Name: generation, amplification, and titration of recombinant respiratory syncytial viruses
Uploaded: 2019-04-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses at JoVE.com

يشكر المؤلفون الدكتور تشين يو من استرا زينيكا R & D بوسطن، ماجستير، الولايات المتحدة الأمريكية، لتوفير الدواء AZD4316. الكتاب ممتنون لمنصة سيماجيس للوصول إلى المجهر أوليمبوس ScanR، الذي كان يدعمه المنح المقدمة من المنطقة القارسة (الصحة واحد خافت). الكتاب الاعتراف بدعم من INSERM وجامعة فرساي ساينتكوينتين.

1-المواد من إعداد
<ol><li>شراء وسائل الإعلام الخلية (تعديل المصل انخفاض وسائط الإعلام، وسائل الإعلام الأساسية الدنيا [MEM]، 10 × الفنزويلية، ودولبيكو المتوسطة النسر [دميم])، كاشف تعداء، وميكروكريستالاين سيليولوز (انظر الجدول للمواد).</li>
	<li>الحصول على ناقلات التالية لعلم الوراثة العكسي...

<ol>
	<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015:+a+systematic+review+and+modelling+study.">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> The Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li><li>Falsey, A. R., Hennessey, P. A., Formica, M. A., Cox, C., Walsh, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+Syncytial+Virus+Infection+in+Elderly+and+High-Risk+Adults.">Respiratory Syncytial Virus Infection in Elderly and High-Risk Adults.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (17), 1749-1759 (2005).</li><li>DeVincenzo, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+Oral+ALS-008176+in+a+Respiratory+Syncytial+Virus+Challenge+Study.">Activity of Oral ALS-008176 in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (21), 2048-2058 (2015).</li><li>DeVincenzo, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+GS-5806+Activity+in+a+Respiratory+Syncytial+Virus+Challenge+Study.">Oral GS-5806 Activity in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (8), 711-722 (2014).</li><li>Afonso, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taxonomy+of+the+order+Mononegavirales:+update+2016.">Taxonomy of the order Mononegavirales: update 2016.</a> Archives of Virology. 161 (8), 2351-2360 (2016).</li><li>Collins, P. L., Hill, M. G., Cristina, J., Grosfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+elongation+factor+of+respiratory+syncytial+virus,+a+nonsegmented+negative-strand+RNA+virus.">Transcription elongation factor of respiratory syncytial virus, a nonsegmented negative-strand RNA virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (1), 81-85 (1996).</li><li>Hoenen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inclusion+bodies+are+a+site+of+ebolavirus+replication.">Inclusion bodies are a site of ebolavirus replication.</a> Journal of Virology. 86 (21), 11779-11788 (2012).</li><li>Heinrich, B. S., Cureton, D. K., Rahmeh, A. A., Whelan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+expression+redirects+vesicular+stomatitis+virus+RNA+synthesis+to+cytoplasmic+inclusions.">Protein expression redirects vesicular stomatitis virus RNA synthesis to cytoplasmic inclusions.</a> PLoS Pathogens. 6 (6), e1000958 (2010).</li><li>Lahaye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Characterization+of+Negri+Bodies+(NBs)+in+Rabies+Virus-Infected+Cells:+Evidence+that+NBs+Are+Sites+of+Viral+Transcription+and+Replication.">Functional Characterization of Negri Bodies (NBs) in Rabies Virus-Infected Cells: Evidence that NBs Are Sites of Viral Transcription and Replication.</a> Journal of Virology. 83 (16), 7948-7958 (2009).</li><li>Kolesnikova, L., M&#252;hlberger, E., Ryabchikova, E., Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+organization+of+recombinant+Marburg+virus+nucleoprotein:+comparison+with+Marburg+virus+inclusions.">Ultrastructural organization of recombinant Marburg virus nucleoprotein: comparison with Marburg virus inclusions.</a> Journal of Virology. 74 (8), 3899-3904 (2000).</li><li>Dolnik, O., Stevermann, L., Kolesnikova, L., Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marburg+virus+inclusions:+A+virus-induced+microcompartment+and+interface+to+multivesicular+bodies+and+the+late+endosomal+compartment.">Marburg virus inclusions: A virus-induced microcompartment and interface to multivesicular bodies and the late endosomal compartment.</a> European Journal of Cell Biology. 94 (7-9), 323-331 (2015).</li><li>Rincheval, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+cytoplasmic+inclusion+bodies+in+cells+infected+by+respiratory+syncytial+virus.">Functional organization of cytoplasmic inclusion bodies in cells infected by respiratory syncytial virus.</a> Nature Communications. 8 (1), 563 (2017).</li><li>Santangelo, P. J., Bao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+filamentous+viral+RNPs+prior+to+egress.">Dynamics of filamentous viral RNPs prior to egress.</a> Nucleic Acids Research. 35 (11), 3602-3611 (2007).</li><li>Lifland, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Respiratory+Syncytial+Virus+Nucleoprotein+and+Inclusion+Bodies+Antagonize+the+Innate+Immune+Response+Mediated+by+MDA5+and+MAVS.">Human Respiratory Syncytial Virus Nucleoprotein and Inclusion Bodies Antagonize the Innate Immune Response Mediated by MDA5 and MAVS.</a> Journal of Virology. 86 (15), 8245-8258 (2012).</li><li>Garcia, J., Garcia-Barreno, B., Vivo, A., Melero, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+inclusions+of+respiratory+syncytial+virus-infected+cells:+formation+of+inclusion+bodies+in+transfected+cells+that+coexpress+the+nucleoprotein,+the+phosphoprotein,+and+the+22K+protein.">Cytoplasmic inclusions of respiratory syncytial virus-infected cells: formation of inclusion bodies in transfected cells that coexpress the nucleoprotein, the phosphoprotein, and the 22K protein.</a> Virology. 195 (1), 243-247 (1993).</li><li>Brown, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+association+between+heat+shock+protein+70+and+the+respiratory+syncytial+virus+polymerase+complex+within+lipid-raft+membranes+during+virus+infection.">Evidence for an association between heat shock protein 70 and the respiratory syncytial virus polymerase complex within lipid-raft membranes during virus infection.</a> Virology. 338 (1), 69-80 (2005).</li><li>Radhakrishnan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+analysis+of+purified+respiratory+syncytial+virus+particles+reveals+an+important+role+for+heat+shock+protein+90+in+virus+particle+assembly.">Protein analysis of purified respiratory syncytial virus particles reveals an important role for heat shock protein 90 in virus particle assembly.