Name: intraventricular transplantation of engineered neuronal precursors for in vivo neuroarchitecture studies
Uploaded: 2019-05-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intraventricular Transplantation of Engineered Neuronal Precursors for In Vivo Neuroarchitecture Studies at JoVE.com

ونشكر مين دوك دو على إسهامه في الإعداد المبكر لهذا الإجراء.

تمت الموافقة على جميع الأساليب والإجراءات الموضحة هنا من قبل SISSA Organismo preposto al Benessere Animale (SISSA IACUC).
1- توليد مجمعات ذرية "خضراء" هندسية
<ol><li>إعداد حمام السباحة "الأخضر"
	<ol>
<li>ماتي أنثى من نوع البرية CD1 مع مؤسس MTAPT EGFP / + 16. قتل السد الحامل عن طريق خلع ?...

<ol>
	<li>Kistner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxycycline-mediated+quantitative+and+tissue-specific+control+of+gene+expression+in+transgenic+mice.">Doxycycline-mediated quantitative and tissue-specific control of gene expression in transgenic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , (1996).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection. Journal of visualized experiments: JoVE. , (2011).</li><li>Kim, J. Y., Grunke, S. D., Levites, Y., Golde, T. E., Jankowsky, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebroventricular+Viral+Injection+of+the+Neonatal+Mouse+Brain+for+Persistent+and+Widespread+Neuronal+Transduction.">Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2014).</li><li>Puram, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CaMKII&#946;+2+signaling+pathway+at+the+centrosome+regulates+dendrite+patterning+in+the+brain.">A CaMKII&#946; 2 signaling pathway at the centrosome regulates dendrite patterning in the brain.</a> Nature Neuroscience. , (2011).</li><li>Zuccotti, A., Le Magueresse, C., Chen, M., Neitz, A., Monyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+Fezf2+directs+the+differentiation+of+neural+stem+cells+in+the+subventricular+zone+toward+a+cortical+phenotype.">The transcription factor Fezf2 directs the differentiation of neural stem cells in the subventricular zone toward a cortical phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2014).</li><li>Mikuni, T., Nishiyama, J., Sun, Y., Kamasawa, N., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput,+High-Resolution+Mapping+of+Protein+Localization+in+Mammalian+Brain+by+in+Vivo+Genome+Editing.">High-Throughput, High-Resolution Mapping of Protein Localization in Mammalian Brain by in Vivo Genome Editing.</a> Cell. , (2016).</li><li>Spiga, S., Acquas, E., Puddu, M. C., Mulas, G., Lintas, A., Diana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Golgi-Cox+and+immunofluorescence+using+confocal+microscopy.">Simultaneous Golgi-Cox and immunofluorescence using confocal microscopy.</a> Brain Structure and Function. , (2011).</li><li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Fezf2-Ctip2+genetic+pathway+regulates+the+fate+choice+of+subcortical+projection+neurons+in+the+developing+cerebral+cortex.">The Fezf2-Ctip2 genetic pathway regulates the fate choice of subcortical projection neurons in the developing cerebral cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2008).</li><li>Feng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. , (2000).</li><li>Lu, X. H., Yang, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically-directed+Sparse+Neuronal+Labeling+in+BAC+Transgenic+Mice+through+Mononucleotide+Repeat+Frameshift.">Genetically-directed Sparse Neuronal Labeling in BAC Transgenic Mice through Mononucleotide Repeat Frameshift.</a> Scientific Reports. , (2017).</li><li>Cai, D., Cohen, K. B., Luo, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+tools+for+the+Brainbow+toolbox.">Improved tools for the Brainbow toolbox.</a> Nature Methods. , (2013).</li><li>Garcia-Moreno, F., Vasistha, N. A., Begbie, J., Molnar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLoNe+is+a+new+method+to+target+single+progenitors+and+study+their+progeny+in+mouse+and+chick.">CLoNe is a new method to target single progenitors and study their progeny in mouse and chick.</a> Development. , (2014).</li><li>Falcone, C., Daga, A., Leanza, G., Mallamaci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emx2+as+a+novel+tool+to+suppress+glioblastoma.">Emx2 as a novel tool to suppress glioblastoma.</a> Oncotarget. , (2016).</li><li>Brancaccio, M., Pivetta, C., Granzotto, M., Filippis, C., Mallamaci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emx2+and+Foxg1+inhibit+gliogenesis+and+promote+neuronogenesis.">Emx2 and Foxg1 inhibit gliogenesis and promote neuronogenesis.</a> Stem Cells. , (2010).</li><li>Fimiani, C., Goina, E., Su, Q., Gao, G., Mallamaci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+activation+of+haploinsufficient+Foxg1+gene+in+murine+neocortex.">RNA activation of haploinsufficient Foxg1 gene in murine neocortex.</a> Scientific Reports. , (2016).</li><li>Tucker, K. L., Meyer, M., Barde, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins+are+required+for+nerve+growth+during+development.">Neurotrophins are required for nerve growth during development.</a> Nature Neuroscience. , (2001).</li><li>Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+mouse+neural+stem+cell+precursors.">Culture of mouse neural stem cell precursors.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2007).</li><li>Park, J. J., Cunningham, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin+Sectioning+of+Slice+Preparations+for+Immunohistochemistry.">Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2007).</li><li>Puzzolo, E., Mallamaci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortico-cerebral+histogenesis+in+the+opossum+Monodelphis+domestica:+Generation+of+a+hexalaminar+neocortex+in+the+absence+of+a+basal+proliferative+compartment.">Cortico-cerebral histogenesis in the opossum Monodelphis domestica: Generation of a hexalaminar neocortex in the absence of a basal proliferative compartment.</a> Neural Development. , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> NeurphologyJ Manual. , (2012).</li><li>Chiola, S., Do, M. D., Centrone, L., Mallamaci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxg1+Overexpression+in+Neocortical+Pyramids+Stimulates+Dendrite+Elongation+Via+Hes1+and+pCreb1+Upregulation.">Foxg1 Overexpression in Neocortical Pyramids Stimulates Dendrite Elongation Via Hes1 and pCreb1 Upregulation.</a> Cerebral Cortex. , (2018).</li></ol>

