Name: swimming induced paralysis to assess dopamine signaling in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2019-04-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Swimming Induced Paralysis to Assess Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Yazarlar Dr Osama Refai Dr Randy Blakely'nın Lab SWIP otomatik analizi ile rehberlik için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser NIH R01 DA042156 LC için fon tarafından desteklenmiştir.

1. hazırlık çözümler ve medya
<ol><li>KH2PO4 3.0 g (22,05 mM), Na2HPO4 6.0 g (42,2 mM), çözülerek M9 arabellek hazırlamak ve NaCl 5.0 g (85.5 mM) autoclaved deiyonize su 1 litre. 1 M MgSO4 (100 mL autoclaved deiyonize su son hacmi 12 g) 1.0 mL ısıyla sonra ekleyin. Elde edilen 10 x Mix 100 mL su 1 x çözüm yapmak M9 ile autoclaved 900 mL deiyonize.</li>
	<li>Yumurta tampon yapmak, HEPES autoclaved deiyonize su 1 litre, 6.896 g NaCl (118 mM), KCl (48 mM...

<ol>
	<li>de Bono, M., Villu Maricq, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+Substrates+of+Complex+Behaviors+in+C.+elegans.">Neuronal Substrates of Complex Behaviors in C. elegans.</a> Annual Review of Neuroscience. 28 (1), 451-501 (2005).</li><li>Sawin, E. R., Ranganathan, R., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Locomotory+Rate+Is+Modulated+by+the+Environment+through+a+Dopaminergic+Pathway+and+by+Experience+through+a+Serotonergic+Pathway.">C. elegans Locomotory Rate Is Modulated by the Environment through a Dopaminergic Pathway and by Experience through a Serotonergic Pathway.</a> Neuron. 26 (3), 619-631 (2000).</li><li>McDonald, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vigorous+Motor+Activity+in+Caenorhabditis+elegans+Requires+Efficient+Clearance+of+Dopamine+Mediated+by+Synaptic+Localization+of+the+Dopamine+Transporter+DAT-1.">Vigorous Motor Activity in Caenorhabditis elegans Requires Efficient Clearance of Dopamine Mediated by Synaptic Localization of the Dopamine Transporter DAT-1.</a> Journal of Neuroscience. 27 (51), 14216-14227 (2007).</li><li>Carvelli, L., Blakely, R. D., DeFelice, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+Transporter/Syntaxin+1A+Interactions+Regulate+Transporter+Channel+Activity+and+Dopaminergic+Synaptic+Transmission.">Dopamine Transporter/Syntaxin 1A Interactions Regulate Transporter Channel Activity and Dopaminergic Synaptic Transmission.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14192 (2008).</li><li>Carvelli, L., Matthies, D. S., Galli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+amphetamine+actions+in+Caenorhabditis+elegans.">Molecular mechanisms of amphetamine actions in Caenorhabditis elegans.</a> Molecular Pharmacology. 78 (1), 151-156 (2010).</li><li>Refai, O., Blakely, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+and+reversal+of+swimming-induced+paralysis+in+C.+elegans+by+the+antipsychotic+and+D2-type+dopamine+receptor+antagonist+azaperone.">Blockade and reversal of swimming-induced paralysis in C. elegans by the antipsychotic and D2-type dopamine receptor antagonist azaperone.</a> Neurochemistry International. , (2018).</li><li>Bermingham, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Atypical+MAP+Kinase+SWIP-13/ERK8+Regulates+Dopamine+Transporters+through+a+Rho-Dependent+Mechanism.">The Atypical MAP Kinase SWIP-13/ERK8 Regulates Dopamine Transporters through a Rho-Dependent Mechanism.</a> The Journal of Neuroscience. 37 (38), 9288-9304 (2017).</li><li>Nass, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+in+Caenorhabditis+elegans+for+dopamine+neuron+insensitivity+to+6-hydroxydopamine+identifies+dopamine+transporter+mutants+impacting+transporter+biosynthesis+and+trafficking.">A genetic screen in Caenorhabditis elegans for dopamine neuron insensitivity to 6-hydroxydopamine identifies dopamine transporter mutants impacting transporter biosynthesis and trafficking.</a> Journal of Neurochemistry. 94 (3), 774-785 (2005).</li><li>Hardaway, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+genetic+analysis+to+identify+determinants+of+dopamine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans+using+swimming-induced+paralysis.">Forward genetic analysis to identify determinants of dopamine signaling in Caenorhabditis elegans using swimming-induced paralysis.