Name: a human blood-brain interface model to study barrier crossings by pathogens or medicines and their interactions with the brain
Uploaded: 2019-04-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Blood-Brain Interface Model to Study Barrier Crossings by Pathogens or Medicines and Their Interactions with the Brain at JoVE.com

इस अध्ययन Institut Pasteur से आंतरिक अनुदान द्वारा एक Incitative अनुदान (PTR ४३५) और एक अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था "Contrat de सौटीन à ला Recherche" Sanofi Pasteur द्वारा प्रदान करने के लिए Institut Pasteur । ए दा कोस्टा Sanofi द्वारा समर्थित-पाश्चर अनुदान और फ्लोरियन Bakoa एक पीएचडी ANRT द्वारा प्रदान की अनुदान के प्राप्तकर्ता है (एसोसिएशन Nationale डे ला Recherche एट डे ला Technologie) । हम उपयोगी चर्चाओं के लिए पीआर पियरे-ओलिवियर कौराउड और डॉ फ्लोरेंस मिलर के ऋणी हैं ।

1. Ntera के सेल संस्कृति काम/ब्स2 । डी 1 के बाद मिटिक hNeurons और hAstrocytes के एक सह संस्कृति तैयार करने के लिए (NT2-N/
नोट: यह Minibrain के घटक है (चित्रा 1).
<ol><li>Ntera/ब्स2. D1<ol>
<li>तरल नाइट्रोजन टैंक से जमे हुए कोशिकाओं क?...

इस अनुच्छेद में हम कैसे cellulo रक्त में एक बनाने के लिए प्रदर्शन/मस्तिष्क अंतरफलक, BBB-Minibrain, एक BBB मॉडल और मिश्रित मस्तिष्क मस्तिष्क कोशिकाओं (Minibrain) की एक संस्कृति के संयोजन से एक किट में । इस प्रणाली को जैविक रूप ...

