Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet gennem opstart forskningsstøtte til Edward Narayan gennem Western Sydney University, School of Science and Health. Forfatterne takker Jack Nakhoul for hjælp til prøve behandling.

Dette projekt blev udført under strenge dyre-og menneske sundheds retningslinjer. Dyreetik blev tildelt af Western Sydney University (A12373). Derudover, en lab risikovurdering og biosikkerhed og stråling form blev indsendt og accepteret af Western Sydney University til sikkert at udføre denne forskning (B12366).
Bemærk: Koala Fur prøver til dette projekt blev indhentet fra Adelaide Koala og Wildlife Hospital, beliggende på 282 Anzac Highway, Plympton South Australia. Fur blev taget fra ...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

Der er en række undersøgelser, der bruger en række teknikker til at detektere cortisol i pattedyrs pels. Denne undersøgelse præsenterer resultater for påvisning af cortisol i pels indsamlet fra en vild Koala udsat for nuværende antropogene stress. Denne banebrydende undersøgelse brugte pels til at teste, hvilke af de tre almindeligt anvendte opløsningsmidler er bedst til at udtrække cortisol, et mål af kronisk stress, fra Koala pels. Resultaterne viste, at 100% methanol var det anbefalede opløsningsmiddel til...

Australske økosystemer opretholder menneskeliv gennemleve ring af tjenester, herunder mad og fiber blandt mange andre dynamiske interaktioner1. Ironisk nok er det menneskelig aktivitet, der fungerer som den dominerende drivkraft for økosystem forstyrrelser gennem biodiversitets ændringer2. Fragmentering af levesteder, kendt som processen med at opdele store kontinuerlige habitater i små jord pletter, isoleret fra hinanden, er den største antropogene biodiversitet forandring truer australske økosystemer2. Fragmentering af levesteder ændrer strukturen og mangfoldigheden af artssammensætning i et givet område og mindsker dermed det område af habitat, som er nødvendigt for at opretholde levedygtige populationer2. Resultatet af dette er øget konkurrence mellem arter for ressourcer, herunder fødevarer, brændstof, fiber, og vand3. Ødelæggelsen af australske økosystemer gennem ændringer i biodiversiteten har katastrofale konsekvenser for mange australske indfødte arter1.
Australiens mest ikoniske pungdyr arter, Koala (phascolarctos cinereus), afhænger af australske økosystemer forbliver sunde for deres overlevelse4. Indførelsen af den europæiske bosættelse forårsagede en hurtig nedgang i de australske befolkninger i Koalas, da de blev slagtet for deres skind i jagten på profit i en stor eksporthandel5. Denne praksis blev forbudt i 1980 ' er og populationer af Koalas var derefter i stand til at stabilisere5. Men eksponentiel vækst i den menneskelige befolkning har resulteret i denne art konkurrerer om en stor del af deres habitat, og deres overlevelse er igen under trussel6. Ifølge den internationale Union for naturbevaring (IUCN), alle populationer af australske Koalas er opført som sårbare over for udryddelse med en faldende befolknings tendens7. Denne fortegnelse tilskrives usikkerheden omkring relevante populations parametre og markante variationer i befolknings tendenserne for denne art7. Som de mest ikoniske og endemiske dyr, Koalas stort set gavne den australske økonomi gennem turisme (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Et skøn tyder på, at Koala relaterede turisme har genereret ca 9.000 job og bidrager mellem $1,1 og $2.500.000.000 til økonomien (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Fjernelsen af en art har potentialet til at være katastrofal, og kan ses i den stadige nedgang i indfødte australske dyreliv6. Desuden, Australien økonomi vil føle forgreninger hvis populationer af australske Koalas fortsætte med at falde med den sats, de er6.
Det foreslås, at forekomsten af død og sygdom som følge af fragmentering af levesteder er resultatet af kronisk stress8. Allerede, fireogtyve pungdyr arter er blevet erklæret uddøde i Australien på grund af habitatfragmentering, med Koalas efter en lignende tendens8. Kompleksiteten af habitatfragmentering og biologiske systemer er synergistisk, men kan pakkes ud gennem analyse af stress respons6. Generelt, enhver forstyrrelse i et dyr naturlige omgivelser aktiverer en kompleks kaskade af Neuro hormonelle begivenheder, kendt som en ' Fight eller Flight ' svar9,10. Denne reaktion på stress er en proces, der begynder i hjernen, hvor hypothalamus-hypofyse-adrenal (HPA) akse er aktiveret11. En komponent i hjernen kaldes hypothalamus frigiver kortikotropin-releasing hormon (CRH), som derefter signalerer den forreste hypofyse til frigivelse adrenocorticotrophic hormon (ACTH)11. Dette stimulerer igen glukokortikoid sekretionen fra binyre medulla. Kroppen cirkulerer glukokortikoider gennem blodet, som afledes lagring af glucose fra glykogen og mobiliserer glukose fra lagret glykogen11. Denne kaskade af Neuro hormonelle begivenheder er det svar, der anvendes af dyret til at beskæftige sig med uforudsigelige stimuli11. Men, når glukokortikoider frigives og forblive forhøjet i en længere periode, dyret anses for at være oplever kronisk stress12,13. Denne proces indebærer at omdirigere energi væk fra andre korporal kropsfunktioner, da det er nødvendigt for løbende glukokortikoid produktion13. Som et resultat, kronisk stress kan forbyde vækst, reproduktion og immunitet, alle er vigtige fitness egenskaber kræves for overlevelse14.
Måling af et dyrs glukokortikoidproduktion er en fælles indikator, der anvendes til at bestemme, om dyret oplever fysiologisk stress15. For at gøre dette kan glukokortikoider måles i blodplasma, serum, spyt, urin eller fæces16. Men, tyder på, at hår er en langt mere effektiv indikator for kronisk stress, i modsætning til de førnævnte16. Dette skyldes, at håret menes at indarbejde blod-bårne hormoner i sin vækstfase; Det er relativt stabilt; og enhver cortisol detekteret i håret afspejler fysiologiske stress oplevet i perioden med hårvækst, som kan være uger frem til måneder16. Desuden bør enhver samling af cortisol være ikke-invasiv for at minimere stress i forbindelse med opsamling og håndtering16. Men, enhver stress oplevet under denne begivenhed ville ikke påvirke glukokortikoid niveauer i hår16. Der har været mange undersøgelser, der udforsker færdighed i at bruge hår til at måle langsigtet stress i en række dyr, og omfatter undersøgelser af rensdyr, Grizzly bjørne, rhesus aber, moskus og brune bjørne17,18, 19 , 20 , 21. hår cortisol er normalt udvindes ved første vask prøven for at sikre sved og sebum-afledte cortisol deponeret på overfladen af håret er ikke Co-ekstraheret med cortisol og derefter pulveriserer prøven i en perle-beater22. Efter vask skal prøven tørres for at sikre fuldstændig fordampning22. Endelig, ved hjælp af et opløsningsmiddel, kan prøven ekstraheres og rekonstitueres for at lette analysen af cortisol22. Det mest almindelige opløsningsmiddel, der anvendes til at udtrække cortisol fra pels, er methanol21,23; Men, der er nogle undersøgelser, der bruger ethanol og isopropanol i deres cortisol udvinding teknikker. For eksempel, en undersøgelse, der brugte ethanol var en succes for udvinding cortisol fra Human amniotisk væske24. Desuden, en undersøgelse, der anvendes isopropanol var en succes for udvinding cortisol fra menneskehår og negle25,26. Af denne grund testede denne undersøgelse alle tre opløsningsmidler (methanol, ethanol og isopropanol) for at afgøre, hvilken var den mest vellykkede til ekstraktion af cortisol fra prøver af Koala pels.
Det primære formål med denne undersøgelse var at bruge nuværende teknikker til at validere en optimal hormon udvinding teknik, der skal anvendes som en ikke-invasiv måling af cortisol fra Koala pels. Dette blev opnået ved at afprøve tre ekstraktionsmidler (methanol, ethanol og isopropanol). Vi hypotese, at methanol vil være den optimale opløsningsmiddel, der anvendes til udvinding cortisol fra Koala pels, fordi det er den anbefalede opløsningsmiddel af ekstraktion af Arbor assay cortisol kits27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

Optimale metoder til hormon ekstraktion bruges til at måle stress i dyr på tværs af prøvetyper er ikke altid de samme. Australiens ikoniske pungdyr arter, Koala (phascolarctos cinereus), står over for langvarig udsættelse for antropogene inducerede stressorer og vurdering af kronisk stress i vilde populationer er presserende berettiget. En af de mest effektive måder at måle kronisk stress er gennem analyse af glukokortikoidhormonet cortisol i hår eller pels, da det understøtter fysiologiske og adfærdsmæssige reaktioner. Dette laboratorium validering undersøgelse har til formål at teste nuværende teknikker til at validere en optimal hormon udvinding metode, der skal anvendes som en ikke-invasiv måling af cortisol i Koala pels. Det erkendes, at ved hjælp af ikke-invasive teknikker til at måle stresshormoner foretrækkes frem for traditionelle, invasive teknikker på grund af deres ideelle praktiske og etiske standpunkter. Desuden er det forholdsvis lettere at erhverve pels fra Koalas end det er at erhverve prøver af deres blod. Denne undersøgelse brugte prøver af Koala pels erhvervet fra Adelaide Koala og Wildlife Hospital til at køre en række hormon udvinding teknikker i et forsøg på at validere en optimal cortisol udvinding metode. Resultaterne viste, at 100% methanol gav den mest optimale solventekstraktion sammenlignet med 100% ethanol eller 100% isopropanol baseret på parallelitet resultater. Afslutningsvis, denne metode til cortisol udvinding fra Koala pels forudsat en pålidelig ikke-invasiv analyse, der kunne bruges til at studere kronisk stress i Koalas.

Analyse påvisning af hormon metabolitter af interesse bestemmes ved hjælp af parallelitet. Ved hjælp af en parallelitet kurve fastsætter 50%-bindings punktet også prøve fortyndingsfaktoren på standardkurven (figur 1). Som vist i parallelismen Graf (figur 1), 100% ethanol og 100% isopropanol ekstrakter ikke give parallel forskydning mod cortisol standard. Imidlertid leverede 100% methanol-ekstrakten parallel forskydning mod cortisol-standarden. Tørrede ekstrakter blev kørt pænt ...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

Vi præsenterer en protokol til at bestemme den optimale ekstraktionsmiddel til at måle cortisol fra Koala pels. De opløsningsmidler, der anvendes i denne protokol, er methanol, ethanol og isopropanol. Bestemmelse af en optimal ekstraktionsmiddel vil støtte i pålideligt måling af pels til at bestemme virkningen af kronisk stress på Koalas.

Cortisol måling i Koala (Phascolarctos cinereus) pels

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Dette er en ny metode til vurdering af glukokortikoide hormon, kortisol, fra koala pels. Det giver en ny biomarkør til vurdering af kronisk stress i koalas. Den største fordel ved denne teknik er, at det er en meget følsom og reproducerbar metode med en forholdsvis hurtig ekspeditionstid mellem prøveforberedelse og hormonanalyse.Denne teknik giver mulighed for kvantitativ vurdering af kronisk stress i koalas, som er et meget nyttigt klinisk styringsværktøj. At hjælpe mig med denne procedure er Dylan Fox, en grad studerende fra mit laboratorium. For at begynde denne procedure hente pelsen fra opbevaring på minus 80 grader Celsius og lad det tø ved stuetemperatur.Derefter vejes pelsen på et laboratorium analytisk præcision balance. 60 mg pelsen anbringes i et forvejet og mærket 1,5 millilitercentrifugerør, og dette gentages, indtil 18 rør er fyldt. Ved hjælp af en pipette tilsættes en milliliter 100% HPLC-kvalitet isopropanol til hvert rør.Vortex prøverne i 30 sekunder. Hver prøve belastes med en mikropræcisionsstien på 0,5 milliliter for at opnå adskillelse af væske og pels, og væsken smides ud i en affaldsbeholder. Hver pelsprøve anbringes i en mærket plastvejrbåd.Derefter placere vejebåde i en vakuum ekssiccator og lad i tre dage for at lade pelsen tørre. Når pelsen er helt tør, anbringes hver prøve i et mærket 1,5 milliliter mikrocentrifugerør. Hver prøve anbringes i en perlefabrik med tre kromstålperler og pulveriseres i to minutter ved 30 rystelser pr. sekund.Denne overførsel gentages med 100 % methanol af analysekvalitet og 100 % isopropanol af analysekvalitet, indtil der er fyldt 18 rør i alt. Derefter anvendes en pipette til at overføre en milliliter af den første ekstraktionsteknik til seks 1,5 millilitercentrifugerør, der indeholder pelsprøven. Cap hvert rør, og bruge en shaker til at inkubere dem ved stuetemperatur med konstant pulserende i mindst 12 timer.Derefter stamme prøverne med en 0,5-milliliter mikro-præcision sigte. Brug en pipette til at overføre væsken til et nyt mærket 1,5 milliliter mikrocentrifugerør, samtidig med at pelsen kasseres korrekt. I en røghætte, helt prøve opløsningsmiddel ekstrakt under en strøm af kvælstof damp.Derefter rekonstitueres den tørrede prøve med 400 mikroliter analysebuffer og 100 mikroliter af 100 % ethanol af analysekvalitet. For at gøre kontrollerne, først vælge prøver fra dyr med kendt eksponering for stressor. For at lave en ekstraktpulje udtages der 20 mikroliter ekstrakt fra hver prøve, indtil der opnås et samlet volumen på 200 mikroliter.Opbevar ekstraktpuljen på minus 80 grader Celsius, indtil den er klar til at køre analyser. Når du er klar, opnås fortyndingsfaktoren for de 30 % og 70 % bindingspunkter fra parallelitetsgrafen for ekstraktet i forhold til kortisolstandarden, og der anvendes analysebuffer til at fortynde prøvepuljen på passende vis for at skabe de høje og lave kontroller. Ved hjælp af en kommerciel kortisol kit oprettet en 96-brønd strimmel plade, herunder prøver, kontroller, kortisol standarder, uspecifik-bindende brønde, og maksimal-bindende brønde i henhold til leverandørens anvisninger.Brug det ark, der er medtaget i kithæftet, til at angive prøvernes, kontrollernes og standardens placering. Dernæst skal du følge pels hormon ekstraktion proces, der er beskrevet tidligere for at opnå 100% methanol-ekstraheret koala pels. Opbered kortisolsættets reagenser i henhold til producentens anvisninger.Pipette 50 mikroliter af prøver eller standarder i pladens brønde. Pipette 75 mikroliter af analysebufferen i de uspecifikke bindingsblyde og 50 mikroliter af analysebufferen i de maksimalt bindende brønde. Ved hjælp af en repeater pipette tilføje 25 mikroliter af kortisol konjugat til hver brønd.Derefter pipette 25 mikroliter af kortisol antistof i hver brønd, undtagen de uspecifikke-bindende brønde. Bank forsigtigt på siderne af pladen for at sikre, at reagenserne er godt blandet. Dæk pladen med pladeforseglingen, og brug en orbital shaker til at ryste ved stuetemperatur i en time.Derefter fjernes pladeforseglingen, og indsugning af brøndpladen ved at vaske hver brønd med 300 mikroliter vaskebuffer fire gange. Tør derefter pladen ved at banke den på rene absorberende håndklæder. Pipette 100 mikroliter tetramethylbenzidin substrat til hver brønd.Placer pladeforseglingen på brøndpladen, og inkuber ved stuetemperatur i 30 minutter. Efter dette, pipette 50 mikroliter stop opløsning i hver brønd. Overfør pladen til en pladelæser i stand til at aflæsning 450 nanometer, og beregne den endelige hormonkoncentration som beskrevet i tekstprotokollen.I denne undersøgelse, essay påvisning af hormon metabolitter af interesse bestemmes ved hjælp af parallelitet. På parallelitetskurven bestemmer bindingspunktet på 50 % prøvefortyndingsfaktoren på standardkurven. Som det kan ses, gav 100%ethanol og 100% isopropanol ekstrakter ikke parallel forskydning mod kortisol standard.Men, den 100% methanol ekstrakt giver parallel forskydning mod kortisol standard. Variationskoefficienter for intra- og mellemanalyse bestemmes på grundlag af høj- og lavbindingsprøveekstrakter, der køres i alle analyser. Den lav-bindende interne kontrol ses at være pæn koala ekstrakt pool, mens den høj-bindende interne kontrol ses at være en-til-to fortyndet koala ekstrakt pulje.Forbindelsen mellem hvert opløsningsmiddel ekstrakt og kortisol standard bestemmes derefter ved hjælp af en regression plot. Den 100% methanol ekstrakt giver den bedste linje af regression med den højeste R-kvadreret værdi i forhold til 100% ethanol og 100% isopropanol ekstrakter. Det er vigtigt at huske, at prøven vask trin skal udføres før slibning prøverne for at undgå tab af steroid hormoner.Efter denne procedure, Vi kan måle andre steroide hormoner, såsom reproduktive hormoner til at se på samspillet mellem stress og reproduktion i koalas. Denne teknik giver et nyt værktøj til det nye område for bevarelse fysiologi, så den ikke-invasive vurdering af kortisol i koala pels. Den kommercielle cortisol kit giver reagenser i minut mængde.Det er dog vigtigt at bære personlige værnemidler for at minimere skader på sig selv, mens du udfører denne laboratorieprocedure.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

Måling af basal og forskolin-stimuleret lipolyse i fedtpads

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Forberedelse af Keratin hydrolysat fra kylling fjer og dens anvendelse i kosmetik

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Måling af mitokondrie iltforbrug i Permeabilized fibre fra Drosophila bruger minimale mængder af væv

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Måling og korrelation af celle tæthed og lys Emission af en bioluminescerende bakterier

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

Måling af Ion koncentration i Unstirred grænselag med åben Patch-Clamp Pipette: konsekvenser i kontrol af Ionkanaler af væske Flow

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

Affinitet rensning af grønkorn Translocon Protein komplekser ved hjælp af tryk på Tag

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

Direkte måling af KDM1A Target engagement ved hjælp af Chemoprobe-baserede Immunoassays

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

Forberedelse af planteprøve til måling af nukleoside/nukleotidindhold med en HPLC-MS/MS

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Måling af fedtsyre β-oxidation i en suspension af frisk isolerede musehepatocytter

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tidsopløste Förster Resonans Energy Transfer Assays til måling af endogene fosforylerede STAT-proteiner i humane celler

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...