Name: 3d analysis of multi-cellular responses to chemoattractant gradients
Uploaded: 2019-05-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Analysis of Multi-cellular Responses to Chemoattractant Gradients at JoVE.com

وكان هذا العمل مدعوما بالمنح المقدمة إلى الجمعية الخيرية (NSF PD-11-7246 ، ومؤسسه بحوث سرطان الثدي (BCRF) ، والU54 CA210173) وال (U54CA209992).

وقد أجريت جميع الاعمال الحيوانية وفقا للبروتوكولات التي استعرضتها ووافقت عليها اللجنة المؤسسية للعناية بالماشية واستخدامها ، جامعه جونز هوبكنز ، كليه الطب.
1. تصنيع جهاز الجريان الوسطي
<ol><li>تصميم قناع العفن للجهاز PDMS باستخدام برنامج CAD 3D.</li>
	<li>اطبع القالب باستخدام معدات ا...

<ol>
	<li>Humphrey, J. D., Dufresne, E. R., Schwartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+and+extracellular+matrix+homeostasis.">Mechanotransduction and extracellular matrix homeostasis.</a> Nature Reviews: Molecular Cell Biology. 15 (12), 802-812 (2014).</li><li>Schwartz, M. A., Schaller, M. D., Ginsberg, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrins:+emerging+paradigms+of+signal+transduction.">Integrins: emerging paradigms of signal transduction.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 11, 549-599 (1995).</li><li>Yin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+Stem+Cell+Organoids.">Engineering Stem Cell Organoids.</a> Cell Stem Cell. 18 (1), 25-38 (2016).</li><li>Doyle, A. D., Carvajal, N., Jin, A., Matsumoto, K., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+3D+matrix+microenvironment+regulates+cell+migration+through+spatiotemporal+dynamics+of+contractility-dependent+adhesions.">Local 3D matrix microenvironment regulates cell migration through spatiotemporal dynamics of contractility-dependent adhesions.</a> Nature Communications. 6, 8720 (2015).</li><li>Meyvantsson, I., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture+models+in+microfluidic+systems.">Cell culture models in microfluidic systems.</a> Annual Review of Analytical Chemistry (Palo Alto, Calif). 1, 423-449 (2008).</li><li>Bhatia, S. N., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+organs-on-chips.">Microfluidic organs-on-chips.</a> Nature Biotechnology. 32 (8), 760-772 (2014).</li><li>Zervantonakis, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+microfluidic+model+for+tumor+cell+intravasation+and+endothelial+barrier+function.">Three-dimensional microfluidic model for tumor cell intravasation and endothelial barrier function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (34), 13515-13520 (2012).</li><li>Barkefors, I., Thorslund, S., Nikolajeff, F., Kreuger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fluidic+device+to+study+directional+angiogenesis+in+complex+tissue+and+organ+culture+models.">A fluidic device to study directional angiogenesis in complex tissue and organ culture models.</a> Lab on a Chip. 9 (4), 529-535 (2009).</li><li>Hou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+lapse+investigation+of+antibiotic+susceptibility+using+a+microfluidic+linear+gradient+3D+culture+device.">Time lapse investigation of antibiotic susceptibility using a microfluidic linear gradient 3D culture device.</a> Lab on a Chip. 14 (17), 3409-3418 (2014).</li><li>Ellison, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cell+communication+enhances+the+capacity+of+cell+ensembles+to+sense+shallow+gradients+during+morphogenesis.">Cell-cell communication enhances the capacity of cell ensembles to sense shallow gradients during morphogenesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (6), E679-E688 (2016).</li><li>Nguyen-Ngoc, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+culture+assays+of+murine+mammary+branching+morphogenesis+and+epithelial+invasion.">3D culture assays of murine mammary branching morphogenesis and epithelial invasion.</a> Methods in Molecular Biology. 1189, 135-162 (2015).</li></ol>

تم اجراء تصنيع قوالب PDMS باستخدام خدمه الطباعة 3D التجارية ، ولكن يمكن أيضا ان يتحقق من قبل الطابعة 3D نهاية عاليه في المنزل. من بين مختلف أساليب التصنيع ثلاثي الابعاد ، ينصح بالتصوير المجسم لتوليد العفن عالي الدقة. لان معالجه PDMS يحدث في درجه حرارة عاليه (80 درجه مئوية) ، يجب ان تكون المواد مقاو?...

في البيئة الفسيولوجية ، يتم تضمين الخلايا في مصفوفة خارج الخلية (ECM) وتتعرض لكثرة من الجزيئات الحيوية. التفاعلات بين الخلايا والبيئة المجهرية المحيطة تنظم العمليات داخل الخلايا السيطرة علي الأنماط الظاهرية المتنوعة ، بما في ذلك الهجرة والنمو والتمايز والبقاء علي قيد الحياة1،2. وقد تعلمت الكثير عن السلوكيات الخلوية في ثقافة خليه ثنائيه الابعاد التقليدية. ومع ذلك ، مع ظهور التصوير الانترافيتال والتجريب مع الخلايا المضمنة في الهلام المائي ثلاثي الابعاد ، تم التعرف علي الاختلافات الهامه في سلوكيات الخلايا في الثقافات المبسطة ثنائيه الابعاد في المختبر مقابل بيئات تشبه الانسجه ثلاثية الابعاد. بينما تتفاعل الخلايا مع ألياف ECM وتستشعر خواصها الميكانيكية داخل المصفوفة ثلاثية الابعاد ، فان الصلابة المادية للجل ليست متغيرا مستقلا تماما في نظام ثنائي الابعاد في المختبر. الابعاد يغير تشكيل التصاق البؤري ، مما يؤدي إلى شكل الخلية المختلفة والسلوك. وعلاوة علي ذلك ، تتعرض الخلايا علي سطح ثنائي الابعاد لإشارات اقل من الخلايا المفتوحة لجميع الاتجاات في الابعاد الثلاثية.
وقد زادت هذه القيود من الاهتمام بالانظمه ثلاثية الابعاد التي تمثل التعقيد المكاني والكيميائي للانسجه الحية والتنبؤ بشكل أفضل بوظائف الانسجه المجرية. وقد وضعت في اشكال كثيره من organoids كما الذاتي تجميع الهياكل الخلوية إلى خلايا تتخللها عشوائيا في ECM3,4. وقد يسرت التطورات الاخيره في تكنولوجيات التصنيع المجهري ظهور أنواع مختلفه من نظم الثقافة ثلاثية الابعاد5، 6،7،8،9 لدراسة التغيرات الظاهرية الاستجابات الخلوية للإشارات القابلة للذوبان; بيد ان الحواجز التكنولوجية تحد من الاستخدام الواسع النطاق في مختبرات البحوث. في كثير من الحالات ، تتطلب عمليات التصنيع تقنيات التصوير الضوئي والمعارف الخلفية للطباعة الحجرية الناعمة. وعلاوة علي ذلك ، يجب السيطرة علي عوامل مختلفه لبناء جهاز بنجاح وتحقيق وظيفة الأمثل للجهاز علي مدي فتره طويلة من الزمن.
طريقتنا يصف كيفيه بناء جهاز PDMS 3D لدمج الخلايا والعضوية المتعددة الخلية في البيئة المجهرية 3D مع التدرجات تشيمواتراكتانت المحددة ومن ثم تحليل الاستجابات الظهاريه إلى EGF10. بياناتنا تكشف عن ان قدره organoids للرد علي التدرجات EGF الضحلة تنشا من اقتران الكيميائية بين الخلايا من خلال تقاطعات الفجوة. وهو يوحي بقدره العضو العضوي علي الكشف بدقه أكبر عن المدخلات الضعيفة والصاخبة المصنفة مكانيا. عمليه التصنيع لا تتطلب مرفق غرفه الأبحاث ولا تقنيات التصوير الضوئي. ومع ذلك ، فان جهاز PDMS ثلاثي الابعاد يتضمن العوامل الضرورية للبيئة الفسيولوجية ثلاثية الابعاد. هذه الطريقة ستكون مفيده لدراسة السلوكيات الخلوية ثلاثية الابعاد ولديها إمكانات بحثيه كبيره مع أنواع مختلفه من الخلايا ، تشيمواتراكتانتس ، وتركيبات ECM.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">22mm x 22mm coverslip&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">12-542-B</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Collagen I, Rat</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">CB-40236</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Collagenease</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">C5138</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">COMSOL Multiphysics 4.2</td>
			<td style="width:171px;">COMSOL Inc</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td>Used for simulating diffusion dynamics</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">10x DMEM</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2429</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DEME/F12</td>
			<td style="width:171px;">Thermo Fisher</td>
			<td>11330032</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">DNase</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">D4623</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:199px;">EGF Recombinant Mouse Protein</td>
			<td style="width:171px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:135px;">PMG8041</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:171px;">Life technologies</td>
			<td>16140-071</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Fiji-ImageJ</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td>Used for measuring branching length and angles</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Gentamicin</td>
			<td style="width:171px;">GIBCO&#160;</td>
			<td style="width:135px;">5750-060</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">IMARIS</td>
			<td style="width:171px;">Bitplane</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Insulin</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">19278</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:199px;">Insulin-Transferrin-Selenium-X</td>
			<td style="width:171px;">GIBCO&#160;</td>
			<td style="width:135px;">51500</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:199px;">Low-lint tissue</td>
			<td style="width:171px;">Kimberly-Clark Professional</td>
			<td style="width:135px;">Kimtech wipe</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Mold Material</td>
			<td style="width:171px;">Proto labs</td>
			<td style="width:135px;">Accura SL5530&#160;</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:199px;">Mold printing equipment</td>
			<td style="width:171px;">Proto labs</td>
			<td style="width:135px;">Stereolithogrphy</td>
			<td style="width:269px;">Maximum dimension: 127mm x 127mm x 63.5mm, Layer thnickness: 0.0254mm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Mold printing Service</td>
			<td style="width:171px;">Proto labs</td>
			<td style="width:135px;">Custom</td>
			<td style="width:269px;">https://www.protolabs.com/</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">NaOH</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2770</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:171px;">VWR</td>
			<td>16777-164P</td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:199px;">Spinning-disk confocal microscope</td>
			<td style="width:171px;">Solamere Technology Group</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:269px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:199px;">Sylgard 184</td>
			<td style="width:171px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT&#160;</td>
			<td style="width:269px;">PDMS kit</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:199px;">Trypsin</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9935</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d analysis of multi-cellular responses to chemoattractant gradients

وقد أثارت القيود المختلفة لنظم الثقافة الخلية 2D الاهتمام في ثقافة الخلية 3D ومنصات التحليل ، والتي من شانها ان تحاكي بشكل أفضل التعقيد المكاني والكيميائي للانسجه الحية وتقليد في وظائف الانسجه المجرية. وقد يسرت التطورات الاخيره في تكنولوجيات التصنيع المجهري تطوير بيئات ثلاثية الابعاد في المختبر يمكن فيها دمج الخلايا في مصفوفة واضحة المعالم خارج الخلية (ECM) ومجموعه محدده من الجزيئات البيولوجية المرتبطة القابلة للذوبان أو المصفوفة. غير ان الحواجز التكنولوجية قد حدت من استخدامها علي نطاق واسع في مختبرات البحوث. هنا ، ونحن وصف طريقه لبناء أجهزه بسيطه للثقافة 3D والتجريب مع الخلايا والعضوية المتعددة الخلية في البيئات المجهرية 3D مع التدرج تشيمواتراكتانت محدده. ونحن نوضح استخدام هذه المنصة لتحليل استجابه الخلايا الظهاريه والعضوية العضوية لتدرجات عوامل النمو ، مثل عامل نمو البشرة (EGF). وكانت التدرجات EGF مستقره في الاجهزه لعده أيام مما ادي إلى تشكيل فرع الموجهة في الثدي العضوي. وقد سمح لنا هذا التحليل بالخلوص إلى ان استشعار التدرج الجماعي من قبل مجموعات من الخلايا أكثر حساسية مقارنه بالخلايا المفردة. ونحن أيضا وصف طريقه التصنيع ، والتي لا تتطلب مرافق التصوير الضوئي ولا تقنيات الطباعة الحجرية الناعمة المتقدمة. سيكون هذا الأسلوب مفيدا لدراسة السلوكيات الخلوية ثلاثية الابعاد في سياق تحليل التطور والحالات المرضية ، بما في ذلك السرطان.

EGF هو منظم أساسي من النشاه المتفرعة في الغدد الثديية وتشيمواتراكتانت الحرجة توجيه هجره الخلايا الظهاريه الثدي في نمو السرطان الغازية. استخدمنا الاجهزه ميسوسكوبيك فلويديك المذكورة أعلاه لدراسة استجابه الخلايا لتحديد التدرجات egf (الشكل 1a، B)<sup clas...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Analysis of Multi-cellular Responses to Chemoattractant Gradients at JoVE.com

3D Analysis of Multi-cellular Responses to Chemoattractant Gradients

نحن وصف طريقه لبناء الاجهزه للثقافة 3D والتجريب مع الخلايا والهيكل العضوي متعدد الخلية. يسمح هذا الجهاز بتحليل الاستجابات الخلوية للإشارات القابلة للذوبان في البيئات المجهرية ثلاثية الابعاد مع تدرجات تشيمواتراكتانت محدده. Organoids هي أفضل من خلايا واحده في الكشف عن المدخلات الضعيفة الصاخبة.

تحليل ثلاثي الابعاد للاستجابات متعددة الخلايا لتدرجات تشيمواتراكتانت

Various limitations of 2D cell culture systems have sparked interest in 3D cell culture and analysis platforms, which would better mimic the spatial and ...

وقد زادت الاختلافات في الثقافات المُبسَّطة 2D في البيئات المختبرية مقابل البيئات الشبيهة بالأنسجة ثلاثية الأبعاد من الاهتمام بالنظم ثلاثية الأبعاد لتمثيل التعقيد المكاني والكيميائية للأنسجة الحية. لا تتطلب عملية التصنيع تقنيات مرفق أو التصوير الضوئي. ومع ذلك، يتضمن جهاز PDMS 3D النواقل اللازمة لتطبيقات البيئة الفسيولوجية 3D.لإعداد الجهاز mesofluidic، واستخدام برنامج تصميم الكمبيوتر بمساعدة الكمبيوتر مناسبة ثلاثية الأبعاد لتصميم قناع القالب لجهاز polydimethylsiloxane أو PDMS وطباعة القالب باستخدام معدات الطباعة الحجرية ستيريو مع راتنج thermoresistant. عندما القالب جاهز، مزيج تقريبا ثلاثة ملليلتر من حل مونومير PDMS لكل قالب مع عامل علاج بنسبة 10 إلى واحد واستخدام فراغ ل degas الخليط في جهاز استنشاق الاستنشاق للفراغ لمدة ساعة واحدة. في نهاية الجفاف، استخدم قطعة من شريط لاصق لإزالة أي غبار من سطح القالب وملء القالب بعناية مع حل PDMS degassed.بعد ذلك ، علاج PDMS عند 80 درجة مئوية لمدة ساعتين قبل السماح للقالب أن يبرد في درجة حرارة الغرفة. عندما يتم تبريد القالب لمسة، واستخدام شفرة لقطع الحدود بين القالب و PDMS وقشر بعناية PDMS من القالب. تقليم PDMS لتناسب 22 في 22 ملليمتر يغطي ولكمة حفرة في مدخل.باستخدام أنسجة الوبر المنخفضة والإيثانول بنسبة 70٪، امسح الجهاز وأغطية الجهاز وداب مع قطعة جديدة من شريط لاصق لإزالة أي جزيئات الغبار كبيرة. ثم الأوتوكلاف جهاز PDMS و coverlip في 121 درجة مئوية لمدة ثماني دقائق الرطب و 15 دقيقة الجافة وعلاج السطح السفلي من جزء PDMS و coverlip مع بندقية تفريغ الهالة لمدة خمس دقائق في غطاء لثقافة الأنسجة قبل الترابط القطع معا. لتحميل الجهاز، أولاً إعادة تعليق الخلايا ذات الاهتمام في حجم مناسب من متوسط النمو تكمل مع 1٪ من البنسلين و ستريبتوميسين و 1٪ الأنسولين نقل السيلينيوم-x.المزيج المقبل 50 ميكرولترات من تعليق الخلايا غدة الثديية مع 425 ميكرولترات من حل الكولاجين تحييد حديثا أعدت وملء ماصة 200 ميكرولتر مع تعليق خلية الكولاجين. حقن التعليق من خلال المدخل في جهاز PDMS حتى يتم تعبئة الغرفة بأكملها ووضع الجهاز في الحاضنة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ساعة واحدة للحث على الجل قبل ملء الخزانات على كلا الجانبين مع متوسط النمو وإعادة الجهاز إلى الحاضنة حتى التصوير confocal. ل3D التصوير والكمية، تثبيت خلية حية التصوير غرفة الثقافة على المجهر confocal و مسبقا درجة الحرارة وثاني أكسيد الكربون إلى 37 درجة مئوية و 5٪ على التوالي.إضافة الماء إلى خزان غرفة التصوير لترطيب الغرفة، ووضع مناديل مبللة في الغرفة حسب الضرورة ووضع الجهاز PDMS في الغرفة. إضافة عامل نمو البشرة إلى أحد الخزانات كمصدر للعامل في تشكيل التدرج ترك الخزان الآخر لتكون بمثابة بالوعة لتطوير توزيع عامل نمو البشرة متدرج مكانيا. ثم تعيين مجموعة من المكدس Z التي تغطي حجم organoids من الفائدة وبدء التصوير.في نهاية التجربة، استخدم برنامج تحليل الصور المناسب لقياس طول وزاوية الفروع الممتدة من الأعضاء أو هجرة الخلايا الفردية. وكشفت كل من في الاختبارات السيليكو وفي المختبر تشكيل عامل نمو البشرة الخطي مستقرة التدرج عبر منطقة زراعة الخلية التي تستمر لمدة يومين تقريبا دون تجديد الخزانات المصدر أو المصارف مما يشير إلى أن عامل النمو البشرة، وهو بروتين 6.4 كيلودالتون، يمكن أن تشكل تدرج مستقر القائم على الانتشار داخل هلام الكولاجين أعدت على مدى فترة قصيرة نسبيا من الزمن. تشكل العضيات الثديية فروعًا متعددة في وجود عامل نمو بشري نانوي موحد مكانياً 2.5 مع عدم وجود تحيز اتجاهي على مدى ثلاثة أيام إذا تمت إضافة عامل نمو البشرة في التدرج الخطي ليكون 0.5 نانوموللار لكل ملليلتر.ومع ذلك، يعرض تشكيل الفرع تحيزًا اتجاهيًا كبيرًا. وتجدر الإشارة إلى أن إضافة مثبطات الوصلات الفجوة تقمع قدرة الأعضاء على الاستجابة للتدرج. إنّ مُحلّة الكولاجين ذات الـH أمرُ حاسم بالنسبة للجلّام و قابلية الخلية للصلاحية.إذا لم يتم تحييد الكولاجين قبل الاختلاط، فإن الخلية البقاء تكون منخفضة. ويمكن توسيع هذه الطريقة لاستيعاب النمذجة الأنسجة أكثر واقعية ويمكن أن تستوعب تشكيل شبكة الأوعية الدموية من الخلايا الفردية داخل هلام.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

تصميم مفاعل حيوي لضغط الدوري السابقين فيفو دراسة صمامات القلب الأورطي

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy

إنشاء تدرجات لاصق وقابل للذوبان للهجرة الخليوي مع التصوير مضان المجهري

Cells can sense and migrate towards higher concentrations of adhesive cues such as the glycoproteins of the extracellular matrix and soluble cues such as ...

Correlative Microscopy for 3D Structural Analysis of Dynamic Interactions

الميكروسكوب المتلازم لتحليل الهيكلية 3D من التفاعلات الدينامية

Cryo-electron tomography (cryoET) allows 3D visualization of cellular structures at molecular resolution in a close-to-physiological state1. However, ...

Multi-Scale Modification of Metallic Implants With Pore Gradients, Polyelectrolytes and Their Indirect Monitoring In vivo

Multi-Scale Modification of Metallic Implants With Pore Gradients, Polyelectrolytes and Their Indirect Monitoring In vivo

تعديل متعدد مقياس من يزرع لامع مع التدرجات مسام، مركبات البولي الكتروليت والمراقبة غير المباشرة<em&gt; في الجسم الحي</em

Metallic implants, especially titanium implants, are widely used in  clinical applications. Tissue in-growth and integration to these implants in  the ...

A Method for Evaluating Timeliness and Accuracy of Volitional Motor Responses to Vibrotactile Stimuli

منهج في تقييم توقيت ودقة الردود الإرادية للسيارات لVibrotactile المحفزات

Artificial sensory feedback (ASF) systems can be used to compensate for lost proprioception in individuals with lower-limb impairments.  Effective design ...

Polydimethylsiloxane-polycarbonate Microfluidic Devices for Cell Migration Studies Under Perpendicular Chemical and Oxygen Gradients

ثنائي ميثيل بولي سيلوكسان البولي أجهزة ميكروفلويديك لخلية دراسات الهجرة تحت عمودي الكيميائية والتدرجات الأوكسجين

This paper reports a microfluidic device made of polydimethylsiloxane (PDMS) with an embedded polycarbonate (PC) thin film to study cell migration under ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

بيوبرينتينج الغضاريف والجلد الأنسجة النظير استخدام سلبية رواية خلط وحدة تقنية بريسيلولاريزيشن بيوينك

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

Four-Dimensional CT Analysis Using Sequential 3D-3D Registration

تحليل الاشعه المقطعية رباعي الابعاد باستخدام التسجيل المتسلسل 3D-3D

Four-dimensional computed tomography (4DCT) provides a series of volume data and visualizes joint motions. However, numerical analysis of 4DCT data ...

Generation of Heterogeneous Drug Gradients Across Cancer Populations on a Microfluidic Evolution Accelerator for Real-Time Observation

توليد التدرجات المخدرات غير متجانسة عبر السكان السرطان على مسرّع تطور Microfluidic للمراقبة في الوقت الحقيقي

Conventional cell culture remains the most frequently used preclinical model, despite its proven limited ability to predict clinical results in cancer. ...

Quantification of Oculomotor Responses and Accommodation Through Instrumentation and Analysis Toolboxes

القياس الكمي للاستجابات الحركية للعين والتكيف من خلال مجموعات أدوات الأجهزة والتحليل

Through the purposeful stimulation and recording of eye movements, the fundamental characteristics of the underlying neural mechanisms of eye movements ...