (HPA)11. عنصر من الدماغ يسمى تحت المهاد النشرات هرمون الإفراج عن الكورتيكوتروفين (CRH), الذي يشير بعد ذلك الغدة النخامية الأمامية لإطلاق هرمون أدرينوكورتيكوتروبيوم (ACTH)11. وهذا بدوره يحفز إفراز الكورتيزون من النخاع الكظري. يقوم الجسم بتعميم الكورتيزون من خلال الدم، مما يحول تخزين الجلوكوز من الجليكوجين ويعبئ الجلوكوز من الجليكوجين المخزن11. هذه السلسلة من الأحداث العصبية الهرمونية هي الاستجابة المستخدمة من قبل الحيوان للتعامل مع المحفزات لا يمكن التنبؤ بها11. ومع ذلك ، عندما يتم إطلاق الكورتيزون وتبقى مرتفعة لفترة طويلة من الزمن ، يعتبر الحيوان يعاني من الإجهاد المزمن12،13. وتنطوي هذه العملية على تحويل الطاقة بعيدا عن الوظائف الجسدية البدنية الأخرى، حيث أنها ضرورية لإنتاج الغلوكوكورتيكود المستمر13. ونتيجة لذلك، يمكن للإجهاد المزمن أن يمنع النمو والإنجاب والمناعة، وكلها سمات اللياقة البدنية الرئيسية المطلوبة للبقاء على قيد الحياة14.
قياس إنتاج الحيوان غلوكوكورتيكود هو مؤشر شائع يستخدم لتحديد ما إذا كان الحيوان يعاني من الإجهاد الفسيولوجي15. للقيام بذلك، يمكن قياس الكورتيزون في بلازما الدم، المصل، اللعاب، البول أو البراز16. ومع ذلك، تشير الأدلة إلى أن الشعر هو مؤشر أكثر فعالية بكثير من الإجهاد المزمن، بدلا من16المذكورة أعلاه . ويرجع ذلك إلى أن الشعر يعتقد أن دمج الهرمونات المنقولة بالدم خلال مرحلة نموها; هو نسبيّا ثابتة; وأي الكورتيزول المكتشف في الشعر يعكس الإجهاد الفسيولوجي الذي عانى منه خلال فترة نمو الشعر، والذي يمكن أن يكون أسابيع حتى أشهر16. وعلاوة على ذلك، فإن أي مجموعة من الكورتيزول ينبغي أن تكون غير الغازية من أجل تقليل الإجهاد المرتبط ة التقاط والتعامل مع16. ومع ذلك، فإن أي الإجهاد من ذوي الخبرة خلال هذا الحدث لن يؤثر على مستويات الكورتيزون في الشعر16. كانت هناك العديد من الدراسات التي تستكشف كفاءة استخدام الشعر لقياس الإجهاد على المدى الطويل في عدد من الحيوانات، وتشمل دراسات عن الرنة، الدببة الأشيب، الحصى ريسوس، muskoxen، والدببة البني17،18، 19 سنة , 20 , 21.عادة ما يتم استخراج الكورتيزول الشعر عن طريق غسل العينة أولا لضمان العرق والزهم المستمدة من الكورتيزول المودعة على سطح الشعر لا يتم استخراج مشترك مع الكورتيزول ومن ثم سحق العينة في حبة الخافق22. بعد الغسيل، تحتاج العينة إلى تجفيفها لضمان التبخر الكامل22. وأخيرا، باستخدام المذيبات، يمكن استخراج العينة وإعادة تشكيلها لتسهيل اختبار الكورتيزول22. المذيب الأكثر شيوعا المستخدمة لاستخراج الكورتيزول من الفراء هو الميثانول21،23؛ ومع ذلك, هناك بعض الدراسات التي تستخدم الإيثانول وisopropanol في تقنيات استخراج الكورتيزول. على سبيل المثال، كانت دراسة استخدام الإيثانول ناجحة لاستخراج الكورتيزول من السائل السلوي البشري24. بالإضافة إلى ذلك، كانت دراسة التي استخدمت isopropanol ناجحة لاستخراج الكورتيزول من شعر الإنسان والأظافر25،26. ولهذا السبب، اختبرت هذه الدراسة جميع المذيبات الثلاثة (الميثانول والإيثانول والإيزوبروبانول) لتحديد أيهما كان الأكثر نجاحا لاستخراج الكورتيزول من عينات من فرو الكوالا.
وكان الهدف الرئيسي من هذه الدراسة استخدام التقنيات الحالية للتحقق من صحة تقنية استخراج هرمون الأمثل لاستخدامها كتدبير غير الغازية من الكورتيزول من الفراء كوالا. وقد تحقق ذلك عن طريق اختبار ثلاثة مذيبات استخراج (الميثانول، الإيثانول، وإيزوبروبانول). افترضنا أن الميثانول سيكون المذيب الأمثل المستخدم لاستخراج الكورتيزول من فرو كوالا لأنه هو المذيب الموصى به لاستخراج من قبل شجرة اختبار الكورتيزول مجموعات27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