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 9 (9), 1829-1848 (2010).</li><li>Racaniello, V. R., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloned+poliovirus+complementary+DNA+is+infectious+in+mammalian+cells.">Cloned poliovirus complementary DNA is infectious in mammalian cells.</a> Science. 214 (4523), 916-919 (1981).</li><li>Schnell, M. J., Mebatsion, T., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+rabies+viruses+from+cloned+cDNA.">Infectious rabies viruses from cloned cDNA.</a> The EMBO Journal. 13 (18), 4195-4203 (1994).</li><li>Collins, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+infectious+human+respiratory+syncytial+virus+from+cloned+cDNA+confirms+an+essential+role+for+the+transcription+elongation+factor+from+the+5'+proximal+open+reading+frame+of+the+M2+mRNA+in+gene+expression+and+provides+a+capability+for+vaccine.">Production of infectious human respiratory syncytial virus from cloned cDNA confirms an essential role for the transcription elongation factor from the 5' proximal open reading frame of the M2 mRNA in gene expression and provides a capability for vaccine.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (25), 11563-11567 (1995).</li><li>Rameix-Welti, M. -. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+the+replication+of+respiratory+syncytial+virus+in+cells+and+in+living+mice.">Visualizing the replication of respiratory syncytial virus in cells and in living mice.</a> Nature Communications. 5, 5104 (2014).</li><li>Buchholz, U. J., Finke, S., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+bovine+respiratory+syncytial+virus+(BRSV)+from+cDNA:+BRSV+NS2+is+not+essential+for+virus+replication+in+tissue+culture,+and+the+human+RSV+leader+region+acts+as+a+functional+BRSV+genome+promoter.">Generation of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) from cDNA: BRSV NS2 is not essential for virus replication in tissue culture, and the human RSV leader region acts as a functional BRSV genome promoter.</a> Journal of Virology. 73 (1), 251-259 (1999).</li><li>Cianci, C., Meanwell, N., Krystal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiviral+activity+and+molecular+mechanism+of+an+orally+active+respiratory+syncytial+virus+fusion+inhibitor.">Antiviral activity and molecular mechanism of an orally active respiratory syncytial virus fusion inhibitor.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 55 (3), 289-292 (2005).</li><li>Derscheid, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+respiratory+syncytial+virus+memphis+37+grown+in+HEp-2+cells+causes+more+severe+disease+in+lambs+than+virus+grown+in+vero+cells.">Human respiratory syncytial virus memphis 37 grown in HEp-2 cells causes more severe disease in lambs than virus grown in vero cells.</a> Viruses. 5 (11), 2881-2897 (2013).</li><li>McKimm-Breschkin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+plaque+assay+for+respiratory+syncytial+virus+-+direct+visualization+of+plaques+without+immunostaining.">A simplified plaque assay for respiratory syncytial virus - direct visualization of plaques without immunostaining.</a> Journal of Virological Methods. 120, 113-117 (2004).</li><li>Matrosovich, M., Matrosovich, T., Garten, W., Klenk, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+low-viscosity+overlay+medium+for+viral+plaque+assays.">New low-viscosity overlay medium for viral plaque assays.</a> Virology Journal. 7, 1-7 (2006).</li><li>Novina, C. D., Sharp, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNAi+revolution.">The RNAi revolution.</a> Nature. 430 (6996), 161-164 (2004).</li><li>Sintchak, M. D., Nimmesgern, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+inosine+5'-monophosphate+dehydrogenase+and+the+design+of+novel+inhibitors.">The structure of inosine 5'-monophosphate dehydrogenase and the design of novel inhibitors.</a> Immunopharmacology. 47 (2-3), 163-184 (2000).</li><li>Beaucourt, S., Vignuzzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribavirin:+A+drug+active+against+many+viruses+with+multiple+effects+on+virus+replication+and+propagation.+Molecular+basis+of+ribavirin+resistance.">Ribavirin: A drug active against many viruses with multiple effects on virus replication and propagation. Molecular basis of ribavirin resistance.</a> Current Opinion in Virology. 8, 10-15 (2014).</li><li>Hruska, J. F., Bernstein, J. M., Douglas, R. G., Hall, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ribavirin+on+Respiratory+Syncytial+Virus+in+vitro.">Effects of Ribavirin on Respiratory Syncytial Virus in vitro.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 17 (5), 770-775 (1980).</li><li>Sim&#245;es, E. A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Past,+Present+and+Future+Approaches+to+the+Prevention+and+Treatment+of+Respiratory+Syncytial+Virus+Infection+in+Children.">Past, Present and Future Approaches to the Prevention and Treatment of Respiratory Syncytial Virus Infection in Children.</a> Infectious Diseases and Therapy. 7 (1), 87-120 (2018).</li><li>Alvarez, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-mediated+silencing+of+the+respiratory+syncytial+virus+nucleocapsid+defines+a+potent+antiviral+strategy.">RNA interference-mediated silencing of the respiratory syncytial virus nucleocapsid defines a potent antiviral strategy.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3952-3962 (2009).</li><li>DeVincenzo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+placebo-comtrolled+study+of+an+RNAi-based+therapy+directed+against+respiratory+syncytial+virus.">A randomized, double-blind, placebo-comtrolled study of an RNAi-based therapy directed against respiratory syncytial virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (19), 8800-8805 (2010).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+of+a+CRISPR/Cas9+library+for+functional+genomics+in+human+cells.">High-throughput screening of a CRISPR/Cas9 library for functional genomics in human cells.</a> Nature. 509 (7501), 487-491 (2014).</li><li>Nikolic, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negri+bodies+are+viral+factories+with+properties+of+liquid+organelles.">Negri bodies are viral factories with properties of liquid organelles.</a> Nature Communications. 8 (1), 58 (2017).</li></ol>

