Name: patient-derived orthotopic xenograft models for human urothelial cell carcinoma and colorectal cancer tumor growth and spontaneous metastasis
Uploaded: 2019-05-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis at JoVE.com

Yazarlar Brian Reuter, Danielle Bertoni, Peter Miller, ve Shannon McChesney onların mükemmel teknik destek için bu çalışmaları başlatmak için yardımcı teşekkür ederiz. Yazarlar da Heather yeşil Matrana, Margaret Variano, Sunil taşa, ve Maria Latsis yardım için hasta ve tümör numuneleri sağlamak için teşekkür ederiz.

Bu hayvan çalışmalarında açıklanan tüm yöntemler, Ochsner sağlık sistemi kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi onaylı yönergeler altında ve hayvan araştırma kurallarına uygun olarak yapılmıştır. Bu çalışmanın tüm hasta tümörleri, Ochsner Health System araştırma Inceleme kurulu ve ınsan üzerindeki kurumsal komite 'nin etik standartlarına uygun olarak kanser rezeksiyon ameliyatı geçiren hastalarından toplanmıştır. Deneme. Ochsner Health System 'de kurulu sertifikalı patologla...

<ol>
	<li>Sundlisaeter, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphangiogenesis+in+colorectal+cancer--prognostic+and+therapeutic+aspects.">Lymphangiogenesis in colorectal cancer--prognostic and therapeutic aspects.</a> International Journal of Cancer. Journal international du cancer. 121, 1401-1409 (2007).</li><li>Gout, S., Huot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cancer+microenvironment+in+metastasis:+focus+on+colon+cancer.">Role of cancer microenvironment in metastasis: focus on colon cancer.</a> Cancer Microenvironment. 1, 69-83 (2008).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: a Cancer Journal for Clinicians. 68, 7-30 (2018).</li><li>Hautmann, R. E., de Petriconi, R. C., Pfeiffer, C., Volkmer, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radical+cystectomy+for+urothelial+carcinoma+of+the+bladder+without+neoadjuvant+or+adjuvant+therapy:+long-term+results+in+1100+patients.">Radical cystectomy for urothelial carcinoma of the bladder without neoadjuvant or adjuvant therapy: long-term results in 1100 patients.</a> European Urology. 61, 1039-1047 (2012).</li><li>Stein, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radical+cystectomy+in+the+treatment+of+invasive+bladder+cancer:+long-term+results+in+1,054+patients.">Radical cystectomy in the treatment of invasive bladder cancer: long-term results in 1,054 patients.</a> Journal of Clinical Oncology. 19, 666-675 (2001).</li><li>Lerner, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rationale+for+en+bloc+pelvic+lymph+node+dissection+for+bladder+cancer+patients+with+nodal+metastases:+long-term+results.">The rationale for en bloc pelvic lymph node dissection for bladder cancer patients with nodal metastases: long-term results.</a> The Journal of Urology. 149, 758-764 (1993).</li><li>Poulsen, A. L., Horn, T., Steven, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radical+cystectomy:+extending+the+limits+of+pelvic+lymph+node+dissection+improves+survival+for+patients+with+bladder+cancer+confined+to+the+bladder+wall.">Radical cystectomy: extending the limits of pelvic lymph node dissection improves survival for patients with bladder cancer confined to the bladder wall.</a> The Journal of Urology. 160, 2015-2019 (2020).</li><li>Margolin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+stromal+cells+enhance+drug-resistant+colon+cancer+cell+tumor+formation+through+SDF-1alpha/CXCR4+paracrine+signaling.">Lymph node stromal cells enhance drug-resistant colon cancer cell tumor formation through SDF-1alpha/CXCR4 paracrine signaling.</a> Neoplasia. 13, 874-886 (2011).</li><li>Vermeulen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+activity+defines+colon+cancer+stem+cells+and+is+regulated+by+the+microenvironment.">Wnt activity defines colon cancer stem cells and is regulated by the microenvironment.</a> Nature Cell Biology. 12, 468-476 (2010).</li><li>Margolin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+critical+roles+of+tumor-initiating+cells+and+the+lymph+node+stromal+microenvironment+in+human+colorectal+cancer+extranodal+metastasis+using+a+unique+humanized+orthotopic+mouse+model.">The critical roles of tumor-initiating cells and the lymph node stromal microenvironment in human colorectal cancer extranodal metastasis using a unique humanized orthotopic mouse model.