Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par le financement de la recherche de démarrage pour Edward Narayan par l'Université western Sydney, School of Science and Health. Les auteurs remercient Jack Nakhoul pour son aide dans le traitement des échantillons.

Ce projet a été réalisé selon des directives strictes en matière de soins aux animaux et aux humains. L'éthique animale a été accordée par l'Université Western Sydney (A12373). De plus, une évaluation des risques en laboratoire et une forme de biosécurité et de rayonnement ont été soumises et acceptées par l'Université Western Sydney pour entreprendre cette recherche en toute sécurité (B12366).
REMARQUE : Des échantillons de fourrure de koala pour ce projet ont été obtenu...

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	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

Il existe un certain nombre d'études qui utilisent une gamme de techniques pour détecter le cortisol dans la fourrure de mammifères. Cette étude présente des résultats pour la détection du cortisol dans la fourrure recueillie à partir d'un koala sauvage exposé au stress anthropique actuel. Cette étude révolutionnaire a utilisé la fourrure pour tester lequel des trois solvants couramment utilisés sont les meilleurs pour extraire le cortisol, une mesure du stress chronique, de la fourrure de koala. Les résult...

Les écosystèmes australiens soutiennent la vie humaine grâce à la fourniture de services, y compris la nourriture et la fibre parmi de nombreuses autres interactions dynamiques1. Ironiquement, c'est l'activité humaine qui est le principal moteur de la perturbation de l'écosystème par le changement de biodiversité2. La fragmentation de l'habitat, connue sous le nom de processus de division de grands habitats continus en petites parcelles de terre, isolées les unes des autres, est le changement anthropique majeur de la biodiversité qui menace les écosystèmes australiens2. La fragmentation de l'habitat modifie la structure et la diversité de la composition des espèces dans une zone donnée, réduisant ainsi la superficie d'habitat nécessaire à ces espèces pour maintenir des populations viables2. Le résultat de ceci est concurrence accrue entre les espècespour les ressources comprenant la nourriture, le carburant, la fibre, et l'eau 3. La destruction des écosystèmes australiens par le changement de la biodiversité a des conséquences catastrophiques sur de nombreuses espèces indigènes australiennes1.
L'espèce marsupiale la plus emblématique d'Australie, le koala (Phascolarctos cinereus), dépend du fait que les écosystèmes australiens restent en bonne santé pour leur survie4. L'introduction de l'établissement européen a provoqué un déclin rapide des populations australiennes de koalas, car ils ont été abattus pour leurs peaux dans la poursuite du profit dans un grand commerce d'exportation5. Cette pratique a été interdite dans les années 1980 et les populations de koalas ont ensuite pu stabiliser5. Cependant, la croissance exponentielle de la population humaine a entraîné cette espèce en concurrence pour une grande partie de leur habitat, et leur survie est de nouveau menacée6. Selon l'Union internationale pour la conservation de la nature (UICN), toutes les populations de koalas australiens sont classées comme vulnérables à l'extinction avec une tendance démographique en baisse7. Cette inscription est attribuée à l'incertitude entourant les paramètres de population pertinents et à la variation marquée des tendances démographiques pour cette espèce7. En tant qu'animaux les plus emblématiques et endémiques, les koalas profitent largement à l'économie australienne grâce au tourisme (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Une estimation suggère que le tourisme lié au koala a généré environ 9 000 emplois et contribue entre 1,1 et 2,5 milliards de dollars à l'économie (NSW Office of Environment and Heritage 2018). L'élimination d'une espèce a le potentiel d'être catastrophique, et peut être vu dans le déclin constant de la faune indigène australienne6. En outre, l'économie australienne ressentira les ramifications si les populations de koalas australiens continuent de diminuer au rythme où elles sontde 6.
