Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

この研究は、西シドニー大学、科学衛生学部を通じてエドワード・ナラヤンのスタートアップ研究資金を通じて支援されました。著者は、サンプル処理の支援のためにジャック・ナクールに感謝します。

このプロジェクトは、厳格な動物と人間のケアガイドラインの下で行われました。動物倫理は、西シドニー大学(A12373)によって付与されました。さらに、この研究を安全に行うために、ウェスタンシドニー大学によってラボリスク評価とバイオセーフティおよび放射線フォームが提出され、受け入れられました(B12366)。
注:このプロジェクトのコアラ毛皮サンプルは、282ア...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

哺乳類の毛皮でコルチゾールを検出する技術の範囲を使用する研究の数があります。.本研究は、現在の人為的ストレスにさらされた野生のコアラから採取した毛皮中のコルチゾールの検出に関する結果を提示する。この画期的な研究では、一般的に使用される3つの溶媒のうち、コアラの毛皮から慢性ストレスの尺度であるコルチゾールを抽出するのに最適な方法をテストするために毛皮を?...

オーストラリアの生態系は、他の多くの動的相互作用の中で食物や繊維を含むサービスの提供を通じて人間の生活を維持します 1.皮肉なことに、生物多様性の変化を通じた生態系破壊の主な原動力として機能しているのは人間の活動です2。生息地の断片化は、大きな連続的な生息地を互いに隔離された小さな土地のパッチに分割するプロセスとして知られており、オーストラリアの生態系を脅かす大きな人為的生物多様性変化2である。生息地の断片化は、任意の領域における種組成の構造と多様性を変更し、したがって、これらの種が生存可能な集団を維持するために必要な生息地の面積を減少させる2.この結果、食料、燃料、繊維、水3を含む資源の種間の競争が激化しています。生物多様性の変化によるオーストラリアの生態系の破壊は、多くのオーストラリアの在来種1に壊滅的な影響を及ぼしている。
オーストラリアで最も象徴的なマーシャル種であるコアラ(ファスコラルコトス・シネレウス)は、オーストラリアの生態系が生存のために健全なままにしている4に依存している。ヨーロッパの入植地の導入は、彼らが大規模な輸出貿易5で利益を追求するために彼らの毛皮のために虐殺されたので、コアラのオーストラリアの人口の急速な減少を引き起こしました。この慣行は1980年代に禁止され、コアラの集団はその後5を安定させることができました.しかし、人間の人口の指数関数的な成長は、この種が彼らの生息地の多くを競い合う結果となり、その生存は再び脅威6の下にあります。国際自然保護連合(IUCN)によると、オーストラリアのコアラのすべての集団は、人口減少傾向7で絶滅の危機に瀕していると記載されています。このリストは、関連する集団パラメータに関する不確実性と、この種7の人口動向の顕著な変動に起因する。最も象徴的で風土的な動物として、コアラは観光を通じてオーストラリア経済に大きな利益を与えます(NSW環境遺産局2018)。推定によると、コアラ関連の観光業は約9,000人の雇用を生み出し、1.1~25億ドルの経済に貢献している(NSW環境遺産局2018)。任意の1種の除去は壊滅的になる可能性があり、オーストラリア原産の野生生物6の着実な減少に見ることができます。さらに、オーストラリアのコアラの人口が6歳のペースで減少し続けると、オーストラリア経済は影響を感じるだろう。
生息地の断片化に対する死亡および疾患の有病率は、慢性ストレス8の結果であることが示唆される。すでに、オーストラリアでは生息地の断片化により24種が絶滅したと宣言されており、コアラも同様の傾向に従っている8。生息地の断片化と生物学的システムの複雑さは相乗的であるが、応力応答6の分析を通じて解凍することができる。一般的に、動物の自然環境におけるあらゆる妨害は、「戦いまたは飛行」応答9、10として知られている神経ホルモン事象の複雑なカスケードを活性化する。ストレスに対するこの応答は、視床下部下垂体副腎(HPA)軸が活性化される脳で始まるプロセスである 11.視床下部と呼ばれる脳の成分は、コルチコトロフィン放出ホルモン(CRH)を放出し、副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)11を放出するために前下垂体に信号を送る。これは順番に副腎髄質からのグルココルチコイド分泌を刺激する。体は血液を通してグルココルチコイドを循環し、これはグリコーゲンからグルコースの貯蔵をそらし、貯蔵されたグリコーゲン11からグルコースを動員する。神経ホルモンイベントのこのカスケードは、予測不可能な刺激11に対処するために動物によって使用される応答である。しかし、グルココルチコイドが放出され、長期間上昇したままである場合、動物は慢性的なストレス12、13を経験していると考えられる。このプロセスは、進行中のグルココルチコイド生産13に必要とされる他の体の機能からエネルギーをそらすことを含む。その結果、慢性的なストレスは、成長、生殖および免疫を禁止することができ、すべてが生存14に必要な主要なフィットネス特性である。
動物のグルココルチコイド産生を測定することは、動物が生理的ストレスを経験しているかどうかを決定するために使用される一般的な指標である15。そうするために、グルココルチコイドは、血漿、血清、唾液、尿または気管16で測定することができる。しかし、証拠は、前述の16とは対照的に、髪が慢性ストレスのはるかに効果的な指標であることを示唆している。これは、髪は、その成長段階の間に血液媒介ホルモンを組み込むと考えられているためです。それは比較的安定しています。そして、髪の中で検出されたコルチゾールは、髪の成長の期間にわたって経験した生理的ストレスを反映し、それは16ヶ月まで数週間することができます。さらに、コルチゾールの任意のコレクションは、捕捉および取り扱いに関連するストレスを最小限に抑えるために非侵襲的であるべきである16.しかし、このイベント中に経験したストレスは、毛髪16のグルココルチコイドレベルに影響を与えないだろう。多くの動物の長期的なストレスを測定するために髪を使用する能力を探求し、トナカイ、グリズリークマ、カゲザル、マスキセン、およびヒグマ17、18、ヒグマに関する研究を含む多くの研究があります。19歳,20歳,21.毛髪コルチゾールは、通常、毛髪の表面に付着した汗および皮脂由来のコルチゾールがコルチゾールと共抽出されず、ビーズビーター22でサンプルを粉砕することを確実にするために試料を最初に洗浄することによって抽出される。洗浄後、サンプルは完全な蒸発22を確実にするために乾燥する必要があります。最後に、溶媒を用いて、試料を抽出し、コルチゾール22のアッセイを容易にするために再構成することができる。毛皮からコルチゾールを抽出するために使用される最も一般的な溶媒は、メタノール21、23です。しかし, 彼らのコルチゾール抽出技術でエタノールとイソプロパノールを使用するいくつかの研究があります。.例えば、エタノールを用いたした研究は、ヒト羊水24からコルチゾールを抽出することに成功した。さらに、イソプロパノールを用いたした研究は、ヒトの毛髪および爪からコルチゾールを抽出することに成功した25,26.このため、本研究では、コアラファーのサンプルからコルチゾールを抽出するのに最も成功した3つの溶媒(メタノール、エタノール、イソプロパノール)をすべて試験した。
本研究の主な目的は、コアラの毛皮からのコルチゾールの非侵襲的尺度として使用される最適なホルモン抽出技術を検証するために現在の技術を使用することでした。これは、3つの抽出溶媒(メタノール、エタノール、イソプロパノール)を試験することによって達成された。我々は、メタノールがコアラファーからコルチゾールを抽出するのに使用される最適な溶媒であると仮定した。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

