Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Эта работа была поддержана путем запуска научно-исследовательского финансирования для Эдварда Нараяна через Западный Сиднейский университет, Школа науки и здравоохранения. Авторы благодарят Джека Нахула за помощь в обработке образцов.

Этот проект был выполнен в соответствии со строгими руководящими принципами по уходу за животными и людьми. Этика животных была предоставлена Западным Сиднейским университетом (A12373). Кроме того, лабораторная оценка рисков и биобезопасность и радиационная форма были представлены и при...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

Есть ряд исследований, которые используют ряд методов для обнаружения кортизола в меха млекопитающих. Это исследование представляет результаты для обнаружения кортизола в мехе, собранных из дикой коалы подвергаются текущему антропогенному стрессу. Это новаторское исследование испо?...

Австралийские экосистемы поддерживают жизнь человека путем предоставления услуг, включая продукты питания и волокна среди многих других динамических взаимодействий1. По иронии судьбы, это человеческая деятельность, которая действует в качестве доминирующего драйвера нарушения экосистемы через изменение биоразнообразия2. Фрагментация мест обитания, известная как процесс деления больших непрерывных мест обитания на небольшие участки земли, изолированные друг от друга, является основным антропогенным изменением биоразнообразия, угрожающим австралийским экосистемам2. Фрагментация мест обитания изменяет структуру и разнообразие видового состава в той или инойобласти, тем самым уменьшая площадь среды обитания, необходимую для сохранения жизнеспособных популяций 2. Результатом этого является усиление конкуренции между видами за ресурсы, включая продукты питания, топливо, клетчатку и воду3. Разрушение австралийских экосистем путем изменения биоразнообразия имеет катастрофические последствия для многих австралийских местных видов1.
Самые знаковые сумчатые виды Австралии, коала(Phascolarctos cinereus),зависит от австралийских экосистем, остающихся здоровыми для их выживания4. Введение Европейского урегулирования вызвало быстрое сокращение австралийского населения коал, так как они были убиты за шкуры в погоне за прибылью в большой экспортной торговле5. Эта практика была запрещена в 1980-х и популяции коал смогли стабилизировать5. Тем не менее, экспоненциальный рост популяции людей привел к тому, что этот вид конкурирует за большую часть своей среды обитания, и их выживание снова находится под угрозой6. По данным Международного союза охраны природы (МСОП), все популяции австралийских коал ы перечислены как уязвимые к вымиранию с уменьшением демографиитенденция 7. Этот перечень объясняется неопределенностью вокруг соответствующих параметров популяции и заметными различиями в демографических тенденциях для данного вида7. Как наиболее знаковых и эндемичных животных, коалы в значительной степени пользу австралийской экономики через туризм (NSW Управление окружающей среды и наследия 2018). По оценкам, связанный с коалой туризм создал около 9000 рабочих мест и вносит от $1,1 до $2,5 млрд в экономику (NSW Office of Environment and Heritage 2018). Удаление любого одного вида имеет потенциал, чтобы быть катастрофическим, и можно увидеть в устойчивом упадке родной австралийской дикой природы6. Кроме того, экономика Австралии будет чувствовать последствия, если население австралийских коал продолжать снижаться темпами они6.
Предполагается, что распространенность смертности и заболеваний в ответ на фрагментацию среды обитания является результатом хронического стресса8. Уже, двадцать четыре сумчатых видов были объявлены вымершими в Австралии из-за фрагментации среды обитания, с коалами после аналогичной тенденции8. Сложность фрагментации среды обитания и биологических систем является синергетической, но может быть распакована путем анализа реакции на стресс6. Как правило, любое нарушение в естественной среде животных активирует сложный каскад нейрогормональных событий, известный как "борьба или полет" ответ9,10. Эта реакция на стресс процесс, который начинается в головном мозге, где гипоталамо-гипофизарно-надпочечников (HPA) оси активируется11. Компонент мозга называется гипоталамус релизы кортикотрофина-рилизинг гормона (CRH), который затем сигнализирует передний гипофиза, чтобы освободить адренокортикотрофический гормон (ACTH)11. Это, в свою очередь, стимулирует глюкокортикоидную секрецию из надпочечников медуллы. Организм циркулирует через кровь глюкокортикоиды, что отвлекает хранение глюкозы из гликогена и мобилизует глюкозу из хранящегося гликогена11. Этот каскад нейрогормональных событий является ответом, используемым животным для борьбы с непредсказуемыми раздражителями11. Однако, когда глюкокортикоиды высвобождаются и остаются повышенными в течение длительного периода времени, считается, что животное испытывает хронический стресс12,13. Этот процесс включает в себя отвлечение энергии от других телесных функций организма, так как это необходимо для текущего производства глюкокортикоидов13. В результате, хронический стресс может запретить рост, размножение и иммунитет, все это ключевые черты фитнес, необходимые для выживания14.
Измерение производства глюкокортикоидов животного является общим показателем, используемым для определения того, испытывает ли животное физиологический стресс15. Для этого глюкокортикоиды могут быть измерены в плазме крови, сыворотке крови, слюне, моче или фекалиях16. Тем не менее, данные свидетельствуют о том, что волосы является гораздо более эффективным показателем хронического стресса, в отличие от вышеупомянутых16. Это потому, что волосы, как полагают, включают кровь гормонов во время его фазы роста; она относительно стабильна; и любой кортизол, обнаруженный в волосах, отражает физиологический стресс, испытываемый в период роста волос, который может составить несколько недель до16месяцев. Кроме того, любая коллекция кортизола должна быть неинвазивной, чтобы свести к минимуму стресс, связанный с захватом и обработкой16. Тем не менее, любой стресс, испытываемый во время этого события не повлияет на уровень глюкокортикоидов в волосах16. Там было много исследований, которые исследуют мастерство использования волос для измерения долгосрочного стресса в ряде животных, и включают в себя исследования на оленей, медведей гризли, рекусов обезьян, muskoxen, и бурых медведей17,18, 19 лет , 20 , 21. Кортизол волос, как правило, извлекается при первом мытье образца для обеспечения пота и кожного сала полученных кортизола на хранение на поверхности волос не совместно извлечены с кортизола, а затем распыления образца в бисером бисером22. После стирки образец необходимо высушить, чтобы обеспечить полное испарение22. Наконец, с помощью растворителя, образец может быть извлечен и восстановлен для облегчения анализ кортизола22. Наиболее распространенным растворителем, используемым для извлечения кортизола из меха, является метанол21,23; однако, Есть некоторые исследования, которые используют этанол и изопропанол в своих методах извлечения кортизола. Например, исследование, в ходе которого использовался этанол, было успешным для извлечения кортизола из амниотической жидкости человека24. Кроме того, исследование, которое использовало изопропанол был успешным для извлечения кортизола из человеческих волос и ногтей25,26. По этой причине, это исследование протестировало все три растворителя (метанол, этанол и изопропанол), чтобы определить, какой из них был наиболее успешным для извлечения кортизола из образцов меха коалы.
Основная цель этого исследования заключается в использовании современных методов для проверки оптимального метода экстракции гормонов, которые будут использоваться в качестве неинвазивной меры кортизола из меха коалы. Это было достигнуто путем тестирования трех растворителей извлечения (метанол, этанол и изопропанол). Мы предположили, что метанол будет оптимальным растворителем, используемым для извлечения кортизола из меха коалы, потому что это рекомендуемый растворитель извлечения Arbor assay комплекты кортизола27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

Оптимальные методы экстракции гормонов, используемые для измерения стресса у животных по типам образцов, не всегда одинаковы. Австралийские культовые сумчатые виды, коала(Phascolarctos cinereus),сталкивается с длительным воздействием антропогенных стрессоров и оценка хронического стресса в диких популяциях является срочно оправданным. Одним из наиболее эффективных способов измерения хронического стресса является анализ глюкокортикоидного гормона кортизола в волосах или мехе, так как он поддерживает физиологические и поведенческие реакции. Это лабораторное исследование проверки направлено на тестирование современных методов для проверки оптимального метода экстракции гормонов, который будет использоваться в качестве неинвазивной меры кортизола в мехе коалы. Признано, что использование неинвазивных методов для измерения гормонов стресса является предпочтительным по сравнению с традиционными, инвазивными методами из-за их идеальной практической и этической точки зрения. Кроме того, сравнительно легче приобретать мех у коал, чем приобретать образцы их крови. В этом исследовании использовались образцы меха коалы, приобретенные в Аделаиде Коала и больнице дикой природы, чтобы запустить ряд методов экстракции гормонов в попытке проверить оптимальный метод экстракции кортизола. Результаты показали, что 100% метанол обеспечивает наиболее оптимальный растворитель добычи по сравнению с 100% этанола или 100% изопропанола на основе результатов параллелизма. В заключение, этот метод извлечения кортизола из меха коалы обеспечил надежный неинвазивный тест, который может быть использован для изучения хронического стресса у коал.

