Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

עבודה זו נתמכה באמצעות התחל מחקר מימון עבור אדוארד נאראיאן באמצעות אוניברסיטת סידני המערבית, בית הספר למדע ובריאות. המחברים מודים לג נאקהאול לקבלת סיוע בעיבוד לדוגמא.

פרויקט זה בוצע תחת בעלי חיים קפדנית והנחיות לטיפול בבני אדם. האתיקה בבעלי חיים ניתנה על ידי אוניברסיטת סידני המערבית (A12373). בנוסף, הערכת סיכוני מעבדה וביובטיחות והקרנות הוגשו והתקבלו על ידי אוניברסיטת סידני המערבית כדי להתחייב בבטחה למחקר זה (B12366).
הערה: דוגמאות לפרוות קואלה...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

ישנם מספר מחקרים המשתמשים במגוון טכניקות כדי לזהות קורטיזול בפרוות היונקים. מחקר זה מציג תוצאות לגילוי של קורטיזול בפרווה שנאסף קואלה פראי חשוף המתח אנתרופוגניים הנוכחי. זה מחקר הקרקע פורצת בשימוש בפרווה כדי לבדוק מי מתוך שלושת ממיסים בשימוש נפוץ הם הטובים ביותר לחילוץ קורטיזול, מידה של ...