</a> G3. 2 (8), 961-975 (2012).</li><li>Hardaway, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+Expression+of+the+Caenorhabditis+elegans+Gene+swip-10+Supports+Glutamate+Dependent+Control+of+Extrasynaptic+Dopamine+Signaling.">Glial Expression of the Caenorhabditis elegans Gene swip-10 Supports Glutamate Dependent Control of Extrasynaptic Dopamine Signaling.</a> Journal of Neuroscience. 35 (25), 9409-9423 (2015).</li><li>Felton, C. M., Johnson, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+signaling+in+C.+elegans+is+mediated+in+part+by+HLH-17-dependent+regulation+of+extracellular+dopamine+levels.">Dopamine signaling in C. elegans is mediated in part by HLH-17-dependent regulation of extracellular dopamine levels.</a> G3. 4 (6), 1081-1089 (2014).</li><li>Lanzo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+of+Syntaxin+1A+in+the+Dopaminergic+Neurons+Decreases+the+Activity+of+the+Dopamine+Transporter+and+Prevents+Amphetamine-Induced+Behaviors+in+C.+elegans.">Silencing of Syntaxin 1A in the Dopaminergic Neurons Decreases the Activity of the Dopamine Transporter and Prevents Amphetamine-Induced Behaviors in C. elegans.</a> Frontiers in Physiology. 9 (576), (2018).</li><li>Safratowich, B. D., Lor, C., Bianchi, L., Carvelli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+activates+an+amine-gated+chloride+channel+to+generate+behavioral+effects+in+Caenorhabditis+elegans.">Amphetamine activates an amine-gated chloride channel to generate behavioral effects in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Biological Chemistry. 288 (30), 21630-21637 (2013).</li><li>Safratowich, B. D., Hossain, M., Bianchi, L., Carvelli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+Potentiates+the+Effects+of+-Phenylethylamine+through+Activation+of+an+Amine-Gated+Chloride+Channel.">Amphetamine Potentiates the Effects of -Phenylethylamine through Activation of an Amine-Gated Chloride Channel.</a> Journal of Neuroscience. 34 (13), 4686-4691 (2014).</li><li>Carvelli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+activates+/+potentiates+a+ligand-gated+ion+channel.">Amphetamine activates / potentiates a ligand-gated ion channel.</a> Channels (Austin). 8 (4), 294-295 (2014).</li><li>Hardaway, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.An+open-source+analytical+platform+for+analysis+of+C.+elegans+swimming-induced+paralysis.">et al.An open-source analytical platform for analysis of C. elegans swimming-induced paralysis.</a> Journal of Neuroscience Methods. 232, 58-62 (2014).</li><li>L&#252;ersen, K., Faust, U., Gottschling, D. -. C., D&#246;ring, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gait-specific+adaptation+of+locomotor+activity+in+response+to+dietary+restriction+in+Caenorhabditis+elegans.">Gait-specific adaptation of locomotor activity in response to dietary restriction in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Experimental Biology. 217, 2480-2488 (2014).</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cer&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+methods:+synchronization+and+observation.">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4019 (2012).</li><li>Lamitina, S. T., Morrison, R., Moeckel, G. W., Strange, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.+to+extreme+osmotic+stress.">Adaptation of the nematode Caenorhabditis elegans. to extreme osmotic stress.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 286 (4), 785-791 (2004).</li><li>Masoudi, N., Ibanez-Cruceyra, P., Offenburger, S. -. L., Holmes, A., Gartner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetraspanin+(TSP-17)+Protects+Dopaminergic+Neurons+against+6-OHDA-Induced+Neurodegeneration+in+C.+elegans.">Tetraspanin (TSP-17) Protects Dopaminergic Neurons against 6-OHDA-Induced Neurodegeneration in C. elegans.</a> PLoS Genetics. 10 (12), 1004767 (2014).</li><li>Jayanthi, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+gene+T23G5.5+encodes+an+antidepressant-+and+cocaine-sensitive+dopamine+transporter.">The Caenorhabditis elegans gene T23G5.5 encodes an antidepressant- and cocaine-sensitive dopamine transporter.</a> Molecular Pharmacology. 54 (4), 601-609 (1998).</li></ol>

Burada, bir davranış yöntemi, SWIP, C. elegansiçinde gerçekleştirmek için adım adım bir protokol açıklayın. Bu iletişim kuralı bu tahlil çok kullanıcı dostu yapmak hiçbir büyük teknik engel ile basit ve anlaşılır. Yine de, etkili bir şekilde tahlil gerçekleştirmek için dikkat edilmesi gereken bazı önemli yönleri vardır.
Diyet kısıtlama SWIP17etkiler bu yana tahlil için kullanılan solucanlar iyi beslenmiş olması için özen g...

Hayvanlar farklı nörotransmitter karmaşık sinyalleşme işlemler tarafından koordine tarafından aracılı doğuştan gelen ve karmaşık davranışlar çeşitli gerçekleştirmek. Nörotransmitter dopamin (DA) son derece korunmuş davranışlar öğrenme, motor işlevleri ve ödül işleme gibi türler arasında aracılık eder.
Toprak Yuvarlak solucanlar C. elegans, nispeten basit ve de eşlenen sinir sadece 302 nöronlar oluşan sistemi ile belirgin karmaşık davranışları DA çiftleşme, öğrenme, yiyecek arama, hareket ve yumurta atma gibi düzenlenir da dahil olmak üzere, gösterir 1. diğer özellikleri arasında kısa yaşam döngüsü, kullanım kolaylığı ve moleküller sinyal koruma, C. elegans korunmuş davranışları nöral temeli eğitimi için bir model olarak kullanmanın yararları vurgulayın.
C. elegans hermafrodit sekiz dopaminerjik nöron içerir; Bunlara ek olarak, altı ilave çiftlerini amaçlar çiftleşme için erkek içerir. Memeliler, olduğu gibi bu nöronlar DA sentez ve DA ışınlama (DAT-1), hangi DA sinaptik yarık geri dopaminerjik nöron serbest nakliye sadece dopaminerjik nöronlarda bulunan bir membran protein ifade eder. Ayrıca, çoğu protein sentezi, paketleme ve serbest bırakmak-in DA her adımda dahil solucanlar ve insanlar arasında son derece korunmuş ve gibi memelilerde DA beslenme davranışları ve hareket C. elegans2modüle.
C. elegans düz yüzeylerde tarar ve karakteristik dayak davranış suda yüzüyor. İlginçtir, DAT-1 (dat-1) ifadesi eksik mutantlar normalde katı yüzey üzerinde tarama ama suya dalmış zaman Yüzme ayakta tutmak başarısız. Bu davranış indüklenen Yüzme felç veya SWIP olarak adlandırdığı oldu. Önceki deneyler SWIP, kısmen DA sonuçta D2-benzeri postsinaptik reseptörler (DOP-3) overstimulates sinaptik yarık içinde aşırı kaynaklanır gösterdi. Her ne kadar başlangıçta dat-1 nakavt hayvanlar3' te tanımlanan, SWIP da o blok faaliyet DAT (örneğin, imipramine4) ilaçlar ile tedavi vahşi-türü hayvanlarda gözlenen ve/veya DA yayın (örneğin, amfetamin5) ikna etmek. Öte yandan, sentez ve serbest bırakmak-in DA önlenmesi ve engelleme DOP-3 reseptör fonksiyonu farmakolojik veya genetik manipülasyon SWIP6önlemek. Birlikte ele alındığında, bu zaten yayımlanmış veri SWIP mutasyona uğramış proteinlerin dopaminerjik sinapslarda3,4,7 içinde neden davranışsal etkileri çalışmaya ve için istihdam için güvenilir bir araç olarak kurduk kimliği roman yasal yolları7,8,9,10,11,12sinyal DA dahil ileri genetik ekranlar. Buna ek olarak, uyuşturucu kaynaklı davranış yaşayan hayvanlarda kolayca ölçülebilir bir okuma sağlayarak, SWIP mekanizmaları eylem amfetamin (AMPH) gibi ilaçlar aydınlatma sağlar ve azaperone dopaminerjik,5, synapses 6 , 13 , 14 , 15.
SWIP deneyleri yerine getirmek için kullanılan protokolleri16daha önce anlatmıştık. Metodoloji ve etkili bir şekilde SWIP gerçekleştirmek C. elegans toplum için görsel bir kılavuz sağlamak amacı ile tahlil yapmak için Kur'u burada, biz ayrıntılı olarak tarif.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:992px;" width="991">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Aluminum foil</td>
			<td style="width:260px;">Reynolds wrap</td>
			<td style="width:267px;">1091835</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Amphetamine</td>
			<td style="width:260px;">Sigma</td>
			<td style="width:267px;">51-63-8&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Autoclave</td>
			<td style="width:260px;"></td>
			<td style="width:267px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Bacterial Incubator</td>
			<td style="width:260px;">New Brunswick scientific</td>
			<td style="width:267px;">M1352-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Bacteriological grade, Agar</td>
			<td style="width:260px;">Lab Scientific, Inc</td>
			<td>&#160;A466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Bacto (TM) Peptone</td>
			<td style="width:260px;">BD</td>
			<td>REF 211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Calcium Chloride (dihydrate)</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:267px;">C3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Camera&#160;</td>
			<td style="width:260px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:267px;">U-CMAD3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:260px;">Eppendorf 5810R 15amp</td>
			<td style="width:267px;">E215059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Cholesterol</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:267px;">57-88-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Deionised water</td>
			<td style="width:260px;">Millipore</td>
			<td style="width:267px;">Z00QSV0WW</td>
			<td>Milli-Q</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Depression glass spot plate</td>