هنا نقدم طريقة لإنقاذ المؤتلف رسفس من البلازميدات الخمسة، وعلى التضخيم. القدرة على التلاعب جينوم الفيروسات أحدث ثورة في بحوث علم الفيروسات لاختبار الطفرات والتعبير عن جينات إضافية أو بروتين فيروسي المعلمة. RSV لدينا وصف والمستخدمة كمثال في هذا المقال هو فيروس التعبير عن جين مراسل، RSV-بروت?...

RSV البشرية هو السبب الرئيسي لدخول المستشفى لعدوى الجهاز التنفسي الحادة في الأطفال الرضع في جميع أنحاء العالم1. وبالإضافة إلى ذلك، يرتبط RSV عبء مرض كبيرة في البالغين مماثلة للأنفلونزا، مع معظم المستشفيات وعبء وفيات المسنين2. لا تتوفر أي اللقاحات أو الأدوية المضادة للفيروسات محددة حتى الآن ضد RSV، لكن الواعدة عقاقير جديدة في التنمية3،4. التعقيد والخفة لتقنيات القياس الكمي للضرب RSV تعرقل البحث عن الأدوية المضادة للفيروسات أو اللقاحات على الرغم من الجهود الكبيرة الحالية. ويستند التقدير الكمي للضرب RSV في المختبر عموما على طرق شاقة وتستغرق وقتاً طويلاً ومكلفة، التي تتكون غالباً في تحليل تأثير سيتوباثيك بالفحص المجهري، إيمونوستينينج، والحد من البلاك فحوصات، الكمية عكس المنتسخة (قرة)-تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، والمرتبط بالانزيم الممتز الاعتداء الاختبارات. الفيروسات مع مورثات معدلة والتعبير عن الجينات مراسل، مثل تلك الترميز للتجارة والنقل، وهي أكثر ملاءمة لمثل هذه العروض. بالإضافة إلى استخدام لوحة الآلي القراء، مراسل الجينات تحمل فيروسات المؤتلف يمكن جعل هذه فحوصات أكثر ملاءمة لأغراض التوحيد والفائق.
هو RSV المغلفة، نونسيجمينتيد فيروس الحمض النووي الريبي الشعور السلبي الذي ينتمي إلى جنس أورثوبنيوموفيروس بنيوموفيريداي العائلية، ترتيب مونونيجافيراليس5. هو الجينوم RSV رنا طاق واحد، والشعور السلبي لحوالي 15 كيلو بايت, التي تحتوي على منطقة فضله في الأطراف 3 'و 5' ودعا الزعيم ومقطورة و 10 وحدات النسخي ترميز البروتينات 11. يتم ترتيب الجينات على النحو التالي: 3 '-NS1, NS2، ن، ف، م، ش، ز، و، M2 (ترميز للبروتينات M2-1 و M2-2) و L-5'. الجيش الملكي النيبالي الجينوم محكم وتعبئتها بالبروتين النووي أ. استخدام الجيش الملكي النيبالي المجينية انكابسيداتيد كقالب، وتعتمد على الجيش الملكي النيبالي الفيروسية بوليميريز الحمض النووي الريبي (RdRp) سيضمن النسخ والنسخ المتماثل من الجيش الملكي النيبالي الفيروسية. RdRp الفيروسية وتتألف من البروتين الكبيرة ل الذي يحمل النشاط بوليميراز النوكليوتيدات في حد ذاتها، عامل مساعد إلزامية فوسفوبروتين ف والبروتين M2-1 الذي يعمل كنسخ فيروسية6. في الخلايا المصابة، يستحث RSV تشكيل تضمينات هيولى دعا الهيئات إدراج (IBs). وقد لوحظت تضمينات هيولى شكلياً مشابهة ل عدة مونونيجافيراليس7،،،من89،10. الدراسات التي أجريت مؤخرا على فيروس داء الكلب، فيروس التهاب الفم الحويصلي (منظمة) وفيروس إيبولا و RSV أظهرت أن توليف الحمض النووي الريبي الفيروسية تحدث في الرابطة، التي يمكن اعتبارها المصانع الفيروسية8،،من911، وهكذا 12-يركز الجيش الملكي النيبالي، والبروتينات الفيروسية المطلوبة لتوليف الحمض النووي الريبي الفيروسية المصانع الفيروس وتحتوي أيضا على البروتينات الخلوية13،،من1415،16، 17. IBs معرض سوبكومبارتمينت وظيفية تسمى حبيبات المرتبطة IB (إيباجس)، التي تركز سينثيتيزيد حديثا مرناً الفيروسية الوليدة جنبا إلى جنب مع البروتين M2-1. لا يتم كشف الجيش الملكي النيبالي الجينوم ول، ف ون في إيباجس. إيباجس هي هياكل كروية الحيوي صغيرة داخل الرابطة الذي يحمل خصائص السائل العضيات12. وعلى الرغم من الدور المركزي للرابطة في تكاثر الفيروس، المعروف القليل جداً حول طبيعة وهيكل داخلي، وتشكيل، وتشغيل هذه المصانع الفيروسية.
التعبير عن جينوم فيروس شلل الأطفال من كدنا مكن إنتاج استنساخ الفيروسية المعدية الأولى في عام 198118. للبحث عن فيروسات الحمض النووي الريبي السلبية واحد-الذين تقطعت بهم السبل، لم يكن حتى عام 1994 أن إنتاج أول فيروس داء الكلب عقب تعداء البلازميدات إلى خلايا19 وقع. وصدر أول بلازميد عكس الوراثية النظام القائم ل RSV في 199520. علم الوراثة العكسي أدت إلى إحراز تقدم كبير في مجال علم الفيروسات. إمكانية إدخال تعديلات محددة في الجينوم الفيروسي قدمت رؤى الحرجة في النسخ المتماثل والمرضية من فيروسات الرنا. ويسرت هذه التكنولوجيا أيضا إلى حد كبير تطوير لقاحات بالسماح التوهين محددة من خلال مجموعة مستهدفة من التعديلات. التعديلات الجينوم مما يتيح إجراء تقييم كمي سريع لتكاثر الفيروس إلى حد كبير تحسين فحص الأدوية المضادة للفيروسات، ودراسة لطريقة العمل.
على الرغم من أن وصف سابقا، يبقى الحصول على رسفس المعدلة وراثيا حساسة. هنا، نحن بالتفصيل وضع بروتوكول لإنشاء نوعين من هرسف المؤتلف، على التوالي يعبر عن RSV-التجارة والنقل أو RSV-M2-1-التجارة والنقل. في هذا البروتوكول، يصف لنا تعداء الظروف اللازمة لإنقاذ الفيروسات التوليفية الجديدة، فضلا عن التضخيم بالحصول على الأرصدة الفيروسية مع ارتفاع عيار، مناسبة للتجريب استنساخه. بناء ناقلات الوراثة عكس في حد ذاتها لا يرد هنا. يصف لنا أساليب الحصاد المثلى وتجميد الأرصدة الفيروسية. الطريقة الأكثر دقة لقياس الجسيمات الفيروسية المعدية يظل البلاك المقايسة. الخلايا المصابة بتخفيف المسلسل من تعليق تم تحليلها والمحتضنة مع تراكب التي تحظر نشر الجزيئات الفيروسية الحرة في المادة طافية. في مثل هذه الظروف، سيكون فقط تصيب الفيروس الخلايا المتجاورة تشكل "لوحة" لكل الجسيمات المعدية الأولى. في مقايسة المعايرة RSV التقليدية، كشفت عنها immunostaining لويحات وتحسب تحت الملاحظة المجهرية. هذا الأسلوب مكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً. هنا يمكننا وصف بروتوكول بسيط جداً مقايسة البلاك RSV استخدام تراكب ميكروكريستالاين سيليولوز التي تمكن من تشكيل لويحات مرئية بالعين المجردة. علينا إظهار كيف يمكن استخدام RSV-التجارة والنقل لتدبير RSV النسخ المتماثل، ومن ثم لقياس تأثير الأدوية المضادة للفيروسات. الجمع بين علم الوراثة العكسي وتكنولوجيا التصوير الحي، وعلينا أن نبرهن كيف يسمح RSV-M2-1-بروتينات فلورية خضراء العلماء إلى تصور م 2-1 في الخلايا الحية واتباع القوى المحركة لهياكل الفيروسي داخل الخلية، مثل الرابطة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>35mm &#181; dish for live cell imaging</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A549</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel RC-591</td>
			<td>FMC BioPolymer</td>
			<td>Avicel RC-591</td>
			<td>Technical and other information on Avicels is available at http://www.fmcbiopolymer.com. Store at room temperature. Protocol in step 4 is optimized for this reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSRT7/5</td>
			<td></td>
			<td>not commercially available</td>
			<td>See ref 22. Buchholz et al, 1999</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT90132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope for observations</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX73 Olympus microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope for videomicroscopy</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>ScanR Olympus microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEp-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC CCL-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES &#8805;99.5%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25030024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIPOFECTAMINE 2000 REAGENT</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11668019</td>
			<td>Protocol in step 2.3. is optimized for this reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10X), no glutamine</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11430030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM, GlutaMAX Supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>41090-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 ReagentPlus, &#8805;99.5%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>51985-026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde Aqueous Solution, 32%, EM Grade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmids</td>
			<td></td>
			<td>not commercially available</td>
			<td>see ref 21. Rameix-Welti et al, 2014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>See Saw Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Si RNA GAPDH</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus siRNA 
			D-001810-10-05</td>
			<td>SMARTpool and 3 of 4 individual siRNAs designed by Dharmacon.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Si RNA IMPDH2</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus siRNA IMPDH2 Pool- Human 
			L-004330-00-0005</td>
			<td>SMARTpool of 4 individual siRNAs designed by Dharmacon. 
			Individual references and sequences 
			J-004330-06: GGAAAGUUGCCCAUUGUAA; 
			J-004330-07: GCACGGCGCUUUGGUGUUC; 
			J-004330-08: AAGGGUCAAUCCACAAAUU; 
			J-004330-09: GGUAUGGGUUCUCUCGAUG;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Si RNA RSV N</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus custom siRNA</td>
			<td>UUCAGAAGAACUAGAGGCUAU and UUUCAUAAAUUCACUGGGUUA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SiRNA NT</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus Non-targeting Pool</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SiRNA transfection reagent</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>DharmaFECT 1 Ref: T-2001-03</td>
			<td>Protocol in steps 5.1.and 5.1.2 are optimized for this reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate 7.5% solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25080094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrofluorometer</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Tecan infinite M200PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation, amplification, and titration of recombinant respiratory syncytial viruses