</a> FASEB Journal. 29, 3571-3581 (2015).</li><li>Gills, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+patient-derived+orthotopic+xenograft+model+enabling+human+high-grade+urothelial+cell+carcinoma+of+the+bladder+tumor+implantation,+growth,+angiogenesis,+and+metastasis.">A patient-derived orthotopic xenograft model enabling human high-grade urothelial cell carcinoma of the bladder tumor implantation, growth, angiogenesis, and metastasis.</a> Oncotarget. 9, 32718-32729 (2018).</li><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+models:+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research.">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4, 998-1013 (2014).</li><li>Hiroshima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+mouse+models+of+cancer+need+to+be+orthotopic+in+order+to+evaluate+targeted+anti-metastatic+therapy.">Patient-derived mouse models of cancer need to be orthotopic in order to evaluate targeted anti-metastatic therapy.</a> Oncotarget. 7, 71696-71702 (2016).</li><li>Kim, H. S., Zhang, X., Klyushnenkova, E., Choi, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+germinal+center+B+lymphocyte+proliferation+by+an+FDC-like+cell+line,+HK.">Stimulation of germinal center B lymphocyte proliferation by an FDC-like cell line, HK.</a> The Journal of Immunology. 155, 1101-1109 (1995).</li><li>Hite, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Optimal+Orthotopic+Mouse+Model+for+Human+Colorectal+Cancer+Primary+Tumor+Growth+and+Spontaneous+Metastasis.">An Optimal Orthotopic Mouse Model for Human Colorectal Cancer Primary Tumor Growth and Spontaneous Metastasis.</a> Diseases of the Colon and Rectum. 61, 698-705 (2018).</li><li>Jager, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intramural+inoculation+of+orthotopic+bladder+cancer+xenografts:+a+novel+high-precision+approach.">Ultrasound-guided intramural inoculation of orthotopic bladder cancer xenografts: a novel high-precision approach.</a> PloS One. 8, e59536 (2013).</li><li>Schirner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin+alpha5beta1:+a+potent+inhibitor+of+experimental+lung+metastasis.">Integrin alpha5beta1: a potent inhibitor of experimental lung metastasis.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 16, 427-435 (1998).</li><li>Ricci-Vitiani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+expansion+of+human+colon-cancer-initiating+cells.">Identification and expansion of human colon-cancer-initiating cells.</a> Nature. 445, 111-115 (2007).</li><li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+cancer+stem+cells+dictate+tumor+growth+and+resist+cell+death+by+production+of+interleukin-4.">Colon cancer stem cells dictate tumor growth and resist cell death by production of interleukin-4.</a> Cell Stem Cell. 1, 389-402 (2007).</li><li>Lee, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+establishment+features+of+orthotopic+murine+bladder+cancer+models.">Tumor establishment features of orthotopic murine bladder cancer models.</a> Korean Journal of Urology. 53, 396-400 (2012).</li><li>Hadaschik, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging.">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU International. 100, 1377-1384 (2007).</li><li>Silinsky, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD+133++and+CXCR4++colon+cancer+cells+as+a+marker+for+lymph+node+metastasis.">CD 133+ and CXCR4+ colon cancer cells as a marker for lymph node metastasis.</a> The Journal of Surgical Research. 185, 113-118 (2013).</li></ol>

Metastatik hastalık çoğu kanser hastası mortaliteleri için sorumludur. Klinik öncesi terapötik testlerde, insan tümörü büyümesini spontan uzak organ metastazı ile en yakından taklit eden fare modelleri kurmak çok önemlidir. İmplante edilen hasta tümörü ile duvar modellerini kullanarak kanser hücreleri türetilmiştir (xenografts) tümör biyoloji ve öngörü biyolojik daha iyi bir anlayış yanı sıra test ve yeni tedaviler Antineoplastik etkileri tahmin sağlar18. Bir çok ...

Lenf nodu (LN) metastazının, mesane ve kolorektal kanser (CRC)1,2' nin yüksek dereceli ürogariyal Hücre Karsinomu (UCC) dahil olmak üzere birçok katı organ malignitesinde kötü prognostik bir gösterge olduğunu göstermiştir. Kas-invaziv UCC (MıUCC) olan hastaların yarısından fazlası, klinikte lokalize hastalık için küratif tedaviye rağmen, 5 yıl içinde metastanca gelişecek ve ölür. Metastatik CRC ABD 'de kanser ile ilgili ölüm önde gelen nedenidir.
Tahmini 81.190 yeni hastalar ve 17.240 kanser spesifik ölümlerin, ABD 'de, mesane3,4UCC nedeniyle 2018 yılında gerçekleşmesi bekleniyor. Hastalar ağırlıklı olarak (% 70) Kas invazif olmayan hastalık ile mevcut,% 30 MıUCC5olacaktır. Klinikte lokalize hastalık için küratif tedaviye (radikal cystektomi [RC] veya sistemik kemoterapi olmadan) rağmen, mesane MIUCC olan hastaların yarısı hala metasürler geliştirecek ve 5 yıl içinde ölmek3. RC6,7,8' deki hastaların yaklaşık% 20 −% 25 ' inde lenf nodu tutulumu bulunmuştur. LN pozitif hastalarda beş yıllık hayatta kalma oranı, RC 'den sonra bile% 35 ' den az, UCC hastalarında prognoz için önemli bir negatif öngörü olarak LN tutulumu öneriyor.
Kolorektal kanser, Amerika Birleşik Devletleri 'nde hem erkek hem de kadınlarda teşhis edilen üçüncü en yaygın kanserdir. Hastanın sonuçları büyük ölçüde invazyonu, LN tutulumu ve uzak organ metastaz derinliği gibi tümör özelliklerine ve tümör mikroortamına bağlıdır. Tarama ve etkili ameliyatlar nedeniyle son on yılda CRC 'deki mortalite oranı azalsa da, CRC hastalarının yaklaşık% 50 ' si metasrat veya tekrarlayan hastalık9' da gelişecektir.
Küçük hayvan modelleri, tümör progresyonu ve farklı metastatik desenleri incelemek için hızlandırılabilen, tekrarlanabilir ve değiştirilebilir bir platform sağlar. Şu anda, hastalarda görülen CRC ve UCC metasrik olarak taklit edilen xenograft modelleri tanımlanmıştır. Kanser uzak metastaz primer rota lenfatik Spread yoluyla. Yeni araştırma LNs benzersiz bir mikroçevre ile tümörlerin sağlamak ve sadece sadece sabit hedefler nerede kanser hücrelerinin geçmeli geçiş olduğunu göstermektedir, aynı zamanda metastatik süreçte kanser hücreleri ile etkileşim tarafından ayrılmaz bir rol oynar. Gerçekten de, çalışmalarımız, tümör progresyonu ve metastacıları eğitmek ve teşvik etmek yanı sıra, ın stromal mikroçevre da CRC10,11ilaç direnci sorumlu olduğunu keşfetti. Laboratuvarımız son zamanlarda, in stromal hücrelerinin (lnscs) CRC ve uccs üzerinde hasta tarafından türetilen ortootopik xenograft (PDOX) fare modellerini kullanarak tümör etkilerini doğruladı12,13.

PDOX modellerini geliştirmek translasyonel kanser araştırması için önemli bir platform sağlar14,15. PDOX modelleri, donör tümörlerinin temel histolojik ve genetik özelliklerini koruyarak, pasajlar arasında kararlı kalır ve translasyonel kanser araştırması için iyi platformlar yapar12,15. PDOX modelleri preklinik ilaç değerlendirmesi, biyomarker tanımlaması ve klinik sonuçların öngörülerine izin veren kişiselleştirilmiş tıp stratejilerinin preklinik değerlendirilmesi için kullanılmaktadır. Şu anda, LN tutulumunun önemini dikkate alan ve CRC ve UCC 'de primer tümör ve uzak organ metastaz sürekli olarak yeniden üretebilmiyor, açıklanan xenograft modelleri yoktur. Bu çalışmada, ıNSC tutulumu ile metastatik CRC ve UCC hastalıklarının çoğaltılması ile NOD/SCıD farelerinde PDOX modellerinin gelişimini tarif ediyoruz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Avidin-biotin-peroxidase</td>
			<td>Vector Labs Inc</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated secondary antibody</td>
			<td>Vector Labs Inc</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV (1.5 mg/mL)</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LS004189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I (0.1 mg/mL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin (150 mg/kg)</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>122796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin (10% neutral buffered)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>46129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutamine (2 nM)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Removal Cream</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co., Inc</td>
			<td>1 (800) 248-8820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH30016.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase (20 mg/mL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>108333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luc/RFP-lentivirus</td>
			<td>From our collaborators. See reference 13: Gills, J. et al. A patient-derived orthotopic xenograft model enabling human high-grade urothelial cell carcinoma of the bladder tumor implantation, growth, angiogenesis, and metastasis. Oncotarget. 9, 32718-32729, doi:10.18632/oncotarget.26024 (2018).</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McCoy&#8217;s medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>110862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin/streptomycin 100 mL (100 U/mL)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Medium</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>110636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Oxygen</td>
			<td>Airgas Inc</td>
			<td>OX USP200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% CO2</td>
			<td>Airgas Inc</td>
			<td>CD USPE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-8 week old NOD/SCID Mice (male)</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>001303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-8 week old NOD/SCID Mice (female)</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>001303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki-67 Rabbit Monoclonal Antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>RM-9106-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m cell strainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell strainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-771-19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>11799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>15762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>150 mm Tissue Culture Dish</td>
			<td>USA Scientific Inc</td>
			<td>CC7682-3614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well plate</td>
			<td>USA Scientific Inc</td>
			<td>CC7682-7596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Symmetry Surgical Inc</td>
			<td>06-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Symmetry Surgical Inc</td>
			<td>02-2011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% CO2 humidified incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescent (BLI) Imaging Machine</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>CLS136334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BLI Imaging Machine Software</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>CLS136334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>366830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deconvoluting Microscope</td>
			<td>Intelligent Imaging Innovations</td>
			<td>Marianas</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deconvoluting Microscope Imaging Software</td>
			<td>Intelligent Imaging Innovations</td>
			<td>+1 (303) 607-9429 x1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital caliper</td>
			<td>Fowler Tools and Instruments</td>
			<td>54-115-330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Precision Instruments LLC</td>
			<td>(504) 228-0076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrosurgical generator</td>
			<td>ValleyLab</td>
			<td>FORCE1C20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Induction Chamber</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>119038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>American Optical Corporation</td>
			<td>829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet Aid</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>13-681-15E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipet (10 mL)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1254.001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived orthotopic xenograft models for human urothelial cell carcinoma and colorectal cancer tumor growth and spontaneous metastasis

Kanser hastaları, mesane ve kolorektal kanseri (CRC) hem yüksek dereceli ürosityal Hücre Karsinomu (HG-UCC) içinde lenf nodu (LN) tutulumu olduğunda kötü prognostiklere sahiptir. Kas-invaziv UCC olan hastaların% 50 ' den fazla, klinik lokalize hastalık için küratif tedaviye rağmen, metastaz geliştirmek ve 5 yıl içinde ölmek, ve metastatik CRC ABD 'de kansere bağlı ölümlerin önde gelen nedenidir. Hastalarında sürekli olarak UCC ve CRC metasrik taklit eden xenograft modelleri gereklidir. Bu çalışmada primer tümör büyümesi için UCC ve CRC 'nin hasta türevi ortootopik xenograft (PDOX) modelleri ve LN stromal hücrelerinin etkisi altında spontan metastaz modeli, insan metastatik hastalıklarının ilaç taraması için ilerlemesini taklit etmeyi amaçlamaktadır. HG-UCC ve kolorektal adenokarsinoma için rezeksiyon yapılarak, sırasıyla taze UCC ve CRC tümörleri elde edildi. LN stromal Cell (LNSC) Analog HK hücreleri ile ortak inoküle, luciferase-etiketli UCC hücreleri intra-vesically vardı (ıB) kadın olmayan obez diyabetik/şiddetli kombine immünyetmezlik (NOD/SCıD) fareler, ve CRC hücreleri intra-rektik edildi (IR) içine enjekte Erkek NOD/SCıD fareler. Tümör büyümesi ve metassel, Bioluminesans görüntüleme (BLı) kullanılarak haftalık olarak izleniyor. Kurban üzerine, primer tümörler ve fare organları hasat edildi, tartıldı, ve formalin-hematoxylin ve eozin ve immünhistokimya boyama için sabit. Benzersiz PDOX modellerinde, xenograft tümörleri hasta ön implantasyon tümörlerine benzerdir. HK hücrelerinin varlığında, her iki model de BLı ve tümör ağırlıkları ile ölçülen yüksek tümör implantasyon oranları, 83,3% UCC ve% 96,9 CRC için, ve yüksek uzak organ metastaz oranları (% 33,3 tespit karaciğer veya akciğer metastaz için UCC ve% 53,1 CRC için). Buna ek olarak, her iki model yordamdan sıfır mortalite vardır. İnsan HG-UCC ve CRC için benzersiz, tekrarlanabilir PDOX modelleri kurduk, bu da tümör oluşumuna, büyümesini ve metasük çalışmalarına izin verir. Bu modellerde, yeni terapötik ilaçların test edilmesi verimli ve klinik olarak mimetic bir şekilde yapılabilir.

UCC PDOX modelinde, UCC hastaları ' BlCaPt15 veya BlCaPt37 hücreleri intra-vesically (ıB), HK hücrelerinin varlığını kadın NOD/SCıD fare mesane (Şekil 1a) içine aşıldı. Yirmi beş dışarı otuz (83,3%) hayvanlar primer tümörlerin oluşturduğu ve haftalık BLI (Şekil 1B, C ve Tablo 1) dayalı zaman bağımlı primer tümör büyümesi gösterilir. Benzer şekilde, CRC PDOX mode...

Watch this Scientific Journal Video about Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis at JoVE.com

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Bu protokol, yüksek dereceli ürosityal Hücre Karsinomu hücrelerinin intra-vesically instilling veya intra-rektal enjekte kolorektal kanser hücreleri olmayan obez diyabetik/şiddetli kombine tarafından hasta türeyen ortootopik xenograft modellerinin oluşturulması açıklanmaktadır immüneksikliği (NOD/SCıD) primer tümör büyümesi için fareler ve lenf nodu stromal hücrelerin etkisi altında spontan metastaz, hangi insan metastatik hastalıkların ilerlemesini taklit.

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Modeller sürekli lenf düğümleri ile etkileşim yoluyla kanser metastazı taklit etmek için gerekli olan. Hem kolorektal kanser li hem de mesanenin ürotelyal hücreli kanseri olan hastalarda. Bu yazıda açıklanan ortotopik knenografik modellerimiz bu önemli biyolojik soruların cevapılmasına ve yeni tedavilerin etkin ve klinik olarak uygun bir şekilde test edilebilebilir.Farelerde üretilen ortotopik ksenogreft tümörlerimiz hastaların tümörüne benzer. Lenf nodu stromal hücrelerinin varlığında her iki modelde de daha yüksek tümör implantasyonu ve uzak organ metastazı oranları ve insan metastatik desenleri taklit eden konumlar vardır. Ayrıca, her iki hayvan modelinde de usule bağlı mortalite sıfırdır.Ötenazi li farelerden hasta kaynaklı tümörleri çıkardıktan sonra, laminaakış kaputunun altındaki petri kabında mümkün olduğunca küçük olan pozitif tümör parçalarını kıymak için steril cerrahi makas kullanın. Tümör parçalarını steril 50 mL konik tüpe aktarın. Sindirim çözeltisi hazırlamak için, kollajenaz tip 4 10 mL, hyaluronidaz 80 mikrolitre ve deoksiribonükle azm 1 ila 40 mL HBSS ve ters karıştırarak 160 mikrolitre ekleyin.Kıyılmış tümöre 35-40 mL sindirim çözeltisi ekleyin ve periyodik güçlü sallayarak 2 saat boyunca sürekli rotasyon ile 37 santigrat derecede kuluçka. Sindirim sonrası enkaz kaldırmak için, steril 100 mikrometre hücre süzgeci ile sindirilmiş tümör filtre 40 mikrometre hücresüz ile filtrasyon her zaman bir 50 mL tüp üzerinden akışı kaydederek ve enkaz atarak. Serbest hücreleri yıkamak için, akışa 20 mL HBSS ekleyin ve 5 dakika boyunca 329 kez yer çekiminde santrifüj edin.Supernatant aspire ve HBSS 30 mL pelet resuspend. Transfer 100, 000 tümör hücreleri steril 15 mL konik tüp ve eklemek 300, 000 önceden hazırlanmış taze HK hücreleri. Hücreleri 5 dakika boyunca 329 kez yer çekiminde santrifüj edin ve aspirasyonla süpernatant'ı atın.Hücreleri tam RPMI ortamında yeniden askıya alın ve kullanıma hazır olana kadar buzda tutun. UCC hücre enjeksiyonu için hayvan hazırlamak için 6-8 haftalık kadın NOD-SCID fare alt sırt tıraş için epilasyon kremi kullanın. Bir mesane içine UCC hücreleri yönetmek için, ilk 4 watt bir güç için bir monopolar elektrokoter makinesi kurmak.Fareyi anestezi ettikten sonra, burnu yla burun haline getirin ve dağınık bir elektrot üzerine sıkıca topraklanmış çıplak sırt. 24 gauge anjiyokateteri yağlayıcı jöle ile yağlayın ve anjiyokateteri fare üretrasına hafifçe ama sıkıca takın. Kateter girişte bükülürse, stabilite sağlamak için kılavuz teli katetere yarıya kadar takın.Daha sonra, anjiyokateterin ucunun 1 milimetre uzamasına 1 mm geçmiş 0,64 milimetrelik sabit çekirdekli düz kılavuz teli tam olarak takın. Mesane mukozasının elektriksel tahrişine izin veren monopolar pimi kılavuz teliçin bir saniye tutun. 1 mL leur kilit şırıngasına taze, steril anjiyokateter takın ve önceki adımlarda hazırlanan 200 mikrolitre ye kadar UCC hücresi çizin.Kılavuz teli ve anjiyokateterüretyişten çıkarın ve sonra ona bağlı hücrelerin şırınga ile anjiyokateter takın. Fare mesane sine hücrelerin 50 mikrolitre enjekte ve hücrelerin mesane duvarına uymak için izin vermek için, anjiyokateter çıkarmadan önce birkaç saniye bekleyin. Son olarak, fareyi izoflurane burun konisi ve topraklama pedinden çıkarın ve sıkıntı belirtileri için prosedürü takip eden 1 saat boyunca gözlemleyin.CRC fare modeli oluşturmak için, bir diseksiyon mikroskop altında supine pozisyonda anestezi 6-8 haftalık erkek NOD-SCID fare yerleştirin ve isoflurane burun konisi ve istikrar için bant ile ön ekstremite güvenliğini sağlar. Vizite ve açıyı iyileştirmek için anüs yükselterek kuyruk tabanının altına küçük bir gazlı bez bölümü gibi küçük bir nesne yerleştirin. Anal kanalı dizmek ve distal anal ve rektal mukozayı ortaya çıkarmak ve dışkı çıkarmak için kavisli yünlenmiş künt uçlu forceps kullanın.Steril 30 gauge çıkarılabilir iğneyi 50 mikrolitrelik cam şırıngaya bağlayın. Şırınga içine önceki adımlarda hazırlanan tümör ve HK hücre süspansiyon 10 mikrolitre çizin. 10 mikrolitreyi anal kanalın 1-2 milimetre yukarısındaki distal posterior rektal submukozaya enjekte edin ve pelvik kaviteye geçmemesini unutmayın.Son olarak, izoflurane burun konisi fare çıkarın ve sıkıntı belirtileri için işlem den sonra bir saat gözlemleyin. Her iki fare modelinde birincil tümör, karaciğer ve akciğer metastatik yükü haftalık izlemek için, ilk, fare tartmak. Periton içi 150 mg/kg luciferin enjekte edin ve substratın vücutta dolaşmasını 5 dakika bekleyin.Burun koni sabit burun ile bir biyolüminesans görüntüleme sistemi içinde anestezili fare yerleştirin ilgi alanı, hangi hayvanın ventral tarafı her görüntü için kamera karşı karşıya olduğundan emin olun. Luciferase etkinliği için haftalık supine konumunda görüntü fare. Parafin gömülü izole dokuları dilimleyip boyandan sonra, yüksek güçlü bir mikroskop kullanarak gözlemleyin.UCC fare modelinde hayvanların yüzde 83.3'ü primer tümör üretti ve haftalık biyolüminesans ölçümlerine göre zamana bağlı primer tümör büyümesi gösterdi. CRC fare modelinde farelerin %96.9'u primer tümör olarak yetişmiştir. Hasta tümörüne bağlı olarak, fare tümörü büyümesi farklı bir gecikme süresine sahipti ve bu da hastaların klinik özelliklerindeki farkı yansıtıyordu.Hem intra-vezikül hem de intra-rektal modellerde tümör hücre enjeksiyonu ortotopik primer tümörler üretti. Ayrıca, ucc hücreleri ve HK hücreleri ile CRC hücreleri ile aşılanan farelerin% 33.3 ve% 53.1, sırasıyla, uzak organ metastazı gelişti. UCC modelinde ksenogreftlerin histopatolojisi primer hasta mesane karsinomu ile karşılaştırıldı.Ksenogreftlerden elde edilen boyama sonuçları orijinal cerrahi biyopsilerde benzerdi ve benzer doku morfolojisini doğruladı. Ki67 antikor, bir insan hücre çoğalma belirteci, pozitif nükleer boyama gösteren son derece çoğalan, hızlı büyüyen insan tümör hücreleri. Benzer şekilde, CRC modelinde, H&E boyama ksenogreftler ve hasta tümörleri arasındaki mimari benzerliğini gösterir.Sitokatin 20'ye karşı antikor boyama da her iki CRC modelinde de benzer tümör büyüme paterni gösterdi. Bu prosedürlerin anahtarı hayvanlara nazik ama sıkıca davranmaktır. Sabit bir el ile uygulama güvenli bir şekilde bu teknikleri gerçekleştirmek ve en iyi sonuçları elde etmek için en iyi yoldur.Bu modeller yapıldıktan sonra, kanser tedavilerinin birden fazla farklı formları test edilebilir, mevcut ilaçların kombinasyonları da dahil olmak üzere yanı sıra hastalarda klinik çalışmalar öncesinde yeni geliştirilen tedaviler. Hem kanser hücrelerinin hem de iğnelerin kullanımının hem de en iyi sonuçları elde etmek için deneyimli personel tarafından yapılması gerektiğini unutmamak gerekir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Bir Klinik öncesi Hasta Türetilmiş Tümör Roman Anti-Kanser Tedaviler Soruşturma Xenograftlarında Modeli Geliştirilmesi ve Bakımı

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Tümör Büyüme ve metastaz Çalışmaları İzlenebilir Muhabirleri ile Meme Kanseri Hasta kaynaklı ksenogratflarının Etiketleme

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Kolorektal kanserli bir Ortotopik Fare Modelinde Dolaşan Tümör Hücrelerinin İzolasyonu

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tümör Engraftment insan Mantle hücreli lenfoma, Xenograft fare modeli

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Karşılaştırmalı Ilaç değerlendirmesi için ev sahipleri olarak zebrafish larvaları kullanarak pankreas kanserinin hasta türevi heterojen xenograft modeli

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

Santral Sinir Sistemi Metastazının Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Kurulması ve Kullanılması

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Intratibial Osteosarcoma Cell Injection to Generate Orthotopic Osteosarcoma and Lung Metastasis Mouse Models

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival ...