Name: cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Bu çalışma, Edward Narayan için Western Sydney Üniversitesi, Bilim ve Sağlık Okulu aracılığıyla start-up araştırma fonu ile desteklenmiştir. Yazarlar örnek işleme ile yardım için Jack Nakhoul teşekkür ederim.

Bu proje sıkı hayvan ve insan bakım yönergeleri altında gerçekleştirilmiştir. Hayvan etiği Western Sydney Üniversitesi (A12373) tarafından verildi. Buna ek olarak, bu araştırmayı güvenli bir şekilde üstlenmek üzere Western Sydney Üniversitesi tarafından bir laboratuvar risk değerlendirmesi ve biyogüvenlik ve radyasyon formu sunulmuş ve kabul edilmiştir (B12366).
NOT: Bu proje için koala kürk örnekleri Adelaide Koala ve Yaban Hayatı Hastanesi, 282 Anzak Karayolu, Ply...

<ol>
	<li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises.">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li><li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves.">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li><li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiversity+Areas+under+Threat:+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World's+Biodiversity+Priorities.">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615 (2017).</li><li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse.">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li><li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland,+1906-1936.">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li><li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials,+focus+on+the+koala+(Phascolarctos+cinereus).">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li><li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phascolarctos+cinereus.">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li><li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland,+Australia:+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587 (2017).</li><li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease:+consequences+for+health+and+conservation.">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li><li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoids,+stree,+and+fertility.">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109 (2010).</li><li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+stress+in+ecology:+lessons+from+biomedical+research.">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li><li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+in+a+name?+Integrating+homeostasis,+allostasis+and+stress.">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li><li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+environmental+stress:+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel,+changing+environments.">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li><li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+disorders+of+the+stress+system.">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li><li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial:+the+Koala+(Phascolarctos+cinereus).">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li><li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+(Tamias+striatus).">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055 (2014).</li><li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge.">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li><li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+(Ursus+arctos):+considerations+with+implications+for+other+wildlife.">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li><li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys:+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses.">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li><li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies.">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052 (2017).</li><li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration:+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling.">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026 (2014).</li><li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair.">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882 (2014).</li><li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+(Pan+troglodytes).">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870 (2016).</li><li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cortisol,+tetrahydrocortisol,+tetrahydrocortisone,+corticosterone,+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid.">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li><li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cortisol+Study;+Facial+Hair+and+Nails.">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids &amp; Hormonal Science. 7 (2), 177 (2016).</li><li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+extraction:+get+the+best+out+of+faecal+samples.">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li><li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques.">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li><li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model.">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li></ol>

Memeli kürkkortizol tespit etmek için teknikler bir dizi kullanmak çalışmalar vardır. Bu çalışma, mevcut antropojenik strese maruz kalan yabani bir koaladan toplanan kürkkortizol tespiti için sonuçlar sunmaktadır. Bu çığır açan çalışmada koala kürk kronik stres bir ölçüsü olan kortizol ayıklama en iyi üç yaygın olarak kullanılan çözücüler hangi test etmek için kürk kullanılır. Sonuçlar% 100 metanol memeli kürk bu tür kortizol ekstraksiyon için önerilen çözücü olduğunu gös...