Ассаи выявляет гормоны метаболитов, представляющих интерес, определяется с помощью параллелизма. Используя кривую параллелизма, 50% связывающая точка также определяет коэффициент разбавления образца на стандартной кривой(рисунок1). Как показано на графике параллелизма(р?...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

Мы представляем протокол для определения оптимального растворителя экстракции для измерения кортизола из меха коалы. Растворителями, используемыми в этом протоколе, являются метанол, этанол и изопропанол. Определение оптимального растворителя извлечения поможет надежно измерить мех, чтобы определить влияние хронического стресса на коал.

Кортизол Измерение в Коала (Phascolarctos cinereus) Мех

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Это новый метод оценки глюкокортикоидного гормона, кортизола, из меха коалы. Он предоставляет новый биомаркер для оценки хронического стресса у коал. Основным преимуществом этой техники является то, что это очень чувствительный и воспроизводимый метод с довольно быстрым временем оборота между подготовкой образца и гормональным анализом.Этот метод позволяет количественно оценить хронический стресс у коал, который является весьма полезным инструментом клинического управления. Помочь мне с этой процедурой - Дилан Фокс, аспирант из моей лаборатории. Для начала этой процедуры извлекаем мех из хранилища при температуре минус 80 градусов по Цельсию и дайте ему оттаять при комнатной температуре.Затем взвесь мех на лабораторно-аналитическом балансе точности. Поместите 60 миллиграммов меха в предварительно взвешенную и помеченную 1,5-миллилитровую центрифугу и повторите это до тех пор, пока не будут заполнены 18 трубок. Используя пипетку, добавьте один миллилитр 100%HPLC класса изопропанол к каждой трубке.Вихрь образцов в течение 30 секунд. Процедить каждый образец с 0,5-миллилитровым микроточной сито, с тем чтобы добиться разделения жидкости и меха, и выбросить жидкость в контейнер для отходов. Поместите каждый образец меха в помеченную пластиковую лодку для взвешивания.Затем поместите лодки для взвешивания в вакуумный децикатор и оставьте на три дня, чтобы мех высох. После того, как мех полностью высохнет, поместите каждый образец в помеченную 1,5-миллилитровую микроцентрифугную трубку. Поместите каждый образец в бисерную мельницу с тремя хромированными стальными бусинками и распылизуйте в течение двух минут при 30 коктейлях в секунду.Повторите эту передачу со 100%-ным аналитическим метанолом и 100%-ным аналитическим сортом изопропанола до тех пор, пока не будет заполнено 18 трубок. После этого используйте пипетку для переноса одного миллилитра первой техники экстракции в шесть 1,5-миллилитровых центрифугных трубок, содержащих образец меха. Cap каждой трубки, и использовать шейкер, чтобы инкубировать их при комнатной температуре с постоянной пульсирующей, по крайней мере 12 часов.Затем процедить образцы с 0,5-миллилитровый микро-точность сито. Используйте пипетку для переноса жидкости в новую помеченную микроцентрифугную трубку с маркировкой 1,5 миллилитров, обеспечивая при этом, чтобы мех был надлежащим образом выброшен. В дымовой капот, полностью попробуйте экстракт растворителя под потоком пара азота.Затем воссоздать высушенный образец с 400 микролитров анализа буфера и 100 микролитров 100% этанола аналитического класса. Чтобы сделать элементы управления, сначала выберите образцы у животных с известным воздействием стрессора. Чтобы сделать экстракт бассейн, возьмите 20 микролитров экстракта из каждой выборки, пока общий объем 200 микролитров не будет получен.Храните экстракт бассейн при температуре минус 80 градусов по Цельсию до готовности к запуску анализов. Когда вы будете готовы, получить фактор разбавления для 30%и 70%binding точек от параллелизма график для экстракта против кортизола стандарта, и использовать анализ буфера для разбавления образца бассейн надлежащим образом для создания высоких и низких элементов управления. Используя коммерческий комплект кортизола создали 96-хорошо полоса пластины, включая образцы, контроль, кортизол стандартов, неспецифических обязательных скважин, и максимально связывающих скважин в соответствии с инструкциями поставщика.Используйте лист макета пластины, включенный в буклет комплекта, чтобы перечислить положения образцов, элементов управления и стандартов. Затем следуйте описанной ранее процессу извлечения меховых гормонов, чтобы получить 100%-ный мех коалы, извлеченный метанолом. Подготовь реагенты комплекта кортизола в соответствии с инструкциями производителя.Pipette 50 микролитров образцов или стандартов в колодцы пластины. Пипетт 75 микролитров анализа буфера в неспецифических связывающих скважин, и 50 микролитров анализа буфера в максимально связывающих скважин. Использование ретранслятора пипетки добавить 25 микролитров кортизола конъюгации к каждой хорошо.Затем, пипетки 25 микролитров антитела кортизола в каждой скважине, за исключением неспецифических связывающих скважин. Аккуратно коснитесь боковых сторон пластины, чтобы убедиться, что реагенты хорошо перемешаются. Обложка пластины с уплотнитель пластины, и использовать орбитальный шейкер встряхнуть при комнатной температуре в течение одного часа.После этого снимите уплотнение пластины, и аспирировать хорошо пластины, мыть каждый хорошо с 300 микролитров мыть буфера четыре раза. Затем высушите тарелку, постукивая ею по чистым абсорбентным полотенцам. Pipette 100 микролитров тетраметилбензидина субстрат для каждой хорошо.Поместите уплотнитель пластины на хорошо пластины, и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 минут. После этого пипетка 50 микролитров стоп-раствора в каждую колодец. Перенесите пластину в считыватель пластин, способный считывать 450 нанометров, и вычислить окончательную концентрацию гормонов, как указано в текстовом протоколе.В этом исследовании, эссе обнаружения гормонов метаболитов интерес определяется с помощью параллелизма. На кривой параллелизма 50%-ная точка связывания определяет фактор разбавления образца на стандартной кривой. Как видно, 100%этанол и 100%изопропанол экстракты не обеспечивают параллельного перемещения против кортизола стандарта.Тем не менее, 100% экстракт метанола обеспечивает параллельное смещение против кортизола стандарта. Коэффициенты изменения внутри- и межассай определяются на основе высоко- и низкоопределяющих экстрактов выборки, которые используются во всех анализах. Низкосвязающий внутренний контроль, как видно, аккуратный бассейн экстракт коала, в то время как высокие связывания внутреннего контроля, как видно, один-два разбавленных коала экстракт бассейн.Связь между каждым экстрактом растворителя и стандартом кортизола определяется с помощью регрессионные участки. Экстракт метанола на 100% обеспечивает лучшую линию регрессии с самым высоким значением R-квадрата по сравнению со 100%-ным этанолом и 100% экстрактами изопропанола. Важно помнить, что шаг мытья образца должны быть выполнены перед шлифовкой образцов, чтобы избежать потери стероидных гормонов.После этой процедуры, мы можем измерить другие стероидные гормоны, такие как репродуктивные гормоны, чтобы посмотреть на взаимодействие между стрессом и размножения у коал. Этот метод предоставляет новый инструмент для формирующейся области сохранения физиологии, что позволяет неинвазивной оценки кортизола в коала меха. Коммерческий комплект кортизола обеспечивает реагенты в минутном количестве.Тем не менее, важно носить средства индивидуальной защиты, чтобы свести к минимуму ущерб себе при проведении этой лабораторной процедуры.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

Измерение базального и форсколин-стимулированного липолиза в паховых жировых жировых подушечках

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Подготовка гидролизат кератина от куриные перья и его применение в косметике

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Измерение потребления кислорода митохондрий в Permeabilized волокнах дрозофилы, используя минимальное количество ткани

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

На месте Измерение и корреляции плотность клеток и светового излучения биолюминесцентных бактерий

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

Измерение концентрации ионов в Unstirred пограничном слое с открытым патч зажим пипетки: последствия управления ионных каналов жидкости потока

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

Очищение сродства хлоропласта Translocon белковых комплексов с помощью тега крана

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

Прямое измерение целевого взаимодействия KDM1A с использованием иммуноанализов на основе хемозондов

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

Заводская пробоподготовка для измерения содержания нуклеозидов/нуклеотидов с помощью ВЭЖХ-MS/MS

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Измерение β окисления жирных кислот в суспензии свежеизолированных гепатоцитов мыши

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Резонансные анализы переноса энергии Фёрстера с временным разрешением для измерения эндогенных фосфорилированных белков STAT в клетках человека

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...