Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet gjennom oppstart forskningsmidler for Edward Narayan gjennom Western Sydney University, School of Science and Health. Forfatterne takker Jack Nakhoul for hjelp med prøven behandling.

Dette prosjektet ble utført under strenge dyre-og omsorgs retningslinjer. Animal etikk ble gitt av Western Sydney University (A12373). I tillegg en lab risikovurdering og biosafety og stråling form ble presentert og akseptert av Western Sydney University for å trygt gjennomføre denne forskningen (B12366).
Merk: Koala pels prøver for dette prosjektet ble innhentet fra Adelaide Koala og Wildlife Hospital, som ligger på 282 Anzac Highway, Plympton South Australia. Fur var tatt fra ettall Ko...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

Det finnes en rekke studier som bruker en rekke teknikker for å oppdage kortisol i pattedyr pels. Denne studien presenterer resultater for påvisning av kortisol i pels samlet fra en vill Koala eksponert for dagens menneskeskapte stress. Denne banebrytende studien brukte pels for å teste hvilke av de tre brukte løsemidler er best på å utvinne kortisol, et mål på kronisk stress, fra Koala pels. Resultatene viste at 100% metanol var det anbefalte løsningsmidlet for kortisol ekstraksjon i denne type pattedyr pels.</...

Australske økosystemer opprettholde menneskelig liv gjennom levering av tjenester, inkludert mat og fiber blant mange andre dynamiske interaksjoner1. Ironisk nok er det menneskelig aktivitet som fungerer som den dominerende føreren av økosystemet avbrudd gjennom biologisk mangfold endring2. Habitat fragmentering, kjent som prosessen med å dele store sammenhengende habitater i små flekker av land, isolert fra hverandre, er den store menneskeskapte biologisk mangfold endring truende australske økosystemer2. Habitat fragmentering endrer strukturen og mangfoldet av arter sammensetning i et gitt område, og dermed redusere arealet av habitat nødvendig for disse artene å opprettholde levedyktig populasjoner2. Resultatet av dette er økt konkurranse mellom arter for ressurser, inkludert mat, drivstoff, fiber, og vann3. Ødeleggelsen av australske økosystemer gjennom endring av biologisk mangfold er å ha katastrofale konsekvenser for mange australske arter1.
Australias mest ikoniske marsupial arter, den Koala (Phascolarctos cinereus), avhenger av australske økosystemer gjenværende sunt for deres overlevelse4. Innføringen av den europeiske bosetningen førte til en rask nedgang i australske populasjoner av koalabjørner, da de ble slaktet for deres skinnene i jakten på profitt i en stor eksport handel5. Denne praksisen ble forbudt på 1980-tallet og bestander av koalabjørner var da i stand til å stabilisere5. Men eksponentiell vekst av den menneskelige befolkning har resultert i denne arten konkurrerer om mye av deres habitat, og deres overlevelse er igjen under trussel6. Ifølge International Union for Conservation of Nature (IUCN), er alle populasjoner av australske koalabjørner oppført som sårbare for utryddelse med en synkende befolknings trend7. Denne oppføringen er tilskrevet usikkerheten rundt relevante befolknings parametre og markert variasjon i befolknings trender for denne arten7. Som den mest ikoniske og endemisk dyr, koalabjørner i stor grad nytte den australske økonomien gjennom turisme (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Et anslag tyder på at Koala relatert turisme har generert ca 9 000 arbeidsplasser og bidrar mellom $1,1 og $2 500 000 000 til økonomien (NSW Office of Environment og Heritage 2018). Fjerning av en Art har potensial til å bli katastrofale, og kan sees i jevn nedgang på Native Australian Wildlife6. I tillegg vil Australia økonomien føler konsekvenser hvis populasjoner av australske koalabjørner fortsetter å avta på den hastigheten de er6.
Det er antydet at utbredelsen av død og sykdom som svar på habitat fragmentering er et resultat av kronisk stress8. Allerede har tjuefire marsupial arter blitt erklært utryddet i Australia på grunn av habitat fragmentering, med koalabjørner etter en lignende trend8. Kompleksiteten av habitat fragmentering og biologiske systemer er synergi, men kan pakkes ut gjennom analyse av stress respons6. Generelt aktiverer enhver forstyrrelse i et dyr naturlige omgivelser en kompleks kaskade av neurohormonal hendelser, kjent som en "fight or flight" respons9,10. Dette svaret på stress er en prosess som begynner i hjernen der hypothalamus-hypofysen-adrenal (HPA) aksen er aktivert11. En del av hjernen kalles hypothalamus utgivelser corticotrophin-lanserer Hormone (CRH), som deretter signaliserer fremre hypofysen til å løslate adrenocorticotrophic Hormone (ACTH)11. Dette i sin tur stimulerer glukokortikoid sekresjon fra binyrene forlengede. Kroppen sirkulerer glukokortikoider gjennom blodet, som viderekobling lagring av glukose fra glykogen og mobiliserer glukose fra lagret glykogen11. Dette kaskade av neurohormonal hendelser er responsen som brukes av dyret til å håndtere uforutsigbare stimuli11. Imidlertid, når glukokortikoider slippes og være opphøyet for en lengre periode av tid, det dyr er betraktet som å bli erfaring kronisk anstrengelse12,13. Denne prosessen innebærer viderekobling energi bort fra andre fysisk kroppsfunksjoner, som det er nødvendig for pågående glukokortikoid produksjon13. Som et resultat, kronisk stress kan forby vekst, reproduksjon og immunitet, alle er viktige fitness egenskaper som kreves for overlevelse14.