			<td style="width:260px;">Corning</td>
			<td style="width:267px;">Corning, Inc. 722085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Erlenmeyer flask</td>
			<td style="width:260px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:267px;">4103-0250PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Eye lash</td>
			<td style="width:260px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Glass slide</td>
			<td style="width:260px;">Fisherbrand</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Graphing and statistical software</td>
			<td style="width:260px;">Prism</td>
			<td style="width:267px;"></td>
			<td>Graphpad 5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">HEPES</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:267px;">RB=H3375 &#38; H7006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Hypochlorite</td>
			<td style="width:260px;">Hawkins</td>
			<td style="width:267px;">Sodium Hypochlorite 4-6%, USP&#34; 1 gal</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">LB Broth, Miller</td>
			<td style="width:260px;">Fisher</td>
			<td style="width:267px;">BP1426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Magnesium Chloride (Hexahydrate)</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:267px;">RB=M0250</td>
			<td>500g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Magnesium sulfate (heptahydrate)</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:267px;">M1880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Magnetic stir bar</td>
			<td style="width:260px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:267px;">16-800-510&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:260px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:267px;">69715</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">NA 22 bacteria</td>
			<td style="width:260px;">CGC</td>
			<td style="width:267px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Nystatin</td>
			<td style="width:260px;">Sigma</td>
			<td style="width:267px;">1400-61-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Osmometer</td>
			<td style="width:260px;">Advanced Instruments, Inc</td>
			<td style="width:267px;">Model 3320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Pasteur Pipettes</td>
			<td style="width:260px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:267px;">13-678-20A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Petriplates</td>
			<td style="width:260px;">Falcon</td>
			<td style="width:267px;">351007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">pH Meter</td>
			<td style="width:260px;">Orion VersaStar Pro</td>
			<td style="width:267px;">IS-68X591202-B 0514</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Polystrine conical tubes</td>
			<td style="width:260px;">Falcon</td>
			<td style="width:267px;">352095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:267px;">P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:267px;">7778-77-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Potassium Phosphate - DIBASIC</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P-8281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Potassium Phosphate - MONOBASIC</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Serological pipettes</td>
			<td style="width:260px;">VWR</td>
			<td style="width:267px;">10ml=89130-898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Shaker</td>
			<td style="width:260px;">Reliable Scientific</td>
			<td>55S 12x16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:260px;">Fisher</td>
			<td>RB=BP358-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sodium dihydrogen Phosphate</td>
			<td style="width:260px;">Fisher</td>
			<td style="width:267px;">RB=S381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Spreadsheet</td>
			<td style="width:260px;">MS office</td>
			<td style="width:267px;"></td>
			<td>Microsoft Excel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Stereo Microscope</td>
			<td style="width:260px;">Zeiss</td>
			<td style="width:267px;">Model tlb3. 1 stemi2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sterile Pipette tips</td>
			<td style="width:260px;">Various</td>
			<td style="width:267px;">02-707-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Sucrose</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:267px;">RB=S5016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Superglue</td>
			<td style="width:260px;">Loctite</td>
			<td style="width:267px;">1647358 .14 oz.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">SwimR sofware</td>
			<td style="width:260px;">10.18129/B9.bioc.SwimR</td>
			<td style="width:267px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:295px;">Tracker 2</td>
			<td style="width:260px;">Worm Tracker 2.0</td>
			<td style="width:267px;">www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">Video recording software</td>
			<td>Virtualdub</td>
			<td style="width:267px;">http://www.virtualdub.org/</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