وجوانب/خطوات محددة من هذا الإجراء حاسمة وتتطلب اهتماما خاصا. أولاً، (أ) يجب أن يكون المشغلون مدربين مسبقاً بشكل كاف ٍ للتعامل بأمان مع الفيروسات اللينة في بيئة مختبر متوافقة مع BSL-2. ثانيا، (ب) قبل خلط "اختبار" و "السيطرة" الاستعدادات العصبية، فإنه من الإلزامي لغسل بعناية اثنين من تعليق المحيط...

هنا نقوم بوصف طريقة بسيطة وضعناها لتشريح في السيطرة على الجينات في الجسم الحي من الخلايا العصبية. استنادا إلى الهندسة في المختبر من السلائف العصبية، وزرعها في الدماغ حديثي الولادة والتقييم المورفومتري المقترن من "اختبار" و "السيطرة" الخلايا، فإنه يسمح للكشف عن الآثار الوظيفية للجينات اختبار في السيطرة الدقيقة على مورفولوجيا الخلايا العصبية في طريقة سريعة وبأسعار معقولة. للتحقيق في السيطرة على الجينات الحية للهندسة العصبية العصبية، يجب معالجة ثلاث قضايا تقنية رئيسية: (1) تحقيق تعبير جين الاهتمام (GOI) منقوشة بشكل كاف ومراقبة كمية دقيقة منه؛ (2) تحقيق مجموعة من الجينات ذات الأهمية الكافية ومراقبة كمية دقيقة لها؛ (2) تحقيق مجموعة من الجينات ذات الأهمية الكافية ومراقبة كمية دقيقة لها؛ (2) تحقيق مجموعة من الجينات ذات الأهمية ومراقبة كمية دقيقة لها؛ (3) تحقيق ذلك التعبير المنقوش بشكل كاف. (2) الحصول على تصور مجزأة بشكل صحيح من الصور الظلية العصبية متميزة؛ (3) استخلاص الأهمية الإحصائية للنتائج مع توظيف عدد محدود من الحيوانات.
عندما تكون متاحة، قد تكون خطوط متحولة الماوس التي تأوي التتراسيكلين (تيت) التي تسيطر عليها الجينات المتحولة أفضل أداة لمعالجة العدد الأول1. وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام التثناع الجسدي. في مثل هذه الحالات ، يتم تسليم الترانسجين عن طريق الكهرباء2 أو التحويل الفيروسي3. بعد ذلك، يتم الاحتفاظ به كإبيسوم (على سبيلالمثال، على الكهربة القياسية 4)، أو يتم دمجها في الجينوم (عشوائيا، عن طريق integrase الرجعية5؛ أو في موقع محدد، عن طريق كريسبر الترويج لإعادة تركيبة متجانسة (SLENDR)6 ).
ثانياً، يمكن تحقيق تصور الصور الظلية العصبية من خلال (أ) وضع العلامات الموحدة المتناثرة أو (ب) وضع العلامات التفاضلية الكثيفة. أما بالنسبة لوضع العلامات متفرقة، يمكن استخدام منهجيات متقدمة مثل Golgi7، يمكن ملء مصغرات الخلايا العصبية المختارة من قبل biocytin8، ويمكن الحصول على وضع العلامات الملح والفلفل بفضل transgene معبر عن هائج. مثل هذا الجين قد يعرض النسخ المتنوع (Thy-EGFP)9 أو يمكن تنشيطه عن طريق إعادة تركيب ة الاستوكاستك (MORF)10. أما بالنسبة لـ (ب)، فإن الاستراتيجيات المتطورة تشمل إعادة تركيب الاستوكاستك بوساطة كري ضمن صفيف متعدد البروتينات الفلورية (Brainbow)11،فضلاً عن التكامل الجيني الذي يحركه البيكونباك-ترانسبوساز لجينات البروتين الفلوري، سابقاً تسليمها عن طريق التثناق الجسدي (CLoNE)12.
أما بالنسبة للمسألة الثالثة، فإن النتيجة المورفومترية تتأثر في كثير من الأحيان بتباين عشوائي كبير، ينشأ عن الاختلافات بين الحيوانات والطوارئ المتعلقة بحقن الخلايا. ولهذا الغرض، يستخدم عادة عدد كبير من الحيوانات لتحقيق القوة الإحصائية اللازمة لتقييم النشاط المورفولومتري GOI.
وكثيرا ما تعتمد النهج التي سبق وصفها على المهارات التقنية المتقدمة وتتطلب موارد مالية واضحة، مما قد يحد من انتشارها داخل الأوساط العلمية. للتحايل على هذه القضايا، تصورنا خط أنابيب سهلة ومباشرة لتشريح السيطرة الجينية للهندسة العصبية في الجسم الحي بطريقة سريعة وبأسعار معقولة. هذا مستوحى من تصميم مماثل زرع مشترك وضعت سابقا لسريع في تقييم الجسم الحي للنشاط عبر الانترابسيتش13.
وعلى وجه التحديد، يعتقد أن الزرع المشترك للسلائف العصبية "الخضراء" المهندسة في المختبر ("اختبار" و "التحكم" الخلايا) في الدماغ "الأسود" الوليد المتلقي يمكن أن يصلح في وقت واحد القضايا الرئيسية الثلاث المذكورة أعلاه. في الواقع، في المختبر الهندسة اللينفيروسير من السلائف، في ظروف تسيطر عليها جيدا، ويسمح الحفاظ على تقلب التعبير عبر الخلايا في الحد الأدنى، أقل بكثير من تلك المرتبطة عادة في التلاعب الجسدية في الجسم الحي (التي أجريت سابقا 14 سنة , 15 وفي نتائجنا غير المنشورة). والسيطرة الدقيقة الناتجة عن ذلك على التعبير الجيني قابلة للمقارنة مع تلك التي حققتها النماذج المحورة وراثيا التي تسيطر عليها التي تسيطر عليها التيت. ومع ذلك، فإن تكاليف هذا الإجراء أقل بكثير من تلك الناشئة عن صيانة خط ماوس المعدل وراثياً. بعد ذلك، حقن الخلايا الحرة سهلة وتتطلب الحد الأدنى من التدريب. وعلاوة على ذلك، يمكن بسهولة ضبط كمية السلائف المسماة التي تحقن في كل دماغ لتحقيق عدد تراكمي كاف من السلائف الموزعة توزيعا ضئيلا، مع الإبقاء أيضا على العدد الإجمالي للالحيوانات المزروعة عند الحد الأدنى. وأخيراً وليس آخراً، فإن الحقن المشترك للسلائف ذات العلامات الفلورية المختلفة و"الاختبار" و"المراقبة" والتحليل الإحصائي الثنائي اللاحق للنتائج يتصدى لآثار التغير التجريبي بين الحيوانات، مما يسمح بالوصول إلى الأهمية الإحصائية للنتائج، حتى بعد تحليل عدد محدود من الأفراد13.
وينبغي التأكيد على أن هذه الطريقة، وإن كانت سريعة ورخيصة، لها لدينا قيودان رئيسيتان. أولا، تم تصميمه للتحقيق في السيطرة الجينية الخلية المستقلة من العمارة العصبية، وليس من المناسب لمعالجة السيطرة البيئية. ثانيا، كما السلائف العصبية المزروعة تصل إلى موقعها النهائي من قبل جدول زمني غير متجانسة، وهذا الأسلوب هو أفضل من نموذج التحكم neuroarchitectonics التي تحدث الانتهاء من الهجرة الماضية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1035px;" width="1034">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">0.3 mL syringe</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">320840</td>