サンプルタイプ全体の動物のストレスを測定するために使用されるホルモン抽出の最適な方法は、常に同じではありません。オーストラリアの象徴的なマルシャル種であるコアラ(ファスコラルコトス・シネレウス)は、人為的に誘発されたストレスに長時間さらされ、野生集団における慢性ストレスの評価が緊急に保証されている。慢性ストレスを測定する最も効果的な方法の一つは、生理的および行動的応答をサポートするように、髪や毛皮のグルココルチコイドホルモンコルチゾールを分析することです。本研究室の検証研究は、コアラ毛皮におけるコルチゾールの非侵襲的尺度として使用される最適なホルモン抽出方法を検証するための現在の技術をテストすることを目的としています。ストレスホルモンを測定するために非侵襲的な技術を使用することは、彼らの理想的な実用的かつ倫理的な観点による伝統的な侵襲的な技術よりも好ましいことが認識されています。さらに、コアラから毛皮を採取する方が、血液のサンプルを採取するよりも比較的簡単です。本研究では、アデレードコアラと野生動物病院から取得したコアラ毛皮のサンプルを用いて、最適なコルチゾール抽出法を検証するために、多くのホルモン抽出技術を実行した。結果は、100%メタノールが並列性結果に基づいて100%エタノールまたは100%イソプロパノールと比較して最も最適な溶媒抽出を提供することを示した。結論として、コアラファーからのコルチゾール抽出のこの方法は、コアラの慢性ストレスを研究するために使用することができる信頼性の高い非侵襲的アッセイを提供しました。