الطرق المثلى لاستخراج هرمون المستخدمة لقياس الإجهاد في الحيوانات عبر أنواع العينة ليست دائماً هي نفسها. تواجه الأنواع المريخية الشهيرة في أستراليا، الكوالا(Phascolarctos cinereus)،التعرض لفترات طويلة لعوامل الإجهاد التي يسببها الإنسان وتقييم الإجهاد المزمن في السكان البرية له ما يبرره على وجه السرعة. واحدة من أكثر الطرق فعالية لقياس الإجهاد المزمن من خلال تحليل هرمون الكورتيزول الكورتيزول الكورتيزول في الشعر أو الفراء، كما أنه يدعم الاستجابات الفسيولوجية والسلوكية. تهدف هذه الدراسة التحقق من صحة المختبر لاختبار التقنيات الحالية للتحقق من طريقة استخراج هرمون الأمثل لاستخدامها كتدبير غير الغازية من الكورتيزول في الفراء كوالا. ومن المسلم به أن استخدام التقنيات غير الغازية لقياس هرمونات الإجهاد هو المفضل على التقنيات التقليدية، الغازية بسبب وجهات نظرهم العملية والأخلاقية المثالية. بالإضافة إلى ذلك، فمن الأسهل نسبيا للحصول على الفراء من الكوالا مما هو عليه للحصول على عينات من دمائهم. استخدمت هذه الدراسة عينات من فرو الكوالا المكتسبة من مستشفى أديلايد كوالا والحياة البرية لتشغيل عدد من تقنيات استخراج الهرمونات في محاولة للتحقق من طريقة استخراج الكورتيزول الأمثل. وأظهرت النتائج أن الميثانول 100٪ قدم استخراج المذيبات الأمثل مقارنة مع الإيثانول 100٪ أو 100٪ isopropanol على أساس نتائج التوازي. وفي الختام، وفرت هذه الطريقة لاستخراج الكورتيزول من فرو كوالا اختباراً موثوقاً به غير الغازية يمكن استخدامه لدراسة الإجهاد المزمن في الكوالا.

يتم تحديد الكشف عن اختبار الأيض هرمون من الفائدة باستخدام التوازي. باستخدام منحنى التوازي، تحدد نقطة الربط 50٪ أيضًا عامل تخفيفالعينة على المنحنى القياسي (الشكل 1). كما هو مبين فيالرسم البياني التوازي (الشكل 1)، والإيثانول 100٪ و100٪ مقتطفات Isopropanol لم توفر الإزاحة موازية ضد م?...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

نقدم بروتوكول لتحديد المذيبات استخراج الأمثل لقياس الكورتيزول من الفراء كوالا. والمذيبات المستخدمة في هذا البروتوكول هي الميثانول والإيثانول والإيزوبروبانول. تحديد المذيبات استخراج الأمثل سوف تساعد في قياس موثوق الفراء لتحديد تأثير الإجهاد المزمن على الكوالا.

قياس الكورتيزول في كوالا(فيسكولارتوس سينيريوس)الفراء

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

هذا هو أسلوب جديد لتقييم هرمون جلوكوكورتيكويد, الكورتيزول, من الفراء كوالا. وهو يوفر علامة حيوية جديدة لتقييم الإجهاد المزمن في الكوالا. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هو أنه أسلوب حساس للغاية وقابلة للتكرار مع وقت تحول سريع إلى حد ما بين إعداد العينة ومحسان الهرمونات.هذه التقنية تسمح للتقييم الكمي للإجهاد المزمن في الكوالا، وهو أداة مفيدة للغاية لإدارة السريرية. مساعدتي في هذا الإجراء هو ديلان فوكس، وهو طالب غراد من مختبري. لبدء هذا الإجراء استرداد الفراء من التخزين في ناقص 80 درجة مئوية والسماح لها ذوبان في درجة حرارة الغرفة.ثم، وزن الفراء على توازن الدقة التحليلية المختبرية. ضع 60 ملليغرامًا من الفراء في أنبوب طرد مركزي وزنها مسبقًا وتسمّى 1.5 ملليلتر وكرر هذا حتى يتم ملء 18 أنبوبًا. باستخدام ماصة، إضافة ملليلتر واحد من 100٪ HPLC الصف isopropanol إلى كل أنبوب.دوامة العينات لمدة 30 ثانية. سلالة كل عينة مع منخل الدقيقة الدقيقة 0.5 ملليلتر وذلك لتحقيق فصل السائل والفراء، والتخلص من السائل في حاوية النفايات. ضع كل عينة من الفراء في قارب وزنها البلاستيك المسمى.ثم ضع قوارب الوزن في جهاز تجفيف فراغ وترك لمدة ثلاثة أيام للسماح للفراء الجافة. مرة واحدة الفراء هو جاف تماما، ووضع كل عينة في أنبوب microcentuge 1.5 ملليلتر المسمى. ضع كل عينة في طاحونة حبة مع ثلاثة حبات فولاذية من الكروم وسحق لمدة دقيقتين في 30 يهز في الثانية الواحدة.كرر هذا النقل مع 100٪ من الميثانول التحليلية و 100٪ من الدرجة التحليلية isopropanol حتى 18 تم ملء الأنابيب الإجمالية. بعد ذلك، استخدم ماصة لنقل مليلتر واحد من تقنية الاستخراج الأولى إلى ستة أنابيب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر تحتوي على عينة من الفراء. اِقْف كل أنبوب، واستخدم شاكرًا لاحتضانه في درجة حرارة الغرفة مع النبض المستمر لمدة 12 ساعة على الأقل.ثم سلالة العينات مع منخل الدقيقة الدقيقة 0.5 ملليلتر. استخدام ماصة لنقل السائل إلى أنبوب جديد يسمى 1.5 ملليلتر microcentuge، مع ضمان أن يتم التخلص من الفراء بشكل مناسب. في غطاء محرك الدخان، حاول تماما استخراج المذيبات تحت تيار من بخار النيتروجين.ثم، إعادة تشكيل العينة المجففة مع 400 ميكرولترات من العازلة المقايسة و 100 ميكرولترات من 100٪ الإيثانول الصف التحليلية. لجعل الضوابط، أولا اختيار عينات من الحيوانات مع التعرض المعروف للإجهاد. لجعل تجمع استخراج، واتخاذ 20 ميكرولترات من استخراج من كل عينة حتى يتم الحصول على حجم إجمالي 200 ميكرولترات.تخزين تجمع استخراج في ناقص 80 درجة مئوية حتى جاهزة لتشغيل المقايسات. عندما تكون جاهزة، والحصول على عامل التخفيف لنقاط 30٪ و 70٪ ملزمة من الرسم البياني التوازي لاستخراج ضد معيار الكورتيزول، واستخدام المخزن المؤقت للمقايسة لتمييع تجمع العينة بشكل مناسب لإنشاء عناصر التحكم العالية والمنخفضة. باستخدام مجموعة الكورتيزول التجارية إعداد لوحة الشريط 96 بئر بما في ذلك العينات، والضوابط، ومعايير الكورتيزول، والآبار غير محددة ملزمة، والآبار ملزمة الحد الأقصى وفقا لتعليمات المورد.استخدم ورقة تخطيط اللوحة المضمنة في كتيب المجموعة لقائمة مواضع العينات وعناصر التحكم والمعايير. بعد ذلك، اتبع عملية استخراج هرمون الفراء الموصوفة سابقاً للحصول على 100٪ الفراء الكوالا الميثانول المستخرج. إعداد الكواشف مجموعة الكورتيزول وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.ماصة 50 ميكرولترات من العينات أو المعايير في آبار اللوحة. Pipette 75 ميكرولترات من المخزن المؤقت للمقصى في الآبار غير محددة ملزمة، و 50 ميكرولترات من المخزن المؤقت المقايسة في الآبار القصوى الملزمة. باستخدام ماصة مكرر إضافة 25 ميكرولترات من الكورتيزول مترافق لكل بئر.ثم، ماصة 25 ميكرولترات من الجسم المضاد الكورتيزول في كل بئر، باستثناء الآبار غير محددة ملزمة. اضغط بلطف على جانبي اللوحة لضمان أن الكواشف مختلطة بشكل جيد. غطي اللوحة بخارج اللوحة، واستخدمي شاكر مداريًا للاهتزاز في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة.بعد ذلك، قم بإزالة ختم اللوحة، وابتد من لوحة البئر عن طريق غسل كل بئر بـ 300 ميكرولترات من عازلة الغسيل أربع مرات. ثم جفف الطبق عن طريق التنصت عليه على مناشف ماصة نظيفة. مايليت 100 ميكرولترات من الركيزة رباعي الميثيل بنزين إلى كل بئر.ضع مدقّق اللوحة على لوحة البئر، ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد هذا، ماصة 50 ميكرولترات من وقف حل في كل بئر. نقل لوحة في لوحة قارئ قادرة على قراءة 450 نانومتر، وحساب تركيز هرمون النهائي كما هو مبين في بروتوكول النص.في هذه الدراسة، يتم تحديد الكشف عن مقال من الأيض هرمون الفائدة باستخدام التوازي. على منحنى التوازي، نقطة 50٪ ربط يحدد عامل تخفيف العينة على المنحنى القياسي. كما يمكن أن نرى، لم 100٪ الإيثانول و 100٪ مقتطفات isopropanol لا توفر إزاحة موازية ضد معيار الكورتيزول.ومع ذلك، فإن استخراج الميثانول 100٪ لا توفر إزاحة موازية ضد معيار الكورتيزول. يتم تحديد معاملات الفحص الداخلي والاتّب من الاختلاف من مستخلصات عينة عالية ومنخفضة الربط يتم تشغيلها في جميع المقايسات. وينظر إلى الضوابط الداخلية المنخفضة الملزمة على أنها تجمع استخراج كوالا أنيق ، في حين أن الضوابط الداخلية عالية الملزمة ينظر إليها على أنها تجمع استخراج الكوالا المخفف واحد إلى اثنين.ثم يتم تحديد العلاقة بين كل مستخلص المذيبات ومعيار الكورتيزول باستخدام مؤامرة الانحدار. استخراج 100٪ الميثانول يوفر أفضل خط الانحدار مع أعلى قيمة R-تربيع مقارنة مع 100٪ الإيثانول و 100٪ مقتطفات isopropanol. من المهم أن نتذكر أن خطوة غسل العينة يجب أن يتم تنفيذها قبل طحن العينات لتجنب فقدان هرمونات الستيرويد.بعد هذا الإجراء، يمكننا قياس الهرمونات الستيرويدية الأخرى، مثل الهرمونات الإنجابية للنظر في التفاعلات بين الإجهاد والتكاثر في الكوالا. توفر هذه التقنية أداة جديدة للمجال الناشئ من علم وظائف الأعضاء الحفظ، مما يتيح التقييم غير الغازية للكورتيزول في الفراء الكوالا. توفر مجموعة الكورتيزول التجارية الكواشف بكميات دقيقة.ومع ذلك، من المهم ارتداء معدات الحماية الشخصية لتقليل الضرر إلى حد ما في حين إجراء هذا الإجراء المختبري.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

قياس بازال و فورسكولين تحفيز انحلال الدهون في الأربطة الدهنية الدهنية

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

إعداد هيدروليساتي الكيراتين من ريش الدجاج وتطبيقه في مستحضرات التجميل

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

قياس استهلاك الأوكسجين المتقدرية في ألياف بيرميبيليزيد من المورفولوجية استخدام كميات ضئيلة من الأنسجة

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

في الموقع القياس والعلاقة بين كثافة الخلية وانبعاث الضوء من البكتيريا طرحه

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

قياس تركيز أيون في طبقة الحدود أونستيرريد مع ماصة المشبك التصحيح مفتوحة: تدفق الآثار في السيطرة على قنوات أيون بالسوائل

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

انجذاب تطهير المجمعات البروتين ترانسلوكون بلاستيدات الخضراء باستخدام علامة الحنفية

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

القياس المباشر للمشاركة المستهدفة KDM1A باستخدام الاختبارات المناعية المستندة إلى العلاج الكيميائي

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

إعداد عينة النبات لقياس محتوى النيوكليوسيد/النيوكليوتيدات باستخدام جهاز HPLC-MS/MS

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

قياس الأحماض الدهنية β الأكسدة في تعليق خلايا الكبد الفئران المعزولة حديثا

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

مقايسات نقل طاقة الرنين Förster التي تم حلها بمرور الوقت لقياس بروتينات STAT المفسفرة الداخلية في الخلايا البشرية

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...