Name: facial nerve surgery in the rat model to study axonal inhibition and regeneration
Uploaded: 2020-05-05T12:30:00
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S.A.A.는 미국 안면 성형 및 재건 수술 레슬리 번스타인 보조금 프로그램에 의해 지원됩니다.

모든 내정간섭은 건강의 국가 학회 (NIH) 지침에 따라 엄격하게 수행되었습니다. 실험 프로토콜은 미시간 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 구현하기 전에 승인되었습니다. 10주령 성인 암컷 스프라그-다울리 쥐를 활용하였다.
1. 수술일 전
<ol><li>수술 일 전에 멸균 수술 기구, 진통제, 마취 약물 및 산소의 적절한 재고를 확인하십시오. 전체 목록은 재료...

랫트 안면 신경 손상 모델은 수술 접근성, 분기 패턴 및 생리적 유의성27,,29, 33,,,33,34,,35,36으로인한 신경 영양 인자의 평가를 위한 가장 다재다능한 시스템으로 부상되었다. 비디오 데모와 형질전환 동물 데이터의 응용의 조합은 신경 재생 현상의 ?...

머리와 목 부위의 두개골 신경 손상은 선천성, 전염성, 특발성, 난성성, 외상성, 신경학적, 종양학, 또는 전신 병인에 이차적일 수 있다1. 두개골 신경 VII, 또는 안면 신경은 일반적으로 영향을 받습니다. 안면 신경 기능 장애의 부각은 매년 100,000명의 사람들 당 20에서 30에 영향을 미치기 때문에 중요할 수 있습니다2. 안면 신경의 주요 운동 가지는 측두엽, zygomatic, 볼, 한계 하악골 및 자궁 경부 가지; 관련된 가지에 따라, 결과는 구강 무능력 또는 침을 흘리거나, 각막 건조, ptosis, dysarthria, 또는 안면 비대칭2,,3에이차 적인 시야 방해를 포함할 수 있습니다. 장기 이환율은 synkinesis의 현상을 포함, 또는 하나의 얼굴 근육 그룹의 무의식적인 운동, 독특한 얼굴 근육 그룹의 자발적인 수축을 시도. 안구 구강 합성은 안면 신경 손상의 후유증으로 비정상적인 재생의 가장 흔한 기능 장애, 당황, 감소 된 자부심, 삶의 질저하를 야기3. 개별 가지에 대한 부상은 선택적으로 손상된 기능을 지시합니다.
안면 신경 손상의 임상 치료는 잘 표준화되지 않고 결과를 개선하기 위해 추가 연구가 필요합니다. 스테로이드급성 안면 신경 부종을 완화할 수 있습니다., 보톡스는 synkinetic 움직임을 temporizing에 대 한 유용 하는 반면; 그러나, 개업의의 무기고에 있는 1 차적인 재건 선택권은 신경 수선, 대체, 또는 재애니메이션3,,4,,5,,6를통해 외과 적 개입을 관련시킵니다. 안면 신경 손상의 유형에 따라 안면 신경 외과 의사는 여러 가지 옵션을 활용할 수 있습니다. 간단한 절제술의 경우 신경 절제술이 유용하지만 케이블 이식 수술 수리는 신경 결함에 더 적합합니다. 기능의 복원을 위해, 외과 의사는 정적 또는 동적 얼굴 재애니메이션 절차를 선택할 수 있습니다. 얼굴 신경 부상 및 후속 수리의 많은 경우에, 심지어 경험이 풍부한 얼굴 신경 외과 의사의 손에, 최고의 결과는 여전히 지속적인 얼굴 비대칭 및기능적타협 7 결과 .
이러한 최적이 아닌 결과는 안면 신경 재생에 대한 광범위한 연구를 촉진했습니다. 관심의 광범위한 주제는 합성88,9,,10,,11의장기적인 결과에 대처하는 데 도움이 되는 다양한 신경 재생 인자의 효과를 결정하고, 특정 신경 억제제의 잠재력을 평가하는, 신경 수리 기술을 완성하고 혁신하는 것을 포함한다. 시험관 내 모델은 프로 성장 또는 억제 인자의 일부 특성을 평가하는 데 사용할 수 있지만,이 주제에 대한 진정한 번역 연구는 번역 가능한 동물 모델을 통해 가장 잘 수행됩니다.
연구자들이 양과 같은 대형 동물모델과마우스(12,,13)와같은 소형 동물 모델을 모두 활용했기 때문에 어떤 동물 모델을 활용해야 할지 결정하는 것은 어려울 수 있다. 대형 동물 모델은 이상적인 해부학 시각화를 제공하지만, 그 사용에는 전문 장비와 인력이 쉽게 또는 쉽게 구할 수 없습니다. 또한, 효과를 입증하기 위해 연구에 전원을 공급하는 것은 매우 비용 금지 및 잠재적으로 많은 과학 센터의 가능한 범위 내에서 하지 않을 수 있습니다. 따라서, 소형 동물 모델이 가장 빈번히 활용된다. 마우스 모델은 안면 신경 수술과 관련된 다수의 결과를 평가하는 데 활용될 수 있다; 그러나, 신경의 제한된 길이는 큰 갭 부상(14)과같은 특정 패턴을 모델링하는 과학자의 능력을 제한 할 수 있습니다.
따라서, 쥐 뮤린 프로토타입은 과학자가 혁신적인 외과 적 수술을 수행하거나 억제 또는 프로 성장 인자를 활용하고 광범위한 결과 매개 변수에 걸쳐 효과를 평가 할 수있는 주력 모델로 부상했습니다. 쥐 얼굴 신경 해부학은 예측 가능하고 쉽게 재현 가능한 방식으로 접근합니다. 그것의 더 큰 규모는 마우스 모형에 비교하여, 간단한 transections에서 5 mm 간격15,,16에구역 수색하는 수술 결함의 넓은 범위를 모델링을 허용합니다. 이것은 또한 요인의 국소 배치, 요인의 내신경 주사, 및 이원이식 또는 교량17,,18,,19,,20,,21,,22,,23의배치를 포함하여 결함 부위에서 복잡한 개입을 적용 할 수 있습니다.
쥐의 유순한 성질, 그 신뢰할 수있는 해부학 및 효과적인 신경 재생에 대한 경향은 앞서 언급 한 부상24의 수술 패턴에 대한 응답으로 많은 결과 측정의 수집을 허용합니다. 쥐 모델을 통해 안면 신경 과학자는 면역 조직화학을 통한 부상, 신경 및 근육 조직학적 결과에 대한 전기 생리학적 반응을 평가할 수 있으며, 생체 패드의 추적 운동을 통한 기능적 결과 및 눈 폐쇄를 평가하고, 형광 또는 공초점 현미경을 통한 미세 및 거시적 변화, 기타,26,27,2811,,,22,,,23,25, 26 , 27 , 27 , 28 ,28. 따라서, 이하의 프로토콜은 쥐 안면 신경및 유도될 수 있는 상해 패턴에 대한 외과적 접근법을 개략적으로 설명할 것이다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:769px;" width="770">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">1.8% isoflurane</td>
			<td style="width:175px;">VetOne</td>
			<td style="width:182px;">13985-030-40</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">11-0 nylon microsutures</td>
			<td style="width:175px;">AROSuture</td>
			<td style="width:182px;">TK-117038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">4-0 monocryl suture</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">75982-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Buprenorphine SR</td>
			<td style="width:175px;">ZooPharm</td>
			<td>MIF 900-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Carprofen</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:182px;">MFCD00079028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Chlorhexidine</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">IC19135805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Jeweler forceps</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">21909-458</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Micro Weitlaner retractor</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">82030-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Micro-scissors</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">100492-348</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Mini tenotomy scissors</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">89023-522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Number 15 scalpel blade</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">102097-834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Operating microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:182px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Petrolatum eye gel</td>
			<td style="width:175px;">Pharmaderm</td>
			<td style="width:182px;">B002LUWBEK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Sterile water</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:182px;">89125-834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Tissue adhesive</td>
			<td style="width:175px;">Vetbond, 3M</td>
			<td style="width:182px;">NC9259532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Water conductor pad</td>
			<td style="width:175px;">Aqua Relief System</td>
			<td style="width:182px;">ARS2000B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

facial nerve surgery in the rat model to study axonal inhibition and regeneration

이 프로토콜은 쥐 얼굴 신경 손상 모델에서 축축한 재생 및 억제를 연구하는 일관되고 재현 가능한 방법을 설명합니다. 얼굴 신경은 두개내 세그먼트에서 시간외 코스에 이르기까지 전체 길이를 따라 조작 할 수 있습니다. 재생 속성의 실험 연구에 사용 되는 신경 부상의 세 가지 기본 유형이 있다: 신경 호감, transection, 그리고 신경 간격. 가능한 내정간섭의 범위는 신경의 외과 조작, 신경 성 시약 또는 세포의 납품, 및 중앙 또는 말기 조작을 포함하여 광대합니다. 신경 재생을 연구하기위한이 모델의 장점은 단순성, 재현성, 종 간 일관성, 쥐의 신뢰할 수있는 생존율, 그리고 뮤린 모델에 비해 증가 된 해부학 적 크기를 포함한다. 그것의 한계는 마우스 모형 과 쥐의 최상급 재생 능력에 비해 더 한정된 유전 조작을 관련시킵니다, 안면 신경 과학자는 신중하게 복구를 위한 시간 점을 평가하고 더 높은 동물과 인간 연구 결과에 결과를 번역할지 여부를 이렇게. 안면 신경 손상에 대한 쥐 모델은 신경 재생의 해석 및 비교를 위한 기능적, 전기 생리학적 및 조직체학적 파라미터를 허용합니다. 그것은 인간 환자에 있는 안면 신경 상해의 파괴적인 결과의 이해 그리고 처리를 발전시키는 쪽으로 엄청난 잠재력을 자랑합니다.

초기 수술 후, 결과 측정의 두 가지 주요 유형이 있다: 살아있는 동물의 직렬 측정 및 동물을 희생 해야 하는 측정. 직렬 측정의 예로는 화합물 근육 작용 전위측정(30)등의 전기생리학적 측정, 레이저 보조 또는 비디오그래피 수단을 통한 안면 근육 움직임의 평가9,형질전환 동물에서 얼굴 신경의 재성장의 반복적인 라이브?...

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Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

이 프로토콜은 부상의 다양한 유도 패턴의 설명을 포함하여 쥐 모델에서 안면 신경 수술에 대한 재현 가능한 접근 방식을 설명합니다.

축축한 억제 및 재생을 연구하는 쥐 모델의 안면 신경 수술

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...

이 프로토콜은 과학자들이 안면 신경 부상 과 많은 다른 매개 변수에 걸쳐 재생을 개선하는 방법 후 결과를 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 쥐 해부학은 안면 신경에 쉽게 접근 할 수 있다는 것입니다, 그것의 큰 규모는 우리가 관련된 부상 패턴을 모두 연구 할 수 있습니다. 이 기술의 응용 프로그램은 안면 신경 부상 후 환자의 재활로 확장.재생 가능성으로 쥐는 재현 가능한 실험 모델을 제공합니다. 그리고이 방법은 안면 신경 마비 또는 마비를 위한 외과 및 의학 치료에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 그리고 다른 머리와 목 모델 이나 다른 말 초 신경에 번역.양손을 사용하여 현미경으로 작동하는 것은 어려울 수 있습니다. 안면 신경 해부를 시도하기 전에 현미경으로 쌍안경 버전을 사용하는 것이 좋습니다. 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 쥐의 눈에 연고를 적용하고 수술 영역을 면도.쥐 식별 을위한 방법을 설정하고 목 아래에 거즈 롤을 배치합니다. 노출된 피부를 3개의 번갈아 클로르헨시딘과 70%에탄올 스크럽으로 소독하고 쥐를 스테레오 현미경 아래에 놓습니다. 전방 후방 방향으로 입시측 귀를 조작하여 후분 피부의 자연적인 접이식을 결정합니다.숫자 15 블레이드를 사용하여 후경에 2~3밀리미터 절개를 합니다. 절개 계획 및 배치는 상처 크기를 최소화하면서 안면 신경의 신뢰할 수 있는 식별을 보장하는 가장 중요한 단계입니다. 즉각적인 피하 근막을 무뚝뚝하게 해부하고 조직 노출을 향상시키기 위해 마이크로 바이틀란어 리트랙터를 배치합니다.두개골 기지를 따라 삽입을 향해 열등한 방향으로 이동할 때 전방 디거스컬 근육을 식별합니다. 근육 삽입 점을 따라 근육 배를 통해 부드럽게 퍼져 전방 디거스산 배의 힘줄을 드러냅니다. 힘줄은 두개골 베이스에 고체 삽입과 근육에서 방출 필름 흰색 과정으로 나타납니다.전방 디거스트릭 근육과 힘줄을 식별한 후 Weitlaner 리트랙터를 조정하여 근육 배를 더 후퇴시킵니다. 노출된 부위는 안면 신경의 주요 트렁크가 있는 입체 공간입니다. 틸로마스토이드 포맨의 출구에서 열등한 방향으로 신경을 따라 해부한다.호감 부상 패턴을 유도하려면 매끄러운 표면의 주얼러 의 집게를 사용하여 30 초 동안 일정하고 재현 가능한 압력을 가하는 신경을 단단히 잡고 압축하여 적절한 호감 부상을 보장하십시오. 간단한 절단을 위해 미세 한 이빨 집게로 신경을 덮는 즉각적인 에피뉴리움을 잡고 날카로운 미세 시체를 사용하여 원하는 지점에서 신경을 단 한 번 잘라 내어 깨끗하게 변형시니다. 신경 갭 모델의 경우 조절 가능한 캘리퍼를 사용하여 원하는 신경 신경 갭 길이를 설정하여 동물 간의 유사한 부상 패턴을 보장하고 방금 입증된 것처럼 신경을 트랜스펙트합니다.실험적 부상이 전달된 후, 멸균 식염수로 상처를 관개하고 멸균 거즈로 조직을 건조시다. 기관 지침에 따라 피부 절개를 닫기 전에. 여기서, 호감 부상을 가진 안면 신경의 주요 트렁크의 라이브 이미징이 성인 트랜스제닉 Thy1-GFP 쥐에서 제1 PES의 분기지점에 약 2~3밀리미터 의 질반이 나타난다.1, 2, 3 및 4 주 후 상해에서 형광의 점진적 반환의 평가는 이 형질전환 동물에 있는 신경 재생을 감시하기 위한 마커로 이용될 수 있습니다. 조직학적 분석은 축축경 직경, 이물질의 양, 신경 섬유, 신경 섬유, 신경 비율 및 밀도 측정의 정량화를 허용하는 한계 하악 분열의 단면 이미지를 얻는 데 사용될 수 있다. 안면 신경을 식별할 때 관련 해부학 신경이 보이는지 확인하기 위해 필요에 따라 re트랙터의 배치를 자주 조정하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 관련 신경 및 근육은 다른 실험 군에 비해 재생 정도를 평가하기 위해 면역 조직화학 분석을 위해 수확될 수 있다. 그것의 발달 후에, 이 기술은 안면 신경 상해 후에 기능적인 결과를 공부하는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 구체적으로, synkinesis의 현상을 미치는 방법.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System

시신경의 절개 : 중추 신경계에서 신경 세포의 Apoptosis 성인의 모델

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. 
The optic nerve can be ...

연구

신경과학

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

망막 신경절 세포의 생존을 공부 시신경의 호감 상해 Murine 모델

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

말초 신경 손상 후 기능 회복을 평가하기 위해 후각 Ensheathing 세포의 이식

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

모델로 후각 시스템은 축삭 성장 패턴 및 형태를 연구하는<em&gt; 생체</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

루트 신경절 신경 세포와 차별화 된 지방 유래 줄기 세포를 이룬다 :<em&gt; 체외</em&gt; 공동 문화 모델은 주변 신경 재생을 연구하는

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

실험 시신경의 탈수 초화의 쥐 모델에서 시각 유발 전위 기록

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

Vivo에서 Axonal 흥분 테스트 쥐 척 골 신경의 electrophysiological 측정

Electrophysiology enables the objective assessment of peripheral nerve function in vivo. Traditional nerve conduction measures such as amplitude and ...

Screening of Axonal Degeneration in Carpal Tunnel Syndrome Using Ultrasonography and Nerve Conduction Studies

초음파 검사 및 신경 유도 학문을 사용 하 여 수 근 관 증후군에서 Axonal 변성의 심사

Axonal degeneration, indicative of surgical decompression, may coexist in carpal tunnel syndrome (CTS) as the disease progresses. However, the current ...

Thoracic Spinal Cord Hemisection Surgery and Open-Field Locomotor Assessment in the Rat

쥐의 흉척 척수 위축 수술 및 개방운동 운동 평가

Spinal cord injury (SCI) causes disturbances in motor, sensory, and autonomic function below the level of the lesion. Experimental animal models are ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Sciatic 신경 호감 상해의 쥐 모형에 있는 기능 평가를 위한 3D 운동학 분석

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...