Måler en dyrene ' glukokortikoid produksjon er en vanlig indikatoren anvendt å avgjøre hvorvidt eller ikke det dyr er erfaring fysiologisk trykk15. For å gjøre dette, kan glukokortikoider måles i blodplasma, serum, spytt, urin eller avføring16. Imidlertid tyder tyder på at håret er en mye mer effektiv indikator på kronisk stress, i motsetning til de nevnte16. Dette er fordi håret er antatt å innlemme blod-borne hormoner i sin vekstfase; Det er relativt stabilt; og eventuelle kortisol oppdaget i håret reflekterer fysiologisk stress oppleves over perioden av hårvekst, som kan være uker gjennom til måneder16. Videre bør enhver samling av kortisol være ikke-invasiv for å minimere stress forbundet med fangst og håndtering16. Men noe stress opplevde i løpet av denne hendelsen ville ikke påvirke glukokortikoid nivåer i håret16. Det har vært mange studier som utforsker ferdighet av å bruke håret til å måle langsiktige stress i en rekke dyr, og inkluderer studier på reinsdyr, grizzly bjørner, rhesus aper, muskoxen, og brune bjørner17,18, 19 andre priser , 20 priser og , 21. Hair kortisol er vanligvis ekstrahert ved først å vaske prøven for å sikre svette og sebum-avledet kortisol avsatt på overflaten av håret er ikke co-ekstrahert med kortisol og deretter pulverizing prøven i en perle-visp22. Etter vask må prøven tørkes for å sikre fullstendig fordampning22. Til slutt, ved hjelp av et løsemiddel, kan prøven trekkes ut og rekonstituert å lette analysen av kortisol22. Den vanligste løsemiddel som brukes til å trekke ut kortisol fra pels er metanol21,23; Det er imidlertid noen studier som bruker etanol og isopropanol i sine kortisol utvinning teknikker. For eksempel, en studie som brukte etanol var vellykket for utpakking av kortisol fra humant fostervann væske24. I tillegg en studie som brukte isopropanol var vellykket for utpakking av kortisol fra menneskehår og negler25,26. Av denne grunn, denne studien testet alle tre løsningsmidler (metanol, etanol, og isopropanol) for å finne ut hvilke som var mest vellykket for ekstraksjon av kortisol fra prøver av Koala pels.
Det primære målet med denne studien var å bruke dagens teknikker for å validere en optimal hormon utvinning teknikk som skal brukes som en ikke-invasiv måling av kortisol fra Koala pels. Dette ble oppnådd ved å teste tre avsugs løsemidler (metanol, etanol og isopropanol). Vi hypotetisk gjennomsnitt at metanol vil være den optimale løsemiddel som brukes for utpakking av kortisol fra Koala pels fordi det er den anbefalte løsningsmiddel for ekstraksjon av Arbor analysen kortisol kits27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

Optimale metoder for hormon utvinning brukes til å måle stress i dyr over utvalget typer er ikke alltid det samme. Australias ikoniske marsupial arter, Koala (Phascolarctos cinereus), ansikter langvarig eksponering for menneskeskapte-indusert stressorer og vurdering av kronisk stress i ville populasjoner er snarest berettiget. En av de mest effektive måtene å måle kronisk stress er gjennom å analysere glukokortikoid hormonet kortisol i hår eller pels, som det støtter fysiologiske og atferdsmessige responser. Dette laboratoriet validering studien tar sikte på å teste dagens teknikker for å validere en optimal Hormone utvinning metode som skal brukes som en ikke-invasiv måling av kortisol i Koala pels. Det er anerkjent at bruk av ikke-invasiv teknikker for å måle stress hormoner foretrekkes over tradisjonelle, invasive teknikker på grunn av sin ideelle praktiske og etiske ståsteder. I tillegg er det relativt lettere å skaffe pels fra koalabjørner enn det er å tilegne seg prøver av sitt blod. Denne studien brukte prøver av Koala pels ervervet fra Adelaide Koala og Wildlife Hospital å kjøre en rekke hormon utvinning teknikker i et forsøk på å validere en optimal kortisol utvinning metoden. Resultatene viste at 100% metanol ga den mest optimale løsningsmiddel utvinningen sammenlignet med 100% etanol eller 100% isopropanol basert på parallellisme resultater. I konklusjonen, denne metoden for kortisol utvinning fra Koala pels forutsatt en pålitelig ikke-invasiv analysen som kan brukes til å studere kronisk stress i koalabjørner.

Analysen deteksjon av hormon metabolitter av interesse bestemmes ved hjelp parallellisme. Ved hjelp av en parallellisme kurve bestemmer 50% bindings punktet også prøve fortynningsfaktoren på standardkurven (figur 1). Som vist i parallellisme grafen (figur 1), 100% etanol og 100% isopropanol ekstrakter ikke gi parallell forskyvning mot kortisol standarden. Men 100% metanol ekstrakt gitt parallell forskyvning mot kortisol standarden. Tørkede ekstrakter ble kjørt ryddig gjennom fortynn...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

Vi presenterer en protokoll for å fastslå den optimale ekstraksjon løsemiddel å måle kortisol fra Koala pels. Løsnings midlene som brukes i denne protokollen, er metanol, etanol og isopropanol. Bestemme en optimal ekstraksjon løsemiddel vil hjelpe i pålitelig måling pels for å fastslå effekten av kronisk stress på koalabjørner.

Kortisol måling i Koala (Phascolarctos cinereus) fur

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Dette er en ny metode for vurdering av glukokortikoidhormonet, kortisol, fra koalapels. Det gir en ny biomarkør for vurdering av kronisk stress i koalaer. Den største fordelen med denne teknikken er at det er en svært følsom og reproduserbar metode med en ganske rask behandlingstid mellom prøveforberedelse og hormonanalyse.Denne teknikken muliggjør kvantitativ vurdering av kronisk stress i koalaer, som er et svært nyttig klinisk styringsverktøy. Dylan Fox, en student fra laboratoriet mitt, hjelper meg med denne prosedyren. For å begynne denne prosedyren hente pelsen fra lagring på minus 80 grader Celsius og la den tine ved romtemperatur.Deretter veier pelsen på et laboratorium analytisk presisjonsbalanse. Legg 60 milligram pels i en pre-veid og merket 1,5-milliliter sentrifuge rør og gjenta dette til 18 rør er fylt. Bruk en pipette til å legge til én milliliter med 100 % ISOpropanol av HPLC-klasse til hvert rør.Vortex prøvene i 30 sekunder. Sil hver prøve med en 0,5 milliliter mikropresisjonssil for å oppnå separasjon av væske og pels, og kast væsken i en avfallsbeholder. Plasser hver pelsprøve i en merket veiebåt i plast.Plasser deretter veiebåtene i en vakuumdesiccator og la stå i tre dager for å la pelsen tørke. Når pelsen er helt tørr, legg hver prøve i et merket 1,5 milliliter mikrocentrifugerør. Legg hver prøve i en perlemølle med tre krom stålperler og pulveriser i to minutter ved 30 rister per sekund.Gjenta denne overføringen med 100 % analytisk metanol og 100 % analytisk karakter isopropanol til 18 totale rør er fylt. Etter dette, bruk en pipette til å overføre en milliliter av den første ekstraksjonsteknikken til seks 1,5 milliliter sentrifugerør som inneholder pelsprøven. Cap hvert rør, og bruk en shaker for å inkubere dem ved romtemperatur med konstant pulserende i minst 12 timer.Deretter spenne prøvene med en 0,5-milliliter mikro-presisjon sil. Bruk en pipette til å overføre væsken til et nytt merket 1,5 milliliter mikrocentrifugerør, samtidig som du sikrer at pelsen kastes riktig. I en røykhette, prøv helt løsningsmiddelekstraktet under en strøm av nitrogendamp.Deretter rekonstituerer den tørkede prøven med 400 mikroliter analysebuffer og 100 mikroliter på 100% analytisk karakter etanol. For å gjøre kontrollene, velg først prøver fra dyr med kjent eksponering for stressoren. For å lage et ekstraktbasseng, ta 20 mikroliter ekstrakt fra hver prøve til et totalt volum på 200 mikroliter oppnås.Oppbevar ekstraktutvalget på minus 80 grader Celsius til du er klar til å kjøre analyser. Når du er klar, få fortynningsfaktoren for 30% og 70% bindingspunkter fra parallellismegrafen for ekstraktet mot kortisolstandarden, og bruk analysebuffer for å fortynne prøveutvalget riktig for å skape de høye og lave kontrollene. Ved hjelp av et kommersielt kortisolsett satte du opp en 96-brønns stripeplate, inkludert prøver, kontroller, kortisolstandarder, uspesifikke brønner og maksimumsbindende brønner i henhold til leverandørens instruksjoner.Bruk plateoppsettarket som er inkludert i kit-heftet, til å vise plasseringene til prøvene, kontrollene og standardene. Deretter følger du pelshormonutvinningsprosessen som tidligere ble beskrevet for å oppnå 100% metanolutvunnet koalapels. Forbered kortisolsettets reagenser i henhold til produsentens