Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door de start-up onderzoeksfinanciering voor Edward Narayan via de Western Sydney University, school of Science and Health. De auteurs bedanken Jack Nakhoul voor hulp bij het verwerken van monsters.

Dit project werd uitgevoerd onder strikte richtlijnen voor dier-en menselijke zorg. De ethiek van dieren werd verleend door de Western Sydney University (A12373). Daarnaast werden een laboratorium risicobeoordeling en bioveiligheid en stralings vorm ingediend en aanvaard door de Western Sydney University om dit onderzoek veilig uit te voeren (B12366).
Opmerking: Koala fur monsters voor dit project zijn verkregen uit het Adelaide Koala and Wildlife Hospital, gelegen aan de 282 Anzac Highway, Pl...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

Er zijn een aantal studies die gebruik maken van een scala van technieken voor het opsporen van cortisol in zoogdier vacht. Deze studie presenteert resultaten voor de opsporing van cortisol in bont verzameld van een wilde Koala blootgesteld aan huidige antropogene stress. Deze baanbrekende studie gebruikt bont om te testen welke van de drie veelgebruikte oplosmiddelen het beste zijn bij het uitpakken van cortisol, een maat voor chronische stress, van Koala vacht. De resultaten toonden aan dat 100% methanol het aanbevolen...

Australische ecosystemen ondersteunen het menselijk leven door het leveren van diensten, waaronder voedsel en vezels onder vele andere dynamische interacties1. Ironisch genoeg is het menselijke activiteit die opereert als de dominante drijfkracht van ecosysteem verstoring door biodiversiteits verandering2. Habitat fragmentatie, bekend als het proces van het verdelen van grote continue habitats in kleine stukjes land, geïsoleerd van elkaar, is de belangrijkste antropogene biodiversiteits verandering die de Australische ecosystemen2bedreigt. Habitat fragmentatie wijzigt de structuur en diversiteit van de soortensamenstelling in een bepaald gebied, waardoor het gebied van habitat dat voor deze soorten nodig is, wordt verminderd om levensvatbare populaties2te behouden. Het resultaat hiervan is een toegenomen concurrentie tussen soorten voor hulpbronnen, waaronder voedsel, brandstof, vezels en water3. De vernietiging van de Australische ecosystemen door het veranderen van biodiversiteit heeft catastrofale gevolgen voor veel Australische inheemse soorten1.
De meest iconische marsupiale soort van Australië, de Koala (Phascolarctos cinereus), is afhankelijk van de Australische ecosystemen die gezond blijven voor hun overleving4. De invoering van de Europese nederzetting veroorzaakte een snelle afname van de Australische populaties koala's, omdat ze werden geslacht voor hun pelten in de winstbejag in een grote export handel5. Deze praktijk werd verboden in de jaren 1980 en populaties van koala's waren dan in staat om te stabiliseren5. Echter, exponentiële groei van de menselijke bevolking heeft geresulteerd in deze soort concurreren voor een groot deel van hun habitat, en hun overleving is weer onder bedreiging6. Volgens de Internationale Unie voor het behoud van de natuur (IUCN) worden alle populaties van Australische koala's als kwetsbaar voor uitsterven vermeld met een dalende bevolkings trend7. Deze vermelding wordt toegeschreven aan de onzekerheid rond relevante bevolkings parameters en een duidelijke variatie in bevolkings trends voor deze soort7. Als de meest iconische en endemische dieren, koala's profiteren grotendeels de Australische economie door middel van toerisme (NSW kantoor van milieu en erfgoed 2018). Een schatting suggereert dat Koala gerelateerd toerisme ongeveer 9.000 banen heeft opgeleverd en bijdraagt tussen $1,1 en $2.500.000.000 aan de economie (NSW Office of Environment en Heritage 2018). Het verwijderen van één soort heeft het potentieel catastrofaal te zijn, en is te zien in de gestage achteruitgang van inheemse Australische fauna6. Bovendien, de Australië economie zal de consequenties voelen als de populaties van de Australische koala's blijven dalen tegen het tarief dat ze zijn6.
Er wordt gesuggereerd dat de prevalentie van dood en ziekte in reactie op habitatfragmentatie het resultaat is van chronische stress8. Al vierentwintig buideldier soorten zijn verklaard uitgestorven in Australië als gevolg van habitatfragmentatie, met koala's volgens een soortgelijke trend8. De complexiteit van habitatfragmentatie en biologische systemen is synergetisch, maar kan worden uitgepakt door analyse van de stressrespons6. Over het algemeen activeert elke verstoring in een natuurlijke omgeving van dieren een complexe cascade van neurohormonale gebeurtenissen, bekend als een ' gevecht of vlucht ' reactie9,10. Deze reactie op stress is een proces dat begint in de hersenen waar de hypothalamische-hypofyse-adrenale (HPA) as is geactiveerd11. Een onderdeel van de hersenen genaamd de hypothalamus releases corticotrophin-releasing hormoon (CRH), die vervolgens signalen van de anterieure hypofyse om adrenocorticotrofische hormoon (ACTH)11vrijgeven. Dit stimuleert op zijn beurt de Glucocorticoïde secretie van de bijnier Medulla. Het lichaam circuleert glucocorticoïden door het bloed, die de opslag van glucose uit glycogeen afleidt en glucose van opgeslagen glycogeen11mobiliseert. Deze cascade van neurohormonale gebeurtenissen is de reactie die door het dier wordt gebruikt om te gaan met onvoorspelbare stimuli11. Echter, wanneer glucocorticoïden vrijkomen en gedurende langere tijd verhoogd blijven, wordt het dier geacht chronische stress12,13te ervaren. Dit proces omvat het afleiden van energie uit de buurt van andere corporale lichaamsfuncties, omdat het nodig is voor lopende Glucocorticoïde productie13. Als gevolg daarvan, chronische stress kan het verbieden van groei, reproductie en immuniteit, alle belangrijke fitness eigenschappen die nodig zijn voor overleving14.
Het meten van de Glucocorticoïde productie van een dier is een veelgebruikte indicator die wordt gebruikt om te bepalen of het dier fysiologische stress ondervindt15. Om dit te doen, glucocorticoïden kunnen worden gemeten in bloed plasma, serum, speeksel, urine of feces16. Echter, bewijs suggereert dat haar een veel effectievere indicator van chronische stress, in tegenstelling tot de bovengenoemde16. Dit komt omdat haar wordt verondersteld te nemen bloed-overgedragen hormonen tijdens de groeifase; het is relatief stabiel; en elke cortisol gedetecteerd in haar weerspiegelt fysiologische stress ervaren over de periode van haargroei, die kan worden weken tot en met maanden16. Bovendien moet elke verzameling van cortisol niet-invasief zijn om de stress die gepaard gaat met het opvangen en hanteren van16te minimaliseren. Echter, elke stress ervaren tijdens dit evenement zou geen invloed hebben op Glucocorticoïde spiegels in haar16. Er zijn veel studies geweest die de vaardigheid van het gebruik van haren onderzoeken om lange termijn stress in een aantal dieren te meten, en omvatten studies over rendieren, grizzly beren, rhesus-apen, muskoxen en bruine beren17,18, 19 , 20 , 21. haar cortisol wordt meestal geëxtraheerd door het eerste wassen van het monster om ervoor te zorgen zweet en sebum-afgeleide cortisol afgezet op het oppervlak van het haar is niet co-geëxtraheerd met cortisol en vervolgens verpulveren het monster in een kraal-klopper22. Na het wassen moet het monster worden gedroogd om volledige verdamping te garanderen22. Tot slot, met behulp van een oplosmiddel, kan het monster worden geëxtraheerd en gereconstitueerd om de assay van cortisol22te vergemakkelijken. Het meest voorkomende oplosmiddel dat wordt gebruikt om cortisol uit de vacht te halen, is methanol21,23; echter, er zijn enkele studies die gebruik maken van ethanol en isopropanol in hun cortisol extractietechnieken. Bijvoorbeeld, een studie die ethanol gebruikte was succesvol voor het extraheren van cortisol uit humaan vrucht vocht24. Bovendien was een studie waarin isopropanol werd gebruikt succesvol voor het extraheren van cortisol uit menselijk haar en nagels25,26. Om deze reden testte deze studie alle drie de oplosmiddelen (methanol, ethanol en isopropanol) om te bepalen welke het meest succesvol was voor extractie van cortisol uit monsters van Koala vacht.
Het primaire doel van deze studie was het gebruik van de huidige technieken om te valideren van een optimale hormoon extractietechniek te worden gebruikt als een niet-invasieve maatregel van cortisol van Koala vacht. Dit werd bereikt door het testen van drie extractiemiddelen (methanol, ethanol en isopropanol). We veronderstelde dat methanol zal het optimale oplosmiddel gebruikt voor het uitpakken van cortisol van Koala vacht omdat het de aanbevolen oplosmiddel van extractie door Arbor assay cortisol kits27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

Optimale methoden van hormoon extractie gebruikt voor het meten van stress bij dieren over de monster soorten zijn niet altijd hetzelfde. De iconische marsupiale soort van Australië, de Koala (Phascolarctos cinereus), wordt geconfronteerd met langdurige blootstelling aan antropogene-geïnduceerde stressoren en de beoordeling van chronische stress in wilde populaties is dringend gerechtvaardigd. Een van de meest effectieve manieren om chronische stress te meten is door het analyseren van het Glucocorticoïde hormoon cortisol in haar of vacht, omdat het fysiologische en gedragsmatige reacties ondersteunt. Dit laboratorium validatie studie is bedoeld om te testen van de huidige technieken voor het valideren van een optimale hormoon extractiemethode te gebruiken als een niet-invasieve maatregel van cortisol in Koala vacht. Het is bekend dat het gebruik van niet-invasieve technieken voor het meten van stresshormonen de voorkeur heeft boven traditionele, invasieve technieken vanwege hun ideale praktische en ethische standpunten. Bovendien is het relatief gemakkelijker om bont van koala's te verwerven dan om monsters van hun bloed te verwerven. Deze studie gebruikte monsters van Koala bont verworven van de Adelaide Koala en Wildlife Hospital om een aantal hormoon extractietechnieken uit te voeren in een poging om een optimale cortisol extractiemethode te valideren. De resultaten toonden aan dat 100% methanol de meest optimale oplosmiddelextractie leverde ten opzichte van 100% ethanol of 100% isopropanol op basis van parallellisme resultaten. Concluderend, deze methode van cortisol extractie van Koala bont verstrekt een betrouwbare niet-invasieve assay die kan worden gebruikt voor het bestuderen van chronische stress in koala's.

Assay detectie van hormoon metabolieten van belang wordt bepaald met behulp van parallellisme. Met behulp van een parallellisme curve bepaalt het binding punt 50% ook de monster verdunningsfactor op de standaard curve (Figuur 1). Zoals weergegeven in de parallellisme grafiek (Figuur 1), hebben de 100% ethanol en 100% Isopropanolextracten geen parallelle verplaatsing tegen de cortisol norm opgeleverd. Echter, de 100% methanol extract voorzag parallel verplaatsing tegen de cortisol-standaa...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

We presenteren een protocol om te bepalen van de optimale extractie oplosmiddel voor het meten van cortisol van Koala vacht. De in dit Protocol gebruikte oplosmiddelen zijn methanol, ethanol en isopropanol. Het bepalen van een optimaal extractieoplosmiddel zal helpen bij het betrouwbaar meten van de vacht om de impact van chronische stress op koala's te bepalen.

Cortisol meting in Koala (Phascolarctos cinereus) bont

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Dit is een nieuwe methode voor de beoordeling van het glucocorticoïde hormoon, cortisol, van koalabont. Het biedt een nieuwe biomarker voor de beoordeling van chronische stress in koala's. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een zeer gevoelige en reproduceerbare methode met een vrij snelle doorlooptijd tussen monster voorbereiding en hormoontest.Deze techniek maakt het mogelijk om chronische stress in koala's kwantitatief te beoordelen, wat een zeer nuttig klinisch managementinstrument is. Ik help me met deze procedure is Dylan Fox, een student uit mijn laboratorium. Om te beginnen met deze procedure halen de vacht uit de opslag op min 80 graden Celsius en laat het ontdooien bij kamertemperatuur.Weeg vervolgens de vacht op een laboratorium analytische precisie balans. Plaats 60 milligram van de vacht in een voorgewogen en gelabeld 1,5 milliliter centrifuge buis en herhaal dit tot 18 buizen zijn gevuld. Voeg met behulp van een pipet een milliliter van 100% HPLC-kwaliteit isopropanol toe aan elke buis.Vortex de monsters voor 30 seconden. Zeef elk monster met een microprecisiezeef van 0,5 milliliter om vloeistof en bont te scheiden en gooi de vloeistof in een afvalcontainer. Plaats elk bontmonster in een gelabelde plastic weegboot.Plaats vervolgens de weegboten in een vacuüm desiccator en laat drie dagen om de vacht te laten drogen. Zodra de vacht volledig droog is, plaats elk monster in een gelabelde 1,5-milliliter microcentrifuge buis. Plaats elk monster in een kraalmolen met drie chroomstalen kralen en verpulver gedurende twee minuten met 30 shakes per seconde.Herhaal deze overdracht met 100% analytische kwaliteit methanol en 100% analytische kwaliteit isopropanol tot 18 totale buizen zijn gevuld. Gebruik hierna een pipet om een milliliter van de eerste extractietechniek over te brengen in zes centrifugebuizen van 1,5 milliliter die het bontmonster bevatten. Dop elke buis, en gebruik een shaker om ze te broeden bij kamertemperatuur met constante pulserende gedurende ten minste 12 uur.Dan stam de monsters met een 0,5-milliliter micro-precisie zeef. Gebruik een pipet om de vloeistof over te brengen in een nieuwe gelabelde 1,5-milliliter microcentrifuge buis, terwijl ervoor te zorgen dat de vacht op de juiste manier wordt weggegooid. Probeer in een rookkap het oplosmiddelextract volledig onder een stroom stikstofdamp.Reconstrueren vervolgens het gedroogde monster met 400 microliter testbuffer en 100 microliter van 100% analytische ethanol. Om de controles te maken, selecteert u eerst monsters van dieren met bekende blootstelling aan de stressor. Om een extractgroep te maken, neem 20 microliter uit elk monster tot een totaal volume van 200 microliter is verkregen.Bewaar het extract zwembad op min 80 graden Celsius tot klaar om tests uit te voeren. Verkrijg de verdunningsfactor voor de 30% en 70% bindingspunten uit de parallellismegrafiek voor het extract tegen de cortisolnorm en gebruik de testbuffer om de monsterpool op de juiste manier te verdunnen om de hoge en lage controles te creëren. Met behulp van een commerciële cortisol kit het opzetten van een 96-well strip plaat met inbegrip van de monsters, controles, cortisol normen, niet-specifiek-bindende putten, en maximale binding putten volgens de instructies van de leverancier.Gebruik het plaatlay-outblad in het kitboekje om de posities van de monsters, bedieningselementen en normen op te sommen. Volg vervolgens het eerder beschreven extractieproces van bonthormoon om 100% methanol-geëxtraheerde koalabont te verkrijgen. Bereid de reagentia van de cortisolkit volgens de instructies van de fabrikant.Pipette 50 microliter monsters of normen in de putten van de plaat. Pipette 75 microliters van testbuffer in de niet-specifieke bindingsputten, en 50 microliter van testbuffer in de maximaal bindende putten. Met behulp van een repeater pipet voeg 25 microliters van de cortisol conjugaat aan elke put.Vervolgens pipette 25 microliters van het cortisolantilichaam in elke put, behalve de niet-specifieke bindende putten. Tik voorzichtig op de zijkanten van de plaat om ervoor te zorgen dat de reagentia goed gemengd zijn. Bedek de plaat met de plaatafdichter en gebruik een orbitale shaker om een uur op kamertemperatuur te schudden.Verwijder hierna de plaatafdichting en spoel de putplaat aan door elke put met 300 microliter wasbuffer vier keer te wassen. Droog vervolgens de plaat door te tikken op schone absorberende handdoeken. Pipette 100 microliters van tetramethylbenzidine substraat aan elke put.Plaats de plaat sealer op de put plaat, en incubeer op kamertemperatuur gedurende 30 minuten. Na deze, pipet 50 microliter van stop oplossing in elke put. Breng de plaat in een plaatlezer in staat om te lezen 450 nanometer, en bereken de uiteindelijke hormoonconcentratie zoals beschreven in het tekstprotocol.In deze studie wordt de essaydetectie van hormoonmetabolieten van belang bepaald met behulp van parallellisme. Op de parallellijncurve bepaalt het bindingspunt van 50% de monsterverdunningsfactor op de standaardcurve. Zoals te zien is, hebben de 100% ethanol- en 100%-isopropanolextracten geen parallelle verplaatsing tegen de cortisolnorm.Het 100%methanol-extract biedt echter parallelle verplaatsing tegen de cortisolnorm. De intra- en inter-test coëfficiënten van variatie worden bepaald op basis van hoog- en laagbindende monsterextracten die in alle tests worden uitgevoerd. De lage-bindende interne controles worden gezien als nette koala extract pool, terwijl de hoge-bindende interne controles worden gezien als een-op-twee verdunde koala extract pool.De associatie tussen elk oplosmiddelextract en cortisolnorm wordt vervolgens bepaald met behulp van een regressieperceel. De 100% methanol extract biedt de beste lijn van regressie met de hoogste R-kwadraat waarde in vergelijking met de 100% ethanol en 100% isopropanol extracten. Het is belangrijk om te onthouden dat het monster wassen stap moet worden uitgevoerd voordat slijpen van de monsters om het verlies van steroïde hormonen te voorkomen.Na deze procedure kunnen we meten andere steroïde hormonen, zoals reproductieve hormonen om te kijken naar de interacties tussen stress en voortplanting in koala's. Deze techniek biedt een nieuw instrument voor het opkomende gebied van conserveringsfysiologie, waardoor de niet-invasieve beoordeling van cortisol in koalabont mogelijk wordt. De commerciële cortisol kit biedt reagentia in minieme hoeveelheid.Het is echter belangrijk om persoonlijke beschermingsmiddelen te dragen om letsel aan zichzelf te minimaliseren tijdens het uitvoeren van deze laboratoriumprocedure.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

Meting van basale en forskolin-gestimuleerde lipolyse in buikvlies vetpads

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Voorbereiding van keratine hydrolysaat van kippenveren en haar toepassing in cosmetica

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Meting van mitochondriale zuurstofverbruik in permeabel vezels van Drosophila met minimale hoeveelheden weefsel

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Meting en de correlatie van de celdichtheid en lichte emissie van bioluminescente bacterie

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

Meting van de concentratie van de Ion in de ongemengde grenslaag met Open Patch-Clamp pipet: gevolgen in de controle van de ionenkanalen door Fluid Flow

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

Affiniteit zuivering van Chloroplast Translocon eiwitcomplexen met behulp van de Tag van de TAP

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

Directe meting van KDM1A target engagement met behulp van Chemoprobe-gebaseerde immunoassay

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

Plantmonstervoorbereiding voor nucleoside/nucleotide-inhoudsmeting met een HPLC-MS/MS

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Meting van vetzuur β-oxidatie in een suspensie van vers geïsoleerde muizenhepatocyten

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tijd-opgeloste Förster Resonantie Energie Transfer Assays voor meting van endogene gefosforyleerde STAT-eiwitten in menselijke cellen

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...