目的のホルモン代謝産物のアッセイ検出は並列処理を用いて決定される。並列化曲線を使用して、50% 結合点は、標準曲線上のサンプル希釈係数も決定します (図1)。並列化グラフ(図1)に示すように、100%エタノールおよび100%イソプロパノール抽出物は、コルチゾール標準に対する並列変位を提供しなかった。しかしながら、100%メタノール抽出物は、コルチゾール標準?...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

コアラ毛からコルチゾールを測定する最適な抽出溶媒を決定するプロトコルを提示する.このプロトコルで使用される溶媒は、メタノール、エタノールおよびイソプロパノールである。最適な抽出溶媒を決定することは、コアラに対する慢性ストレスの影響を決定するために毛皮を確実に測定するのに役立ちます。

コアラでのコルチゾール測定(ファスコラルコトス・シネレウス)毛皮

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

これは、コアラファーからグルココルチコイドホルモン、コルチゾールの評価のための新しい方法です。コアラの慢性ストレスの評価のための新しいバイオマーカーを提供します。この技術の主な利点は、サンプル調製とホルモンアッセイの間にかなり速いターンアラウンドタイムを有する非常に敏感で再現性の高い方法である点である。この技術は、非常に有用な臨床管理ツールであるコアラの慢性ストレスの定量的評価を可能にする。この手順を手伝ってくれるのは、私の研究室の卒業生であるディラン・フォックスです。この手順を開始するには、マイナス80°Cで貯蔵から毛皮を取り出し、室温で解凍させます。次に、実験室の分析精度バランスで毛皮の重量を量る。ファーの60ミリグラムを事前に計量し、1.5ミリリットル遠心管にラベル付けし、18チューブが満たされるまでこれを繰り返します。ピペットを使用して、各チューブに100%HPLCグレードのイソプロパノールを1ミリリットル加えます。30秒間サンプルを渦出します。液体と毛皮の分離を達成するために0.5ミリリットルのマイクロ精密ふるいで各サンプルをひずみ、液体を廃棄物容器に捨てます。各毛皮のサンプルをラベル付きプラスチック製の計量ボートに入れる。その後、計量ボートを真空デシケータに入れ、毛皮を乾燥させるために3日間放置します。毛皮が完全に乾燥したら、各サンプルをラベル付きの1.5ミリリットルマイクロ遠心分離チューブに入れる。各サンプルを3つのクロムスチールビーズを入れたビーズミルに入れ、毎秒30回揺れで2分間粉砕します。100%分析グレードメタノールと100%分析グレードイソプロパノールで、18本の全管が充填されるまでこの転写を繰り返します。この後、ピペットを使用して、最初の抽出技術の1ミリリットルを毛皮サンプルを含む6つの1.5ミリリットル遠心分離管に移します。各チューブをキャップし、シェーカーを使用して室温で少なくとも12時間脈動してインキュベートします。その後、0.5ミリリットルのマイクロ精密ふるいでサンプルをひずみます。ピペットを使用して、毛皮が適切に廃棄されることを確認しながら、新しいラベルの1.5ミリリットルマイクロ遠心チューブに液体を移します。ヒュームフードでは、窒素蒸気の流れの下で溶媒抽出物を完全に試してみてください。次いで、400マイクロリットルのアッセイバッファーと100%分析グレードエタノールの100マイクロリットルで乾燥したサンプルを再構成する。コントロールを作成するには、まずストレータへの既知の露出を持つ動物からサンプルを選択します。抽出プールを作るために、200マイクロリットルの総容量が得られるまで、各サンプルから20マイクロリットルの抽出物を取ります。抽出プールをマイナス80°Cで保管し、アッセイを実行する準備が整うまで保管します。準備ができたら、コルチゾール標準に対する抽出物の並列処理グラフから30%および70%の結合点の希釈係数を取得し、サンプルプールを適切に希釈して高低コントロールを作成するためにアッセイバッファーを使用します。市販のコルチゾールキットを使用して、サプライヤーの指示に従って、サンプル、コントロール、コルチゾール標準、非特異的結合井戸、最大結合井戸を含む96ウェルストリッププレートを設置しました。キットの小冊子に含まれるプレートレイアウトシートを使用して、サンプル、コントロール、標準の位置をリストします。次に、前述したファーホルモン抽出プロセスに従って、100%メタノール抽出コアラファーを得る。メーカーの指示に従ってコルチゾールキットの試薬を準備します。ピペット50マイクロリットルのサンプルまたは標準はプレートの井戸に入る。ピペット75マイクロリットルのアッセイバッファーを非特異的結合ウェルに、そして50マイクロリットルのアッセイバッファーを最大結合ウェルに入れます。リピーターピペットを使用して、各ウェルにコルチゾールコンジュゲートの25マイクロリットルを追加します。