מערכות האקולוגיות האוסטרליות מפעילות את חיי האדם באמצעות אספקת שירותים כולל מזון וסיבים בקרב אינטראקציות דינמיות רבות אחרות1. באופן אירוני, זוהי פעילות אנושית הפועלת כנהג דומיננטי של שיבוש המערכת האקולוגית באמצעות שינוי מגוון המינים2. פיצול הביטאט, הידוע כתהליך חלוקת בתי גידול גדולים לתוך כתמי קרקע קטנים, מבודדים זה מזה, הוא שינוי המגוון הביולוגי העיקרי של המינים האוסטרלי מאיים על הסביבה האוסטרלית2. פיצול הביטאט משנה את המבנה והגיוון של הרכב המינים בכל אזור נתון, ובכך מקטין את שטח הגידול הדרוש למינים אלה כדי לשמור על אוכלוסיות קיימא2. התוצאה של התחרות מוגברת בין מינים למשאבים, כולל מזון, דלק, סיבים ומים3. הרס האקולוגית האוסטרלי באמצעות שינוי במגוון המינים הוא בעל השלכות קטסטרופיות על מינים רבים של הילידים האוסטרליים1.
מינים חיות הכיס האיקוני ביותר של אוסטרליה, קואלה (Phascolarctos cinereus), תלוי האקולוגית האוסטרלי הנותרים בריאים עבור ההישרדות שלהם4. הכנסת ההתנחלות האירופאית גרמה לירידה מהירה באוכלוסיית הקואלאס האוסטרלית, כפי שנשחטו בגלל העורות שלהם במרדף אחר רווח בסחר יצוא גדול5. פרקטיקה זו נאסרה בשנת 1980 ובאוכלוסיות של קואלאס הצליחו לייצב את5. עם זאת, הצמיחה האקספוננציאלית של האוכלוסייה האנושית הביאה למין הזה מתחרה על הרבה מסביבתם, וההישרדות שלהם שוב תחת איום6. על-פי האיחוד הבינלאומי לשימור הטבע (IUCN), כל האוכלוסיות של הקואלאס האוסטרלי מפורטות כחשופות להכחדה במגמה להפחתת האוכלוסיה7. רישום זה מיוחס לחוסר הוודאות סביב הפרמטרים הרלוונטיים של האוכלוסיה והווריאציה המסומנת במגמות האוכלוסייה עבור זן זה7. כבעלי החיים האיקוניים והאנדמיים ביותר, קואלאס מרוויח במידה רבה את הכלכלה האוסטרלית דרך התיירות (משרד הסביבה והמורשת 2018). הערכה מרמזת כי התיירות הקשורות קואלה יצרה כ 9,000 משרות ותורם בין $1.1 ו $2,500,000,000 לכלכלה (משרד הסביבה והמורשת של המשרד 2018). הסרת כל מין אחד יש את הפוטנציאל להיות קטסטרופלי, וניתן לראות את הירידה המתמדת של חיות הבר האוסטרלי מקורי6. בנוסף, הכלכלה באוסטרליה ירגיש את ההשלכות אם אוכלוסיות של קואלאס האוסטרלי ממשיכים לרדת בקצב שהם6.
הוא הציע כי שכיחות של מוות ומחלות בתגובה לפיצול הגידול היא תוצאה של לחץ כרוני8. כבר, עשרים וארבע מינים של חיות כיס הוכרזו נכחדו באוסטרליה בשל הפיצול הגידול, עם koalas בעקבות מגמה דומה8. המורכבות של הפיצול בבית הגידול ומערכות ביולוגיות הוא סינגיסטי אך ניתן לפרוק באמצעות ניתוח של תגובת הלחץ6. בדרך כלל, כל הפרעה בסביבה טבעית בעלי חיים מפעילה מפל מורכב של אירועים נוירוהורמונלית, המכונה "להילחם או הטיסה" תגובה9,10. תגובה זו ללחץ הוא תהליך המתחיל במוח שבו ציר ההיפותלמי-יותרת הכליה (HPA) הצירים מופעל11. רכיב של המוח שנקרא ההיפותלמוס משחרר corticotrophin-שחרור הורמון (CRH), אשר לאחר מכן מאותת יותרת המוח הקדמי כדי לשחרר adrenocorticotrophic הורמון (ACTH)11. זה בתורו מגרה את הפרשת glucocorticoid מתוך ליבת יותרת הכליה. הגוף זורם גלוקוקורטיקואידים דרך הדם, אשר מסיט את האחסון של גלוקוז מן הגליקוגן ומגייס גלוקוז מאוחסן הגליקוגן11. זה מפל של אירועים נוירוהורמונלית היא התגובה המשמשת את בעל החיים להתמודד עם גירויים בלתי צפויים11. עם זאת, כאשר גלוקוקורטיקואידים משתחררים ונשארים מוגבהים למשך תקופה ממושכת, החיה נחשבת לאדם הסובל מלחץ כרוני של12,13. תהליך זה כרוך הטיית אנרגיה הרחק מפונקציות אחרות הגוף הגופני, כפי שהוא נדרש עבור glucocorticoid מתמשך הייצור13. כתוצאה מכך, לחץ כרוני יכול לאסור על צמיחה, רבייה וחסינות, כל להיות תכונות מפתח הכושר הנדרש להישרדות14.
מדידת ייצור glucocorticoid של בעל חיים הוא מחוון נפוץ המשמש כדי לקבוע אם בעל החיים חווים לחץ פיזיולוגי15. כדי לעשות זאת, ניתן למדוד את גלוקוקורטיקואידים בדם, בסרום, ברוק, בשתן או בצואה16. עם זאת, הראיות מצביעות על כך שהשיער הוא אינדיקטור הרבה יותר אפקטיבי ללחץ כרוני, בניגוד ל-16האמורות. זה בגלל השיער נחשב לשלב הורמונים הנישאים בדם במהלך הגידול שלה; הוא יציב יחסית; וכל קורטיזול שזוהו בשיער משקף את הלחץ הפיזיולוגי מנוסים על התקופה של צמיחת השיער, אשר יכול להיות שבועות עד חודשים16. יתר על כן, כל אוסף של קורטיזול צריך להיות לא פולשני כדי למזער את הלחץ הקשור ללכוד וטיפול16. עם זאת, כל הלחץ המנוסה במהלך אירוע זה לא ישפיע על רמות glucocorticoid בשיער16. היו מחקרים רבים לחקור את מיומנות השימוש בשיער כדי למדוד מתח לטווח ארוך במספר בעלי חיים, וכוללים מחקרים על איילים, דובי גריזלי, רזוס קופים, מוקוקסן, ו בראון דובים17,18, מיכל בן 19 , מיכל בן 20 , 21. שיער קורטיזול מופק בדרך כלל על ידי הראשון לשטוף את המדגם כדי להבטיח זיעה ואת החלב הנגזר קורטיזול הופקד על פני השטח של השיער אינו מופק משותף עם קורטיזול ולאחר מכן לרסק את המדגם במכה חרוז22. לאחר הכביסה, המדגם צריך להתייבש כדי להבטיח אידוי מלאה22. לבסוף, באמצעות ממיס, את המדגם ניתן לחלץ ולאפשר מחדש כדי להקל על הקיום של קורטיזול22. הממס הנפוץ ביותר המשמש לחילוץ קורטיזול מפרווה הוא מתנול21,23; עם זאת, ישנם מחקרים המשתמשים אתנול ו איזופנול בטכניקות החילוץ שלהם קורטיזול. לדוגמה, מחקר שהשתמשו באתנול היה מוצלח להפקת קורטיזול מנוזל השפיר האנושי24. בנוסף, מחקר שהשתמשו באיזופנול היה מוצלח להפקת קורטיזול משיער האדם והציפורניים25,26. מסיבה זו, מחקר זה בדק את כל שלושת ממיסים (מתנול, אתנול, ו איזופנול) כדי לקבוע איזה הוא המוצלח ביותר עבור החילוץ של קורטיזול מדגימות של פרווה קואלה.
המטרה העיקרית של מחקר זה היה להשתמש בטכניקות הנוכחיות כדי לאמת הורמון מיטבי החילוץ טכניקה לשמש כמדד לא פולשני של הקורטיזול פרווה קואלה. זה הושג על ידי בדיקת שלושה ממיסים החילוץ (מתנול, אתנול, ו איזופנול). אנו שיערו כי מתנול יהיה הממס האופטימלי המשמש לחילוץ קורטיזול מן הפרווה קואלה כי זה הממס המומלץ של החילוץ על ידי שיטת הקורטיזול שינון ערכת27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

שיטות אופטימליות של חילוץ הורמון המשמש למדידת הלחץ בבעלי חיים על פני סוגים לדוגמה אינם תמיד אותו הדבר. מינים של חיות כיס איקוני של אוסטרליה, הקואלה (Phascolarctos cinereus), פנים חשיפה ממושכת לתוך אנתרופוגניים המושרה מתחים והערכה של מתח כרוני באוכלוסיות בר מוצדקת בדחיפות. אחת הדרכים היעילות ביותר למדוד לחץ כרוני היא באמצעות ניתוח קורטיזול הורמון glucocorticoid בשיער או פרווה, כפי שהוא תומך בתגובות פיסיולוגיים והתנהגותיים. מחקר זה אימות מעבדה שואפת לבדוק את הטכניקות הנוכחיות כדי לאמת את שיטת חילוץ הורמון אופטימלי לשמש כמדד לא פולשני של הקורטיזול פרווה קואלה. הוא מוכר כי באמצעות טכניקות שאינן פולשני כדי למדוד הורמונים לחץ הוא המועדף על טכניקות מסורתיות, פולשנית בשל האידיאל שלהם מעשיים ואתית נקודות. בנוסף, קל יחסית לרכוש פרווה מ koalas מאשר להשיג דגימות של הדם שלהם. מחקר זה השתמשו בדגימות של פרווה קואלה רכשה מ קואלה אדלייד וחיות הבר בבית החולים כדי להפעיל מספר טכניקות חילוץ הורמונים בניסיון לאמת שיטה אופטימלית החילוץ קורטיזול. תוצאות הראו כי 100% מתנול סיפק את החילוץ האופטימלי ביותר הממס בהשוואה 100% אתנול או 100% איזופנול מבוסס על תוצאות ההקבלה. לסיכום, שיטה זו של מיצוי הקורטיזול מפרווה קואלה סיפק הספק אמין לא פולשני שניתן להשתמש כדי ללמוד לחץ כרוני koalas.

שיטת זיהוי של הורמון מטבוליטים של עניין נקבעת באמצעות הקביריזם. באמצעות עקומת מקבילים, נקודת האיגוד של 50% קובעת גם את פקטור הדילול לדוגמה בעקומה הסטנדרטית (איור 1). כפי שמוצג בגרף המקביל (איור 1), האתנול 100% ו-100% מתמציות איזופנול לא סיפקו הזחה מקבילה נגד תקן הקורטיזול. עם זאת,...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

אנו מציגים פרוטוקול כדי לקבוע את ממיס החילוץ אופטימלית כדי למדוד קורטיזול מפרווה קואלה. הממיסים המשמשים בפרוטוקול זה הם מתנול, אתנול ו איזופנול. קביעת הממס החילוץ אופטימלית יסייע מדידה מהימנה הפרווה כדי לקבוע את ההשפעה של לחץ כרוני על koalas.

הקורטיזול מדידה קואלה (פאיסקולארקטוס cinereus) פרווה

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

זוהי שיטה חדשנית להערכת הורמון glucocorticoid, קורטיזול, פרווה קואלה. הוא מספק סמן ביולוגי חדשני להערכת מתח כרוני בקואלות. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא כי היא שיטה רגישה מאוד לשחזור עם זמן תפנית מהיר למדי בין הכנת מדגם והערכה הורמונלית.טכניקה זו מאפשרת הערכה כמותית של מתח כרוני בקואלות, שהוא כלי ניהול קליני שימושי ביותר. עוזר לי עם הליך זה הוא דילן פוקס, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי. כדי להתחיל בהליך זה לאחזר את הפרווה מאחסון במינוס 80 מעלות צלזיוס ולתת לו להפשיר בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, לשקול את הפרווה על איזון דיוק אנליטי מעבדה. מניחים 60 מיליגרם של הפרווה לתוך צינור צנטריפוגה שנשקל מראש ומתויג 1.5 מיליליטר צנטריפוגה ולחזור על זה עד 18 צינורות מלאים. באמצעות פיפטה, להוסיף מיליליטר אחד של 100% HPLC כיתה isopropanol לכל צינור.מערבולת הדגימות במשך 30 שניות. מסננים כל דגימה עם מסננת מיקרו-דיוק 0.5 מיליליטר כדי להשיג הפרדת נוזלים ופרווה, ומשליכים את הנוזל לתוך מיכל פסולת. מניחים כל דגימת פרווה בסירת שקילה מפלסטיק.לאחר מכן מניחים את הסירות במשקל לתוך יבוש ואקום ולהשאיר במשך שלושה ימים כדי לתת את הפרווה להתייבש. לאחר הפרווה יבש לחלוטין, מניחים כל מדגם לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה שכותרתו 1.5 מיליליטר. מניחים כל דגימה במפעל חרוזים עם שלושה גם פדיות פלדה כרום ומרוכלים במשך שתי דקות ב-30 שייקים לשנייה.חזור על העברה זו עם 100% מתנול כיתה אנליטית ו 100% כיתה אנליטית isopropanol עד 18 צינורות סה"כ מולאו. לאחר מכן, השתמש פיפטה להעביר מיליליטר אחד של טכניקת החילוץ הראשונה לתוך שישה צינורות צנטריפוגה 1.5 מיליליטר המכיל את דגימת הפרווה. מכסים כל צינור, ולהשתמש בשייקר כדי להידגר אותם בטמפרטורת החדר עם פעימות קבועות לפחות 12 שעות.לאחר מכן מסננים את הדגימות עם מסננת מיקרו-דיוק של 0.5 מיליליטר. השתמש פיפטה כדי להעביר את הנוזל לתוך צינור microcentrifuge חדש שכותרתו 1.5 מיליליטר, תוך הבטחה כי הפרווה מושלכת כראוי. במכסה המנוע אדים, לגמרי לנסות את תמצית ממס תחת זרם של אדי חנקן.לאחר מכן, מחדש את המדגם המיובש עם 400 microliters של מאגר assay ו 100 microliters של 100% אתנול כיתה אנליטית. כדי להפוך את הפקדים, בחר תחילה דגימות מבעלי חיים עם חשיפה ידועה ללחץ. כדי להפוך את בריכת תמצית, לקחת 20 microliters של תמצית מכל מדגם עד נפח כולל של 200 microliters מתקבל.אחסן את בריכת התמצית במינוס 80 מעלות צלזיוס עד מוכן לרוץ assays. כאשר אתה מוכן, השג את גורם הדילול עבור 30% ו- 70% נקודות מחייבות מגרף הקבליות עבור התמצית מול תקן הקורטיזול, ולהשתמש במאגר ההתמדה כדי לדלל את מאגר הדגימה כראוי כדי ליצור את הפקדים הגבוהים והנמומים. באמצעות ערכת קורטיזול מסחרית להגדיר צלחת רצועה 96 באר כולל דגימות, פקדים, תקני קורטיזול, בארות כריכה לא ספציפיות, בארות מחייבות מקסימלית על פי הוראות הספק.השתמש בגיליון פריסת הלוחיות הכלול החוברת ערכה כדי לפרט את המיקומים של דגימות, פקדים וסטנדרטים. לאחר מכן, בצע את תהליך מיצוי הורמון הפרווה שתואר בעבר כדי להשיג 100% פרווה קואלה שחולצו מתנול. הכינו את הרהגנטים של ערכת הקורטיזול בהתאם להוראות היצרן.פיפטה 50 מיקרוליטרים של דגימות או תקנים לתוך בארות הצלחת. פיפטה 75 מיקרוליטרים של מאגר בדיקה לתוך בארות שאינן מחייבות, ו-50 מיקרוליטרים של מאגר בדיקה לתוך בארות הכריכה המרביות. באמצעות פיפטה מהדר להוסיף 25 microliters של קורטיזול חידה לכל באר.לאחר מכן, פיפטה 25 מיקרוליטר של נוגדן הקורטיזול לתוך כל באר, למעט בארות לא ספציפיות מחייבות. הקישו בעדינות על דפנות הצלחת כדי לוודא שהריג'ים מעורבבים היטב. מכסים את הצלחת עם איטום הצלחת, ולהשתמש שייקר מסלולית לנער בטמפרטורת החדר במשך שעה אחת.לאחר מכן, להסיר את חותם הצלחת, ולשוכך את צלחת היטב על ידי כביסה כל גם עם 300 microliters של חיץ לשטוף ארבע פעמים. ואז לייבש את הצלחת על ידי הקשה עליו על מגבות סופג נקי. פיפטה 100 מיקרוליטרים של מצע tetramethylbenzidine לכל באר.מניחים את איטום הצלחת על צלחת היטב, ודגירה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות. לאחר מכן, פיפטה 50 מיקרוליטרים של פתרון עצירה לתוך כל באר. מעבירים את הלוחית לקורא לוחות המסוגל לקרוא 450 ננומטר, ולחשב את ריכוז ההורמונים הסופי כמתואר בפרוטוקול הטקסט.במחקר זה, זיהוי החיבור של מטבוליטים הורמון של עניין נקבע באמצעות מקבילות. בעקומת הקבלה, נקודת הכריכה של 50%קובעת את גורם הדילול לדוגמה בעקומה הסטנדרטית. כפי שניתן לראות, תמציות 100%אתנול ו 100%isopropanol לא סיפקו תזוזה מקבילה נגד תקן קורטיזול.עם זאת, תמצית 100% מתנול מספקת תזוזה מקבילה מול תקן הקורטיזול. מקדמי תוך-הערכה של וריאציה נקבעים מתמציות מדגם גבוהות ונמוכה המנוהלות בכל הראיות. הבקרות הפנימיות הנמוכות נתפסות כבריכת תמצית קואלה מסודרת, ואילו הבקרות הפנימיות המחייבות הגבוהות נתפסות כבריכת תמצית קואלה מדוללת של אחד עד שניים.הקשר בין כל תמצית ממס ותקן קורטיזול נקבעים לאחר מכן באמצעות עלילת רגרסיה. תמצית 100%מתנול מספקת את השורה הטובה ביותר של רגרסיה עם הערך R בריבוע הגבוה ביותר לעומת תמציות 100%אתנול ו 100%isopropanol. חשוב לזכור כי שלב לשטוף מדגם חייב להתבצע לפני שחיקה את הדגימות, כדי למנוע אובדן של הורמונים סטרואידים.בעקבות הליך זה, אנו יכולים למדוד הורמונים סטרואידים אחרים, כגון הורמוני הרבייה להסתכל על האינטראקציות בין מתח רבייה קואלות. טכניקה זו מספקת כלי חדש לתחום המתפתח של פיזיולוגיה שימור, המאפשר הערכה לא פולשנית של קורטיזול בפרוות קואלה. ערכת הקורטיזול המסחרית מספקת רייגנטים בכמות דקה.עם זאת, חשוב ללבוש ציוד מגן אישי כדי למזער את הפגיעה בעצמך בעת ביצוע הליך מעבדה זה.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