Avustralya ekosistemleri diğer birçok dinamik etkileşimlerarasındagıda ve lif dahil olmak üzere hizmetlerin sağlanması yoluyla insan hayatını sürdürmek 1. İronik olarak, biyolojik çeşitlilik değişimi ile ekosistem bozulmasının baskınitici gücü olarak çalışan insan aktivitesidir 2. Habitat parçalanma, arazi küçük yamalar halinde büyük sürekli habitatlar bölme süreci olarak bilinen, birbirinden izole, Avustralya ekosistemleri tehdit eden büyük antropojenik biyoçeşitlilik değişimi2. Habitat parçalanması herhangi bir alandaki türlerin bileşiminin yapısını ve çeşitliliğini değiştirerek, bu türlerin canlı popülasyonları korumak için gerekli olan habitat alanını azaltır2. Bunun sonucu gıda, yakıt, lif vesu3 dahil olmak üzere kaynaklar için türler arasındaki rekabet artmaktadır. Biyolojik çeşitlilik değişimi ile Avustralya ekosistemlerinin imha birçok Avustralya yerlitürler üzerinde felaket sonuçlara sahip 1.
Avustralya'nın en ikonik keseli türler, koala(Phascolarctos cinereus),Avustralya ekosistemleri hayatta kalmak için sağlıklı kalan bağlıdır4. Avrupa Yerleşimi'nin başlatılması koalaavustralya popülasyonlarında hızlı bir düşüşe neden oldu, onlar büyük bir ihracat ticaretikar peşinde kendi pelts için katledildi 5. Bu uygulama 1980'lerde yasaklandı ve koala popülasyonları daha sonra5stabilize başardık. Ancak, insan nüfusunun üstel büyüme bu türün yaşam alanlarının büyük bir kısmı için rekabetsonuçlandı ve hayatta kalmaları yine tehdit altında 6. Uluslararası Doğayı Koruma Birliği'ne (IUCN) göre, Avustralya koalalarının tüm popülasyonları azalan nüfuseğilimi7 ile yok olmaya karşı savunmasız olarak listelenmiştir. Bu liste, ilgili nüfus parametreleri etrafındaki belirsizliğe atfedilirve bu tür için popülasyon eğilimlerinde belirgin bir değişim 7. En ikonik ve endemik hayvanlar olan koalalar, turizm yoluyla Avustralya ekonomisine büyük ölçüde fayda sağlamaktadır (NSW Çevre ve Miras Ofisi 2018). Yapılan tahminlere göre koala turizmi yaklaşık 9.000 kişiye iş sağladı ve ekonomiye 1.1 ila 2.5 milyar dolar arasında katkıda bulundu (NSW Çevre ve Miras Ofisi 2018). Herhangi bir türün kaldırılması felaket olma potansiyeline sahiptir, ve yerli Avustralya yaban hayatı sürekli düşüş görülebilir6. Ayrıca, Avustralya koalalarının popülasyonları6oranında azalmaya devam ederse Avustralya ekonomisi nin sonuçları hissedilecektir.
Habitat parçalanmasına yanıt olarak ölüm ve hastalık prevalansının kronik stresin sonucu olduğu ileri sürülmaktadır8. Zaten, yirmi dört keseli türler avustralya'da habitat parçalanma nedeniyle soyu tükenmiş ilan edilmiştir, koalalar benzer bir eğilim aşağıdaki8. Habitat parçalanma ve biyolojik sistemlerin karmaşıklığı sinerjik ama stres yanıtı analizi ile çözülebilir6. Genellikle, bir hayvan doğal ortamda herhangi bir rahatsızlık nörohormonal olayların karmaşık bir çağlayan aktive, bir 'mücadele veya uçuş' yanıtı olarak bilinen9,10. Strese verilen bu yanıt, hipotalamik-hipofiz-adrenal (HPA) ekseninin aktive edildiği beyinde başlayan bir süreçtir11. Hipotalamus denilen beynin bir bileşeni kortikotrofin salgılayan hormon bültenleri (CRH), daha sonra adrenokortikotrofik hormon serbest bırakmak için ön hipofiz sinyalleri (ACTH)11. Bu da adrenal medulla gelen glukokortikoid salgısını uyarır. Vücut glikoz depolarını glikojenden uzaklaştıran ve glikozu depolanan glikojen11'denharekete geçirerek kan yoluyla glukokortikoidler dolaşır. Nörohormonal olayların Bu çağlayan öngörülemeyen uyaranlar ile başa çıkmak için hayvan tarafından kullanılan tepkidir11. Ancak, glukokortikoidler serbest bırakılır ve uzun bir süre için yüksek kalır, hayvan kronik stres yaşıyor olarak kabul edilir12,13. Bu süreç, devam eden glukokortikoid üretimi için gerekli olduğu gibi, enerjiyi diğer onbaşı bedensel işlevlerden uzaklaştırmayı içerir13. Sonuç olarak, kronik stres büyüme, üreme ve bağışıklık yasaklayabilir, tüm önemli fitness özellikleri hayatta kalmak için gerekli olan14.
Bir hayvanın glukokortikoid üretiminin ölçülmesi, hayvanın fizyolojik stres yaşanıp yaşamadığını belirlemek için kullanılan yaygın bir göstergedir15. Bunu yapmak için, glukokortikoidler kan plazması, serum, tükürük, idrar veya dışkı16ölçülebilir. Ancak, kanıtlar saç kronik stres çok daha etkili bir göstergesi olduğunu göstermektedir, yukarıda belirtilen aksine16. Saç büyüme aşamasında kan yoluyla gelen hormonlar dahil düşünülmektedir olmasıdır; nispeten kararlıdır; ve saçta tespit edilen herhangi bir kortizol, saç büyüme döneminde yaşanan fizyolojikstresi yansıtır, bu da haftalar ile 16 ay arasında olabilir. Ayrıca, kortizol herhangi bir koleksiyon yakalama ve 16 işleme ile ilişkilistresi en aza indirmek için non-invaziv olmalıdır. Ancak, bu olay sırasında yaşanan herhangi bir stres saç glukokortikoid düzeylerini etkilemez16. Hayvanların bir dizi uzun vadeli stres ölçmek için saç kullanma yeterliliğini keşfetmek birçok çalışma olmuştur, ve ren geyiği üzerinde çalışmalar dahil, boz ayılar, rhesus maymunlar, muskoxen, ve kahverengi ayılar17,18, 19.09.20 , 20.000 , 21. Saç kortizol genellikle saç yüzeyinde biriken ter ve sebum türetilmiş kortizol sağlamak için ilk örnek yıkanarak ayıklanır co-kortizol ile ayıklanırve daha sonra bir boncuk-beater 22 örnek pulverizing değildir. Yıkandıktan sonra, numunenin tam buharlaşma sağlamak için kurutulması gerekir22. Son olarak, bir çözücü kullanılarak, numune ayıklanabilir ve kortizol 22tsay kolaylaştırmak için yeniden oluşturulabilir. Kürk kortizol ayıklamak için kullanılan en yaygın çözücü metanol21,23; ancak, kortizol çıkarma tekniklerinde etanol ve izopropanol kullanan bazı çalışmalar vardır. Örneğin, etanol kullanılan bir çalışma insan amniyotik sıvı24kortizol ayıklamak için başarılı oldu. Ayrıca, kullanılan izopropanol kullanılan bir çalışma insan saç ve tırnak25,26kortizol ayıklamak için başarılı oldu. Bu nedenle, bu çalışmada koala kürkü örneklerinden kortizol çıkarılması için en başarılı olduğunu belirlemek için her üç çözücüler (metanol, etanol ve izopropanol) test edilmiştir.
Bu çalışmanın temel amacı, koala kürkünden kortizolün non-invaziv bir ölçütü olarak kullanılmak üzere optimal hormon ekstraksiyon tekniğini doğrulamak için mevcut teknikleri kullanmaktır. Bu üç ekstraksiyon çözücüler test edilerek elde edildi (metanol, etanol, ve isopropanol). Biz metanol koala kürk kortizol ayıklamak için kullanılan optimal çözücü olacağını varsayılmış çünkü Arbor tsay kortizol kitleri tarafından ekstraksiyon önerilen çözücü27.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Chrome Steel Beads</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">3.2 mm x 3</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Cortisol Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H1W</td>
			<td style="width:211px;">Manufactured in Michigan USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit</td>
			<td style="width:72px;">Arbor Assays</td>
			<td style="width:119px;">K003-H5</td>
			<td style="width:211px;">Used first-time for cortisol testing in koala fur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Methanol</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Pipette</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Micro Precision Sieve</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microplate Washer</td>
			<td style="width:72px;">Bio Radi</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:72px;">Bio Line</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plastic Weighing Boat</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Plate Sealer</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Precision Balance</td>
			<td style="width:72px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:72px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:211px;">n/a</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cortisol measurement in koala (phascolarctos cinereus) fur

Örnek türleri arasında hayvanlarda stresi ölçmek için kullanılan hormon ekstraksiyon optimal yöntemler her zaman aynı değildir. Avustralya'nın ikonik keseli türleri, koala(Phascolarctos cinereus),antropojenik kaynaklı stres ve yabani popülasyonlarda kronik stres indeğerlendirilmesi uzun süreli maruz kalma karşı karşıya acilen garanti edilir. Kronik stresi ölçmenin en etkili yollarından biri, fizyolojik ve davranışsal tepkileri desteklediği için saç veya kürkteki glukokortikoid hormon kortizolünün analizidir. Bu laboratuvar doğrulama çalışması, koala kürkünde kortizolün non-invaziv bir ölçütü olarak kullanılacak optimal hormon ekstraksiyon yöntemini doğrulamak için mevcut teknikleri test etmeyi amaçlamaktadır. Stres hormonlarını ölçmek için non-invaziv teknikler kullanmanın, ideal pratik ve etik bakış açıları nedeniyle geleneksel, invaziv tekniklere tercih olduğu kabul edilmektedir. Ayrıca koalalardan kürk elde etmek kan örneklerinden elde etmekten nispeten daha kolaydır. Bu çalışmada, optimal kortizol ekstraksiyon yöntemini doğrulamak amacıyla bir dizi hormon çıkarma tekniğini çalıştırmak için Adelaide Koala ve Vahşi Yaşam Hastanesi'nden alınan koala kürkü örnekleri kullanılmıştır. Sonuçlar, %100 metanolün paralellik sonuçlarına göre %100 etanol veya %100 izopropanol ile karşılaştırıldığında en uygun çözücü ekstraksiyonu sağladığını göstermiştir. Sonuç olarak, koala kürkkortizol ekstraksiyon bu yöntem koalalarda kronik stres çalışma için kullanılabilecek güvenilir bir non-invaziv bir titret sağladı.

İlgi hormon metabolitlerinin asa saptanması paralellik kullanılarak belirlenir. Paralellik eğrisi kullanılarak, %50 bağlama noktası standart eğrideki örnek seyreltmefaktörünü de belirler (Şekil 1). Paralellik grafiğinde gösterildiğigibi (Şekil 1), %100 etanol ve %100 İzopropanol ekstreleri kortizol standardına paralel yer değiştirme sağlamamıştır. Ancak, % 100 metanol ekstresi kortizol standardına paralel deplasman sağladı. Kurutulmuş ekstreler, istibak tampo...

Watch this Scientific Journal Video about Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur at JoVE.com

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

Koala kürkünden kortizol ölçümü için en uygun ekstraksiyon çözücüsünü belirlemek için bir protokol sayılacağız. Bu protokolde kullanılan çözücüler metanol, etanol ve isopropanol'dür. Optimal bir ekstraksiyon çözücü belirlenmesi koalalar üzerinde kronik stresin etkisini belirlemek için güvenilir ölçüm kürk yardımcı olacaktır.

Koalak'da Kortizol Ölçümü (Phascolarctos cinereus) Kürk

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Bu koala kürk gelen glukokortikoid hormonu, kortizol, değerlendirilmesi için yeni bir yöntemdir. Koalalarda kronik stresin değerlendirilmesi için yeni bir biyomarker sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı, numune hazırlama ve hormon telbette arasında oldukça hızlı bir dönüş süresi ile son derece hassas ve tekrarlanabilir bir yöntem olmasıdır.Bu teknik koalalarda kronik stresin kantitatif değerlendirmesine olanak sağlar, bu da son derece yararlı bir klinik yönetim aracıdır. Bu prosedürde bana yardım dylan Fox, laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi. Bu işlem başlamak için eksi 80 santigrat derece de depolama kürk almak ve oda sıcaklığında çözülme izin.Daha sonra, bir laboratuvar analitik hassas denge üzerinde kürk tartın. Kürkün 60 miligramını önceden tartılmış ve etiketli 1,5 mililitrelik santrifüj tüpüne yerleştirin ve 18 tüp dolana kadar bunu tekrarlayın. Bir pipet kullanarak, her tüp için% 100 HPLC sınıf isopropanol bir mililitre ekleyin.30 saniye boyunca örnekleri girdap. Sıvı ve kürk ayrımını sağlamak için her numuneyi 0,5 mililitrelik mikro hassasiyetli bir elek ile süzün ve sıvıyı bir atık kabına atın. Her kürk örneğini etiketli plastik bir tartı teknesine yerleştirin.Sonra bir vakum desiccator içine tartMa tekneler yerleştirin ve kürk kurumasını sağlamak için üç gün bekletin. Kürk tamamen kurudıktan sonra, her numuneyi etiketli 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin. Her numuneyi üç krom çelik boncuklu bir boncuk değirmenine yerleştirin ve saniyede 30 titremeyle iki dakika toz haline getirin.18 toplam tüp doldurulana kadar %100 analitik sınıf metanol ve %100 analitik sınıf izopropanol ile bu transferi tekrarlayın. Bundan sonra, kürk örneğini içeren altı adet 1,5 mililitrelik santrifüj tüpüne ilk ekstraksiyon tekniğinin bir mililitresini aktarmak için bir pipet kullanın. Kapak her tüp, ve en az 12 saat boyunca sürekli zonklayan oda sıcaklığında onları kuluçkaya bir shaker kullanın.Daha sonra numuneleri 0,5 mililitrelik mikro hassasiyetli elek ile süzün. Kürk uygun atılır sağlarken, yeni etiketli 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüp içine sıvı aktarmak için bir pipet kullanın. Bir duman kaputunda, tamamen azot buharı akışı altında solvent ekstresi deneyin.Daha sonra, 400 mikrolitre analiz tamponu ve 100 mikrolitre %100 analitik sınıf etanol ile kurutulmuş numuneyi yeniden oluşturun. Kontrolleri yapmak için, ilk olarak strese maruz kalarak bilinen hayvanlardan örnekler seçin. Bir ekstre havuzu yapmak için, 200 mikrolitre toplam hacmi elde edilene kadar her örnekten 20 mikrolitre ekstresi alın.Ayıklama havuzunu, tahlilleri çalıştırmaya hazır olana kadar eksi 80 derecede saklayın. Hazır olduğunuzda, kortizol standardına karşı ekstre için paralellik grafiğinden %30 ve %70 bağlama noktaları için seyreltme faktörü alın ve yüksek ve düşük kontrolleri oluşturmak için numune havuzunu uygun şekilde seyreltmek için test arabelleği kullanın. Ticari bir kortizol kiti kullanarak numuneler, kontroller, kortizol standartları, spesifik olmayan bağlayıcı kuyular ve tedarikçinin talimatlarına göre maksimum bağlayıcı kuyuları içeren 96 kuyulu bir şerit plaka sıca.Örneklerin, denetimlerin ve standartların konumlarını listelemek için kit kitapçıkta yer alan plaka düzeni sayfasını kullanın. Daha sonra, %100 metanol ekstresi koala kürkü elde etmek için daha önce açıklanan kürk hormonu ekstraksiyon işlemini takip edin. Kortizol kitinin reaktiflerini üreticinin talimatlarına göre hazırlayın.Pipet plaka kuyularına 50 mikrolitre numune veya standart. Pipet 75 mikrolitre nonspesifik bağlayıcı kuyulara arabellek ve maksimum bağlayıcı kuyulara 50 mikrolitre talaş tamponu. Tekrarlayıcı pipet kullanarak her kuyuya 25 mikrolitre kortizol ekleyin.Daha sonra, pipet 25 mikrolitre kortizol antikor her kuyuiçine, nonspesifik bağlayıcı kuyular hariç. Reaktiflerin iyice karıştırıldığından emin olmak için plakanın kenarlarına hafifçe dokunun. Plakayı plaka lı kapatıcı ile kapatın ve oda sıcaklığında bir saat sallamak için orbital shaker kullanın.Bundan sonra, plaka mührünü çıkarın ve her kuyuyu 300 mikrolitre yıkama tamponu ile dört kez yıkayarak kuyu plakasını aspire edin. Daha sonra temiz emici havlular üzerine dokunarak plaka kuru. Pipet 100 mikrolitre tetrametilbenzidin her kuyuya substrat.Plakalı inisini kuyu tabağına yerleştirin ve oda sıcaklığında 30 dakika kuluçkaya yatırın. Bundan sonra, pipet 50 mikrolitre stop çözeltisi her kuyuya. Plakayı 450 nanometre okuyabilen bir plaka okuyucusuna aktarın ve metin protokolünde belirtildiği gibi son hormon konsantrasyonu hesaplayın.Bu çalışmada, ilgi hormon metabolitlerinin deneme tespiti paralellik kullanılarak belirlenir. Paralellik eğrisinde, %50 bağlama noktası standart eğrideki örnek seyreltme faktörünü belirler. Görüldüğü gibi, %100 etanol ve %100 izopropanol ekstreleri kortizol standardına paralel deplasman sağlamamıştır.Ancak, % 100 metanol ekstresi kortizol standardına paralel deplasman sağlar. Tüm tahlillerde çalışan yüksek ve düşük bağlayıcılı numune ekstrelerinden varyasyonun intra-ve inter-tahlil katsayıları belirlenir. Düşük bağlayıcı iç kontroller düzgün koala özü havuzu olarak görülürken, yüksek bağlayıcı iç kontroller bir-iki seyreltilmiş koala ekstresi havuzu olarak görülmektedir.Her çözücü özü ve kortizol standardı arasındaki ilişki daha sonra bir regresyon çizimi kullanılarak belirlenir. %100 metanol ekstresi% 100 etanol ve% 100 izopropanol özleri ile karşılaştırıldığında en yüksek R kare değeri ile regresyon en iyi çizgi sağlar. Bu örnek yıkama adımı steroid hormonların kaybını önlemek için örnekleri taşlama önce yapılması gerektiğini hatırlamak önemlidir.Bu prosedürü takiben, diğer steroid hormonları ölçebilirsiniz, üreme hormonları gibi koalalar stres ve üreme arasındaki etkileşimleri bakmak için. Bu teknik, koala kürkü kortizolnon-invaziv değerlendirme sağlayan, koruma fizyolojisi gelişmekte olan alan için yeni bir araç sağlar. Ticari kortizol kiti dakika miktarı reaktifler sağlar.Ancak, bu laboratuvar prosedürünü yürütürken kendine zarar vermek için kişisel koruyucu ekipman giymek önemlidir.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads

İnguinal Yağ Yastıklarında Basal ve Forskolin ile uyarılmış Lipoliz Ölçümleri

Lipolysis is a process by which the lipid stored as triglycerides in adipose tissues are hydrolyzed into glycerol and fatty acids. This article describes ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Keratin hidrolizat tavuk tüyleri ve kozmetik kendi uygulamasında hazırlanması

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Doku çok az miktarda kullanarak Drosophila Permeabilized liflerinin mitokondrial oksijen harcama ölçme noktalar

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

In Situ Measurement and Correlation of Cell Density and Light Emission of Bioluminescent Bacteria

Situ Ölçüm ve korelasyon hücre yoğunluğu ve kollarındaki bakterilerin ışık emisyon

There is a considerable number of bacterial species capable of emitting light. All of them share the same gene cluster, namely the lux operon. Despite ...

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

Açık yama-kelepçe pipet ile Unstirred sınır tabaka iyonu konsantrasyonu ölçümü: etkileri kontrol altında sıvı iyon kanalları akışı

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

Kloroplast Translocon Protein kompleksleri dokunun etiketini kullanarak benzeşme arıtma

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Direct Measurement of KDM1A Target Engagement Using Chemoprobe-based Immunoassays

Chemoprobe tabanlı bağışıklık sistemini kullanarak KDM1A hedef etkileşimi doğrudan ölçümü

The assessment of the target engagement, defined as the interaction of a drug with the protein it was designed for, is a basic requirement for the ...

Plant Sample Preparation for Nucleoside/Nucleotide Content Measurement with An HPLC-MS/MS

HPLC-MS/MS ile Nükleozid/Nükleotid İçerik Ölçümü için Bitki Numunesi Hazırlama

Nucleosides/nucleotides are building blocks of nucleic acids, parts of cosubstrates and coenzymes, cell signaling molecules, and energy carriers, which ...

Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

Yeni İzole Edilmiş Fare Hepatositlerinin Süspansiyonunda Yağ Asidi β-Oksidasyonunun Ölçülmesi

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

İnsan Hücrelerinde Endojen Fosforile STAT Proteinlerinin Ölçümü için Zaman Çözülmüş Förster Rezonans Enerji Transfer Testleri

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...