次いで、非特異的結合ウェルを除き、コルチゾール抗体のピペット25リットルを各ウェルに入れます。プレートの側面を軽くタップして、試薬が十分に混合されていることを確認します。プレートシーラーでプレートを覆い、軌道シェーカーを使用して室温で1時間振ります。この後、プレートシールを取り外し、300マイクロリットルの洗浄バッファーを4回洗浄してウェルプレートを吸引した。その後、きれいな吸収性タオルでそれをタップしてプレートを乾燥させます。ピペット100マイクロリットルのテトラメチルベンジジン基質を各ウェルに。プレートシーラーをウェルプレートに置き、室温で30分間インキュベートします。この後、各ウェルに50マイクロリットルのストップ溶液をピペットします。プレートを450ナノメートルを読み取ることができるプレートリーダーに移し、テキストプロトコルで概説されているように最終的なホルモン濃度を計算します。本研究では、対象となるホルモン代謝産物のエッセイ検出は、並列性を用いて決定される。並列曲線上では、50%の結合点によって、標準曲線のサンプル希釈係数が決まります。ご覧のように、100%エタノールおよび100%イソプロパノール抽出物は、コルチゾール標準に対して平行変位を提供しなかった。しかし、100%メタノール抽出物はコルチゾール標準に対して平行変位を提供する。イントラアッセイと相互アッセイの変動係数は、すべてのアッセイで実行される高結合および低結合サンプル抽出から決定されます。低結合の内部制御はきちんとしたコアラ抽出プールと見られ、高結合の内部制御は1対2の希釈コアラ抽出プールであると見られる。各溶媒抽出物とコルチゾール標準との関連は、回帰プロットを用いて決定される。100%メタノール抽出物は、100%エタノールおよび100%イソプロパノール抽出物と比較して、最高のR二乗値を持つ回帰の最良の線を提供します。ステロイドホルモンの損失を避けるためにサンプルを粉砕する前に、サンプルの洗浄ステップを実行する必要があることを覚えておくことが重要です。.この手順に従って、我々は他のステロイドホルモンを測定することができます, コアラのストレスと生殖との相互作用を見るために生殖ホルモンなど.この技術は、保全生理学の新しい分野のための新しいツールを提供し、コアラファーのコルチゾールの非侵襲的評価を可能にする。市販のコルチゾールキットは、少量の試薬を提供します。しかし、この実験室の手順を行っている間、自分自身への傷害を最小限に抑えるために個人的な保護具を着用することが重要です。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

腹腔脂肪脂肪パッドにおける基礎およびフォルスコリン刺激脂質測定の測定

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

鶏の羽根や化粧品への応用からケラチンを加水分解物の準備

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

ショウジョウバエのティッシュの最小限の量を使用してのグリセリンの繊維でミトコンドリアの酸素消費量の測定

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

その場で測定と細胞密度の相関、発光細菌の発光

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

オープン パッチ ・ クランプのピペットで非撹拌の境界層におけるイオン濃度の測定: 流体によるイオン チャネルの制御の流れ

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

タップのタグを使用して葉緑体トランスロコン タンパク質複合体の親和性の浄化

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

ケモプローブベースの免疫アッセイを用いてKDM1A標的エンゲージメントを直接測定

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

HPLC-MS/MSによるヌクレオシド/ヌクレオチド含有量測定のための植物サンプル調製

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

単離したてのマウス肝細胞の懸濁液中の脂肪酸β酸化の測定

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

ヒト細胞中の内因性リン酸化STATタンパク質の測定のための時間分解フェルスター共鳴エネルギー移動アッセイ

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...