מדידה של ליפוליזה מגורה של Basal ו- Forskolin במרפאות שומן אדיפוז

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

הכנת קרטין Hydrolysate של נוצות העוף ויישומו בתחום הקוסמטיקה

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

מדידה של צריכת חמצן מיטוכונדריאלי של סיבי Permeabilized דרוזופילה באמצעות כמויות מינימליות של רקמות

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

בחיי עיר ובחינת המתאם של צפיפות התאים ואת פליטת אור של חיידקים זוהרים

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

מדידת ריכוז יון בשכבת הגבול Unstirred עם תיקון פתוח-קלאמפ פיפטה: השלכות בשליטה של תעלות יונים על ידי נוזל לזרום

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

זיקה טיהור של מתחמי חלבון Translocon כלורופלסט בעזרת התג ברז

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

מדידה ישירה של התחייבות KDM1A יעד באמצעות החיסונית מבוססי כימוציל

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

הכנת דגימת צמח למדידת תוכן נוקליאוסיד/נוקלאוטידים עם HPLC-MS/MS

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

מדידה של חומצת שומן β-חמצון בהשעיה של הפטוציטים עכברים מבודדים טריים

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

בדיקות העברת אנרגיה תהודה Förster נפתר זמן למדידה של חלבונים STAT זרחן אנדוגני בתאים אנושיים

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...