instruksjoner.Pipette 50 mikroliter av prøver eller standarder inn i brønnene på platen. Pipette 75 mikroliter med analysebuffer inn i de ikke-spesifikke bindende brønnene, og 50 mikroliter analysebuffer inn i de maksimalt bindende brønnene. Bruk en repeater pipette legge til 25 mikroliter av kortisol konjugat til hver brønn.Deretter pipette 25 mikroliter av kortisol antistoffet i hver brønn, bortsett fra de uspesifikke bindende brønnene. Trykk forsiktig på sidene av platen for å sikre at reagensene er godt blandet. Dekk platen med platetetningen, og bruk en orbital shaker til å riste ved romtemperatur i en time.Etter dette fjerner du plateforseglingen, og aspirerer brønnplaten ved å vaske hver brønn med 300 mikroliter vaskebuffer fire ganger. Tørk deretter platen ved å trykke den på rene absorberende håndklær. Pipette 100 mikroliter tetrametylbenzidin substrat til hver brønn.Plasser platetetningen på brønnplaten, og inkuber ved romtemperatur i 30 minutter. Etter dette, pipette 50 mikroliter stoppløsning i hver brønn. Overfør platen til en plateleser som er i stand til å lese 450 nanometer, og beregn den endelige hormonkonsentrasjonen som beskrevet i tekstprotokollen.I denne studien bestemmes essayet påvisning av hormonmetabolitter av interesse ved hjelp av parallellisme. På parallellismekurven bestemmer 50% bindingspunktet prøvefortynningsfaktoren på standardkurven. Som det frem ser, ga 100% etanol og 100% isopropanolekstrakter ikke parallell forskyvning mot kortisolstandarden.Imidlertid gir 100% metanolekstraktet parallell forskyvning mot kortisolstandarden. Intra-og inter-analyse koeffisienter av variasjon bestemmes fra høy-og lav-bindende prøveekstrakter kjøres i alle analysene. De lavbindende interne kontrollene er sett på som ryddig koala ekstrakt basseng, mens de høybindende interne kontrollene er sett på å være en-til-to fortynnet koala ekstrakt basseng.Sammenhengen mellom hvert løsemiddelekstrakt og kortisolstandard bestemmes deretter ved hjelp av et regresjonsplott. Den 100% metanol ekstrakt gir den beste linjen av regresjon med den høyeste R-kvadrert verdi sammenlignet med 100% etanol og 100% isopropanol ekstrakter. Det er viktig å huske at prøven vaske trinn må utføres før sliping prøvene for å unngå tap av steroid hormoner.Etter denne prosedyren kan vi måle andre steroide hormoner, som reproduktive hormoner for å se på interaksjonene mellom stress og reproduksjon i koalaer. Denne teknikken gir et nytt verktøy for det nye feltet for bevaring fysiologi, slik at ikke-invasiv vurdering av kortisol i koala pels. Det kommersielle kortisolsettet gir reagenser i minuttmengde.Det er imidlertid viktig å bruke personlig verneutstyr for å minimere skade på seg selv mens du utfører denne laboratorieprosedyren.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

Måling av basal og forskolinstimulert lipolyse i fettputer

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Utarbeidelse av Keratin hydrolyse fra kylling fjær og dens anvendelse i kosmetikk

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Måling av mitokondrie oksygenforbruk i Permeabilized fiber av Drosophila med minimale mengder vev

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Måling og korrelasjon av cellen og lys utslipp av Bioluminescent bakterier

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

Måling av konsentrasjon i Unstirred grensen laget med åpne Patch-klemme Pipette: implikasjoner i kontroll av Ion kanaler av væske flyt

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

Affinitet rensing av Chloroplast Translocon Protein komplekser hjelp av trykk-koden

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

Direkte måling av KDM1A Target Engagement ved hjelp av Chemoprobe-baserte immunanalyser

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

Planteprøveforberedelse for nukleoside/nukleotidinnholdsmåling med en HPLC-MS/MS

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Måling av fettsyre β-oksidasjon i en suspensjon av nyisolerte musehpopatocytter

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tidsavklarte Förster Resonance Energy Transfer Assays for måling av endogene fosforylaterte STAT-proteiner i humane celler

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...