मस्तिष्क एक गैर पारगम्य संरचना है कि मस्तिष्क पैरेन्काइमा और रक्त, रक्त मस्तिष्क बाधा (BBB) कहा जाता है के बीच आदान प्रदान प्रतिबंधित द्वारा प्रणालीगत संचलन से अलग है । ज्यादातर मस्तिष्क endothelial कोशिकाओं से बना है, BBB गतिशील astrocytes, परिसंवहनी microglia और पड़ोसी मस्तिष्क पैरेन्काइमा के ंयूरॉंस के साथ सूचना का आदान प्रदान । Bbb के तीन प्रमुख कार्यों के निर्माण और न्यूरोनल कार्यों के लिए आयनिक homeostasis के रखरखाव, पोषक तत्वों के साथ मस्तिष्क की आपूर्ति कर रहे हैं, और विषाक्त चोटों या रोगजनकों1,2के प्रवेश से सुरक्षा, जो योगदान करने के लिए मस्तिष्क होमियोस्टैसिस और उसके कार्यों के रखरखाव3। इस बाधा इतना कुशल है कि केवल कुछ दवाओं bbb4,5को पार कर सकते हैं । वर्तमान में, उपलब्ध तरीकों की भविष्यवाणी करने के लिए कि क्या एक अणु BBB पास होगा और मस्तिष्क में फैलाना पूर्व vivo अध्ययन से मिलकर बनता है ऑटोप्सी सामग्री, एमआरआई द्वारा मानव स्वयंसेवकों के मस्तिष्क में छवि ट्रैकिंग (चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग) या पीईटी (positon उत्सर्जन tomography) या फार्माकोडाइनेमिक्स और पशुओं में फार्माकोकाइनेटिक पूर्व नैदानिक अध्ययन6,7,8. इन तकनीकों और मॉडलों जैसे पीईटी के सीमित संकल्प और एमआरआई6,8की कम संवेदनशीलता के रूप में कुछ सीमाएं हैं, कठिनाई अणुओं यों तो करने के लिए (यानी, उदाहरण के लिए एंटीबॉडी आधारित अणुओं) कि खराब 7मस्तिष्क घुसना, और पूर्व नैदानिक अध्ययन उनके उच्च लागत और पशु परीक्षण के रिसॉर्ट के लिए ।
अंतिम बिंदु महत्वपूर्ण है क्योंकि, है 3R's नियमों के अनुसार, (प्रतिस्थापन, कमी और शोधन के पशु परीक्षण) विनियामक प्रशासन कहा है कि शोधकर्ताओं ने तुरंत वैज्ञानिक पशु के लिए सही विकल्प विकसित प्रयोग9,10,11,12,13,14,15.
पिछले दशकों में, bbb के विट्रो मॉडलों में कई का प्रस्ताव किया गया है16,17,18 फिल्टर झिल्ली पर खेती द्वारा ऐसी माउस, चूहा, गोजातीय और सुअर के रूप में विभिंन प्रजातियों से endothelial कोशिकाओं को संमिलित करता है । जहां तक मानव प्रजाति का संबंध है, प्राथमिक कोशिकाओं की दुर्लभ और कठिन उपलब्धता ने शोधकर्ताओं को मानव मॉडल को अमर मस्तिष्क endothelial कोशिकाओं या मानव व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं के आधार पर विकसित करने के लिए प्रेरित किया19,20, 21. इन बाधाओं के विट्रो में उचित bbb के surrogates है बशर्ते कि वे endothelial सेल मार्करों, तंग जंक्शन मार्करों, बहि: स्राव ट्रांसपोर्टरों, घुला वाहक, रिसेप्टर्स, और endothelial उत्तेजनाओं 20का जवाब व्यक्त करते हैं । कुछ bbb मॉडल endothelial कोशिकाओं और अंय सेल प्रकार (यानी, astrocytes, ंयूरॉंस या pericytes22,23,24) के साथ लेपित फिल्टर झिल्ली आवेषण का उपयोग कर रहे थे assayed । इन सह संस्कृतियों का लक्ष्य astrocytes/ंयूरॉंस या pericytes द्वारा घुलनशील कारकों के स्राव का लाभ लेने के द्वारा BBB शारीरिक विशेषताओं को बढ़ाने के लिए किया गया था ।
फिर भी, इन मॉडलों में से कोई भी शामिल है मस्तिष्क पैरेन्काइमा का अध्ययन करने के लिए और एक दवा उंमीदवार के भाग्य की भविष्यवाणी एक बार यह बाधा पारित कर दिया है । इसलिए, हमारे लक्ष्य के लिए एक एक किट में एक BBB मॉडल और मिश्रित मस्तिष्क कोशिकाओं की एक संस्कृति के संयोजन से cellulo रक्त/मस्तिष्क अंतरफलक, BBB-Minibrain में एक का निर्माण किया गया था । BBB-Minibrain एक संस्कृति एक multiwell सेल संस्कृति प्लेट की एक अच्छी तरह से डाला फिल्टर से मिलकर प्रणाली का उपयोग करता है । फिल्टर hcmec/D3 कोशिकाओं, एक मानव मस्तिष्क endothelial कोशिका लाइन है कि bbb दवा परीक्षण25,26,27के लिए अत्यधिक विश्वसनीय साबित कर दिया गया है के साथ लेपित है, bbb के रूप में । मिनिब्रेन, जो मानव ंयूरॉंस और astrocytes की एक सह-विभेदित संस्कृति ntera/ब्स2. D1 सेल लाइन28,29 के साथ मिश्रित मानव माइक्रोग्लाइकल सेल लाइन के साथ मिला है chme/Cl530 के अनुरूप अनुपात में माइक्रोग्लिया बनाम ंयूरून-31मस्तिष्क के astrocytes अनुपात, थाली के तल में अच्छी तरह से खेती की जाती है ।
BBB भर में दवाओं के पारित होने के अलावा और उनके भाग्य में पैरेन्काइमा, रक्त मस्तिष्क अंतरफलक cellulo मॉडल में मस्तिष्क में रोगजनकों के प्रवेश का पता करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण हो सकता है (neuroinvasiveness), मस्तिष्क में फैलाव (neurotropism) और विषाक्तता (neurovirulence) वे मस्तिष्क पैरेन्काइमा कोशिकाओं पर डालती कर सकते हैं । Neurovirulence और neurovirulence अध्ययन cellulo मॉडल में एक कुशल के विकास से लाभ और पशु मॉडल की जगह लाभप्रद होगा । Bbb-minibrain किट३२का उपयोग कर, हम दुर्लभ वायरल म्यूटेंट कि पीले बुखार वायरस (यानी, fnv-yfv३३,३४) के फ्रेंच न्यूरोट्रॉपिक वायरस तनाव में जमा की neuroinvasive phenotype का प्रदर्शन एक तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया बंद रहते yfv वैक्सीन और एक neuroregenerative और न्यूरोप्रोटेक्टिव biomolecule बुलाया neurovita के पारित होने (NV के रूप में पांडुलिपि में अब से कहा जाता है)३५। क्योंकि NV न तो स्वाभाविक रूप से कोशिका झिल्ली को पार करता है और न ही BBB, NV एक एकल श्रृंखला Llama कि BBB और एक कोशिका मर्मज्ञ अणु (सीपीएम)३६के रूप में कार्य सहित जैविक झिल्ली को पार की एंटीबॉडी के चर भाग (vhh) के साथ जुड़े हुए थे । Vhh के सीपीएम संपत्ति समविभव बिंदु और vhh३७की लंबाई पर निर्भर लगता है ।
यह cellulo परीक्षण में यह संभव है कि अणुओं को बाहर ले जाने से पहले संभावित BBB को पार कर सकता है, और एक ही समय में आदर्श के लिए अपने व्यवहार की भविष्यवाणी करने में सक्षम होने के लिए कर सकते है पैरेन्काइमा. इस प्रणाली को जैविक रूप से प्रासंगिक है और आसानी से स्थापित और सेल संस्कृति26,29,30,३८में प्रशिक्षित पेशेवरों द्वारा संभाल आसान है । ऐसे cellulo परीक्षण में ब्याज दो गुना होगा: एक हाथ पर पूर्व नैदानिक परीक्षणों की लागत को कम करने और दूसरी ओर पशु परीक्षण के उपयोग को कम करने ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>12 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-fluoro-2&#8217;deoxyuridine</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>F0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>85mm Petri Dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83-3902-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Nf200</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>N4142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-mercapto-ethanol</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHME/Cl5</td>
			<td>Unit&#233; de Neuroimmunologie Virale</td>
			<td>On request to Dr Lafon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMC</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>217274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytosine &#946;-D-arabinofuranoside</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>C1768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dark 96 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>31330-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endogro IV</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCME004</td>
			<td>endothelial cell medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>529121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV30015-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>252549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GIEMSA</td>
			<td>RAL Diagnostic</td>
			<td>320310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti Mouse</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>115-545-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti Rabbit</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>R37117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS with Ca2+-Mg2+</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>14025-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hCMEC/D3</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>CLU512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes 1M</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>15630-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoescht 33342</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>33263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminine</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>L6274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamin</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucifer Yellow</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>L0259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM 10X</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>21430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM 1X</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>42360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ntera/Cl2D.1</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1973</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS without Ca2+-Mg2+</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>14190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS-Ca2+-Mg2+</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>14040-091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Eurobio</td>
			<td>CXXPES00-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-d-Lysine</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>P1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qiashredder</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>79656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Collagen I</td>
			<td>Cultrex</td>
			<td>3443-100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic Acid All-Trans</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA purification kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>L4509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate 5.6%</td>
			<td>Eurobio</td>
			<td>CXXBIC00-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>11360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 Cell+ Flask</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83-1813-302</td>
			<td>Tissue culture polystyrene flask with specific surface treatment (Cell+) for sensitive adherent cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3460</td>
			<td>polyester porous membrane culture inserts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>T3924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Pure Water</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>10977-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uridine</td>
			<td>Merck-Sigma Aldrich</td>
			<td>U3750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>15040-033</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YFV-FNV</td>
			<td>IP Dakar</td>
			<td>Vaccine vial</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human blood-brain interface model to study barrier crossings by pathogens or medicines and their interactions with the brain

एक प्रासंगिक और cellulo bbb मॉडल में उनकी पैठ और बाधा और मस्तिष्क पैरेन्काइमा के साथ उनकी बातचीत के लिए एक उचित और विश्वसनीय पर तंत्रिका तंत्र दवाओं की जल्दी स्क्रीनिंग अभी भी एक अपूरित की जरूरत है । इस अंतर को भरने के लिए, हम cellulo मॉडल में एक 2D डिजाइन, BBB-Minibrain, एक पॉलिएस्टर झरनी झिल्ली संस्कृति एक त्रिकोणीय मानव मस्तिष्क कोशिकाओं (ंयूरॉंस, astrocytes और microglial कोशिकाओं की संस्कृति द्वारा गठित Minibrain के साथ मानव BBB मॉडल डालने के संयोजन के द्वारा) । Bbb-minibrain हमें एक न्यूरोप्रोटेक्टिव दवा उंमीदवार (जैसे, neurovita) के परिवहन का परीक्षण करने की अनुमति दी, bbb के माध्यम से, न्यूरॉन्स के लिए इस अणु के विशिष्ट लक्ष्यीकरण निर्धारित करने के लिए और दिखाने के लिए कि दवा की न्यूरोप्रोटेक्टिव संपत्ति के बाद संरक्षित किया गया था दवा बीबीबी को पार कर गई थी । हम यह भी दिखा दिया है कि BBB-Minibrain एक दिलचस्प मॉडल endothelial कोशिकाओं बाधा भर में वायरस के कणों के पारित होने का पता लगाने और न्यूरोइनवेसिव वायरस कणों द्वारा Minibrain के संक्रमण की निगरानी करने के लिए गठन किया है । BBB-Minibrain एक विश्वसनीय प्रणाली, सेल संस्कृति प्रौद्योगिकी और उपचार या अपमान के बाद मस्तिष्क कोशिकाओं phenotypes के भविष्य कहनेवाला में प्रशिक्षित शोधकर्ता के लिए संभालना आसान है । इस तरह के cellulo परीक्षण में ब्याज twofold होगा: एक हाथ पर दवा के विकास में जल्दी कदम derisking शुरू करने और दूसरी ओर पशु परीक्षण के उपयोग को कम करने ।

BBB-Minibrain रक्त मस्तिष्क अंतरफलक के cellulo प्रयोगात्मक मॉडल में एक है ।
BBB-Minibrain पॉलिएस्टर झिल्ली संस्कृति डालने प्रणाली पर ऊपरी स्तर पर एक रक्त डिब्बे और रक्त मस्तिष्क अ...

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A Human Blood-Brain Interface Model to Study Barrier Crossings by Pathogens or Medicines and Their Interactions with the Brain

यहां हम एक cellulo bbb (रक्त मस्तिष्क बाधा) में एक की स्थापना का वर्णन प्रोटोकॉल वर्तमान-minibrain पॉलिएस्टर झरवाला झिल्ली संस्कृति डालने प्रणाली आदेश में जैव अणुओं या एक मानव bbb भर में संक्रामक एजेंटों के परिवहन का मूल्यांकन करने के लिए और उनके पड़ोसी मस्तिष्क कोशिकाओं पर शारीरिक प्रभाव ।

एक मानव रक्त मस्तिष्क इंटरफेस मॉडल रोगजनकों या दवाओं और मस्तिष्क के साथ उनकी बातचीत द्वारा बैरियर क्रॉसिंग का अध्ययन करने के लिए

The early screening of nervous system medicines on a pertinent and reliable in cellulo BBB model for their penetration and their interaction with the ...