			<td style="width:247px;">store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.45 &#956;m sterile filter</td>
			<td>Millex-HV</td>
			<td>SLHU033RS</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12 multiwell plate</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353043</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1X PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24 multiwell plate</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351147</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-EGFP antibody, chicken polyclonal, RRID:AB_371416</td>
			<td>Tebubio</td>
			<td>GTX13970</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-RFP antibody, rat monoclonal, RRID:AB_10795839</td>
			<td>Antibodies Online</td>
			<td>ABIN334653</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-Tubb3 antibody, mouse monoclonal, RRID:AB_2313773</td>
			<td>Covance</td>
			<td>MMS-435P</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aspirator tube assemblies kit for calibrated microcapillary pipettes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177-5EA</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blue light lamp</td>
			<td>Nightsea</td>
			<td>BLS2</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Borosilicate capillaries</td>
			<td>Kwik-Fil</td>
			<td>TW150-4</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9647</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;">B&#252;rker chamber</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>BR719520</td>
			<td>0.0025 mm2, 0.100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cryo-inclusion medium (Killik)</td>
			<td>Bio-Optica</td>
			<td>05-9801</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable embedding mold</td>
			<td>Bio-Optica</td>
			<td>07MP7070</td>
			<td>DispoMold07</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F-12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31331-028</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Doxycicline</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1822</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont forceps #3c</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11231-20</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGF</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>PHG0311</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E3889</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FGF</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>PHG0261</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-09</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fungizone (Amphotericin B)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15290018</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-chicken Alexa 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11039</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-rat Alexa 594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11007</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heparin Solution</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>07980</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N2 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Optical fibers</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CLS150X</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P1000 puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-1000 model</td>
			<td>Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pen Strep</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0781</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PFA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid #363 [LV_TREt_(IRES)PLAP]</td>
			<td>built in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid #386 [LV_pTa1_mCherry]</td>
			<td>built in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid #401 [LV_pTa1_rtTA(M2)]</td>
			<td>built in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid #408 [LV_Ppgk1p_rtTA(M2)]</td>
			<td>built in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid #484 [LV_lacZ]</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid #529 [LV_Pgk1p_mCherry]</td>
			<td>built in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid #730 [LV_pSyn_rtTA(M2)]</td>
			<td>built in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BB515</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Steromicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ6</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15400-054</td>
			<td>store at -20 &#8451;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6522</td>
			<td>store at +4 &#8451;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intraventricular transplantation of engineered neuronal precursors for in vivo neuroarchitecture studies

السيطرة الجينية على الخلايا العصبية هي حاليا موضوع تحقيق مكثف. يوصف هنا هو طريقة بسيطة وضعت لدراسة في السيطرة على الجينات في الجسم الحي من مورفولوجيا الخلايا العصبية الإسقاط neocortical. ويستند هذا الأسلوب على (1) في الهندسة في المختبر lentiviral من السلائف العصبية كما "اختبار" و "السيطرة" الخلايا، (2) زرع مشترك في العقول البرية من نوع، و (3) تقييم مورفومتري المقترنة من مشتقاتها العصبية. وعلى وجه التحديد، تستخدم السلائف البللة E12.5 من المتبرعين بالخلايا العصبية، والمسمى وراثيا، لهذا الغرض. وهي مصممة للاستفادة من المروجين المختارين وتكنولوجيا التيتون/أوف، وهي مزروعة يدوياً حرة في البطينين الجانبيين حديثي الولادة. في وقت لاحق، عند التنميط المناعي للعقول المتلقية، يتم تغذية الصور الظلية من الخلايا العصبية المزروعة في برامج المصدر المفتوح NeurphologyJ، يتم استخراج المعلمات مورفومترية، ويتم حساب متوسط الطول ومؤشر المتفرعة. بالمقارنة مع الطرق الأخرى، وهذا واحد يقدم ثلاث مزايا رئيسية: أنه يسمح بتحقيق رقابة دقيقة على التعبير عبر الجينات بتكاليف معقولة، فإنه يتطلب فقط المهارات الجراحية الأساسية، ويوفر نتائج موثوقة إحصائيا عند تحليل محدود عدد الحيوانات. غير أنه بسبب تصميمه، فإنه لا يكفي لمعالجة السيطرة غير المستقلة للخلايا على الهندسة العصبية. وعلاوة على ذلك، فإنه يفضل أن تستخدم للتحقيق في السيطرة على مورفولوجيا النيورايت بعد الانتهاء من الهجرة العصبية. في تركيبته الحالية، يتم ضبط هذه الطريقة بشكل رائع للتحقيق في السيطرة الجينية على بنية الخلايا العصبية الجديدة الجلوتاماستيك. الاستفادة من خطوط المعدلة وراثيا التعبير عن EGFP في أنواع الخلايا العصبية محددة أخرى، فإنه يمكن إعادة الغرض لمعالجة السيطرة الجينية من هندستها المعمارية.

وهناك خمس مجموعات بيانات أولية توفر معلومات مفيدة عن الجوانب الرئيسية للإجراء، أولها (1) كفاءة انتقال السلائف العصبية ونقلها بصورة مشتركة بواسطة ناقلات الفيروسات اللينة. (2) مثال على السمات الرئيسية للمروّجين الذين استخدموا لقيادة "جين الاختبار". (3) مثال على الخلايا المهن...

Watch this Scientific Journal Video about Intraventricular Transplantation of Engineered Neuronal Precursors for In Vivo Neuroarchitecture Studies at JoVE.com

Intraventricular Transplantation of Engineered Neuronal Precursors for In Vivo Neuroarchitecture Studies

استنادا ً إلى الهندسة الفيروسية في المختبر للسلائف العصبية، وزرعها المشترك في العقول البرية والتقييم المورفومتري المقترن لمشتقات "الاختبار" و"التحكم"، تسمح هذه الطريقة بنمذجة دقيقة للتحكم في الجينات الحية للنيوكورتيكال مورفولوجيا الخلايا العصبية بطريقة بسيطة وبأسعار معقولة.

زرع داخل البطين من السلائف العصبية المهندسة لدراسات الهندسة العصبية في الجسم الحي

Gene control of neuronal cytoarchitecture is currently the subject of intensive investigation. Described here is a simple method developed to study in ...

الهدف العام من هذه التقنية هو تقييم تأثير التلاعب بالتعبير الجيني على بنية الخلايا العصبية القشرية في الجسم الحي. ميزتنا الرئيسية الأولى من هذا الإجراء على تلك القائمة على كهرباء محايدة، هو التحكم الدقيق لمستويات التعبير الجيني. على وجه التحديد، هذا خط أنابيب متكامل تمكن في تقييم في الجسم الحي من عيب، تمجيدها من قبل تغييرات صغيرة في التعبير الجيني على السيطرة على الخلايا العصبية cytoarchitecture.وعلاوة على ذلك، فإن هيكل الزوج من اختبار زرع يسمح لخفض كبير في أعداد الحيوانات اللازمة للحصول على نتائج ذات دلالة إحصائية. ويستفيد هذا الأسلوب من مجموعة سلائف ناشئة عن أجنة تحويلية من نوع Tau EGFP. وينقسم هذا التجمع إلى اثنين من تجمعات فرعية التي هي بدلا من المصابين مع اثنين من يمزج العدسي الفيروسية.للحصول على تجمع اختبار أخضر و تجمع تحكم أصفر سيتم إدخاله بشكل مشترك. بعد يومين من التوسع في المختبر ، يتم فصل المجالات العصبية الناتجة ، مختلطة من واحد إلى واحد ، وحقنها مع شعرية في الفضاء البطيني الماوس. بعد عشرة أيام ، يتم تنفيذ الفلوروس المناعي على الأقسام التاجية للسماح بالمقارنة بين الخلايا العصبية الاختبارية والتحكم فيها.وأخيراً، يتم تصوير الأجزاء المثبطة للمناعة وتممّم هيكلها من أجل التقييم النهائي لبارامترات القياسات المورفومية. قبل زرع الجسم الحي ، قم بإعداد المسبح الأخضر. يتم تعيين الأجنة E12.5، التي تم حصادها من سد حامل تزاوج سابقا إلى مؤسس تاو EGFP، في آبار فردية من لوحة متعددة الآبار في حل PBS.Genotype لهم بسرعة عن طريق التفتيش البصري تحت مصباح الضوء الأزرق. فصل القشريات الخضراء تشريح إلى خلايا واحدة. إعادة تعليق الخلايا في الوسيلة التكاثرية، وتقسيمها إلى اثنين من تجمعات فرعية متساوية الحجم.تصيب كل حمام سباحة فرعي بمزيج من العدسة المخصصة. كل مزيج يحتوي على فيروس التسمية الحمراء أو فيروس مكافحة الأسود. فضلا عن الفيروسات لتيت-إيقاف التي يحركها transgene أو التعبير عنصر التحكم، على التوالي.يجب أن تدار كل فيروس العدس في تعدد العدوى من 8. لوحة الخلايا المصابة في المتوسطة التكاثرية مع 2 ميكروغرام لكل ملليلتر من doxycycline. نقل الخلايا إلى الحاضنة وتركها لمدة يومين عند 37 درجة.بعد يومين، يجب أن تظهر اثنين من حمامات فرعية كمواد تعليق من neurospheres الصغيرة. التعبير عن بروتين الفلورسنت الأحمر بشكل متجانس، أم لا. بعد هندسة السلائف، تعيين مجموعة تقييم لزرع في الجراء مختبر P0 الأبيض.استخدام الشعيرات الدموية الزجاج البورسليكات مع القطر الأبدي والداخلي يساوي 1.5 ملليمتر و 1.12 ملليمتر، على التوالي. سحب شعري مع سحب P1000. أولاً، أدخل برنامج السحب.ثانياً، ضع الشعيرات الدموية في حامليها وشدها. ثالثا ، بدء تشغيل البرنامج واتخاذ اثنين من سحب microcapillaries. قطع طرف شعري، باليد مع مشرط، تحت منظار مجسم للحصول على طرف مع قطر خارجي من 200-250 ميكرومتر.وأخيرا، ضع الشعيرات الدموية على دعم البلاستيك في طبق بيتري مغلق، ونقله تحت غطاء محرك السيارة. تطهير الألياف البصرية ووضعها تحت غطاء محرك السيارة. مزيج EGTA وسريع الأخضر الماجستير يمزج، لإعداد الحل تتبع الخلية، ووضعها مرة أخرى تحت غطاء محرك السيارة.قطع قطع صغيرة من مختبر ختم الفيلم لاكتشاف تعليق الخلية. وأخيرا، إعداد حل من 1 مليغرام لكل ملليلتر doxycycline معقم التخلص في حقنة 0.3 ملليلتر. يتم إعداد أنبوب الحقن من أنبوبين اللاتكس.إصلاح قطعة الفم البلاستيكية الصلبة إلى نهاية واحدة من أنبوب اللاتكس. ثم، إصلاح حامل الشعرية إلى نهاية واحدة من أنبوب اللاتكس الأخرى. قم بتوصيل النهايات الحرة لأنابيب اللاتكس من فلتر معقم 0.45 ميكرومتر، كحاجز ضد الجراثيم المشغل.ضع تجميع أنبوب التعرق الناتج على حامل بلاستيكي ليتم الاحتفاظ به تحت غطاء محرك السيارة. جمع واختبار ومراقبة الاعصاب في أنابيب منفصلة. تعليق في الغلاف العصبي للطرد المركزي واستبدال المكبر بـ PBS.كرر هذا التسلسل مرتين أكثر. تعليق الغلاف العصبي الطرد المركزي، استبدال فائقة بحل التربسين، والماصة بيليه الخلية صعودا وهبوطا، 4، 5 مرات. اترك الخلايا في الحاضنة لمدة خمس دقائق للحصول على تعليق خلية واحدة.كتلة تريبسين مع محلول مثبطات التربسين. خلايا الطرد المركزي، وإعادة تعليقها في وسط الانتشارية الجديدة. عد الخلايا من اثنين من تجمعات وضبط تركيزها إلى 100،000 الخلايا في ميكرولتر، في المتوسطة التكاثرية.ثم، خلط اختبار والسيطرة على الخلايا 1:1 والتحقق من المزيج الناتج تحت المجهر الفلوري. وأخيرا، وضع المزيج على الجليد تحت غطاء محرك السيارة. إعداد القفص مع الأم والجراء على طاولة بعيدة عن منطقة العمليات الجراحية.ضع قفص الاسترداد على عربة. ضع خليط من نشارة نقّاصة نقّاصة النقّد المُستَخَذة من قفص الأم في قاعها، ووضع قفص التعافي تحت مصباح. جانبا، تعيين مربع الجليد التي تغطيها رقائق الألومنيوم لتخدير الجراء P0.فقط قبل زرع، إضافة 1 إلى 10 حجم من حل تتبع الخلية إلى حجم واحد من تعليق الخلية، وبقعة ثلاثة ميكرولترات من المزيج الناتج على قطعة من مختبر ختم الفيلم. وضع الجرو على بارد، رقائق الألومنيوم لمدة دقيقة واحدة، وتحقق من أنه هو تخدير تماما. وفي الوقت نفسه، الطامح 3 ميكرولترات من مزيج الحقن في الشعيرات الدموية الزجاجية.مسح بلطف رأس الجرو تخدير مع 70٪ الإيثانول. بعد ذلك، حدد موقعه على الألياف البصرية، لتحديد بوضوح نصفي الكرة القشرية. أدخل الشعيرات الدموية في الجبهة والوصول إلى تجويف البطين.أثناء القيام بذلك، وإيلاء الاهتمام بعدم تلف الأوعية الدموية. لمنع الضرر من سماحة العقدية، تدوير الإبرة بشكلٍ جانبي بثلاثين درجة. حقن بلطف الخلايا في تجويف ورصد انتشارها عن طريق الأخضر السريع.انتظر لمدة خمس إلى عشر ثوانٍ. إزالة إبرة الزجاج، مع الحرص على عدم التعرق تعليق الخلية، والتخلص منه في سلة التخلص المناسبة. قبل استرداد الجرو من التخدير ، حقن 150 ميكرولترات من محلول دوككسي داخل الصفاق ، للحفاظ على التعبير المعدل وراثيا لا يزال خارج بعد الزرع.بعد الحقن، ضع الجراء مباشرة تحت المصباح للتعافي. اترك الجراء هناك لمدة خمس إلى عشر دقائق ، وبمجرد أن يكونوا مستيقظين تمامًا ، ضعهم في القفص مع الأم. مراقبة الجراء التي تعمل لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات، لضمان أن الأم تقبل لهم.تزويد القفص مع مياه الشرب التي تحتوي على 0.5mg/mL دوكسيسيكلين وسوكروز, للحفاظ على التعبير المعدلة وراثيا قبالة. استبدل الـ doxycycline الذي يحتوي على الماء بمياه خالية من الـ بعد أربعة أيام من الزراعة. وبالتالي تفعيل الجينات عبر في الخلايا العصبية ما بعد التشنج.إبقاء الفئران في نظام خال من دوكسي لمدة ستة أيام، والقتل الرحيم لهم في P10. إصلاح العقول من الجراء القتل الرحيم في 4٪ PFA، في أربع درجات، بين عشية وضحاها. إزالة حل PFA واستبداله مع محلول السكروز 30٪.اترك الأدمغة عند أربع درجات حتى تغرق إلى قاع القارورة. نقل العقول إلى قالب التضمين المتاح ما يقرب من نصف مليئة متوسطة إدراج التبريد. تجميد الدماغ وشملت في 80 درجة.قطع 60 ميكرون أقسام إكليل سميكة باستخدام التبريد. أقسام عملية لمكافحة GFP، ومكافحة RFP immunofluorescence ومضادة لهم مع حل DAPI. تعيين المعلمات العمل من المجهر confocal بشكل مناسب كما هو مبين.جمع صور لشرائح مناعية، واختيار GFP إيجابية حقول التصوير الفوتوغرافي الغنية بالخلايا العصبية أعمى من توزيع إشارة RFP. تصدير الصور كملفات ND2 وإنشاء الإسقاطات z الأقصى منها كملفات TIFF. للسماح للهيكل العظمي العصبية اللاحقة أعمى من الخلايا الجينية، إخفاء إشارة حمراء.للقيام بذلك، إضافة طبقة معايرة. حدد المستويات، حدد الأحمر. تعيين الإخراج إلى صفر.وحفظ الملف على هذا النحو. يتم تنفيذ الهيكل العظمي في وقت لاحق من قبل مشغل جديد ، الذي لم يكن لديه حق الوصول السابق إلى الملفات الحمراء العادية الأصلية. لكل ملف أحمر مخفي، افتح الملف، وأضف طبقة رسم إلى الصورة الأساسية، وحدد أداة القلم الرصاص.تتبع سومر على أساس إشارة GFP. ثم، تتبع نيوريت. وأخيرا، حفظ ملف mutlilayer، بما في ذلك الصور الظلية العصبية.ويمكن إجراء تحليل لاحق من الهياكل العظمية العصبية من قبل أي من المشغلين. فتح كل ملف mulitlayer، إنشاء ملفات جديدة فارغة 16 بت الرمادي مع خلفية سوداء. واحد لكل خلية عصبيةنسخ ولصق الصور الظلية العصبية واحدة، من الصورة الأساسية، إلى ملفات تدرج الرمادي. نعود إلى ملف متعدد الطبقات وإيقاف طبقة التكيف لكشف النقاب عن الأنماط الجينية العصبية. حفظ الملفات الرمادية 16 بت، وإملاء على الخلايا العصبية المقابلة النماذج الجينية.استيراد الصور الرمادية في ImageJ واحدا تلو الآخر ، وتحليل الهياكل العظمية من قبل البرنامج المساعد NeurphologyJ. جمع بيانات أساسية مختارة من NeurophologyJ، إجمالي مساحة طول نيوريت، نقاط المرفق ونقاط النهاية، في جدول بيانات، وتوظيفها لحساب معلمات المورفوميتري الثانوية. البروتوكول الهندسي نقترح يسمح cotransduce الغالبية العظمى من الخلايا العصبية موضوع التحقيق، مع مجموعات transgenes المقصود.وعلاوة على ذلك، فإنه يسمح لتحقيق التجانس كبير من مستويات التعبير عبر في داخل مجموعة الخلايا المستحثة. ومن السمات الرئيسية للإجراءات لدينا، هو انها تكوين الاقتران. يتم هندسة اختبار و مجموعة السلائف التحكم بشكل منفصل، مختلطة 1:1، وأخيرا شارك في زرعها.وسييسر هذا النهج المقترن الكشف عن الاختلافات في النتائج المرتبطة على وجه التحديد بالأنماط الجينية المتميزة. في هذا المثال، قمنا بتحليل أقسام الإكلالية من الجراء المزروعة، بعد عشرة أيام من الحقن المشترك التدخلي لـ Foxg1 المفرط في التعبير عن السلائف العصبية والتحكم فيها. تم الحصول على صور لمجموعات من الخلايا العصبية مع المجهر confocal.تم استخدام ملفات المكدس Z لحساب الإسقاطات القصوى. تم تتبع الصور الظلية العصبية يدويا. هنا ، تمثل الصور الظلية الخضراء والصفراء Foxg1 الإفراط في التعبير والسيطرة على الخلايا العصبية ، على التوالي.وأخيراً، استخدمت البارامترات الأولية التي حصل عليها تحليل نيورفولوجيا جيه لحساب المؤشرات الثانوية للمورومترات، كما هو موضح. هذا هو بروتوكول بسيط الذي يسمح للباحث لتقييم الأثر الذي التعبير المختلط من جين معين، قد تمارس على السيطرة الدقيقة من دارث التنمية نيوريت في الجسم الحي. والمزايا الرئيسية لهذا البروتوكول هما.عدد الموجود من الجينات المشاركة في تكوين الخلايا العصبية قد تكون تتميز وظيفيا في الجسم الحي، في غياب خطوط المسخ المقابلة. وهناك حاجة إلى عدد أقل من الحيوانات للتحليل للحصول على النتائج الإحصائية الهامة.

Research

JoVE Journal

Genetics

Single-cell Gene Expression Profiling Using FACS and qPCR with Internal Standards

وحيدة الخلية التعبير الجيني التنميط عن طريق نظام مراقبة الأصول الميدانية وQPCR مع المعايير الداخلية

Gene expression measurements from bulk populations of cells can obscure the considerable transcriptomic variation of individual cells within those ...

Primordial Germ Cell Transplantation for CRISPR/Cas9-based Leapfrogging in Xenopus

Primordial Germ Cell Transplantation for CRISPR/Cas9-based Leapfrogging in Xenopus

زرع الخلايا البدائية كريسبر/Cas9-تعتمد قفزات واسعة في النمو

The creation of mutant lines by genome editing is accelerating genetic analysis in many organisms. CRISPR/Cas9 methods have been adapted for use in the ...

CRISPR/Cas9-mediated Targeted Integration In Vivo Using a Homology-mediated End Joining-based Strategy

CRISPR/Cas9-mediated Targeted Integration In Vivo Using a Homology-mediated End Joining-based Strategy

كريسبر/Cas9-بوساطة التكامل المستهدفة في فيفو استخدام استراتيجية تستند إلى الانضمام إلى التماثل بوساطة نهاية

As a promising genome editing platform, the CRISPR/Cas9 system has great potential for efficient genetic manipulation, especially for targeted integration ...

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

Microinjection الأجنة وتقنية زرع "التلاعب الجينوم" فيتريبينيس ناسونيا

The jewel wasp Nasonia vitripennis has emerged as an effective model system for the study of processes including sex determination, haplo-diploid sex ...

Candidate Gene Testing in Clinical Cohort Studies with Multiplexed Genotyping and Mass Spectrometry

الجينات المرشح الاختبار في الدراسات الفوجية السريرية مع التنميط متعدد والطيف الكتلي

Complex diseases are often underpinned by multiple common genetic variants that contribute to disease susceptibility. Here, we describe a cost-effective ...

Ultralow Input Genome Sequencing Library Preparation from a Single Tardigrade Specimen

معالجات الجينوم الإدخال تسلسل إعداد مكتبة من عينة تارديجرادي واحد

Tardigrades are microscopic animals that enter an ametabolic state called anhydrobiosis when facing desiccation and can return to their original state ...

In vivo Application of the REMOTE-control System for the Manipulation of Endogenous Gene Expression

في تطبيق نظام التحكم عن بعد "التلاعب بالتعبير الجيني الذاتية" فيفو

Here we describe a protocol for implementing the REMOTE-control system (Reversible Manipulation of Transcription at Endogenous loci), which allows for ...

Inducible, Cell Type-Specific Expression in Arabidopsis thaliana Through LhGR-Mediated Trans-Activation

Inducible, Cell Type-Specific Expression in Arabidopsis thaliana Through LhGR-Mediated Trans-Activation

إيندوسيبلي، الخلية المحددة بنوع التعبير في نبات التمويل "عن طريق لحجر" بوساطة ترانس-التنشيط

Inducible, tissue-specific expression is an important and powerful tool to study the spatio-temporal dynamics of genetic perturbation. Combining the ...

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

في فيفو دراسة وظيفية من المتغيرات البشرية النادرة المرتبطة بالأمراض باستخدام دروسوفيلا

Advances in sequencing technology have made whole-genome and whole-exome datasets more accessible for both clinical diagnosis and cutting-edge human ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

جيل من الأعضاء الورم من نماذج الماوس المهندسة وراثيا من سرطان البروستاتا

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...