Name: use of in vivo single-fiber recording and intact dorsal root ganglion with attached sciatic nerve to examine the mechanism of conduction failure
Uploaded: 2019-08-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure at JoVE.com

이 사업은 중국 국립자연과학재단(31671089 및 81470060)과 산시성 사회개발과학기술연구사업(2016SF-250)의 지원으로 지원되었다.

현재 의정서는 미국 공중 보건 서비스의 실험실 동물 의인도적 관리 및 사용에 대한 정책에 대한 가이드를 따랐으며, 제 4 군사 의과 대학의 동물 실험 윤리위원회는 이 프로토콜을 승인했습니다.
1. 동물
<ol><li>24마리의 스프라그-다울리 쥐(4-8주)를 두 그룹으로 나눕니다. 14마리의 쥐와 식염수를 치료하여 10마리의 쥐10마리의 또 다른 그룹에서 CFA 100 μL의 내란타르 주입에 의?...

<ol>
	<li>Koski, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+validation+of+diagnostic+criteria+for+chronic+inflammatory+demyelinating+polyneuropathy.">Derivation and validation of diagnostic criteria for chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy.</a> Journal of the Neurological Sciences. 277 (1-2), 1-8 (2009).</li><li>Allen, T. J., Knight, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+intracellular+dialysis+to+study+signal+transduction+coupling+in+the+squid+giant+axon.">The use of intracellular dialysis to study signal transduction coupling in the squid giant axon.</a> Journal of Neuroscience Methods. 42 (3), 169-174 (1992).</li><li>Schafers, M., Cain, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-fiber+recording:+in+vivo+and+in+vitro+preparations.">Single-fiber recording: in vivo and in vitro preparations.</a> Methods in Molecular Medicine. 99, 155-166 (2004).</li><li>Sun, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+conduction+failure+of+the+main+axon+of+polymodal+nociceptive+C-fibres+contributes+to+painful+diabetic+neuropathy+in+rats.">Reduced conduction failure of the main axon of polymodal nociceptive C-fibres contributes to painful diabetic neuropathy in rats.</a> Brain. 135, 359-375 (2012).</li><li>Debanne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Information+processing+in+the+axon.">Information processing in the axon.</a> Nature Reviews Neuroscience. 5 (4), 304-316 (2004).</li><li>De Col, R., Messlinger, K., Carr, R. 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L., Albers, K. M., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation-induced+increase+in+nicotinic+acetylcholine+receptor+current+in+cutaneous+nociceptive+DRG+neurons+from+the+adult+rat.">Inflammation-induced increase in nicotinic acetylcholine receptor current in cutaneous nociceptive DRG neurons from the adult rat.</a> Neuroscience. 284, 483-499 (2015).</li><li>Zhu, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+action+potential+trains+in+rabbit+saphenous+nerve+unmyelinated+fibers.">Modulation of action potential trains in rabbit saphenous nerve unmyelinated fibers.</a> Neurosignals. 21 (3-4), 213-228 (2013).</li><li>Djouhri, L., Bleazard, L., Lawson, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+somatic+action+potential+shape+with+sensory+receptive+properties+in+guinea-pig+dorsal+root+ganglion+neurones.">Association of somatic action potential shape with sensory receptive properties in guinea-pig dorsal root ganglion neurones.</a> Journal of Physiology. 513, 857-872 (1998).</li><li>Fang, X., McMullan, S., Lawson, S. N., Djouhri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+differences+between+nociceptive+and+non-nociceptive+dorsal+root+ganglion+neurones+in+the+rat+in+vivo.">Electrophysiological differences between nociceptive and non-nociceptive dorsal root ganglion neurones in the rat in vivo.</a> Journal of Physiology. 565, 927-943 (2005).</li><li>Young, G. T., Emery, E. C., Mooney, E. R., Tsantoulas, C., McNaughton, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+are+rapidly+suppressed+by+peripheral+block+of+hyperpolarisation-activated+cyclic+nucleotide-gated+ion+channels.">Inflammatory and neuropathic pain are rapidly suppressed by peripheral block of hyperpolarisation-activated cyclic nucleotide-gated ion channels.</a> Pain. 155 (9), 1708-1719 (2014).</li><li>Kim, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupled+Activation+of+Primary+Sensory+Neurons+Contributes+to+Chronic+Pain.">Coupled Activation of Primary Sensory Neurons Contributes to Chronic Pain.</a> Neuron. 91 (5), 1085-1096 (2016).</li><li>Fan, N., Donnelly, D. F., LaMotte, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+compression+of+mouse+dorsal+root+ganglion+alters+voltage-gated+sodium+and+potassium+currents+in+medium-sized+dorsal+root+ganglion+neurons.">Chronic compression of mouse dorsal root ganglion alters voltage-gated sodium and potassium currents in medium-sized dorsal root ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 106 (6), 3067-3072 (2011).</li><li>Ma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+electrophysiological+changes+in+axotomized+and+neighboring+intact+dorsal+root+ganglion+neurons.">Similar electrophysiological changes in axotomized and neighboring intact dorsal root ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 89 (3), 1588-1602 (2003).</li><li>Boucher, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+analgesic+effects+of+GDNF+in+neuropathic+pain+states.">Potent analgesic effects of GDNF in neuropathic pain states.</a> Science. 290 (5489), 124-127 (2000).</li><li>Ma, C., Greenquist, K. W., Lamotte, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mediators+enhance+the+excitability+of+chronically+compressed+dorsal+root+ganglion+neurons.">Inflammatory mediators enhance the excitability of chronically compressed dorsal root ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 95 (4), 2098-2107 (2006).</li><li>Gong, K., Ohara, P. T., Jasmin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+Clamp+Recordings+on+Intact+Dorsal+Root+Ganglia+from+Adult+Rats.">Patch Clamp Recordings on Intact Dorsal Root Ganglia from Adult Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), (2016).</li><li>Schoenen, J., Delree, P., Leprince, P., Moonen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotransmitter+phenotype+plasticity+in+cultured+dissociated+adult+rat+dorsal+root+ganglia:+an+immunocytochemical+study.">Neurotransmitter phenotype plasticity in cultured dissociated adult rat dorsal root ganglia: an immunocytochemical study.</a> Journal of Neuroscience Research. 22 (4), 473-487 (1989).</li><li>Zheng, J. H., Walters, E. T., Song, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+of+dorsal+root+ganglion+neurons+induces+hyperexcitability+that+is+maintained+by+increased+responsiveness+to+cAMP+and+cGMP.">Dissociation of dorsal root ganglion neurons induces hyperexcitability that is maintained by increased responsiveness to cAMP and cGMP.</a> Journal of Neurophysiology. 97 (1), 15-25 (2007).</li><li>Hanani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Satellite+glial+cells:+more+than+just+rings+around+the+neuron.">Satellite glial cells: more than just rings around the neuron.</a> Neuron Glia Biology. 6 (1), 1-2 (2010).</li></ol>