استخدام فيروسات المؤتلف أصبح عاملاً حاسما في علم الفيروسات الأساسية أو التطبيقية. وقد ثبت علم الوراثة العكسي لتكون عبارة عن تقنية قوية للغاية، سواء لفك آليات النسخ المتماثل الفيروسية أو لدراسة الأدوية المضادة للفيروسات أو توفير منصة تطوير اللقاحات. البناء والتلاعب بنظام الجينية العكسية لسلبية-حبلا فيروسات الرنا مثل فيروس المخلوي تنفسي (RSV)، ومع ذلك، تظل حساسة ويتطلب دراية خاصة. هو الجينوم RSV رنا طاق واحد، والشعور السلبي من حوالي 15 كيلوبايت، يعمل كقالب للنسخ المتماثل للجيش الملكي النيبالي الفيروسية والنسخ. لدينا نظام الوراثة عكس يستخدم نسخة كدنا RSV سلالة طويلة المجين البشري (هرسف). يتم وضع هذا كدنا، فضلا عن كدناس ترميز البروتينات الفيروسية من بوليميريز المعقدة (ل، ف، ن، و M2-1)، في ناقلات التعبير الفردي تحت T7 بوليميريز تسلسلات تحكم. تعداء هذه العناصر في زنزانات فرقة البحث-T7/5، التي تعبر عن ستابلي T7 بوليميريز، يسمح بالنسخ المتماثل هيولى والنسخ من RSV المؤتلف، مما أدى إلى فيريونس المعدلة وراثيا. وتجمع RSV جديدة، التي موجودة على سطح الخلية وفي المادة طافية الثقافة BSRT7/5، لتصيب الإنسان HEp-2 الخلايا للتضخيم الفيروسية. اثنين أو ثلاث جولات من التضخيم مطلوبة للحصول على الأرصدة الفيروسي الذي يحتوي على 1 × 106 و 1 × 107 اللوحة تشكيل وحدات (بفو)/مل. أساليب للأمثل الحصاد، وتجميد، ومعايرة الأرصدة الفيروسية موضحة هنا بالتفصيل. نحن توضيح البروتوكول المعروضة هنا بإنشاء اثنين من الفيروسات المؤتلف على التوالي التعبير عن البروتين الفلورية الخضراء الحرة (بروتينات فلورية خضراء) (RSV-التجارة والنقل) أو الفيروسي M2-1 حشو للتجارة والنقل (RSV-M2-1-التجارة والنقل). ونحن تبين كيفية استخدام RSV-التجارة والنقل للتحديد الكمي للنسخ المتماثل RSV و RSV-M2-1-التجارة والنقل لتصور الهياكل الفيروسية، فضلا عن ديناميات الفيروسية البروتين في الخلايا الحية، باستخدام تقنيات الفحص المجهري الفيديو.