यह मानव रक्त-मस्तिष्क इंटरफेस मॉडल न्यूरो सिस्टम में अणुओं के हस्तांतरण का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है। साथ ही रोगाणुओं के अध्ययन के लिए एक संक्रमित मस्तिष्क दर्द ट्यूमर तक पहुंचने । इस रक्त मस्तिष्क बाधा या BBB मॉडल के लिए मिनी मस्तिष्क के अलावा हमारे रोगजनकों और अणुओं कि BBB मस्तिष्क में व्यवहार का कारण के अध्ययन की अनुमति देता है ।प्रक्रिया का त्याग फ्लोरियन बाकाओ, मेरी प्रयोगशाला के लिए पीएचडी छात्रों होगा । एक BBB मिनी मस्तिष्क पॉलिएस्टर झिल्ली संस्कृति डालने डिवाइस स्थापित करने के लिए, प्रति एकाग्रता अपूर्ण एंडोथेलियल सेल माध्यम डालने के लिए चौथी कोशिकाओं के लिए एक पांच गुना 10 के लिए कोशिकाओं को पतला और प्रत्येक पॉलिएस्टर झिल्ली संस्कृति के लिए कोशिकाओं की उचित मात्रा जोड़ने के लिए एक 12 अच्छी तरह से थाली में डालने । फिर, आवेषण और सेल संस्कृति इनक्यूबेटर रखें जब तक कि कोशिकाएं 100% तक न पहुंच जाएं।पॉली-डी के एक मिलीलीटर के साथ एक 12 अच्छी तरह से थाली पकड़ो-कमरे के तापमान पर चार घंटे के लिए उसे अच्छी तरह से lysine । रात भर अच्छी तरह से लेमिनिन के एक मिलीलीटर के बाद । लैमिनिन को एंडोथेलियल सेल मीडियम के एक मिलीलीटर के साथ बदलें, जो 5% भ्रूण गोजातीय सीरम, या एफबीएस के साथ पूरक है।एक घंटे के लिए एक इनक्यूबेटर में जगह रखें। मिनी अनाज तैयार करने के लिए धीरे CHME क्लोन पांच कोशिकाओं में मानव न्यूरॉन्स एस्ट्रोसाइट्स की कोशिश। सेल छर्रों को पूर्ण एंडोथेलियल सेल माध्यम से संबद्ध करें।पांचवें न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स को 3.6 गुना 10 पर गिनती करने के बाद 0.4 गुना 10 से पांचवें CHME क्लोन पांच कोशिकाओं को अच्छी तरह से प्रति अच्छी तरह से एक 12 अच्छी तरह से प्लेट है। और 12 अच्छी तरह से थाली बीज । बीज बोने के 24 घंटे बाद बीबीबी मिनी मस्तिष्क का निर्माण करने के लिए उपयोग किए गए माध्यम को ताजा पूर्ण एंडोथेलियल सेल माध्यम से प्रतिस्थापित करें और मिनी मस्तिष्क कोशिकाओं पर सेरेब्रल माइक्रो वेस्कुलर एंडोथेलियल सेल कोटेड पॉलिएस्टर झिल्ली संस्कृति आवेषण स्थानांतरित करें।इसके बाद बीबीबी कई ब्रेन डिवाइस को इनक्यूबेटर में रखें। बीबीबी मिनी ब्रेन एंडोथेलियल पारगम्यता को मान्य करने के लिए एक नई 12 अच्छी प्लेट में प्रति अच्छी तरह से परिवहन बफर के 1.5 मिलीलीटर जोड़ें। और एंडोथेलियल सेल बैरियर को प्रभावित किए बिना माध्यम को ध्यान से हटाने के लिए प्रत्येक फ़िल्टर को उल्टा करें।परिवहन बफर भरी प्लेट के एक कुएं में प्रत्येक फ़िल्टर रखें, और प्रत्येक अच्छी तरह से लूसिफ़ेर पीले रंग के 0.5 मिलीलीटर जोड़ें। फिर एक नए परिवहन बफर में फिल्टर स्थानांतरित करने से पहले 10 मिनट के लिए इनक्यूबेटर में थाली जगह 12 अच्छी तरह से थाली भरा । एक BBB कई मस्तिष्क डिवाइस की स्थापना के बाद के रूप में प्रदर्शन किया, पीले बुखार वायरस पतला और 2% एफपीएस एंडोथेलियल सेल माध्यम के ५० माइक्रोलीटर के फ्रांसीसी न्यूरोट्रोफिक वायरस तनाव की ३५०० प्लेटफार्मिंग इकाइयों को जोड़ने के लिए, बहुत ध्यान से, चमकदार डिब्बे के शीर्ष पर ।वायरस के बिना 2% एफबीएस एंडोथेलियल सेल माध्यम के 50 माइक्रोलीटर के साथ नियंत्रण बीबीबी मिनी मस्तिष्क टीका। फिर वायरस 24 घंटे के लिए इनक्यूबेटर में BBB कई मस्तिष्क डिवाइस बेनकाब जगह है । अगले दिन, एंडोथेलियल सेल पारमेबिलिटी और एक साथी के रूप में बस के रूप में प्रदर्शन निर्धारित करने के लिए आवेषण हटा दें।बीच के डिब्बे में वायरस टाइटर निर्धारित करने के लिए प्रत्येक कुएं से नमूने का एक मिलीलीटर बचाएं। आलिंद के नीचे धीरे-धीरे चमकदार डिब्बे को एब्ल्यूमिनल डिब्बों में लीक होने से बचने के लिए। रक्त मस्तिष्क बाधा में बायोमॉलिक्यूलर को लक्षित करने वाले न्यूरॉन के परिवहन का अध्ययन करने के लिए, आवेषण में ब्याज के जैव अणु जोड़ें और प्लेट को सेल कल्चर इनक्यूबेटर में वापस करें।24 घंटे के बाद दूर से आवेषण और एंडोथेलियल पारीयता का निर्धारण करें। फिर मिनी मस्तिष्क के भीतर ब्याज के जैव अणु की उपस्थिति का पता लगाने के लिए उपयुक्त एंटीबॉडी के साथ कई मस्तिष्क कोशिकाओं को दाग। मानव सेरेब्रल माइक्रो वैस्कुलर एंडोथेलियल कोशिकाएं रेक्एप्टर, एफफ्लक्स ट्रांसपोर्टर या ट्रांसपोर्टरों के सभी सबसेट को व्यक्त करती हैं जो उनके जैविक कार्यों के लिए प्रमुख प्रासंगिक प्रोटीन हैं।येलो फीवर वायरस के कुछ फ्रेंच न्यूरो ट्रॉपिक वायरस स्ट्रेन 24 घंटे में ब्लड ब्रेन बैरियर को पार कर सकते हैं । वायरस तो मस्तिष्क की कोशिकाओं के अंदर वायरस के गुणा से अगले दो दिनों के लिए बढ़ाना । इसके अलावा, विशिष्ट वायरल बायोमार्कर की अभिव्यक्ति तब उत्तेजित होती है जब यह न्यूरो इनवेसिव वायरल आबादी मिनी मस्तिष्क कोशिकाओं पर क्रमिक रूप से चली जाती है और वायरल लोड से सख्ती से सहसंबंधित होती है।कंपार्टमेंट सेल की सीमा में जोड़े जाने के बाद अणु न्यूरो-टैग न्यूरोविटा रक्त मस्तिष्क बाधा को पार करता है और मानव न्यूरॉन्स को लक्षित करने में सक्षम है। सेल मर्मज्ञ अणु न्यूरो टैग डेल्टा न्यूरोविटा एंडोथेलियल सेल बैरियर को पार करता है, लेकिन मानव न्यूरॉन्स को कम कुशलता से लक्षित करता है। छोटे मध्य डिब्बे में जोड़े जाने के बाद, कोशिका मर्मज्ञ अणु न्यूरो-टैग न्यूरोविटा रक्त मस्तिष्क बाधा को पार करता है और घायल होने के बाद मानव न्यूरॉन्स के अक्षों को पुनर्जीवित करने में सक्षम होता है।कोशिका मर्मज्ञ अणु न्यूरो-टैग न्यूरोविटा डेल्टा के विपरीत, न्यूरोविटा का निष्क्रिय रूप। जब एक्सोन खरोंच सेल मर्मज्ञ अणु न्यूरो टैग न्यूरोविटा के बाद लागू घायल न्यूरॉन्स और एक्स जोनल उत्थान के न्यूरो संरक्षण को ट्रिगर करता है। प्रथाओं के अच्छे लिए सख्ती से।आई-सेल मार्ग का उपयोग नहीं करें। मध्यम और क्षेत्रों की कुछ झलक बनाए रखने और माइकोप्लाज्मा की अनुपस्थिति के लिए जांच करने की कोशिश करें। मिनी मस्तिष्क और दवाओं के बीच बातचीत ब्याज के रोगाणुओं को आगे ट्रांसक्रिप्ट द्वारा अध्ययन किया जा सकता है जो इस या शास्त्रीय जीव विज्ञान को तकनीक कहा जाता है।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Generation of an Immortalized Murine Brain Microvascular Endothelial Cell Line as an In Vitro Blood Brain Barrier Model

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एक के रूप में एक अमर murine मस्तिष्क Microvascular Endothelial सेल लाइन का सृजन<em&gt; इन विट्रो में</em&gt; रक्त मस्तिष्क बाधा मॉडल

Epithelial and endothelial cells (EC) are building paracellular barriers which protect the tissue from the external and internal environment. The ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

कार्यात्मक न्यूरोइमेजिंग अल्ट्रासोनिक रक्त मस्तिष्क बाधा विघटन और मैंगनीज बढ़ाकर एमआरआई का उपयोग

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Neurodegenerative रोग के एक माउस मॉडल में FITC-लेबल एल्ब्युमिन की नसों में अर्क से रक्त मस्तिष्क बाधा पारगम्यता का आकलन

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

High-resolution Confocal Imaging of the Blood-brain Barrier: Imaging, 3D Reconstruction, and Quantification of Transcytosis

रक्त मस्तिष्क बाधा के उच्च संकल्प फोकल इमेजिंग: इमेजिंग, 3 डी पुनर्निर्माण, और Transcytosis के ठहराव

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic multicellular interface that regulates the transport of molecules between the circulation and the brain. ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

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एक Vivo में रक्त मस्तिष्क बाधा विघटन का एक चूहा मॉडल में कोरोनरी स्ट्रोक का आकलन

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A Benchtop Approach to the Location Specific Blood Brain Barrier Opening using Focused Ultrasound in a Rat Model

एक चूहा मॉडल में केंद्रित अल्ट्रासाउंड का उपयोग कर स्थान विशिष्ट रक्त मस्तिष्क बाधा खोलने के लिए एक बेंचटॉप दृष्टिकोण

Stereotaxic surgery is the gold standard for localized drug and gene delivery to the rodent brain. This technique has many advantages over systemic ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

कृंतक मस्तिष्क के नमूनों के एक सेट में पोस्ट-स्ट्रोक सेरेब्रल एडीमा, इनफारेक्ट जोन और रक्त-मस्तिष्क बाधा ब्रेकडाउन को मापने

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Focused Ultrasound Induced Blood-Brain Barrier Opening for Targeting Brain Structures and Evaluating Chemogenetic Neuromodulation

मस्तिष्क संरचनाओं को लक्षित करने और केमोजेनेटिक न्यूरोमॉड्यूलेशन का मूल्यांकन करने के लिए केंद्रित अल्ट्रासाउंड प्रेरित रक्त-मस्तिष्क बाधा खोलना

Acoustically Targeted Chemogenetics (ATAC) allows for the noninvasive control of specific neural circuits. ATAC achieves such control through a ...

Transendothelial Resistance Measurement to Assess Cell Barrier Integrity

Barrier Functional Integrity Recording on bEnd.3 Vascular Endothelial Cells via Transendothelial Electrical Resistance Detection

Applications of TEER Detection to Assess Cell Barrier Integrity (Video) | JoVE

बैरियर फंक्शनल इंटीग्रिटी रिकॉर्डिंग bEnd.3 पर ट्रांसेंडोथेलियल इलेक्ट्रिकल रेजिस्टेंस डिटेक्शन के माध्यम से वैस्कुलर एंडोथेलियल सेल

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic physiological structure composed of microvascular endothelial cells, astrocytes, and pericytes. By coordinating ...

A 3D Blood-Brain Barrier Model Derived from Human Pluripotent Stem-Cells

Reconstruction of the Blood-Brain Barrier In Vitro to Model and Therapeutically Target Neurological Disease

A Personalized Approach Towards Investigating Alzheimer's Disease Using an In Vitro Blood-Brain Barrier Model (Video) | JoVE

मॉडल और चिकित्सीय रूप से न्यूरोलॉजिकल रोग को लक्षित करने के लिए इन विट्रो में रक्त-मस्तिष्क बाधा का पुनर्निर्माण

The blood-brain barrier (BBB) is a key physiological component of the central nervous system (CNS), maintaining nutrients, clearing waste, and protecting ...