Name: generation, amplification, and titration of recombinant respiratory syncytial viruses
Uploaded: 2019-04-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses at JoVE.com

Yazarlar Dr Qin Yu AstraZeneca R & D Boston, MA, ABD AZD4316 uyuşturucu verdiğiniz için teşekkür ederiz. Yazarlar Cymages platforma erişim ScanR Olympus mikroskop için minnettarız tarafından desteklendiği bölgesinden Ile-de-France (LOŞ bir sağlık) verir. Yazarlar INSERM ve Versailles Saint-Quentin Üniversitesi destek kabul etmiş oluyorsunuz.

1. malzeme hazırlama
<ol><li>Satın cep medya (düşük serum medya, en az temel medya [MEM] 10 x MEM ve Dulbecco kartal orta [DMEM] değiştirilmiş'ın), transfection reaktif ve Mikrokristalin Selüloz (bkz: Malzemeler tablo).</li>
	<li>Aşağıdaki vektörel çizimler için ters genetik elde etmek: genomik vector(s) ve N protein ve polimeraz karmaşık proteinleri kodlama ifade vektörel çizimler. Genomik vektörel çizimler bakteriyofaj T7 RNA polimeraz (T7 pol) organizatörü üzerinden tam cDNA...

<ol>
	<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+disease+burden+estimates+of+acute+lower+respiratory+infections+due+to+respiratory+syncytial+virus+in+young+children+in+2015:+a+systematic+review+and+modelling+study.">Global, regional, and national disease burden estimates of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children in 2015: a systematic review and modelling study.</a> The Lancet. 390 (10098), 946-958 (2017).</li><li>Falsey, A. R., Hennessey, P. A., Formica, M. A., Cox, C., Walsh, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+Syncytial+Virus+Infection+in+Elderly+and+High-Risk+Adults.">Respiratory Syncytial Virus Infection in Elderly and High-Risk Adults.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (17), 1749-1759 (2005).</li><li>DeVincenzo, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+Oral+ALS-008176+in+a+Respiratory+Syncytial+Virus+Challenge+Study.">Activity of Oral ALS-008176 in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (21), 2048-2058 (2015).</li><li>DeVincenzo, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+GS-5806+Activity+in+a+Respiratory+Syncytial+Virus+Challenge+Study.">Oral GS-5806 Activity in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (8), 711-722 (2014).</li><li>Afonso, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taxonomy+of+the+order+Mononegavirales:+update+2016.">Taxonomy of the order Mononegavirales: update 2016.</a> Archives of Virology. 161 (8), 2351-2360 (2016).</li><li>Collins, P. L., Hill, M. G., Cristina, J., Grosfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+elongation+factor+of+respiratory+syncytial+virus,+a+nonsegmented+negative-strand+RNA+virus.">Transcription elongation factor of respiratory syncytial virus, a nonsegmented negative-strand RNA virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (1), 81-85 (1996).</li><li>Hoenen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inclusion+bodies+are+a+site+of+ebolavirus+replication.">Inclusion bodies are a site of ebolavirus replication.</a> Journal of Virology. 86 (21), 11779-11788 (2012).</li><li>Heinrich, B. S., Cureton, D. K., Rahmeh, A. A., Whelan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+expression+redirects+vesicular+stomatitis+virus+RNA+synthesis+to+cytoplasmic+inclusions.">Protein expression redirects vesicular stomatitis virus RNA synthesis to cytoplasmic inclusions.</a> PLoS Pathogens. 6 (6), e1000958 (2010).</li><li>Lahaye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Characterization+of+Negri+Bodies+(NBs)+in+Rabies+Virus-Infected+Cells:+Evidence+that+NBs+Are+Sites+of+Viral+Transcription+and+Replication.">Functional Characterization of Negri Bodies (NBs) in Rabies Virus-Infected Cells: Evidence that NBs Are Sites of Viral Transcription and Replication.</a> Journal of Virology. 83 (16), 7948-7958 (2009).</li><li>Kolesnikova, L., M&#252;hlberger, E., Ryabchikova, E., Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+organization+of+recombinant+Marburg+virus+nucleoprotein:+comparison+with+Marburg+virus+inclusions.">Ultrastructural organization of recombinant Marburg virus nucleoprotein: comparison with Marburg virus inclusions.</a> Journal of Virology. 74 (8), 3899-3904 (2000).