في هذا العمل، يمكننا وصف بروتوكول مفصلاً لإنتاج فيروسات RSV المؤتلف معربا عن بروتين فلوري (الشكل 2). في برسف-التجارة والنقل، تم إدخال الجين التجارة والنقل بين الجينات ف وم، كما هو موضح للجينات الكرز في الأعمال المنشورة سابقا21. في برسف-م 2-1-التجا?...

Watch this Scientific Journal Video about Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses at JoVE.com

Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses

يصف لنا طريقة لتوليد وتضخيم وراثيا تعديل فيروسات الجهاز التنفسي المخلوي (رسفس) ومقايسة البلاك أمثل رسفس. يمكننا توضيح هذا البروتوكول عن طريق إنشاء اثنين من الفيروسات المؤتلف على التوالي تسمح بالتحديد الكمي للنسخ المتماثل RSV ويعيش تحليل RSV إدراج الهيئات وديناميات حبيبات إدراج الهيئات المرتبطة.

جيل، والتضخيم، ومعايرة المؤتلف من فيروسات الجهاز التنفسي المخلوي

The use of recombinant viruses has become crucial in basic or applied virology. Reverse genetics has been proven to be an extremely powerful technology, ...

إن استخدام الفيروسات المؤتلفة هو تقنية قوية لفك رموز آليات النسخ الفيروسي ولتوفير منصات تطوير للقاحات. وبالمثل، فإن توليد مخزون فيروسي جيد النوعية أمر بالغ الأهمية لكل دراسة فيروسية من أهم البحوث الأساسية إلى الدراسات التطبيقية. إن إنقاذ الفيروسات المؤتلفة والحصاد الأمثل والتجميد والتكفير من مخزونات RSV هي طرق حاسمة لجميع الدراسات الفيروسية.ويمكن اعتبارها تقليدية ولكنها تظل حساسة وتتطلب خبرة محددة. في اليوم السابق لتحول، قم بتعليق خلايا BSR-T7/5 في وسط كامل عند تركيز 0.5 مليون خلية لكل ملليلتر. توزيع مليلترين من تعليق الخلية في بئر في لوحة ستة جيدا.احتضان لوحة في 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون حتى تصل إلى 80-90٪ التقاء في اليوم التالي. لإنقاذ كل فيروس، مزيج أولا ذاب ناقلات الجينات العكسية في أنبوب، ثم المضي قدما في transfection، بعد بروتوكول الشركة المصنعة transfection كاشف. يضاف التالي 250 ميكرولترات من متوسطة المصل المخفضة إلى النواقل المختلطة.في أنبوب آخر، تمييع 10 ميكرولترات من هذا كاشف transfection في 250 ميكرولترات من متوسطة المصل المخفضة. دوامة بلطف كلا الأنابيب وانتظر لمدة خمس دقائق. اخلطي محتويات كلا الأنبوبين وانتظري لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.وفي الوقت نفسه، شطف الخلايا BSR-T7/5 مع ملليلتر واحد من متوسطة المصل المنخفضة وتوزيع 1.5 ملليلتر من الحد الأدنى من المضادات الحيوية الأساسية وسائل الإعلام تكملة مجانية مع مصل عجل الجنين 10٪ في البئر. إذا لزم الأمر، احتضان في 37 درجة مئوية في بيئة ثاني أكسيد الكربون 5٪. بعد الحضانة لمدة 20 دقيقة، إضافة 500 ميكرولترات من مزيج transfection في كل بئر.احتضان الخلايا في 37 درجة مئوية في بيئة 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاثة أيام. لمراقبة كفاءة الإنقاذ، لاحظ في الفلوري GFP تحت مجهر الفلورانس المقلوب بمعدل 20X مرة واحدة في اليوم. في اليوم الثالث من transfection، خلايا خدش في كل بئر من BSR-T7/5 6-جيدا لوحة.نقل الخلايا و supernatant من كل بئر في أنبوب معقم ميليمترية مركزية. لإطلاق الفيروس الذي تم إنقاذه من أغشية الخلايا ، دوامة كل أنبوب بقوة لمدة 30 ثانية على الأقل. لأول تضخيم للفيروسات التي تم إنقاذها ، قم أولا بإزالة الوسط الثقافي من لوحة HEp-2 المصنفة في اليوم السابق ، ثم إضافة بسرعة 500 ميكرولترتر لكل بئر من التعليق الفيروسي الطازج الممر صفر.ضع لوحة HEp-2 في 37 درجة مئوية على الروك المناشار للهياج الناعم لمدة ساعتين. لإنتاج مرور الأول من الفيروسات التي تم إنقاذها، والتخلص من 500 ميكرولترات من inoculum وإضافة ملليلتر اثنين من MEM مع 2٪ FCS. احتضان لوحة في 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاثة أيام.لرصد العدوى تحت مجهر الفلورانس المقلوب في التكبير 20X، لاحظ الفلورس GFP من الخلايا HEp-2 المصابة بتعليق مرور صفر مرة واحدة في اليوم. تحت المجهر brightfield، مراقبة مظهر تزامنية صغيرة ومفرزة الخلايا، والتي تعكس تأثير cytopathic RSV. لتضخيم الفيروسات التي تم إنقاذها ، أولاً تخفيف التعليق الفيروسي لـ MEM الخالية من FCS للحصول على تعليق ثلاثي المليلتر عند 50 ، 000 PFU لكل ملليلتر ، ثم إزالة الوسيط من قارورة HEp-2.سرعان ما إضافة تعليق الفيروسية ثلاثة ملليلتر واحتضان القارورة في 37 درجة مئوية على الروك المنشار للتحريض لينة لمدة ساعتين. بعد إزالة والتخلص من inoculum وإضافة 15 ملليلتر من MEM مع 2٪ FCS. احتضان في 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة يومين إلى أربعة أيام.لتقدير الوقت المناسب لحصاد الفيروسات، تحقق من مورفولوجيا الخلية وفلورية GFP تحت مجهر الفلورانس المقلوب في التكبير 20X. لاحظ أن هذا عادةً عندما 50٪ إلى 80٪ من طبقة الخلية HEp-2 يتم فصل بسبب تأثير RSV cytopathic الذي يحدث بين 48 و 72 ساعة بعد الإصابة. بعد ذلك كشط جميع الخلايا باستخدام مكشطة الخلية.جمع كل من الخلايا والمازن معا ونقلها إلى أنبوب الطرد المركزي 50 ملليلتر. أضف 1/10 من حجم حل حفظ 10X RSV. دوامة الأنابيب بقوة لمدة خمس ثوان والطرد المركزي لمدة خمس دقائق في 200 مرة ز لتوضيح التعليق.نقل المُنطَر إلى أنبوب 50 ملليلتر. دوامة لفترة وجيزة و aliquot التعليق في أنابيب المبردة وصفت مع العلامات المقاومة للكحول. غمر الأنبوب في الكحول قبل التبريد ، ناقص 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة على الأقل وتخزينها عند ناقص 80 درجة مئوية.لإجراء فحص البلاك، أولا جعل 2X الحد الأدنى المتوسطة الأساسية عن طريق تمييع التجارية 10X MEM مع الماء المعقم وإضافة L-الجلوتامين، 1، 000 وحدة لكل المليلتر البنسلين، وواحد ملليغرام لكل ملليلتر ستريبتوميسين. يهز تخفيف بقوة وتخزينها في أربع درجات مئوية، ثم إضافة 900 ميكرولترات من MEM خالية من FCS إلى ستة أنابيب. ذوبان aliquots الفيروس ودوامة لهم بقوة لمدة خمس ثوان.لجعل التخفيفات التسلسلية، أولا إضافة 100 ميكرولترات من الفيروس إلى 900 ميكرولترات من المتوسطة في الأنبوب الأول. وضع الغطاء على الأنبوب وخلط محتوياته عن طريق دوامة لبضع ثوان، ثم إضافة 100 ميكرولترات من التخفيف الأول إلى 900 ميكرولترات من المتوسط في الأنبوب الثاني. ضع الغطاء على الأنبوب و الدوامة.كرر هذا الإجراء حتى الأنبوب السادس. اكتب اسم الفيروس و التخفيفات الكاملة على لوحات HEp-2 12-well. أضف علامة لمطابقة اللوحة وغطائها لأنه قد يتم فصلها أثناء التلطيخ.إزالة المتوسطة من لوحات وتوزيع 400 ميكرولترات من تخفيف واحد في البئر. احتضان لوحات في 37 درجة مئوية لمدة ساعتين لامصاصة الفيروس. أثناء امتزاز الفيروس، وإعداد تراكب السليلوز microcrystalline عن طريق ضبط أولاً الأسى من 2X MEM إلى حوالي 7.2 مع محلول بيكربونات الصوديوم العقيمة في 7.5٪ بعد مؤشر اللون.للحصول على 100 ملليلتر من تراكب, إضافة 10 ملليلتر من 2X MEM, 10 ملليلتر من 2.4٪ تعليق السليلوز أحادي البلورات, و 80 ملليلتر من MEM تكمل مع 2٪ FCS ومزيج بقوة. في نهاية الحضانة لمدة ساعتين، إضافة 2-3 ملليلتر من تراكب إلى كل بئر من لوحات 12-آبار دون إزالة inoculum. احتضان لوحة في 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ستة أيام.لطخة الخلايا مع حل البنفسج الكريستال، أولا يهز بلطف لوحات لخلع تراكب السليلوز microcrystalline. إزالة عظمى وغسل الخلايا مرتين مع 1X PBS، ثم إضافة ملليلتر واحد إلى اثنين من الحل البنفسجي الكريستال وانتظر 10 إلى 15 دقيقة. إزالة الحل، والتي يمكن إعادة استخدامها لتلوين لوحة اللاحقة.وأخيراً تحسب فيروسات الهتر كجزء من عدد اللويحات المرئية في آبار الصفائح الجافة وحجم الترسبات المخففة. أداء فحص لوحة على السيطرة السلبية، transed مع بلازميدات التعبير فقط من N، P، L، و M2-1 كشفت لا لوحة في أدنى تخفيف. ومن المتوقع أن تكون النترات التي تم الحصول عليها من الخلايا المصابة بالعدوى أعلى من 100 وحدة في كل ملليلتر إذا كانت عملية الإنقاذ فعالة.زاد الاترات على الممرات ليصل مليون إلى 10 مليون PFU لكل ملليلتر عند مرور واحد أو اثنين. بفضل هذه الفيروسات الفلورية، تثبيط التعبير RSV عن طريق سيرنا استهداف البروتين N والبروتين الخلوي IMPDH يمكن بسهولة أن يلاحظ ويقاس. في المقابل، لوحظ إشارة قوية GFP على خلايا التحكم المصابة غير المستهدفة سيرنا أو الخلايا التي تحتوي على الرنا ضد البروتين الخلوي GAPDH وتم قياسها.وبالمثل، مكنت هذه الفيروسات من سهولة مراقبة تثبيط الضرب RSV بواسطة مركب مضاد للفيروسات. أظهر تتبع البروتين الفلوري M2-1 في الخلايا المصابة HEp-2 IBs والحبيبات المرتبطة بIB كهياكل ديناميكية للغاية. ولوحظ أن الهياكل المتحركة والخروية قادرة على الصمامات وتشكيل تدرجات كروية أكبر.خضعت حبيبات مرتبطة بIB لدورات تفكيك تجميعية مستمرة مع تكوين حبيبات صغيرة مرتبطة بـ IB نمت ، وانصهرت في حبيبات كبيرة مرتبطة بـ IB ، ثم اختفت. بروتوكول المعايرة البلاك من RSV باستخدام تراكب السليلوز microcrystalline يمكن تكييفها بسهولة مع الخلايا الأخرى و / أو الفيروسات الأخرى. وسوف يتطلب تعديل تركيز السليلوز microcrystalline.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

توليد المؤتلف فيروسات الأنفلونزا من الحمض النووي البلازميد

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

بمعزل عن المتغيرات الاخلاص للفيروسات الحمض النووي الريبي وتوصيف التردد يتحور الفيروس

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

إنتاج وناقلات Titering الغدة المؤتلف المرتبطة الفيروسية

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions

تضخيم بروتين دوري Misfolding من البريونات

Prions  are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform  encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

إرساء ثقافة السائل المغطاة من مجرى الهواء الإنسان المستقطب طلائي Calu-3 خلايا لدراسة استجابة الخلية المضيفة لمسببات الأمراض التنفسية<em&gt; في المختبر</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Generation of Recombinant Arenavirus for Vaccine Development in FDA-Approved Vero Cells

جيل من الفيروسة الرملية المؤتلف استحداث اللقاحات وافقت عليها الهيئة في خلايا فيرو

The development and implementation of arenavirus reverse genetics represents a significant breakthrough in the arenavirus field  4. The use of cell-based ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

الإنتاجية العالية للفحص واسع الطيف الكيميائية مثبطات الحمض النووي الريبي الفيروسات

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

إدارة الأنف المؤتلف لقاحات الأنفلونزا في همي ماوس نماذج لدراسة الأغشية المخاطية الحصانة

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...