최근 연구는 생체 내에서 DRG 뉴런의 칼슘 이미징을 달성했지만16,개별 DRG nociceptors에서 생체 패치 클램프 기록을 수행하는 것은 매우 어려운 남아있다. 따라서, 통증 분야에 대한 생체 내 단일 섬유 접근법은 지속적으로 중요하다. 본 프로토콜에서 단일 섬유 기록은 전도 실패 현상의 객관적인 관찰을 허용하고, 현재 연구에서 개발 된 생체 전 제제와이 기술의 조합은 기본 메커니...

신경 섬유를 따라 정보의 정상적인 전송은 신경계의 정상적인 기능을 보장합니다. 신경계의 비정상적인 기능은 또한 신경 섬유의 전기 신호 전송에 반영됩니다. 예를 들어, 중앙 탈수질 병변에서의 탈수초화 정도는 개입 적용 전후의 신경 전도 속도의변화의 비교를 통해 분류될 수 있다 1. 오징어 거대 축2와 같은 특별한 준비를 제외하고는 세포내 신경 섬유를 기록하기가어렵습니다. 따라서, 전기 생리활성은 단일 섬유의 세포외 기록을 통해서만 기록할 수 있다. 고전 전기 생리학적 방법 중 하나로서, 단일 섬유 기록은 다른 기술보다 더 긴 역사를 가지고 있다. 그러나 광범위한 적용에도 불구하고이 방법을 파악하는 전기 생리학자는 적습니다. 따라서, 단일 섬유 기록을 위한 표준 프로토콜의 상세한 도입은 그것의 적당한 신청을 위해 필요합니다.
다양한 패치 클램프 기술이 현대 전기 생리학 연구를 지배했지만, 단일 섬유 기록은 여전히 신경 섬유의 활동, 특히 주변 감각을 전달하는 섬유의 활동을 기록하는 데 대체 할 수없는 역할을합니다. 등지 뿌리 신경절 (DRG)에 위치한 감각 세포 체. 여기서 단일 섬유 기록을 사용하는 장점은 생체 내 섬유 기록이 세포 내 환경의 장애 없이 전임상 모델에서 자연 자극에 대한 반응을 기록할 수 있는 용량으로 긴 관찰 시간을 제공한다는 것입니다3 , 4.
지난 2 년간 연구의 증가 수는 신경 섬유를 따라복잡한 기능을 검사했다 5, 그리고 전도 실패, 이는 축을 따라 실패 신경 충동 전송의 상태로 정의, 많은 다른존재했다 말초 신경6,7. 우리의 조사에서 전도 실패의 존재는 C 섬유8을따라 지속적인 nociceptive 입력의 변조를 위한 본질적인 자기 억제 기계장치로 봉사했습니다. 이러한 전도 장애는 과민증4,9의조건하에서 현저히 감쇠되었다. 따라서, 전도 실패에 관여하는 인자를 표적으로 하는 것은 신경병성 통증에 대한 새로운 치료를 나타낼 수 있다. 전도 실패를 관찰하기 위해 단일 섬유 기록에 기초하여 순차적으로 배출된 스파이크를 기준으로 소성 패턴을 기록하고 분석해야 합니다.
전도 실패의 메커니즘을 철저히 이해하려면 의사 단극 성 해부학 적 특성에 따라 축축한 축색의 전송 특성, 또는 보다 정확하게 DRG 뉴런의 막 특성을 식별해야합니다. 이 필드에 있는 많은 이전 연구 결과는 2개의 장애물때문에 전도 실패의 조사를 위해 가능하지 않을 지도 모르다 해리된 DRG 신경 10,11에실행되었습니다. 첫째, 다양한 기계적 및 화학적 방법은 DRG 뉴런을 무료로 해리 과정에서 사용되며, 이는 건강에 해로운 세포를 초래하거나 뉴런의 표현형 / 특성을 변경하고 결과를 혼란스럽게 할 수 있습니다. 둘째, 부착 된 말초 신경은 기본적으로 제거되고 전도 실패 현상은 이러한 준비에서 관찰 할 수 없습니다. 따라서, 부착된 신경을 가진 손상되지 않은 DRG 뉴런의 제제는 상기 장애물을 피하기 위해 개선되었다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:605px;" width="605">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:161px;">Instruments and software used in single fiber recording</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Amplifier</td>
			<td style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td style="width:93px;">MEZ-8201</td>
			<td style="width:203px;">Amplification of the electrophysiological signals</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:161px;">Bioelectric amplifier monitor</td>
			<td style="width:148px;">ShangHai JiaLong Teaching instrument factory</td>
			<td style="width:93px;">SZF-1</td>
			<td style="width:203px;">Monitor firing process via sound which is transformed from physiological discharge signal</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Data acquisition and analysis system</td>
			<td style="width:148px;">CED</td>
			<td style="width:93px;">Spike-2</td>
			<td style="width:203px;">Software for data acquisition and analysis</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Electrode manipulator</td>
			<td style="width:148px;">Narishige</td>
			<td style="width:93px;">SM-21</td>
			<td style="width:203px;">Contro the movement of the electrode as required</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Hairspring tweezers</td>
			<td style="width:148px;">A.Dumont</td>
			<td style="width:93px;">5#</td>
			<td style="width:203px;">Separate the single fiber</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Isolator</td>
			<td style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td style="width:93px;">SS-220J</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="64" rowspan="2" style="height:64px;width:161px;">Memory oscilloscope</td>
			<td rowspan="2" style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td rowspan="2" style="width:93px;">VC-9</td>
			<td style="width:203px;">Display recorded discharge during</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">experiment</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:148px;">ZEISS</td>
			<td style="width:93px;">SV-11</td>
			<td style="width:203px;">Have clear observation when separate the local tissue and single fiber</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Stimulator</td>
			<td style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td style="width:93px;">SEZ-7203</td>
			<td style="width:203px;">Delivery of the electrical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Von Frey Hair</td>
			<td style="width:148px;">Stoelting accompany</td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;">Delivery of the mechanical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Water bath</td>
			<td style="width:148px;">Scientz biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;">SC-15</td>
			<td style="width:203px;">Heating paroline to maintain at 37oC</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Instruments and software used in patch clamp recording</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:161px;">Amplifier</td>
			<td style="width:148px;">Axon Instruments</td>
			<td style="width:93px;">Multiclamp 700B</td>
			<td style="width:203px;">Monitors the currents flowing through the recording electrode and also controls the stimuli by sending a signal to the electrode</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Anti-vibration table</td>
			<td style="width:148px;">Optical Technology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;">Isolates the recording system from vibrations induced by the environment</td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:161px;">Camera</td>
			<td style="width:148px;">Olympus</td>
			<td style="width:93px;">TH4-200</td>
			<td style="width:203px;">See the neurons in bright field; the controlling software allows to take pictures and do live camera image to monitor the approach of the electrode to the cell</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Clampex</td>
			<td style="width:148px;">Axon</td>
			<td style="width:93px;">Clampex 9.2</td>
			<td style="width:203px;">Software for data acquisition and delivery of stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Clampfit</td>
			<td style="width:148px;">Axon</td>
			<td style="width:93px;">Clampfit 10.0</td>
			<td style="width:203px;">Software for data analysis</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:161px;">Electrode puller</td>
			<td style="width:148px;">Sutter</td>
			<td style="width:93px;">P-97</td>
			<td style="width:203px;">Prepare recording pipettes of about 2&#956;m diameter with resistance about 5 to 8 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:148px;">Sutter</td>
			<td style="width:93px;">BF 150-75-10</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:148px;">Sutter</td>
			<td style="width:93px;">MP225</td>
			<td style="width:203px;">Give a precise control of the microelectrode</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:161px;">Microscope</td>
			<td style="width:148px;">Olympus</td>
			<td style="width:93px;">BX51WI</td>
			<td style="width:203px;">Upright microcope equipped with epifluorescence for clearly observe the cells which would be patched</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Origin</td>
			<td style="width:148px;">Origin lab</td>
			<td style="width:93px;">Origin 8</td>
			<td style="width:203px;">Software for drawing picture</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Perfusion Pump</td>
			<td style="width:148px;">BaoDing LanGe Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;">BT100-1J</td>
			<td style="width:203px;">Perfusion of DRG in whole-cell patch clamp</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Other instruments</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Electronic balance</td>
			<td style="width:148px;">Sartorius</td>
			<td style="width:93px;">BS 124S</td>
			<td style="width:203px;">Weighing reagent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">pH Modulator</td>
			<td style="width:148px;">Denver Instrument</td>
			<td style="width:93px;">UB7</td>
			<td style="width:203px;">Adjust pH to 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Solutions/perfusion/chemicals</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Calcium chloride</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">C5670</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Chloralose</td>
			<td style="width:148px;">Shanghai Meryer Chemical Technology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;">M07752</td>
			<td style="width:203px;">Mixed solution for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Collagenase</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">SLBQ1885V</td>
			<td style="width:203px;">Enzyme used for clearing the surface of DRG</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">D (+) Glucose</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">G7528</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Liquid Paraffin</td>
			<td style="width:148px;">TianJin HongYan Reagent Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;">Maintain fiber wetting</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Magnesium sulfate</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">M7506</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">P3911</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Protease</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">62H0351</td>
			<td style="width:203px;">Enzyme used for clearing the surface of DRG</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S5671</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S5886</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Sodium phosphate monobasic</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S0751</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Sucrose</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S0389</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Urethane</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">U2500</td>
			<td style="width:203px;">Mixed solution for Anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of in vivo single-fiber recording and intact dorsal root ganglion with attached sciatic nerve to examine the mechanism of conduction failure

단일 섬유 기록은 중추 및 말초 신경계의 신경 섬유에 대한 특정 응용 프로그램 때문에 지난 수십 년 동안 고전적이고 효과적인 전기 생리학적 기술이었습니다. 이 방법은 신경 과정의 의사 단극 구조를 나타내는 기본 감각 뉴런인 등쪽 뿌리 신경절(DRG)에 특히 적용됩니다. 축색을 따라 전달 된 행동 전거의 패턴과 특징은 이러한 뉴런에서 기록 할 수 있습니다. 본 연구는 완전한 Freund의 보조제 (CFA) 처리 된 쥐에서 심막 신경의 전도 실패를 관찰하기 위해 생체 내 단일 섬유 기록을 사용합니다. 기본 메커니즘은 생체 내 단일 섬유 기록을 사용하여 연구 할 수 없기 때문에, DRG 뉴런의 패치 클램프 기록은 부착 된 sciatic 신경과 그대로 DRG의 준비에 수행됩니다. 이 기록은 CFA 처리한 동물에 있는 DRG 뉴런의 전도 실패그리고 후 과분극 전위 전위 (AHP)의 상승 경사 사이 긍정적인 상관관계를 밝힙니다. 생체 내 단일 섬유 기록을 위한 프로토콜은 특정 질병에 있는 신경 섬유에 있는 전도 속도의 측정 및 감시를 통해 신경 섬유의 분류를 허용합니다. 부착 된 말초 신경과 그대로 DRG는 대부분의 생리 적 조건에서 DRG 뉴런의 활성을 관찰 할 수 있습니다. 결정적으로, 손상되지 않은 DRGs의 전기 생리학적 기록과 결합된 단일 섬유 기록은 진통 과정 동안 전도 실패의 역할을 검사하는 효과적인 방법입니다.

단일 섬유 기록 프로토콜의 결과는 섬유 해질의 품질에 따라 달라집니다. 생체 내 실험을위한 동물은 쉽게 해부를 위해 신경 트렁크를 건강하게 유지하는 좋은 상황에 있어야합니다 (토론 섹션의 조언 참조). 섬유에 약물 전달을 위해 많은 경우에 약물 응용 프로그램 목욕이 필요합니다. 도 1은 생체 내 단일 섬유 기록이 어떻게 작동되었는지를 도시하고(도1A)CFA ...

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Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

단일 섬유 기록은 중추 및 말초 신경계에 적용할 수 있는 효과적인 전기 생리학적 기술입니다. 부착 된 동골 신경과 함께 손상되지 않은 DRG의 준비와 함께 전도 실패의 메커니즘을 검사합니다. 두 프로토콜 모두 말초 신경계의 통증과의 관계에 대한 이해를 향상시킵니다.

전도 실패의 메커니즘을 검사하기 위해 연결된 Sciatic 신경을 가진 생체 내 단일 섬유 기록 및 손상되지 않은 등철 루트 신경절의 사용

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

단일 섬유 레코딩은 신경 섬유의 활동을 기록하는 데 중요한 역할을합니다. 특히 등대 뿌리 신경절의 신경세포에 수용 필드에서 주변 감각을 전달하는 활동. 섬유 레코딩의 물결에서, 자연 자극에 대한 응답을 기록하는 용량으로 지속 시간의 길이를 제공하고, 나중에 세포 간 환경의 교란이었다.단일 섬유 레코딩에서 상황에 중성자 자동이 필요합니다. 치료사는 통합 DRG 테스트의 준비에 대한 요구 사항을 호출하는 것은 상주 신경이 통합된다. 데모 상황의 결과는 좋은 물리적 데칼 단계에서 신경의 거의 모든 세부 사항을 보여줍니다.셋째, 전체 DRG 준비는 통합되어 있습니다. 이 절차를 시작하려면 수술 전에 모든 수술 기구를 준비하고 소독하십시오. 그런 다음 일반 링거의 세포외 용액을 1~2리터로 준비하고 사용할 때까지 섭씨 4도에 보관하십시오.기록을 위해 상골 신경 트렁크를 노출하려면 먼저 허벅지의 등색 부위에 마취 된 쥐의 피부와 근육을 열어 두습니다. 그런 다음 대퇴이 두근을 따라 무딘 해부를 수행합니다. 안과 가위와 유리 분리 바늘을 사용하여 좌골 신경 트렁크를 조심스럽게 분리하고 링거의 용액을 사용하여 조직을 촉촉하게 유지합니다.다음으로, 피부를 주변 슬롯에 바느질하여 집에서 만든 금속 후프에 동물을 고정합니다. 피부를 살짝 위로 당겨 체액 목욕을 설정합니다. 근동 측에 상반신경 트렁크 의 1 센티미터를 노출.미세한 신경 트렁크를 명확하게 관찰하기 위해 대비를 향상시키기 위해 신경 트렁크 아래에 작고 갈색 플랫폼을 배치합니다. 그 후, 섬유 표면의 건조를 방지하기 위해 신경 트렁크의 상단에 일부 따뜻한 액체 파라핀을 적용합니다. 신경 트렁크 주위에 발산이 있는 경우에 액체를 제거합니다.레코딩을 수행하려면 백금 필라멘트를 기록 전극으로 선택합니다. 먹고 마지막에 작은 후크를 만들 수 있습니다. 그 후, 전극을 마이크로 조작기에 부착합니다.목욕에, 피하 조직 옆에 참조 전극을 배치. 척추 두라와 피아 메이터를 분할하고 상골 신경을 얻을. 25% 배율의 스테레오 현미경하에서, 미세한 근심을 집어 들고 기록 전극의 후크에 축삭의 대략적인 끝을 일시 중단합니다.기계적 동시화 및 열 자극을 사용하여 단일 비개념 c 섬유의 수용 필드를 식별합니다. 신경 섬유의 발사가 기계적 자극과 온수에 반응하는 경우, 폴리모토, 비개념 C 섬유로 간주하십시오. 다음으로, 전기 자극의 전달을 위해 식별 필드의 피부에 2 밀리미터 간격으로 두 개의 바늘 자극 전극을 삽입한다.오실로스코프에 작용 잠재력의 파형을 표시하고, 20킬로헤르츠의 신호 샘플링 속도로 컴퓨터에 D-보드를 사용합니다. 그런 다음 데이터 수집 소프트웨어를 사용하여 스파이크를 기록하고 나중에 전문 소프트웨어로 분석합니다. 전도 실패를 측정하기 위해, 60 초 동안 c 섬유에 다른 주파수에서 반복적 인 전극 자극을 제공합니다.섬유가 자극 사이에 이완되도록 10분 간격을 허용합니다. 이어서, 전달된 반복자극 펄스의 수에 대한 실패 수의 비율을 계산하고 전도 실패의 정도를 얻기 위해 100%씩 곱한다. 등쪽 뿌리 신경절을 노출하려면 먼저 l4에서 l5 세그먼트로 뒷면의 중간선에서 피부를 엽니다.다음으로, 뼈 로거를 사용하여 근육 척추 과정 척추 보버 및 횡방향 과정을 제거하고 척수 NDRG 본체를 노출시한다. 노출된 척수 NDRG를 커버하고, 면은 정상적인 링거의 세포외 용액에 담그고 신경 활동을 유지합니다. 출혈을 멈추고 필요에 따라 혈액을 제거하십시오.그 후, 안과 가위를 사용하여, DRG와 연결된 척추 신경을 노출시키기 위하여 척추 대원 위에 l4를 s1 뼈 구조물을 제거합니다. 중간 허벅지에 상골 신경을 노출하는 피부에 상처를. 분리 하고 근육 내부로 가는 신경의 말단 끝에서 상선 신경을 분리.그리고 절단하기 전에 신경의 끝에 수술 라인으로 신경 트렁크를 리게이트. 그런 다음, 신경 결찰 점을 들어 올려 근본적인 결합 조직으로부터 상주 신경을 분리한다. 척수에서 두라를 제거하고, SCIATIC 신경의 인접 한 부분에 도달 할 때까지 기본 결합 조직에서 DRG를 분리합니다.따라서, 부착된 상골 신경으로 DRG의 전체 준비를 분리한다. DRG의 표면을 4배 배율로 클리어하려면 핀셋을 사용하여 l4~ l6 DRG 표면의 척추 두라를 조심스럽게 제거합니다. 혼합 효소 1밀리리터를 함유한 유리 튜브에 부착된 상아 신경을 장착한 DRG를 놓습니다.섭씨 37도의 수조에서 15분간 소화하세요. 15분 후, 수술 라인의 끝을 들어 올리고 효소를 씻어 일반 링거의 세포 외 용액으로 가득 찬 접시로 준비를 이동합니다. 그런 다음 소화된 DRG를 녹음을 위한 산소링어의 세포외 용액으로 채워진 용기로 전송합니다.레코딩을 수행하려면 세포내 용액을 준비하고 사용할 때까지 섭씨 0도에 저장하십시오. 슬라이스 앵커를 사용하여 신경을 안정시키고 신경 끝을 전극자극 흡입에 연결합니다. 40배율에서 물 에머젼 목표를 가진 DRG 뉴런을 시각화하고 선택합니다.전극을 접고 세포내 용액으로 채웁니다. 홀더에 전극을 부착하고 4~7메가옴의 최종 저항으로 파이펫에 양압을 가한다. 다음으로 전극을 세포 표면에 가져옵니다.그런 다음 파이프에 음압을 적용하여 씰을 형성합니다. 기가옴 씰에 도달하면 멤브레인 전위를 약 60밀리볼트로 설정하고 모든 셀 레코딩 모드를 설정합니다. 이어서, 전도 실패를 선별하기 위해 흡입 전극을 통해 상시 신경에 5 내지 50 헤르츠의 반복자극을 전달한다.기준선에서 피크까지 AHP의 진폭과 80%의 AHP 지속 시간을 측정합니다. 이 그림은 10 헤르츠 전기 자극에 대한 응답으로 쥐에서 다시 발사 단일 c5의 원래 연속 기록을 보여줍니다. 모든 20 번째 스윕이 표시되고 위에서 아래로 표시됩니다.삽입은 대표 작업 잠재력을 보여 주어 있습니다. 다음은 CFA주입랫으로부터의 단일 C 섬유의 레코딩이 이전 패널과 동일한 자극에 응하여 이다. 이 수치는 CFA 정격 쥐로부터 작은 직경 DRG 뉴런에서 5 헤르츠 자극에 대한 연속 발사 반응, 또는 ZD7288의 상이한 농도의 투여를 보여줍니다.인셋에는 지정된 기록 기간에 대한 확장된 추적이 표시됩니다. 어두운 반점은 스파이크 실패를 나타냅니다. AHP는 컨트롤에서 더 큰 상승 경사를 보였다.ZD7288 응용 프로그램에서 125 마이크로몰라 후 더 작은 상승 경사를 관찰했다. 시간 단일 파이버 레코딩 할 때, 나는 동물이 좋은 안전 상태를 유지합니다 섬유를 절단하는 것이 중요하다고 생각합니다. 그리고 중성자 주변의 미세 환경.단일 섬유 레코딩과 상골 신경과 부착된 그대로 DRG의 적용의 조합은 통증에 관한 말초 신경계에 대한 이해를 향상시다.

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Channels and the Electrical Properties of Membranes

SCIENTISTS IN ACTION

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

교양 성인 지느러미 루트 신경절의 신경 세포와 축삭 재생의 유전 연구

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

연구

신경과학

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

배근 잠재적 기록하여 생쥐의 척수 시냅스 억제를 측정<em&gt; 생체</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

등쪽 뿌리 신경절 모델 : 암성 신경 침략의 생체 외 모델링에서

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

An Approach to Enhance Alignment and Myelination of Dorsal Root Ganglion Neurons

접근 방법은 등쪽 뿌리 신경절 뉴런의 정렬 및 수초를 강화하는

Axon regeneration is a chaotic process due largely to unorganized axon alignment. Therefore, in order for a sufficient number of regenerated axons to ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Electroporation에 의해 쥐 좌골 신경의 슈반 세포로 생체 내 유전자 전달에

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

등쪽 뿌리 신경절 사출 및 지느러미 루트 감각 축삭의 재생을위한 모델로 부상 크러시

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Laminotomy 허리 지 루트 신경 절의 액세스 및 돼지에 주입

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

단일 좌 골 신경 및 Cytometry 사용 하 여 단일 마우스에서 지 루트 신경 절에 면역 세포의 분석

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

성인 마우스 지 루트 신경 절의 Electroporation Vivo에서 조사 포유류 축 삭 재생:

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

등갈 뿌리 신경절 대식세포의 신속한 절연

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...