</li><li>Dolnik, O., Stevermann, L., Kolesnikova, L., Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marburg+virus+inclusions:+A+virus-induced+microcompartment+and+interface+to+multivesicular+bodies+and+the+late+endosomal+compartment.">Marburg virus inclusions: A virus-induced microcompartment and interface to multivesicular bodies and the late endosomal compartment.</a> European Journal of Cell Biology. 94 (7-9), 323-331 (2015).</li><li>Rincheval, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+organization+of+cytoplasmic+inclusion+bodies+in+cells+infected+by+respiratory+syncytial+virus.">Functional organization of cytoplasmic inclusion bodies in cells infected by respiratory syncytial virus.</a> Nature Communications. 8 (1), 563 (2017).</li><li>Santangelo, P. J., Bao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+filamentous+viral+RNPs+prior+to+egress.">Dynamics of filamentous viral RNPs prior to egress.</a> Nucleic Acids Research. 35 (11), 3602-3611 (2007).</li><li>Lifland, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Respiratory+Syncytial+Virus+Nucleoprotein+and+Inclusion+Bodies+Antagonize+the+Innate+Immune+Response+Mediated+by+MDA5+and+MAVS.">Human Respiratory Syncytial Virus Nucleoprotein and Inclusion Bodies Antagonize the Innate Immune Response Mediated by MDA5 and MAVS.</a> Journal of Virology. 86 (15), 8245-8258 (2012).</li><li>Garcia, J., Garcia-Barreno, B., Vivo, A., Melero, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+inclusions+of+respiratory+syncytial+virus-infected+cells:+formation+of+inclusion+bodies+in+transfected+cells+that+coexpress+the+nucleoprotein,+the+phosphoprotein,+and+the+22K+protein.">Cytoplasmic inclusions of respiratory syncytial virus-infected cells: formation of inclusion bodies in transfected cells that coexpress the nucleoprotein, the phosphoprotein, and the 22K protein.</a> Virology. 195 (1), 243-247 (1993).</li><li>Brown, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+association+between+heat+shock+protein+70+and+the+respiratory+syncytial+virus+polymerase+complex+within+lipid-raft+membranes+during+virus+infection.">Evidence for an association between heat shock protein 70 and the respiratory syncytial virus polymerase complex within lipid-raft membranes during virus infection.</a> Virology. 338 (1), 69-80 (2005).</li><li>Radhakrishnan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+analysis+of+purified+respiratory+syncytial+virus+particles+reveals+an+important+role+for+heat+shock+protein+90+in+virus+particle+assembly.">Protein analysis of purified respiratory syncytial virus particles reveals an important role for heat shock protein 90 in virus particle assembly.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 9 (9), 1829-1848 (2010).</li><li>Racaniello, V. R., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloned+poliovirus+complementary+DNA+is+infectious+in+mammalian+cells.">Cloned poliovirus complementary DNA is infectious in mammalian cells.</a> Science. 214 (4523), 916-919 (1981).</li><li>Schnell, M. J., Mebatsion, T., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+rabies+viruses+from+cloned+cDNA.">Infectious rabies viruses from cloned cDNA.</a> The EMBO Journal. 13 (18), 4195-4203 (1994).</li><li>Collins, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+infectious+human+respiratory+syncytial+virus+from+cloned+cDNA+confirms+an+essential+role+for+the+transcription+elongation+factor+from+the+5'+proximal+open+reading+frame+of+the+M2+mRNA+in+gene+expression+and+provides+a+capability+for+vaccine.">Production of infectious human respiratory syncytial virus from cloned cDNA confirms an essential role for the transcription elongation factor from the 5' proximal open reading frame of the M2 mRNA in gene expression and provides a capability for vaccine.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (25), 11563-11567 (1995).</li><li>Rameix-Welti, M. -. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+the+replication+of+respiratory+syncytial+virus+in+cells+and+in+living+mice.">Visualizing the replication of respiratory syncytial virus in cells and in living mice.</a> Nature Communications. 5, 5104 (2014).</li><li>Buchholz, U. J., Finke, S., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+bovine+respiratory+syncytial+virus+(BRSV)+from+cDNA:+BRSV+NS2+is+not+essential+for+virus+replication+in+tissue+culture,+and+the+human+RSV+leader+region+acts+as+a+functional+BRSV+genome+promoter.">Generation of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) from cDNA: BRSV NS2 is not essential for virus replication in tissue culture, and the human RSV leader region acts as a functional BRSV genome promoter.</a> Journal of Virology. 73 (1), 251-259 (1999).</li><li>Cianci, C., Meanwell, N., Krystal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiviral+activity+and+molecular+mechanism+of+an+orally+active+respiratory+syncytial+virus+fusion+inhibitor.">Antiviral activity and molecular mechanism of an orally active respiratory syncytial virus fusion inhibitor.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 55 (3), 289-292 (2005).</li><li>Derscheid, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+respiratory+syncytial+virus+memphis+37+grown+in+HEp-2+cells+causes+more+severe+disease+in+lambs+than+virus+grown+in+vero+cells.">Human respiratory syncytial virus memphis 37 grown in HEp-2 cells causes more severe disease in lambs than virus grown in vero cells.</a> Viruses. 5 (11), 2881-2897 (2013).</li><li>McKimm-Breschkin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+plaque+assay+for+respiratory+syncytial+virus+-+direct+visualization+of+plaques+without+immunostaining.">A simplified plaque assay for respiratory syncytial virus - direct visualization of plaques without immunostaining.</a> Journal of Virological Methods. 120, 113-117 (2004).</li><li>Matrosovich, M., Matrosovich, T., Garten, W., Klenk, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+low-viscosity+overlay+medium+for+viral+plaque+assays.">New low-viscosity overlay medium for viral plaque assays.</a> Virology Journal. 7, 1-7 (2006).</li><li>Novina, C. D., Sharp, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNAi+revolution.">The RNAi revolution.</a> Nature. 430 (6996), 161-164 (2004).</li><li>Sintchak, M. D., Nimmesgern, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+inosine+5'-monophosphate+dehydrogenase+and+the+design+of+novel+inhibitors.">The structure of inosine 5'-monophosphate dehydrogenase and the design of novel inhibitors.</a> Immunopharmacology. 47 (2-3), 163-184 (2000).</li><li>Beaucourt, S., Vignuzzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribavirin:+A+drug+active+against+many+viruses+with+multiple+effects+on+virus+replication+and+propagation.+Molecular+basis+of+ribavirin+resistance.">Ribavirin: A drug active against many viruses with multiple effects on virus replication and propagation. Molecular basis of ribavirin resistance.</a> Current Opinion in Virology. 8, 10-15 (2014).</li><li>Hruska, J. F., Bernstein, J. M., Douglas, R. G., Hall, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ribavirin+on+Respiratory+Syncytial+Virus+in+vitro.">Effects of Ribavirin on Respiratory Syncytial Virus in vitro.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 17 (5), 770-775 (1980).</li><li>Sim&#245;es, E. A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Past,+Present+and+Future+Approaches+to+the+Prevention+and+Treatment+of+Respiratory+Syncytial+Virus+Infection+in+Children.">Past, Present and Future Approaches to the Prevention and Treatment of Respiratory Syncytial Virus Infection in Children.</a> Infectious Diseases and Therapy. 7 (1), 87-120 (2018).</li><li>Alvarez, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-mediated+silencing+of+the+respiratory+syncytial+virus+nucleocapsid+defines+a+potent+antiviral+strategy.">RNA interference-mediated silencing of the respiratory syncytial virus nucleocapsid defines a potent antiviral strategy.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3952-3962 (2009).</li><li>DeVincenzo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+placebo-comtrolled+study+of+an+RNAi-based+therapy+directed+against+respiratory+syncytial+virus.">A randomized, double-blind, placebo-comtrolled study of an RNAi-based therapy directed against respiratory syncytial virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (19), 8800-8805 (2010).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+of+a+CRISPR/Cas9+library+for+functional+genomics+in+human+cells.">High-throughput screening of a CRISPR/Cas9 library for functional genomics in human cells.</a> Nature. 509 (7501), 487-491 (2014).</li><li>Nikolic, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negri+bodies+are+viral+factories+with+properties+of+liquid+organelles.">Negri bodies are viral factories with properties of liquid organelles.</a> Nature Communications. 8 (1), 58 (2017).</li></ol>

Burada rekombinant RSVs beş plazmid gelen kurtarma yöntemi ve onların amplifikasyon mevcut. Virüs genomu işleme yeteneği mutasyon test etmek ve ek bir gen veya etiketli bir viral protein hızlı Viroloji araştırma devrim yarattı. RSV biz açıklanan ve bu makaledeki örnek bir muhabir gen, RSV-GFP (yayınlanmamış) ve bir M2-1 protein bir GFP etiketi12' ye erimiş ifade ifade bir virüs olduğu gibi kullanılabilir. RSV kurtarmak zordur ve pratik gerektirir. Transfection verimlilik, tran...

İnsan RSV bebekler dünya çapında1' yatış akut solunum yolu enfeksiyonu için önde gelen nedenidir. Buna ek olarak, RSV erişkinlerde grip için karşılaştırılabilir ile hastaneye yatış ve mortalite yükü yaşlı2' deki en önemli hastalık yükü ile ilişkilidir. Var hiçbir aşı ya da belirli antiviral ilaçlar kullanılabilir RSV karşı ama umut verici henüz yeni ilaçlar çoğu geliştirme3,4' te. Karmaşıklığı ve miktar RSV çarpma teknikleri ağırlık antiviral ilaçlar veya geçerli önemli çabalara rağmen aşılar için arama engel. RSV çarpma tüp bebek miktar genellikle çoğunlukla cytopathic etkisi analizinde mikroskobu, immunostaining, plak azaltma tarafından deneyleri, nicel grafiklerden zahmetli, zaman alıcı ve pahalı yöntemler üzerinde dayanır ters transkriptaz (qRT)-Polimeraz zincir tepkimesi (PCR) ve enzim bağlı immunosorbent assay testleri. Virüs genleri değiştirilmiş ve bu gibi muhabir gen ifade ile GFP için kodlama, böyle gösterimleri için daha uygundur. Otomatik Plaka okuyucu kullanmak için birleştiğinde, muhabir gen taşıyan rekombinant virüsler bu deneyleri standardizasyon ve yüksek üretilen iş amaçları için daha uygun hale getirebilirsiniz.
RSV bir saran, nonsegmented olumsuz anlamda RNA Pneumoviridae aile, sipariş Mononegavirales5 Orthopneumovirus cins ait virüstür. RSV genomu yaklaşık 15 kodlamayan bölge lideri ve römork ve 11 protein kodlama 10 transkripsiyon birim adı verilen 3' ve 5' ekstremitelerde, içeren KB, tek iplikçikli, negatif anlamda RNA büyüktür. Genlerin aşağıdaki gibi sıralanır: 3'-NS1, NS2, N, P, M, SH, G, F, M2 (M2-1 ve M2-2 proteinler için kodlama) ve L-5'. Genomik RNA nükleoprotein N. kullanma encapsidated genomik RNA bir şablon olarak tarafından sıkıca paketlenmiş, viral RNA'ya bağımlı RNA polimeraz (RdRp) transkripsiyon ve çoğaltma viral RNA'ın sağlayacaktır. Viral RdRp başına nükleotit polimeraz etkinlik taşıyan büyük protein L oluşmaktadır, onun zorunlu kofaktör Fosoprotein P ve viral transkripsiyonu işlevleri M2-1 protein6faktör. Enfekte hücrelerde, RSV dahil organları (IBS) adı verilen sitoplazmik kapanımlar oluşumuna neden olmaktadır. Morfolojik benzer sitoplazmik kapanımlar birkaç Mononegavirales7,8,9,10için gözlemledim. Kuduz virüsü, vesicular Stomatit virüs (VSV), Ebola virüsü ve viral RNA sentezi böylece viral fabrikalar8,9,11, kabul edilebilir IBS içinde oluştuğunu gösterdi RSV son çalışmalar 12. virüs fabrika RNA ve viral proteinler viral RNA sentezi için gerekli konsantre ve hücresel proteinler13,14,15,16, da içeren 17. IBS sergilemek hangi konsantre IB ilişkili granül (IBAGs) denilen bir fonksiyonel subcompartment yeni synthetized yeni doğmakta olan viral mRNA M2-1 protein ile birlikte. Genomik RNA ve L, P ve N IBAGs algılanmaz. IBAGs küçük dinamik küresel sıvı organelleri12özelliklerini sergileyen IBS içinde yapılardır. Merkezi rolü IBS rağmen viral çarpma, doğa, iç yapısı, oluşumu ve viral Bu fabrikaların işleyişi hakkında çok az bilinir.
İfade bir cDNA sayfasından poliovirus genomunun 198118ilk bulaşıcı viral klon üretimini etkin. Tek iplikçikli negatif RNA virüsleri, 1994'e kadar plazmid transfection hücreleri19 takip ilk bir kuduz virüsü üretimi gerçekleşti değildi. Plazmid tabanlı ters genetik için ilk sistemi RSV 199520dakika sonra yayımlandı. Ters genetik Viroloji alanında önemli gelişmeler yol açmıştır. Viral genom içine belirli değişiklikler tanıtma imkanı çoğaltma ve RNA virüsleri patogenezinde önemli anlayışlar sağlamıştır. Bu teknoloji da büyük ölçüde aşıların geliştirilmesi hedeflenen değişiklikler dizi belirli zayıflama izin vererek kolaylaştırdı. Viral çarpma hızlı bir miktar büyük ölçüde izin genom değişiklikler antiviral tarama ve eylem onların modu çalışma geliştirilmiş.
Daha önce açıklanan rağmen genetiği değiştirilmiş RSVs alma hassas kalır. Burada, iki tür rekombinant HRSV, sırasıyla RSV GFP veya RSV-M2-1-GFP ifade oluşturmak için bir protokol ayrıntılı. Bu protokol için yeni rekombinant virüsler gibi yüksek titresi, tekrarlanabilir Hollow'a için uygun ile viral stokları elde etmek için onların amplifikasyon kurtarmak için gerekli transfection koşulları tanımlamak. Ters genetik vektörel çizimler inşaat başına burada açıklanmıyor. En uygun hasat ve viral stokları dondurulması için yöntemleri açıklanmaktadır. Viral enfeksiyon parçacıklar ölçmek için en doğru yöntemi plak tahlil kalır. Hücreleri analiz süspansiyon seri dilutions ile enfekte ve süpernatant ücretsiz viral parçacıkların Difüzyon yasaklayan bir bindirme ile inkübe. Bu şartlar altında virüs sadece ilk her bulaşıcı parçacık için bir "plak" oluşturan bitişik hücreleri enfekte edecek. Geleneksel RSV titrasyon assay olarak, plaklar immunostaining tarafından ortaya ve mikroskobik gözlem altında sayılır. Bu yöntem pahalı ve zaman alıcı. Burada çok basit bir protokol plaklar çıplak gözle görünür oluşumu sağlar Mikrokristalin selüloz bindirme kullanılarak RSV plak tahlil için açıklanan. RSV GFP ölçü RSV çoğaltma ve böylece, için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir antiviral ilaçlar etkisini ölçmek. Ters genetik ve canlı görüntüleme teknolojisi birleştiren, biz nasıl bilim adamları IBS gibi viral hücre içi yapılar dinamikleri takip etmek ve M2-1 canlı hücrelerdeki görselleştirmek için RSV-M2-1-GFP sağlar göstermek.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>35mm &#181; dish for live cell imaging</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A549</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC CCL-185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel RC-591</td>
			<td>FMC BioPolymer</td>
			<td>Avicel RC-591</td>
			<td>Technical and other information on Avicels is available at http://www.fmcbiopolymer.com. Store at room temperature. Protocol in step 4 is optimized for this reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSRT7/5</td>
			<td></td>
			<td>not commercially available</td>
			<td>See ref 22. Buchholz et al, 1999</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT90132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope for observations</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX73 Olympus microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope for videomicroscopy</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>ScanR Olympus microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEp-2</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC CCL-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES &#8805;99.5%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25030024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIPOFECTAMINE 2000 REAGENT</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11668019</td>
			<td>Protocol in step 2.3. is optimized for this reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10X), no glutamine</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11430030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM, GlutaMAX Supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>41090-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 ReagentPlus, &#8805;99.5%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>51985-026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde Aqueous Solution, 32%, EM Grade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmids</td>
			<td></td>
			<td>not commercially available</td>
			<td>see ref 21. Rameix-Welti et al, 2014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>See Saw Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Si RNA GAPDH</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus siRNA 
			D-001810-10-05</td>
			<td>SMARTpool and 3 of 4 individual siRNAs designed by Dharmacon.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Si RNA IMPDH2</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus siRNA IMPDH2 Pool- Human 
			L-004330-00-0005</td>
			<td>SMARTpool of 4 individual siRNAs designed by Dharmacon. 
			Individual references and sequences 
			J-004330-06: GGAAAGUUGCCCAUUGUAA; 
			J-004330-07: GCACGGCGCUUUGGUGUUC; 
			J-004330-08: AAGGGUCAAUCCACAAAUU; 
			J-004330-09: GGUAUGGGUUCUCUCGAUG;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Si RNA RSV N</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus custom siRNA</td>
			<td>UUCAGAAGAACUAGAGGCUAU and UUUCAUAAAUUCACUGGGUUA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SiRNA NT</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>ON-TARGETplus Non-targeting Pool</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SiRNA transfection reagent</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>DharmaFECT 1 Ref: T-2001-03</td>
			<td>Protocol in steps 5.1.and 5.1.2 are optimized for this reagent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate 7.5% solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25080094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrofluorometer</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Tecan infinite M200PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation, amplification, and titration of recombinant respiratory syncytial viruses

Rekombinant virüs kullanımı temel veya uygulamalı Viroloji çok önemli olmuştur. Ters genetik hem viral çoğaltma mekanizması çözmeye ve antiviral ilaçlar ya da aşılar için geliştirme platformu sağlamak için son derece güçlü bir teknoloji olduğu kanıtlanmış. İnşaat ve bir negatif iplikçikli RNA virüsü gibi solunum sinsisyal virüs (RSV) için ters bir genetik sistemi by pass iddiası ancak, hassas kalır ve özel bilgi birikimi gerektirir. RSV genomu yaklaşık 15 KB hem viral RNA ve transkripsiyonu için bir şablon olarak hizmet veren bir tek iplikçikli, negatif anlamda RNA büyüktür. Ters genetik sistemimiz insan RSV uzun zorlanma genom (HRSV) cDNA kopyasını kullanır. Bu cDNA yanı sıra viral proteinlerin polimeraz karmaşık kodlama cDNAs (L, P, N ve M2-1), bireysel ifade vektörel çizimler T7 polimeraz kontrol dizilerini altında yer alır. Bu unsurların stabil T7 polimeraz hızlı, BSR-T7/5 hücrelerdeki transfection sitoplazmik ve rekombinant RSV transkripsiyonu için genetik olarak değiştirilmiş virions sebebiyet veren sağlar. Hücre yüzeyinde ve kültür süpernatant BSRT7/5, yeni bir RSV viral amplifikasyon için insan HEp-2 hücreleri enfekte için toplanıyor. Amplifikasyon iki veya üç mermi 1 x 106 -1 x 107 plak oluşturan birimler (PFU) içeren viral hisse senetleri almaları gerektiğini / mL. En uygun hasat, donma ve viral stoklarının titrasyon için yöntemler burada ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Biz burada iki rekombinant virüs ücretsiz yeşil flüoresan protein (GFP) (RSV-GFP) sırasıyla ifade oluşturma tarafından sunulan Protokolü göstermek veya viral M2-1 GFP (RSV-M2-1-GFP) erimiş. RSV GFP RSV çoğaltma ve RSV-M2-1-viral yapılarını gibi viral protein dynamics canlı hücrelerdeki video mikroskobu teknikleri kullanarak görselleştirmek için GFP ölçmek için nasıl kullanılacağını gösterir.

Bu çalışmada, floresan protein (Şekil 2) ifade rekombinant RSV virüs üretmek için detaylı bir protokol nitelendirdi. PRSV-GFP GFP gen P ile M arasında gen için daha önce yayımlanmış çalışma21kiraz gen açıklandığı gibi kullanılmaya başlandı. PRSV-M2-1-GFP, M2 gen dokunulmaz ve bir ek gen M2-1-GFP için kodlama SH ve G genler12arasında eklenmiş. İlk adım, belgili tanımlık virüs BSRT...

Watch this Scientific Journal Video about Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses at JoVE.com

Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses

Biz üretmek için bir yöntem tanımlamak ve genetik olarak yükseltecek solunum sinsisyal virüs (RSVs) ve bir en iyi duruma getirilmiş plak tahlil RSVs için değiştirilebilir. Biz bu protokolü sırasıyla miktar RSV çoğaltma izin ve analiz RSV dahil organları ve granül dahil organları ilişkili dynamics canlı iki rekombinant virüs oluşturarak göstermektedir.

Üretimi, güçlendirme ve titrasyon rekombinant solunum sinsisyal virüs

The use of recombinant viruses has become crucial in basic or applied virology. Reverse genetics has been proven to be an extremely powerful technology, ...

Rekombinant virüslerin kullanımı hem viral çoğaltma mekanizmalarını çözmek hem de aşılar için geliştirme platformları sağlamak için güçlü bir teknolojidir. Aynı şekilde, kaliteli viral stok üretimi uygulanan çalışmalara en temel araştırma her viral çalışma için çok önemlidir. Rekombinant virüslerin kurtarılması, optimum hasat, dondurma ve RSV stoklarının titrasyonu tüm virolojik çalışmalar için kritik yöntemlerdir.Onlar geleneksel olarak kabul edilebilir ama hassas kalır ve özel uzmanlık gerektirir. Transfeksiyondan bir gün önce, mililitre konsantrasyonu başına 0,5 milyon hücrede BSR-T7/5 hücrelerini tam ortamda askıya alın. Altı kuyulu bir plaka içinde iyi başına hücre süspansiyon iki mililitre dağıtın.Plakayı 37 derecede %5 karbondioksitle inkübünle ertesi gün %80-90'a ulaşana kadar. Her virüsü kurtarmak için, önce bir tüpte çözülmüş ters genetik vektörleri karıştırın, sonra transfeksiyon reaktifi üreticisinin protokolüne göre transfeksiyona devam edin. Sonraki karışık vektörler için azaltılmış serum orta 250 mikrolitre ekleyin.Başka bir tüpte, azaltılmış serum ortamının 250 mikrolitresinde bu transfeksiyon reaktifinin 10 mikrolitresini seyreltin. Yavaşça her iki tüp girdap ve beş dakika bekleyin. Her iki tüpün içeriğini karıştırın ve oda sıcaklığında 20 dakika bekleyin.Bu arada, azaltılmış serum orta bir mililitre ile BSR-T7/5 hücreleri durular ve az % 10 fetal buzağı serumu ile takviye minimum temel medya antibiyotikler ücretsiz 1.5 mililitre dağıtmak. Gerekirse, %5 karbondioksit ortamında 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. 20 dakikalık kuluçkadan sonra, her kuyuya 500 mikrolitre transfeksiyon karışımı ekleyin.Hücreleri 37 derecede %5 karbondioksit ortamında üç gün kuluçkaya yatırın. Kurtarma verimliliğini izlemek için, gfp floresansını günde bir kez 20X büyütme de ters floresan mikroskobu altında gözlemleyin. Transfeksiyonun üçüncü gününde, transfected BSR-T7/5 altı kuyuplakasının her bir kuyudaki hücreleri çizin.Transfer hücreleri ve steril bir iki mililitrelik mikrosantrifüj tüp içine her kuyunun supernatant. Kurtarılan virüsü hücre zarlarından çıkarmak için her tüpü en az 30 saniye şiddetle girdaplayın. Kurtarılan virüslerin ilk amplifikasyon için, ilk hep-2 plaka önceki gün tohumlu kültür ortamı kaldırmak, sonra hızlı bir şekilde taze geçiş sıfır viral süspansiyon kuyu başına 500 mikrolitre ekleyin.HEp-2 plakasını 37 derecede, iki saat boyunca yumuşak bir ajitasyon için bir tahterevalli rocker'ın üzerine yerleştirin. Kurtarılan virüslerin ilk geçişini üretmek için, inoculum 500 mikrolitre atın ve% 2 FCS ile MEM iki mililitre ekleyin. Plakayı 37 derecede %5 karbondioksitle üç gün boyunca kuluçkaya yatırın.20X büyütmede ters floresan mikroskobu altında enfeksiyonu izlemek için, günde bir kez geçiş sıfır süspansiyon ile enfekte HEp-2 hücrelerinin GFP floresansını gözlemleyin. Bir brightfield mikroskop altında, rsv sitopatik etkisini yansıtan küçük senytia ve hücre kopması görünümünü gözlemleyin. Kurtarılan virüsleri yükseltmek için, önce FCS içermeyen MEM'in viral süspansiyonundan seyreltin ve mililitrede 50, 000 PFU'da üç mililitrelik süspansiyon elde edin, sonra da ortamı HEp-2 şişesinden çıkarın.Hızlı bir şekilde üç mililitrelik viral süspansiyon ekleyin ve iki saat boyunca yumuşak ajitasyon için bir tahterevalli rocker üzerinde 37 santigrat derece şişe kuluçka. Sonra inoculum çıkarın ve atın ve% 2 FCS ile MEM 15 mililitre ekleyin. 2-4 gün boyunca %5 karbondioksitte 37 derecede kuluçkaya yat.Virüsleri hasat etmek için doğru zamanı tahmin etmek için, 20X büyütmede ters floresan mikroskobu altında hücre morfolojisini ve GFP floresansını kontrol edin. Bu genellikle HEp-2 hücre tabakasının% 50 ila% 80 48 ve 72 saat enfeksiyon sonrası meydana gelen RSV sitopatik etkisi nedeniyle ayrılır olduğunu unutmayın. Sonra bir hücre kazıyıcı kullanarak tüm hücreleri kazıyın.Hücreleri ve supernatant birlikte toplamak ve 50 mililitrelik santrifüj tüp aktarın. 10X RSV koruma çözeltisinin hacminin 1/10'una ekleyin. Girdap tüpler ivedilikle beş saniye ve santrifüj beş dakika için 200 kez g süspansiyon açıklığa kavuşturmak için.Süpernatant'ı 50 mililitrelik bir tüpe aktarın. Vortex kısaca ve alkole dirençli etiketleri ile etiketlenmiş kriyojenik tüplerde süspansiyon aliquot. Tüpü önceden soğutulmuş, eksi 80 santigrat derece alkole en az bir saat batırın ve eksi 80 santigrat derecede saklayın.Bir plak titrasyon tahsini gerçekleştirmek için, ilk steril su ile ticari 10X MEM seyreltme ve L-glutamin ekleyerek 2X minimum gerekli orta yapmak, mililitre penisilin başına 1,000 adet, ve mililitre streptomisin başına bir miligram. Seyreltme şiddetle çalkalayın ve dört santigrat derecede saklayın, sonra altı tüpler için FCS içermeyen MEM 900 mikrolitre ekleyin. Virüsü çöz ve beş saniye boyunca şiddetle girdap.Seri seyreltme yapmak için, ilk tüp orta 900 mikrolitre virüs 100 mikrolitre ekleyin. Tüpün kapağını yerleştirin ve birkaç saniye girdap yaparak içindekileri karıştırın, ardından ikinci tüpte ortamın 900 mikrolitresine ilk seyreltmenin 100 mikrolitresini ekleyin. Kapağı tüpe ve girdaba koy.Altıncı tüpkadar bu işlemi tekrarlayın. HEp-2 12-kuyu plakaları üzerinde virüs adı ve tam seyreltme yazın. Onlar boyama sırasında ayrılmış olabilir, çünkü plaka ve kapağı maç için bir işaret ekleyin.Plakalar orta çıkarın ve kuyu başına bir seyreltme 400 mikrolitre dağıtmak. Plakaları virüs adsorpsiyonu için iki saat boyunca 37 derecede kuluçkaya yatırın. Virüs adsorpsiyonsırasında, 2X MEM'in pH'ını renk göstergesini takip eden %7,5'te steril sodyum bikarbonat çözeltisi ile yaklaşık 7,2'ye ayarlayarak mikrokristalin selüloz kaplamasını hazırlayın.Bindirme 100 mililitre elde etmek için, 2X MEM 10 mililitre ekleyin, 2.4% monokristalin selüloz süspansiyon 10 mililitre, ve MEM 80 mililitre ile birlikte 2% FCS ve şiddetle karıştırın. İki saatlik kuluçka sonunda, inoculum çıkarmadan 12 kuyu plakaları her kuyuya bindirme iki ila üç mililitre ekleyin. Plakayı 6 gün boyunca %5 karbondioksitle 37 derecede kuluçkaya yatırın.Kristal mor çözelti ile hücreleri leke için, ilk yavaşça mikrokristalin selüloz bindirme çıkarmak için plakaları sallamak. Supernatants çıkarın ve 1X PBS ile iki kez hücreleri yıkayın, sonra kristal mor çözeltisi bir ila iki mililitre ekleyin ve 10 ila 15 dakika bekleyin. Sonraki plaka boyama için yeniden kullanılabilir çözelti, çıkarın.Son olarak kuru plakalar ve inoculum hacmi ve seyreltme kuyularında görünür plak sayısının bir kısmını olarak virüs titreleri hesaplayın. Negatif kontrol üzerinde bir plak tetkik, N, P, L ve M2-1 sadece ifade plazmidleri ile transfected en düşük seyreltme hiçbir plak ortaya. Transfected hücrelerden elde edilen titrelerin, kurtarma nın verimli olması durumunda mililitre başına 100 PFU'nun üzerinde olması bekleniyordu.Titreler pasajlar üzerinde bir ya da iki geçitte mililitre başına bir milyon 10 milyon PFU ulaşmak için arttı. Bu floresan virüsler sayesinde N proteinini ve hücresel protein IMPDH'yi hedef alan siRNA ile RSV ekspresyonunun inhibisyonu kolayca gözlemlenebilir ve ölçülebilir. Buna karşılık, hücresel protein GAPDH'ye karşı siRNA ile transfeced olmayan siRNA veya hücreler ile transfected kontrol hücreleri üzerinde güçlü bir GFP sinyali gözlendi ve ölçüldü.Aynı şekilde bu virüsler bir antiviral ilaç bileşik tarafından RSV çarpma inhibisyonu kolay gözlem sağladı. HEp-2-enfekte hücrelerde floresan protein M2-1 izleme çok dinamik yapılar olarak IBve IB ilişkili granüller gösterdi. İB'ler, daha büyük küresel inkişmeler oluşturabilen ve kaynaşabilen mobil ve küresel yapılar olarak gözlenmiştir.IB ile ilişkili granüller, büyüyen, büyük IB ilişkili granüller içine erimiş ve daha sonra kayboldu küçük IB ilişkili granüloluşumu ile sürekli montaj-dezassembly döngüleri yapıldı. Mikrokristalin selüloz kaplaması kullanılarak RSV plak titrasyonu protokolü diğer hücrelere ve/veya diğer virüslere kolayca adapte edilebilir. Bu mikrokristalin selüloz konsantrasyonu ayarlama gerektirir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

Plazmid DNA Rekombinant Grip Virüsü Üretimi

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

Virüs mutasyon Frekans RNA Virüsler ve Karakterizasyonu Fidelity Varyantlar izolasyonu

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Rekombinant Adeno ilişkili Viral Vektörlerin Üretimi ve Titering

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions

Prionlar protein misfolding Döngüsel Amplifikasyon

Prions  are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform  encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Polarize İnsan Havayolu bir sıvı kaplı Kültürünün Oluşturulması Solunum Patojenler için Host Hücre Yanıtı Okumak Epitel Calu-3 Hücreler<em&gt; In vitro</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Generation of Recombinant Arenavirus for Vaccine Development in FDA-Approved Vero Cells

FDA onaylı Vero hücrelerinde Aşı Geliştirme için bir araya getiren Arenavirus üretimi

The development and implementation of arenavirus reverse genetics represents a significant breakthrough in the arenavirus field  4. The use of cell-based ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

RNA Virüslerinin geniş spektrumlu Kimyasal Önleyicileri için yüksek verimli tarama

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...