Il est suggéré que la prévalence de la mort et de la maladie en réponse à la fragmentation de l'habitat est le résultat du stress chronique8. Déjà, vingt-quatre espèces marsupiales ont été déclarées éteintes en Australie en raison de la fragmentation de l'habitat, avec des koalas suivant une tendance similaire8. La complexité de la fragmentation de l'habitat et des systèmes biologiques est synergique, mais peut être déballée grâce à l'analyse de la réponse au stress6. En général, toute perturbation dans un environnement naturel animal active une cascade complexe d'événements neurohormonaux, connu sous le nom de «combat ou de fuite» réponse9,10. Cette réponse au stress est un processus qui commence dans le cerveau où l'axe hypothalamique-pituitaire-surrénalien (HPA) est activé11. Un composant du cerveau appelé l'hypothalamus libère l'hormone de libération de corticotrophine (CRH), qui signale alors l'hypotuitaire antérieur pour libérer l'hormone adrénocorticotrophic (ACTH)11. Ceci stimule à son tour la sécrétion glucocorticoïde de la médulle surrénale. Le corps circule glucocorticoïdes à travers le sang, ce qui détourne le stockage du glucose du glycogène et mobilise le glucose à partir de glycogène stocké11. Cette cascade d'événements neurohormonaux est la réponse utilisée par l'animal pour faire face à des stimuli imprévisibles11. Cependant, lorsque les glucocorticoïdes sont libérés et restent élevés pendant une période prolongée, l'animal est considéré comme éprouvant un stress chronique12,13. Ce processus consiste à détourner l'énergie d'autres fonctions corporelles corporelles, car il est nécessaire pour la production continue de glucocorticoïdes13. En conséquence, le stress chronique peut interdire la croissance, la reproduction et l'immunité, tous étant des traits de forme physique clés requis pour la survie14.
La mesure de la production de glucocorticoïdes d'un animal est un indicateur courant utilisé pour déterminer si l'animal subit ou non un stress physiologique15. Pour ce faire, les glucocorticoïdes peuvent être mesurés dans le plasma sanguin, le sérum, la salive, l'urine ou les fèces16. Cependant, les preuves suggèrent que les cheveux sont un indicateur beaucoup plus efficace du stress chronique, par opposition aux16susmentionnés. C'est parce que les cheveux sont pensés pour incorporer des hormones transmissibles par le sang pendant sa phase de croissance; il est relativement stable; et tout cortisol détecté dans les cheveux reflète le stress physiologique ressenti au cours de la période de croissance des cheveux, qui peut être semaines à16mois . En outre, toute collection de cortisol doit être non invasive afin de minimiser le stress associé à la capture et la manipulation16. Cependant, tout stress ressenti au cours de cet événement n'aurait pas d'impact sur les niveaux de glucocorticoïdes dans les cheveux16. Il y a eu beaucoup d'études qui explorent la compétence d'utiliser des cheveux pour mesurer le stress à long terme dans un certain nombre d'animaux, et incluent des études sur des rennes, des ours grizzlis, des singes rhésus, des bœufs musqués, et des ours bruns17,18,, 19 ans, états-unis qui , 20 Ans, états-unis , 21. Le cortisol capillaire est habituellement extrait en lavant d'abord l'échantillon pour s'assurer que la sueur et le cortisol dérivé du sébum déposés à la surface des cheveux ne sont pas co-extraits avec du cortisol, puis pulvérisent l'échantillon dans un perle-batteur22. Après le lavage, l'échantillon doit être séché pour assurer l'évaporation complète22. Enfin, à l'aide d'un solvant, l'échantillon peut être extrait et reconstitué pour faciliter l'analyse du cortisol22. Le solvant le plus commun utilisé pour extraire le cortisol de la fourrure est le méthanol21,23; cependant, il y a quelques études qui emploient l'éthanol et l'isopropanol dans leurs techniques d'extraction de cortisol. Par exemple, une étude qui a utilisé l'éthanol a réussi à extraire le cortisol du liquide amniotique humain24. En outre, une étude qui a utilisé l'isopropanol a été couronnée de succès pour extraire le cortisol des cheveux humains et les ongles25,26. Pour cette raison, cette étude a testé les trois solvants (méthanol, éthanol et isopropanol) pour déterminer lequel était le plus réussi pour l'extraction du cortisol à partir d'échantillons de fourrure de koala.
L'objectif principal de cette étude était d'utiliser les techniques actuelles pour valider une technique optimale d'extraction d'hormones à utiliser comme mesure non invasive du cortisol de la fourrure de koala. Ceci a été réalisé en testant trois solvants d'extraction (méthanol, éthanol, et isopropanol). Nous avons émis l'hypothèse que le méthanol sera le solvant optimal utilisé pour extraire le cortisol de la fourrure de koala parce que c'est le solvant recommandé de l'extraction par arbor estocurant kits de cortisol27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
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cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

Les méthodes optimales d'extraction hormonale utilisées pour mesurer le stress chez les animaux de tous les types d'échantillons ne sont pas toujours les mêmes. L'espèce marsupiale emblématique de l'Australie, le koala (Phascolarctos cinereus), fait face à une exposition prolongée aux facteurs de stress d'origine anthropique et l'évaluation du stress chronique dans les populations sauvages est urgentement justifiée. Une des façons les plus efficaces de mesurer le stress chronique est en analysant l'hormone glucocorticoïde cortisol dans les cheveux ou la fourrure, car il soutient les réponses physiologiques et comportementales. Cette étude de validation en laboratoire vise à tester les techniques actuelles pour valider une méthode optimale d'extraction hormonale à utiliser comme mesure non invasive du cortisol dans la fourrure de koala. Il est reconnu que l'utilisation de techniques non invasives pour mesurer les hormones de stress est préférée aux techniques traditionnelles et invasives en raison de leurs points de vue pratiques et éthiques idéaux. En outre, il est relativement plus facile d'acquérir de la fourrure à partir de koalas que d'acquérir des échantillons de leur sang. Cette étude a utilisé des échantillons de fourrure de koala acquis auprès de l'Hôpital Adélaïde Koala et de la faune pour exécuter un certain nombre de techniques d'extraction hormonale dans une tentative de valider une méthode optimale d'extraction de cortisol. Les résultats ont montré que le méthanol à 100 % fournissait l'extraction de solvants la plus optimale par rapport à 100 % d'éthanol ou 100 % d'isopropanol basé sur les résultats du parallélisme. En conclusion, cette méthode d'extraction de cortisol de la fourrure de koala a fourni un test non invasif fiable qui pourrait être employé pour étudier le stress chronique dans les koalas.

La détection d'analyse des métabolites d'hormone d'intérêt est déterminée utilisant le parallélisme. À l'aide d'une courbe de parallélisme, le point de liaison de 50 % détermine également le facteur de dilution de l'échantillon sur la courbe standard (Figure 1). Comme le montre le graphique du parallélisme (Figure 1), les extraits d'éthanol à 100 % et d'Isopropanol à 100 % n'ont pas fourni de déplacement parallèle par rapport à la norme du cortisol. Cependant, l'extrai...

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Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

Nous présentons un protocole pour déterminer le solvant optimal d'extraction pour mesurer le cortisol de la fourrure de koala. Les solvants utilisés dans ce protocole sont le méthanol, l'éthanol et l'isopropanol. La détermination d'un solvant d'extraction optimal aidera à mesurer de façon fiable la fourrure afin de déterminer l'impact du stress chronique sur les koalas.

Mesure de cortisol à Koala (Phascolarctos cinereus) Fourrure

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Il s’agit d’une nouvelle méthode pour l’évaluation de l’hormone glucocorticoïde, le cortisol, à partir de la fourrure de koala. Il fournit un nouveau biomarqueur pour l’évaluation du stress chronique chez les koalas. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une méthode très sensible et reproductible avec un délai d’exécution assez rapide entre la préparation de l’échantillon et l’essai d’hormones.Cette technique permet l’évaluation quantitative du stress chronique chez les koalas, qui est un outil de gestion clinique très utile. Dylan Fox, un étudiant diplômé de mon laboratoire, m’aide dans cette procédure. Pour commencer cette procédure, récupérez la fourrure de l’entreposage à moins 80 degrés Celsius et laissez-la décongeler à température ambiante.Ensuite, pesez la fourrure sur un équilibre de précision analytique de laboratoire. Placer 60 milligrammes de fourrure dans un tube de centrifugeuse prélouté et étiqueté de 1,5 millilitre et répéter jusqu’à ce que 18 tubes soient remplis. À l’aide d’une pipette, ajouter un millilitre d’isopropanol de qualité 100% HPLC à chaque tube.Vortex les échantillons pendant 30 secondes. Filtrer chaque échantillon à l’aide d’un tamis de micro-précision de 0,5 millilitre afin d’obtenir la séparation du liquide et de la fourrure, et jeter le liquide dans un conteneur à déchets. Placez chaque échantillon de fourrure dans un bateau de pesage en plastique étiqueté.Placez ensuite les bateaux de pesage dans un dessiccateur sous vide et laissez sécher la fourrure pendant trois jours. Une fois la fourrure complètement sèche, placez chaque échantillon dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre étiqueté. Placer chaque échantillon dans un moulin à perles avec trois perles d’acier chromé et pulvériser pendant deux minutes à 30 secousses par seconde.Répétez ce transfert avec du méthanol de qualité analytique à 100 % et de l’isopropanol de qualité analytique à 100 % jusqu’à ce que 18 tubes totaux aient été remplis. Après cela, utilisez une pipette pour transférer un millilitre de la première technique d’extraction dans six tubes de centrifugeuse de 1,5 millilitre contenant l’échantillon de fourrure. Capuchon chaque tube, et utiliser un shaker pour les incuber à température ambiante avec pulsation constante pendant au moins 12 heures.Filtrez ensuite les échantillons à l’aide d’un tamis de micro-précision de 0,5 millilitre. Utilisez une pipette pour transférer le liquide dans un nouveau tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre étiqueté, tout en veillant à ce que la fourrure soit jetée de façon appropriée. Dans une hotte de fumée, essayez complètement l’extrait de solvant sous un jet de vapeur d’azote.Puis, reconstituer l’échantillon séché avec 400 microlitres de tampon d’essai et 100 microlitres d’éthanol de qualité 100% analytique. Pour effectuer les contrôles, sélectionnez d’abord des échantillons d’animaux exposés au stresseur. Pour faire un pool d’extraits, prendre 20 microlitres d’extrait de chaque échantillon jusqu’à ce qu’un volume total de 200 microlitres soit obtenu.Conserver la piscine d’extrait à moins 80 degrés Celsius jusqu’à ce qu’elle soit prête à faire des analyses. Une fois prêt, obtenir le facteur de dilution pour les points de liaison de 30% et 70% du graphique parallélisme pour l’extrait par rapport à la norme cortisol, et utiliser tampon d’essai pour diluer le pool d’échantillons de manière appropriée pour créer les contrôles élevés et bas. À l’aide d’un kit de cortisol commercial, mettre en place une plaque de bande de 96 puits comprenant les échantillons, les contrôles, les normes de cortisol, les puits non contraignants et les puits à liaison maximale selon les instructions du fournisseur.Utilisez la feuille de mise en page des plaques incluse dans le livret du kit pour énumérer les positions des échantillons, des contrôles et des normes. Ensuite, suivez le processus d’extraction de l’hormone de la fourrure décrit précédemment pour obtenir 100% de fourrure de koala extraite de méthanol. Préparez les réaccentrages du kit de cortisol selon les instructions du fabricant.Pipette 50 microlitres d’échantillons ou de normes dans les puits de la plaque. Pipette 75 microlitres de tampon d’essai dans les puits non contraignants, et 50 microlitres de tampon d’essai dans les puits à liaison maximale. À l’aide d’une pipette répéteur, ajouter 25 microlitres du cortisol conjugué à chaque puits.Ensuite, pipette 25 microlitres de l’anticorps cortisol dans chaque puits, à l’exception des puits non spécifiques contraignants. Appuyez doucement sur les côtés de la plaque pour vous assurer que les réhésifs sont bien mélangés. Couvrir la plaque avec le scellant de plaque, et utiliser un shaker orbital pour secouer à température ambiante pendant une heure.Après cela, retirez le joint de plaque, et aspirez la plaque de puits en lavant chaque puits avec 300 microlitres de tampon de lavage quatre fois. Ensuite, séchez la plaque en la tapant sur des serviettes absorbantes propres. Pipette 100 microlitres de substrat de tétraméthylbenzidine à chaque puits.Placer le scellant de la plaque sur la plaque de puits et incuber à température ambiante pendant 30 minutes. Après cela, pipette 50 microlitres de solution d’arrêt dans chaque puits. Transférez la plaque dans un lecteur de plaque capable de lire 450 nanomètres, et calculez la concentration finale d’hormone telle que décrite dans le protocole de texte.Dans cette étude, la détection d’essai des métabolites d’hormone d’intérêt est déterminée utilisant le parallélisme. Sur la courbe du parallélisme, le point de liaison de 50 % détermine le facteur de dilution de l’échantillon sur la courbe standard. Comme on peut le voir, les extraits 100% éthanol et 100% isopropanol n’ont pas fourni de déplacement parallèle par rapport à la norme cortisol.Cependant, l’extrait de 100% méthanol fournit le déplacement parallèle contre la norme de cortisol. Les coefficients de variation intra-et inter-analyse sont déterminés à partir d’extraits d’échantillons à liaison élevée et basse exécutés dans tous les analyses. Les commandes internes à faible liaison sont considérées comme un pool d’extrait de koala soigné, tandis que les commandes internes à liaison élevée sont considérées comme une à deux piscine diluée d’extrait de koala.L’association entre chaque extrait de solvant et la norme de cortisol sont alors déterminées à l’aide d’une parcelle de régression. L’extrait de 100% méthanol fournit la meilleure ligne de régression avec la valeur R-carrée la plus élevée par rapport aux extraits 100% éthanol et 100% isopropanol. Il est important de se rappeler que l’étape de lavage de l’échantillon doit être effectuée avant de broyer les échantillons pour éviter la perte d’hormones stéroïdes.Après cette procédure, nous pouvons mesurer d’autres hormones stéroïdiennes, telles que les hormones de reproduction pour examiner les interactions entre le stress et la reproduction dans les koalas. Cette technique fournit un nouvel outil pour le domaine émergent de la physiologie de conservation, permettant l’évaluation non invasive du cortisol dans la fourrure de koala. Le kit de cortisol commercial fournit des reagents en quantité infite.Cependant, il est important de porter de l’équipement de protection individuelle pour minimiser les blessures à soi-même tout en effectuant cette procédure de laboratoire.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

Mesure de la lipolyse basale et stimulée par Forskolin dans des tampons de graisse adipeuse inguinale

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Recherche

Biochimie

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Préparation d’hydrolysat de kératine des plumes de poulet et son Application dans les produits cosmétiques

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Mesure de la consommation d’oxygène mitochondriale dans les fibres perméabilisées de la drosophile à l’aide de petites quantités de tissu

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Mesure et la corrélation entre la densité cellulaire et la luminescence de bactéries bioluminescentes

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

Mesure de la Concentration en ions dans la couche limite stationnaire avec la Pipette ouverte Patch-Clamp : incidences sur le contrôle des canaux ioniques par Fluid Flow

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

Purification d’affinité des chloroplastes Translocon protéines Complexes à l’aide de la balise de robinet

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

Mesure directe de l'engagement cible de KDM1A à l'aide d'immunossays à base de chemoprobe

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

Préparation d’échantillons de plantes pour la mesure de la teneur en nucléosides/nucléotides avec une CLHP-MS/MS

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Mesure de la β-oxydation des acides gras dans une suspension d’hépatocytes de souris fraîchement isolés

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tests de transfert d’énergie par résonance de Förster à résolution temporelle pour la mesure des protéines STAT phosphorylées endogènes dans les cellules humaines

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...