swimming induced paralysis to assess dopamine signaling in caenorhabditis elegans

Bu protokol için açıklanan Yüzme tahlil dopaminerjik düzenleyen proteinler tanımlamak için geçerli bir araç synapses olduğunu. Benzer şekilde memeliler, dopamin (DA) C. elegans öğrenme ve motor aktivite de dahil olmak üzere çeşitli işlevlerini kontrol eder. Bu DA yayın (örneğin, amfetamin (AMPH) tedavileri) teşvik veya DA izni engel koşulları (örneğin, hayvanlar DA ışınlama eksik (dat-1) DA nöronların reaccumulating aciz olan) hücre dışı DA aşırı oluşturmak Sonuçta ortaya çıkan Inhibe gezisidir. Bu davranış özellikle belirgin olduğunda hayvanlar yüzmek. Aslında, uzun bir süre için yüzmeyi vahşi-türü hayvanlar devam ederken, dat-1 boş mutantlar ve vahşi-tipi AMPH ile tedavi veya DA ışınlama inhibitörleri Kuyunun dibine batırın ve hareket etmiyor. Bu davranış "Yüzme felç" (SWIP) indüklenen olarak adlandırılır. SWIP tahlil iyi kurulmuş olsa da, yöntemin ayrıntılı bir açıklama bulunmuyor. Burada, SWIP gerçekleştirmek için adım adım yönergeler açıklanmaktadır. Tahlil gerçekleştirmek için geç larva sahne-4 hayvan kontrol Sükroz çözümü ile ya da ezelî AMPH içeren bir cam spot levha yerleştirilir. Hayvanlar için bir stereoscope altında görselleştirme tarafından el ile veya otomatik olarak kayıt ile bir fotoğraf makinesi üzerinde stereoscope monte Yüzme davranışlarını attı. Videolar sonra dayak frekans ve felç ısı haritaları şeklinde görsel bir gösterimini verir bir izleme yazılımı kullanılarak analiz edilir. El ile ve otomatik sistemler ve hayvanların Yüzme yeteneği kolayca ölçülebilir bir okuma garanti böylece tarama için mutasyonlar dopaminerjik sistem içinde taşıyan hayvan veya yardımcı genler için kolaylaştırmak. Buna ek olarak, SWIP kötüye AMPH gibi ilaçların etki mekanizmaları aydınlatmak için kullanılabilir.

Biz SWIP tahlil AMPH tedavi tarafından indüklenen örneği mevcut. Şekil 1 yukarıda açıklandığı gibi tahlil kurulumunun şematik gösterim gösterir. İçin el ile tahlil, eşitlenmiş geç L4 sahne solucanlar bir kirpik ya da Platin ile toplanan yaklaşık 8-10 yaş almak ve 40 µL 200 mOsm/L sukroz (kontrol çözümü) veya sukroz 0,5 mM AMPH ile dolu ve SWIP için test edilmiş bir cam spot levha içine yerleştirilir.
<p class="jove_content" ...

Watch this Scientific Journal Video about Swimming Induced Paralysis to Assess Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Swimming Induced Paralysis to Assess Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans

Yüzme felç indüklenen Caenorhabditis elegans dopamin sinyal değerlendirmek için

Yüzme indüklenen felç (SWIP) olan köklü bir davranış tahlil Caenorhabditis elegans içinde (C. elegans) sinyal dopamin temel mekanizmaları çalışırdım. Ancak, tahlil gerçekleştirmek için detaylı bir yöntem bulunmamaktadır. Burada, SWIP için bir adım adım Protokolü açıklar.

The swimming assay described in this protocol is a valid tool to identify proteins regulating the dopaminergic synapses. Similar to mammals, dopamine (DA) ...

Bu prosedürün genel amacı Yüzme Kaynaklı Felç veya SWIP göstermektir, C.elegans dopamin sinyalizasyon değerlendirmek için bir davranışsal tedavi. SWIP içinde veya dopaminerjik sinaps ile ilgili genlerin hızlı bir şekilde tanımlanmasını sağlar. Bu yöntem, örneğin ilaçlar veya dopamin taşıyıcı mutasyonlar neden olduğu ekstrasellüler dopamin aşırı tarafından üretilen etkilerin araştırılmasını sağlar.Test sırasında test edilen tüm solucanların aynı süre boyunca yüzmesini sağlamak için hayvanların çözeltiye hızlı bir şekilde aktarılması gerekir. Prosedürü gösteren Sirisha Kudumala ve Serene Sossi olacaktır. İkisi de laboratuvarımda çalışıyor.Solucan başlangıç kültürleri kurmak için, iyi beslenen C.elegans içeren bir tabak agar küçük parçalar kesmek ve bireysel NA22 E.coli plakalar içine agar parçaları aktarmak için steril bir spatula kullanın. Plakaları 3-4 gün boyunca 20 derecede kuluçkaya yattıktan sonra, stereo mikroskop altında gravid yetişkinlerin varlığını görsel olarak doğrulayın. Senkronize bir solucan popülasyonu elde etmek için, gravid yetişkinlerle dolu bir tabağa su fışkırtın.Solucanları yerinden çıkarmak için plakayı hafifçe döndürün ve solucanları 15 mililitrelik polistiren konik bir tüpe aktarmak için bir bertaraf pipeti kullanın. Solucanları ikinci bir plakadan tüpe çektikten sonra, solucanları yıkama başına 15 mililitre otoklavlı su da üç yıkama için santrifüj ile toplayın. Su son yıkamadan sonra berrak görünmelidir.Son santrifüjden sonra, solucanlara taze hazırlanmış sodyum hipoklorür sodyum hidroksit çözeltisinin beş mililitresini ekleyin ve bir girdap ile hızla karıştırın. Tüpü bir kayanın üzerine yerleştirin, bir damla solucan çözeltisini cam mikroskop kaydıranın üzerine yerleştirin ve dört ila sekiz dakika boyunca her iki dakikada bir stereoskop altında solucan lysis'i kontrol edin. Solucanların yaklaşık %70'i lysed ve yumurtalar serbest bırakıldığında, yumurta tamponu ilavesi ile hemen lysis durdurun.Sonra embriyolar ve solucan leşleri dört kez kalan çamaşır suyu kaldırmak için yıkar arasında taze yumurta tampon ile pelet resuspending santrifüj. Son yıkamadan sonra, pelet beyaz görünmelidir. Otoklaved su beş mililitre pelet resuspend ve% 60 sakaroz beş mililitre santrifüj ile karkas lardan embriyoları ayırmak için.Yoğunluk gradyan ayrımından sonra tüpü santrifüjden dikkatlice çıkarın ve üst menisküste yüzen embriyoların 3-4 mililitresini yeni bir 15 mililitrelik konik tüpe aktarmak için cam pasteur pipetkullanın. Sakaroz ve ardından M9 tamponunda üç yıkama yıkama kaldırmak için embriyoları otoklavlı suile üç kez yıkayın. Son yıkamadan sonra, yumurtaların yumurtadan çıkması ve L1 larva evresinde kalması için embriyoları bir gecede 10 mililitre taze M9 tamponu yla çalkalayın.Shaker üzerinde en fazla 14 saat sonra, larvalar tarafından yayımlanan herhangi bir feromonları kaldırmak ve su bir mililitre larva resuspend otoklav ile üç kez L1 larvaları yıkayın. Solucanların bir aliquot'unu 1'den 10'a kadar seyreltin ve cam bir kaydıra 1:10 mikrolitre damla ekleyin ve solucanları stereo mikroskop altında sayın. Ortalama solucan sayısı elde etmek için tekrarlayın.Bir oda sıcaklığında NA22 plaka üzerine solucan çözeltisi yeterli damlacıkları eklemek için bir pipet kullanın kültür için üçüncü solucanlar için yaklaşık bir kez 10 tohum ve damlalar kuruyana kadar plaka yarısı açık bırakın. Daha sonra plakayı kapalı ve baş aşağı 20 derecede yaklaşık 44 ila 48 saat veya solucanlar stereo mikroskop altında görsel olarak doğrulanan geç L4 aşamasına ulaşana kadar kuluçkaya yatırın. SWIP'nin manuel değerlendirmesi için, 0,5 milimolar amfetaminli veya olmayan 40 mikrolitre kontrol çözeltisini cam nokta plakaya ekleyin.Stereoskop altında, kirpik küremi ile 8 ila 10 geç L4 sahne solucanları seçin ve solucanlar pick hareket ve çözüm içine yüzmek kadar çözüm içeren kuyuda pick batırın. Zamanlayıcıyı çalıştırın. Kuyuya salınan solucan sayısını not edin ve her dakika işaretinde Toplam 10 dakika boyunca SWIP gösteren solucan sayısını gözlemleyin ve kaydedin.Yordamın sonunda, ham verileri bir elektronik tabloya kopyalayın ve her dakika felç olan solucan sayısını, test edilen toplam solucan sayısına bölerek ve 100 ile çarparak felç olan solucanların yüzdesini hesaplayın. Yüzde değerlerini herhangi bir grafik ve istatistiksel yazılıma kopyalayın ve XY grafik biçimini kullanarak verileri y ekseninde Y ekseninde ve x ekseninde zaman üzerinde SWIP yüzde değerleriyle çizin. Kontrol ve amfetamin ile tedavi edilen gruplar arasında istatistiksel analiz ve tedavi süresi, örneğin iki yönlü ANOVA ve post hoc analizi kullanılarak yapılabilir.Yüzmekaynaklı felcin otomatik analizi için, izleme yazılımı analizini çalıştırmak için kamerayı, solucan izci yazılımını ve komut dosyasını ayarlayın ve daha önce gösterildiği gibi tek bir geç aşama L4 solucanını cam nokta plakaya yerleştirmek için kirpik çekme kullanın. Daha sonra bir seferde bir solucanın yüzme videolarını kaydedin ve solucan bükme frekansını hesaplamak için solucan izci yazılımını kullanın, solucan dövme frekansını elde etmek için izleme yazılımıyla sağlanan komut dosyasını takip edin ve solucan dövme verilerinden ısı haritaları oluşturun. Kontrol çözeltisinde test edilen solucanların çoğu en az 10 dakika boyunca sürekli yüzer.Kontrol veya amfetamin maruz solucanlar gözlem in ilk dakikasında SWIP göstermez. Ancak, kontrol solüsyonu ile tedavi edilen solucanlar 10 dakika boyunca yüzmeye devam ederken, amfetamin ile tedavi edilen solucanlar iki dakikalık tedaviden sonra SWIP sergilemeye başlar. Ve 10 dakika sonra, hayvanların %66'sı SWIP gösteriyor.Burada kontrole veya amfetamine maruz kalan hayvanların ısı haritalarına ait örnekler, amfetamin le tedavi edilen hayvanlarda gözlenen felçte beklenen önemli bir artışla gösterilmiştir. Bu titreyi denemeden önce, C.elegans toplama ve gelişimsel evreleme ile iyi tanışmalıdır. SWIP davranışında dopaminerjik sistemin tutulumu dopaminerjik proteinlerin ekspresyonu olmayan hayvanlar veya Reserpine ile dopamin veziküllerinin tükenmesi ile doğrulanmalıdır.SWIP dopaminerjik sinaps etki eden ilaçların etki mekanizmasında yer alan yeni proteinlerin belirlenmesinde etkili olabilir.

Research

JoVE Journal

Behavior

Swimming Induced Paralysis to Assess Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans

Creating Dynamic Images of Short-lived Dopamine Fluctuations with lp-ntPET:  Dopamine Movies of Cigarette Smoking

Sigara Sigara Dopamin Filmler: lp-ntPET ile kısa ömürlü Dopamin Değişiminin Dinamik Görüntü Oluşturma

We describe experimental and statistical steps for creating dopamine movies of the brain from dynamic PET data. The movies represent minute-to-minute ...

Uncovering Beat Deafness: Detecting Rhythm Disorders with Synchronized Finger Tapping and Perceptual Timing Tasks

The Beat Sağırlık Uncovering: Algılama Ritim Bozuklukları Vurma Senkronize Finger ve algısal Zamanlama Görevleri ile

A set of behavioral tasks for assessing perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) is presented here ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Usulü Sıçanlar Pavlovyan klimalı Alkol arayan Davranış Bağlam kaynaklı Yenileme İnceleyecek

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats

Uyanık Sıçanlarda Intra-Oral tat yoğunluğu arttırıcı madde İdaresi Sırasında Hızlı Tarama Dönüşümlü Voltametri Rapid Dopamin Dynamics incelenmesi

Rapid, phasic dopamine (DA) release in the mammalian brain plays a critical role in reward processing, reinforcement learning, and motivational control. ...

Eye-Tracking Control to Assess Cognitive Functions in Patients with Amyotrophic Lateral Sclerosis

Eye-Tracking Kontrol Amyotrofik Lateral Skleroz Hastalarında Bilişsel Fonksiyonlar değerlendirin

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disorder with pathological involvement of upper and lower motoneurons, subsequently leading to ...

Reversible Cooling-induced Deactivations to Study Cortical Contributions to Obstacle Memory in the Walking Cat

Kortikal katkıları engel bellek yürüyen kedi içinde çalışmaya geri dönüşümlü soğutma kaynaklı deaktivasyon

On complex, naturalistic terrain, sensory information about an environmental obstacle can be used to rapidly adjust locomotor movements for avoidance. For ...

Biomechanical Analysis Methods to Assess Professional Badminton Players' Lunge Performance

Profesyonel badminton oyuncularının Lunge performansını değerlendirmek için biyomekanik analiz yöntemleri

Under the condition of simulating a badminton court in the laboratory, this study used the injury mechanism model to analyze the maximal right lunge ...

Using Facial Electromyography to Assess Facial Muscle Reactions to Experienced and Observed Affective Touch in Humans

Deneyimli ve gözlenen duygusal Touch insanlarda yüz kas tepkileri değerlendirmek için yüz Elektromiyografi kullanma

"Affective" touch is believed to be processed in a manner distinct from discriminatory touch and to involve activation of C-tactile (CT) afferent fibers. ...

A Standardized Protocol for Preference Testing to Assess Fish Welfare

Balık Refahını Değerlendirmek Için Tercih Testi için StandartLaştırılmış Protokol

Animal welfare assessment techniques try to take into consideration the specific needs and wants of the animal in question. Providing enrichment (the ...

Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice

Pilocarpine bağlı Epileptik Farelerde Hafıza Fonksiyonunun Değerlendirilmesi

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal ...