Name: visualizing impairment of the endothelial and glial barriers of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo
Uploaded: 2019-03-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo at JoVE.com

우리는 기꺼이 우리와 함께 그녀의 원래 제자리에 zymography 프로토콜10 공유는 리 디 아 Sorokin 인정 합니다.

모든 연구 동물의 보호에 스위스 법률에 따라 지침에 따라 실시 했다 고 구획의 베른, 스위스의 수의 사무실에 의해 승인 (허가 번호: 31/17 수 고 수 77/18).
1. 특정 병원 체 자유롭게 (SPF) 조건에서 C57BL/6 마우스의 주택
<ol><li>집 쥐 개별 환기 케이지 12/12 h 빛-어둠에에서 주기. 음식을 제공 하 고 광고 libidum 물. 쥐의 미생물 품질 감독, 실험 코 호트 분기 상태 모니터링 더러운 침...

<ol>
	<li>Tietz, S., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+barriers:+Crosstalk+between+complex+tight+junctions+and+adherens+junctions.">Brain barriers: Crosstalk between complex tight junctions and adherens junctions.</a> Journal of Cell Biology. 209, 493-506 (2015).</li><li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+basement+membrane+laminin+alpha5+selectively+inhibits+T+lymphocyte+extravasation+into+the+brain.">Endothelial basement membrane laminin alpha5 selectively inhibits T lymphocyte extravasation into the brain.</a> Nature Medicine. 15, 519-527 (2009).</li><li>Hannocks, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+perivascular+drainage+pathways+in+the+murine+brain.">Molecular characterization of perivascular drainage pathways in the murine brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 38, 669-686 (2018).</li><li>Kermode, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breakdown+of+the+blood-brain+barrier+precedes+symptoms+and+other+MRI+signs+of+new+lesions+in+multiple+sclerosis.+Pathogenetic+and+clinical+implications.">Breakdown of the blood-brain barrier precedes symptoms and other MRI signs of new lesions in multiple sclerosis. Pathogenetic and clinical implications.</a> Brain. 113 (Pt 5), 1477-1489 (1990).</li><li>Tommasin, S., Gianni, C., De Giglio, L., Pantano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroimaging+techniques+to+assess+inflammation+in+Multiple+Sclerosis.">Neuroimaging techniques to assess inflammation in Multiple Sclerosis.</a> Neuroscience. , (2017).</li><li>Lopes Pinheiro, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+trafficking+across+the+barriers+of+the+central+nervous+system+in+multiple+sclerosis+and+stroke.">Immune cell trafficking across the barriers of the central nervous system in multiple sclerosis and stroke.</a> Biochimica Biophysica Acta. 1862, 461-471 (2016).</li><li>Bartholomaus, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+T+cell+interactions+with+meningeal+vascular+structures+in+nascent+autoimmune+CNS+lesions.">Effector T cell interactions with meningeal vascular structures in nascent autoimmune CNS lesions.</a> Nature. 462, 94-98 (2009).</li><li>Kyratsous, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+context-dependent+calcium+signaling+in+encephalitogenic+T+cells+in+vivo+by+two-photon+microscopy.">Visualizing context-dependent calcium signaling in encephalitogenic T cells in vivo by two-photon microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114, E6381-E6389 (2017).</li><li>Lodygin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+fluorescent+NFAT+and+H2B+sensors+uncovers+dynamics+of+T+cell+activation+in+real+time+during+CNS+autoimmunity.">A combination of fluorescent NFAT and H2B sensors uncovers dynamics of T cell activation in real time during CNS autoimmunity.</a> Nature Medicine. 19, 784-790 (2013).</li><li>Agrawal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystroglycan+is+selectively+cleaved+at+the+parenchymal+basement+membrane+at+sites+of+leukocyte+extravasation+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Dystroglycan is selectively cleaved at the parenchymal basement membrane at sites of leukocyte extravasation in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Experimental Medicine. 203, 1007-1019 (2006).</li><li>Song, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+MMP-2+and+MMP-9+activity+at+the+blood-brain+barrier+promotes+chemokine-induced+leukocyte+migration.">Focal MMP-2 and MMP-9 activity at the blood-brain barrier promotes chemokine-induced leukocyte migration.</a> Cell Reports. 10, 1040-1054 (2015).</li><li>Tietz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+junctional+adhesion+molecule+(JAM)-B+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Lack of junctional adhesion molecule (JAM)-B ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 3-20 (2018).</li><li>Mähler Convenor, M., Berard, M., Feinstein, R., Gallagher, A., Illgen-Wilcke, B., Pritchett-Corning, K., Raspa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FELASA+recommendations+for+the+health+monitoring+of+mouse,+rat,+hamster,+guinea+pig+and+rabbit+colonies+in+breeding+and+experimental+units.">FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units.</a> Lab Anim. 48 (3), 178-192 (2014).</li><li>Bittner, S., Afzali, A. M., Wiendl, H., Meuth, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+(MOG35-55)+induced+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+(EAE)+in+C57BL/6+mice.">Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 mice.</a> Journal of Visual Experiments. , (2014).</li><li>Tietz, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refined+clinical+scoring+in+comparative+EAE+studies+does+not+enhance+the+chance+to+observe+statistically+significant+differences.">Refined clinical scoring in comparative EAE studies does not enhance the chance to observe statistically significant differences.</a> European Journal of Immunology. 46, 2481-2483 (2016).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> European Journal of Immunology. 25, 1951-1959 (1995).</li><li>Miller, S. D., Karpus, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+mouse.">Experimental autoimmune encephalomyelitis in the mouse.</a> Current Protocols in Immunology. 15, (2007).</li><li>Sobel, R. A., Tuohy, V. K., Lu, Z. J., Laursen, R. A., Lees, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+SJL/J+mice+induced+by+a+synthetic+peptide+of+myelin+proteolipid+protein.">Acute experimental allergic encephalomyelitis in SJL/J mice induced by a synthetic peptide of myelin proteolipid protein.</a> Journal of Neuropathology &amp; Experimental Neurology. 49, 468-479 (1990).</li><li>Westarp, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+lymphocyte+line-mediated+experimental+allergic+encephalomyelitis--a+pharmacologic+model+for+testing+of+immunosuppressive+agents+for+the+treatment+of+autoimmune+central+nervous+system+disease.">T lymphocyte line-mediated experimental allergic encephalomyelitis--a pharmacologic model for testing of immunosuppressive agents for the treatment of autoimmune central nervous system disease.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 242, 614-620 (1987).</li><li>Klotz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-H1+shapes+T-cell-mediated+brain+endothelial+cell+dysfunction+and+regional+encephalitogenicity+in+spontaneous+CNS+autoimmunity.">B7-H1 shapes T-cell-mediated brain endothelial cell dysfunction and regional encephalitogenicity in spontaneous CNS autoimmunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E6182-E6191 (2016).</li><li>Tietz, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MK2+and+Fas+receptor+contribute+to+the+severity+of+CNS+demyelination.">MK2 and Fas receptor contribute to the severity of CNS demyelination.</a> PLoS One. 9, e100363 (2014).</li><li>Coisne, C., Mao, W., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+Natalizumab+blocks+adhesion+but+not+initial+contact+of+human+T+cells+to+the+blood-brain+barrier+in+vivo+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis.">Cutting edge: Natalizumab blocks adhesion but not initial contact of human T cells to the blood-brain barrier in vivo in an animal model of multiple sclerosis.</a> Journal of Immunology. 182, 5909-5913 (2009).</li><li>Korner, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+points+of+tumor+necrosis+factor+action+in+central+nervous+system+autoimmune+inflammation+defined+by+gene+targeting.">Critical points of tumor necrosis factor action in central nervous system autoimmune inflammation defined by gene targeting.</a> Journal of Experimental Medicine. 186, 1585-1590 (1997).</li><li>Krueger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-brain+barrier+breakdown+involves+four+distinct+stages+of+vascular+damage+in+various+models+of+experimental+focal+cerebral+ischemia.">Blood-brain barrier breakdown involves four distinct stages of vascular damage in various models of experimental focal cerebral ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 35, 292-303 (2015).</li><li>Hawkins, B. T., Egleton, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+of+blood-brain+barrier+disruption.">Fluorescence imaging of blood-brain barrier disruption.</a> Journal of Neuroscience Methods. 151, 262-267 (2006).</li><li>Graesser, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+vascular+permeability+and+early+onset+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+PECAM-1-deficient+mice.">Altered vascular permeability and early onset of experimental autoimmune encephalomyelitis in PECAM-1-deficient mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 109, 383-392 (2002).</li><li>Engelhardt, B., Sorokin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-brain+and+the+blood-cerebrospinal+fluid+barriers:+function+and+dysfunction.">The blood-brain and the blood-cerebrospinal fluid barriers: function and dysfunction.</a> Seminars in Immunopathology. 31, 497-511 (2009).</li><li>Owens, T., Bechmann, I., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+spaces+and+the+two+steps+to+neuroinflammation.">Perivascular spaces and the two steps to neuroinflammation.</a> Journal of Neuropathology &amp; Experimental Neurology. 67, 1113-1121 (2008).</li><li>Sixt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+laminin+isoforms,+laminins+8+and+10,+play+decisive+roles+in+T+cell+recruitment+across+the+blood-brain+barrier+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Endothelial cell laminin isoforms, laminins 8 and 10, play decisive roles in T cell recruitment across the blood-brain barrier in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Cell Biology. 153, 933-946 (2001).</li><li>Grewal, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD62L+is+required+on+effector+cells+for+local+interactions+in+the+CNS+to+cause+myelin+damage+in+experimental+allergic+encephalomyelitis.">CD62L is required on effector cells for local interactions in the CNS to cause myelin damage in experimental allergic encephalomyelitis.</a> Immunity. 14, 291-302 (2001).</li></ol>

여기, 선물이 유도 하 고 여성 C57BL/6 쥐에서 EAE 모니터링 프로토콜. 여성은 우선적으로 선택 하 고, 그리고 여자의 발생률: MS에서 3: 1의 남자. 우리가 만든 EAE의 심각도 평가 하기 위해 3-포인트 점수 시트의 사용. EAE 심각도 모터 장애의 심각도 관하여 일반적으로 득점 된다. 마우스와 고급 EAE의 단계, 즉 2 위 점수를 전시 동물의 불필요 한 고통을 피하기 위해 희생 되어야 한다. 따라서,는 것이 좋습...

모든 신체 및 척추 동물, 정신 기능을 조정 하는 중앙 신경 시스템 (CNS) 그리고 CNS 항상성 뉴런의 적절 한 의사 소통을 위해 필수적 이다. CNS 항상성 neurovascular 단위 (NVU) CNS의 혈 류 변화 환경에서 보호에 의해 보증 된다. NVU 2 설정 CNS microvascular 내 피 세포의 화학적 고유 하 고 지속적인 누화와 pericytes, 이다, 신경, 세포 외 기질 (ECM) 구성 요소에에서 혈액-뇌 장벽 (BBB)를 설정, 구성 고유한 지하실 막1. 내 피 지하실 막 BBB 내 피 세포의 abluminal 측면 pericytes의 높은 수 항구 이며 laminin α4와 다른 ECM 단백질2뿐만 아니라 laminin α5는 ensheathes. 반면, parenchymal 지하실 멤브레인 laminin α1 및 laminin α2의 구성 되어 있으며 astrocytic 끝-피트에 의해 포용입니다. 사이토 끝-피트 함께 parenchymal 지하실 멤브레인 가득 척수 혈관 주위 또는 거미 막 밑 공간3에서 CNS 신경 네트워크 분리 명과 limitans를 작성 합니다. NVU의 독특한 구조 때문에 CNS에 밀매 하는 면역 세포는 다릅니다 그 주변 조직으로 면역 세포는 2 단계 과정을 필요로 하 고, 먼저 위배 내 피 BBB와 그 후에 명과 limitans CNS 실질에 도달 합니다.
다 발성 경화 증 (MS)은 CNS, 순환 하는 면역 세포의 많은 CNS 입력 한 neuroinflammation, demyelination, 및 BBB 무결성4의 초점 손실의 일반적인 neuroinflammatory 질병 이다. BBB 무결성의 손실 가돌리늄 대조 자기 공명 영상 (MRI)5시각으로 CNS 병 변 강화의 존재에 의해 나타나는 것과 같이, MS의 초기 특징입니다. Postcapillary venules;의 수준에서 발생 하는 CNS에 백혈구 넘쳐 흐름 그러나, 면역 세포 diapedesis BBB 지하실 멤브레인와 이후 폐해 장벽에에서 관련 된 정확한 메커니즘 탐험 남아 있다. 실험적인 자기 면역 뇌 (EAE) ms는 동물 모델 역할 하 고 MS 병 인에 대 한 우리의 현재 지식에 크게 기여 했다. 예를 들어, EAE 모델을 사용 하 여 그것 발견 되었습니다 백혈구 넘쳐 흐름 초기 캡처를 포함 한 다단계 프로세스에서 발생 하 고 풀과 P selectin 당단백질 리간드 (PSGL)-1, 같은 mucin 같은 분자에 의해 중재 단계를 압 연 integrin 종속 회사 체포와 diapedesis6관대 면 BBB 내 피 세포에서 T 세포의 크롤 링에 의해 따라.
일단 T 세포는 내 피 BBB와 내 피 지하실 막 넘어, 그들은 그들의 동족 항 원 대 식 세포 나 수지상 세포를 환자의 또는 혈관 주위 공간에 전략적으로 지역화를 발생 해야 합니다. 이 상호 작용 그 트리거 후속 메커니즘 명과 limitans7,,89통해 면역 세포의 CNS 조직 침공에 필요한 프로-염증 성 중재자의 초점 생산을 유도 합니다. 매트릭스-metalloproteinases (MMP)-2 및 MMP 9의 초점 활성화 chemokine 활성화를 유도 하는 면역에 대 한 전제 조건 인 사이토 끝-피트, 수용 체 세포 외 매트릭스의 저하로 명과 limitans에서 마이그레이션 셀은 CNS 실질 EAE10,11의 임상 증상의 발병을 유도 하 고.
BBB와 면역 세포를 침투 하는 CNS의 탐지를 결합 하 여 CNS 조직 섹션에서 누설 및 gelatinase 활동 neuroinflammation의 맥락에서 내 피 및 폐해 장벽의 기능 무결성에 대 한 귀중 한 정보를 제공 합니다. 예를 들어, 우리는 최근 내 피 꽉 접합 분자 접합 접착 분자 (잼)의 제정 손실 조사-B 면역 세포 EAE의 맥락에서 CNS에 인신 매매. 건강 한 야생-타입 C57BL/6 마우스에 비해, vivo에서 침투성 평가 생 뿐만 아니라 외 인 추적기12를 사용 하 여 같이 건강 한 잼-B-결핍 littermates BBB 무결성의 아무 장애를 보였다. EAE의 맥락에서 잼 B 불충분 한 C57BL/6 마우스 환자 및 혈관 주위 공간12염증 성 세포 트래핑와 연결 했다 ameliorated 질병 증상을 보였다. 이 현상 검사 우리가 적용 현장에서 zymography, 잼-B-불충분 한 쥐에 gelatinase 활동의 부족은 면역 세포 위반 수의 감소 된 숫자에 대 한 책임이 있을 수 있습니다 하는 경우 테스트 하기 위해 gelatinase 활동의 식별을 허용 합니다 명과 limitans12.
가용성을 감안할 때 다른 유전자 수정 마우스 모델 부족, 예를 들어, BBB 기능에 변화를 일으킬 수 있는 다른 BBB 꽉 접합 분자 BBB 무결성 조사 방법론은 중요 하다. 또한, 새로 개발된 된 약물 NVU 장벽에 영향을 줄 수 있습니다. 여기 우리가 myelin oligodendrocyte 당단백질 (MOG)와 활성 예방 접종에 의해 C57BL/6 쥐에서 EAE를 유도 하는 방법을 보여줍니다-완전 한 Freund adjuvants에서 펩 티 드 aa35-55. 우리 다음 exogenous 추적기와 gelatinase 활동의 현장에서 감지 하 여 각각 vivo에서 내 피 및 폐해 장벽 무결성을 공부 하는 방법은 NVU의 내 피 및 폐해 장벽을 통해 면역 세포 침투를 지역화 하는 방법을 설명 합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >AMCA anti-rabbit antibody</td>
			<td >Jackson ImmunoResearch</td>
			<td >111-156-045</td>
			<td >Store at 4 &#176;C; protect from light</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-CD45 Antibody (30F11)</td>
			<td >Pharmingen</td>
			<td >07-1401</td>
			<td >Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-Laminin Antibody</td>
			<td >DAKO</td>
			<td >Z0097</td>
			<td >Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Breeding food</td>
			<td >e.g. PROVIMI KLIBA SA</td>
			<td >3336</td>
			<td ></td>
		</tr>
			<tr >
			<td >Individually ventilated cages, Blue line Type II or III</td>
			<td >e.g. Tecniplast	</td>
			<td >1145T, 1285L</td>
			<td ></td>
		</tr>	
		<tr >
			<td >BSA fraction V</td>
			<td >Applichem</td>
			<td >A1391</td>
			<td >Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cold gelatine</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >G 9391</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coplin jar + rack</td>
			<td >e.g. Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td >H554.1; H552.1</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cy3 anti-rat antibody</td>
			<td >Jackson ImmunoResearch</td>
			<td >111-156-144</td>
			<td >Store at 4 &#176;C; protect from light</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cover slips 24 x 40 mm # 1</td>
			<td >e.g. Thermo Scientific</td>
			<td >85-0186-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dextran Alexa Fluor 488 (10,000 MW)</td>
			<td >e.g. Molecular probes</td>
			<td >D22910</td>
			<td >Store at -20 &#176;C; protect from light</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dextran Texas Red (3000 MW)</td>
			<td >Invitrogen</td>
			<td >D3328</td>
			<td >Store at -20 &#176;C; protect from light</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EnzChek Gelatinase/Collagenase Assay Kit&#160;</td>
			<td >Thermo Fisher Scientific; EnzCheck</td>
			<td >E12055</td>
			<td >Store at -20 &#176;C; protect form light</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Female C57BL/6J mice (8-12 weeks)</td>
			<td >e.g. Janvier Labs</td>
			<td ></td>
			<td >Females, 8-12 weeks</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Freezing box for histology slides</td>
			<td >e.g. Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td >2285.1</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >18G x 1&#189;&#8217;&#8217; (1.2mm x 40mm) injection needle</td>
			<td >e.g. BD, BD Microlance 3</td>
			<td >304622</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >27G x &#190;&#8217;&#8217; &#8211; Nr. 20 (0.4mm x 19mm) injection needle</td>
			<td >e.g. BD, BD Microlance 3</td>
			<td >302200</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >30G x &#189;&#8217;&#8217; (0.3 mm x 13 mm) injection needle</td>
			<td >e.g. BD, BD Microlance 3</td>
			<td >304000</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incomplete Freund&#8217;s adjuvant (IFA)</td>
			<td >e.g. Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td >sc-24648</td>
			<td >Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Maintenance food</td>
			<td >e.g. PROVIMI KLIBA SA</td>
			<td >3436</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MOGaa35-55 peptide</td>
			<td >e.g. GenScript</td>
			<td ></td>
			<td >Store at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >microscope slides (Superfrost Plus )</td>
			<td >Thermo Scientific</td>
			<td >J1800AMNZ</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Mycobacterium tuberculosis H37RA</td>
			<td >e.g. BD</td>
			<td >231141</td>
			<td >Store at 4 &#176;C&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl 0.9 %</td>
			<td >B. Braun</td>
			<td >3535789</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >O.C.T. compound (Tissue-Tek )</td>
			<td >Sakura</td>
			<td >4583</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Omnican 50 30G x &#189;&#8217;&#8217;</td>
			<td >B. Braun</td>
			<td >9151125S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde</td>
			<td >Merck</td>
			<td >30525-89-4</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pertussis toxin</td>
			<td >e.g. List biological laboratories, Inc.</td>
			<td >180</td>
			<td >Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >poly(vinyl alcohole) (Mowiol 4-88)</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >81381</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Protease Inhibitor EDTA free (Roche)</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >4693132001</td>
			<td >Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >repelling pen e.g. DAKO Pen</td>
			<td >e.g. DAKO</td>
			<td >S2002</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >sealing film e.g. Parafilm M</td>
			<td >e.g Sigma-Aldrich</td>
			<td >P7793</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silica gel</td>
			<td >e.g. Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td >9351.1</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stitch scissor</td>
			<td >F.S.T</td>
			<td >15012-12</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe 1 ml</td>
			<td >e.g. PRIMO</td>
			<td >62.1002</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe 10 ml</td>
			<td >e.g. CODAN Medical ApS</td>
			<td >2022-05</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >vaporizer system Univentor 400</td>
			<td >UNO.BV</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing impairment of the endothelial and glial barriers of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo

혈관 단위 (NVU)는 혈액-뇌 장벽 (BBB), 포함 된 pericytes와 내 피 지하실 막 형성 microvascular 내 피 세포의 구성 및 명과 limitans 구성 parenchymal 지하실 막 그리고 astrocytic 끝-피드 중앙 신경 시스템 (CNS) microvessels의 abluminal 측면을 수용. CNS 유지 이외에 항상성은 NVU 면역 세포 CNS에 밀매 제어 합니다. CNS의 immunosurveillance 동안 활성화 된 림프 톨의 낮은 수 BBB 부전 또는 임상 질병을 유발 하지 않고 내 피 방 벽을 교차 수 있습니다. 대조적으로, 다 발성 경화 증 또는 그것의 동물 모델에서와 같은 neuroinflammation 동안 실험적인 자기 면역 뇌 (EAE) 면역 세포의 많은 교차 BBB와 이후 결국 CNS 실질 도달 명과 limitans 임상 질병을 선도. 
면역 세포 마이그레이션 CNS 실질에 이렇게 독특한 분자 메커니즘을 채용 하는 NVU의 내 피와 폐해 장벽을 가로질러 순차적 마이그레이션을 포함 하는 2 단계 프로세스 이다. 만약 내 피 장벽을 가로질러 그들의 통행 다음, T 세포 발생 그들의 현지 재 gelatinases의 초점 활성화로 이어지는 후속 메커니즘을 시작할 것 이다 혈관 주위 항 원 제시 세포에 그들의 동족 항 원 하 폐해 방 벽을 교차 하 여 CNS 실질 입력 T 셀 수 있게 된다. 따라서, BBB 침투성 및 MMP 활동 EAE 동안 CNS에 면역 세포 축적에 공간 상관 관계에서 모두, 평가 NVU의 내 피와 폐해 장벽의 무결성의 손실을 지정할 수 있습니다. 
우리는 여기 활성 예방 접종에 의해 C57BL/6 쥐에서 EAE를 유도 하는 방법과 이후에 BBB 침투성 생체 조건 exogenous 형광 추적기의 조합을 사용 하 여 분석 하는 방법을 보여줍니다. 우리 더 쇼, 시각화 하 고 현장에서 zymogaphy immunofluorescent stainings BBB 지하실 막과 CD45 + 침입 면역 세포의 결합에 의해 EAE 두뇌에 gelatinase 활동을 지역화 하는 방법.

C57BL/6 쥐에서 EAE의 임상 과정의 평가 질병 곡선 그림 2A 와 그림 2B에 제시 된으로 마우스 몸 무게 변화에 묘사 된 대로 발생 한다. MOGaa35-55 일반적으로 접종 하는 C57BL/6 마우스 활성 예방 접종 (그림 1A) 후 하루 10-12 주위 질환 증상을 개발 하기 시작 합니다. 일반적으로, 면역된 생쥐 유제의 주입 및 백 일 해 독 소 (그...

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Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

Vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 Neurovascular 단위의 내 피와 폐해 장벽의 장애 시각화

여기, 선물이 vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 혈관 단위의 장애를 조사 하는 프로토콜. 우리는 특별히 명과 limitans에서 혈액-뇌 장벽 침투성 및 백혈구 마이그레이션에 관련 된 gelatinase 활동을 확인 하는 방법 주소.

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

여기에서 제출된 방법은 다발성 경화증을 위한 동물 모형인 실험적인 자기 면역 뇌척수염에 있는 두뇌 장벽을 통해 면역 세포 이동의 분자 기계장치를 연구하는 것을 허용합니다. 혈액-뇌 장벽 투과성 및 매트릭스-메탈로로티즈 활성을 동시에 조사하여 뇌 조직 섹션의 면역 세포 침투에 대한 공간 상관 관계를 조사함으로써 이러한 신경 염증 성 사건을 EAE의 임상 징후와 정확하게 연관시킬 수 있습니다. 병에 걸린 마우스의 전문적인 취급은 심층적인 훈련, 뿐만 아니라 EAE의 임상 표시의 정확한 점수를 필요로 합니다.따라서 시각적 데모가 유익합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 특정 병원균 없는 조건에 보관된 C57-Black/6 마우스의 마취로 이 절차를 시작합니다. 마취 된 마우스를 한 손에 고정하고 MOG 펩티드 30 마이크로 리터를 주입하고 각 뒷다리 측면에 프룬트의 보조 에멀젼을 피하하여 잉게인 림프절과 가깝습니다.이제 마우스를 배에 놓고, 꼬리 뿌리에서 왼쪽과 오른쪽 모두에서 연지방 조직에 MOG 펩티드 에멀젼 20 마이크로리터를 주입한다. 또한 마우스의 목에 에멀젼의 작은 액적을 주입하십시오. 당면성 독소 용제 100 마이크로리터를 마우스에 회대적으로 주입하십시오.내장에 주입을 피하기 위해 신체 센터 아래 마우스의 머리를 잡아. 사육 식단으로 유지 보수 식단을 대체하여 쥐에게 예상된 임상 질환 전후 및 도중 더 높은 에너지 함량의 식품을 제공한다. 첫 번째 치료 후 48 시간 동안 등리 소 독소 주입을 반복하십시오.매일 아침 케이지 내부를 살펴서 EAE 마우스의 건강 상태를 확인하십시오. 매일 오후 EAE 마우스 점수. EAE 실험에 포함된 모든 개별 마우스를 케이지에서 꺼내 꼬리에 토누스가 있는지 확인합니다.꼬리를 손가락으로 위쪽으로 이동합니다. 건강한 마우스는 꼬리를 유지합니다. 임상 EAE가 시작된 경우 꼬리 톤은 꼬리의 점진적인 드롭으로 볼 수 있습니다.결국, 마우스는 꼬리를 전혀 들어 올릴 수 없습니다. EAE 실험에 포함된 모든 개별 마우스를 깨끗한 벤치에 배치하여 걷기 동작을 관찰하고 문서화합니다. EAE 점수인 질병 심각도 평가를 위한 점수 기준을 보려면 텍스트를 참조하십시오.실험에 포함된 모든 마우스의 무게를 평가하고 문서화합니다. dextran 주식 솔루션을 준비하기 위해 염화 나트륨 용액 500 마이크로 리터에 10 밀리그램의 3 킬로달톤 Dextran 텍사스 레드를 녹이고 0.9 % 염화 나트륨 용액의 250 마이크로 리터에서 10 킬로톤 Dextran Alexa Fluor 488의 5 밀리그램을 녹입니다. 주입 직전에 10킬로달톤 Dextran Alexa Fluor 488 스톡 용액의 파이펫 55 마이크로리터가 밀봉 필름에 스페톤 작업 용액을 제공합니다.그런 다음 3킬로달톤 텍사스 레드 스톡 솔루션의 55 마이크로리터를 추가합니다. 100마이크로리터를 일회용 미세 주사기에 넣고 수집합니다. 다음으로, 테이블의 측면 위치에 마취 된 마우스를 배치합니다.마우스가 깨어나기 전에 100마이크로리터의 형광 추적기를 마우스에 정맥주사합니다. 트레이서가 텍스트 프로토콜에 상세한 마우스의 관류를 수행하기 전에 15 분 동안 순환하게하십시오. 평평한 데워 용기를 분쇄된 드라이 아이스로 채우고, 액체가 드라이 아이스 팩 위로 약 1센티미터 에 도달할 때까지 2-메틸부탄을 넣습니다.얼음 양동이 커버와 같은 느슨한 뚜껑으로 덮습니다. 날카로운 가위로 침투 된 마우스의 머리를 잘라 낸 후, 더 작은 가위를 사용하여 피부와 귀를 제거합니다. 두개골을 왼쪽과 오른쪽의 앞쪽으로 절단하여 두개골캡을 조심스럽게 해부하여 두개골을 뇌 위로 접을 수 있도록 합니다.그런 다음 평평한 금속 주걱을 사용하여 광학 신경을 분리하면서 두개골 의 기지에서 손상되지 않은 뇌를 조심스럽게 들어 올립니다. 알루미늄 호일에 뇌를 놓습니다. 두 개의 관상 절단을 배치하여 세 조각으로 뇌를 잘라.세 조각은 뇌간, 중간 뇌 및 소뇌를 나타냅니다. 최적의 온도 절단 매트릭스와 1 분기에 크라이오폴드를 채웁니다. 그런 다음 각 뇌 조각의 앞쪽면이 아래쪽으로 향하면서 뇌 조각을 Cryomold에 놓습니다.매트릭스로 조직을 완전히 덮습니다. 2-메틸부탄 목욕에 수평 방향으로 조직과 크라이오폴드를 놓습니다. 조직 전체가 욕조에 담그지 않도록 하여 조직이 바닥에서 위로 1분 이내에 얼어 붙는지 확인합니다.냉동 조직을 영하 80도로 옮겨 보관하십시오. 동결된 조직 섹션의 준비를 위한 텍스트 프로토콜을 참조하십시오. EAE 마우스에서 준비된 6마이크론, 고정되지 않은 뇌 조직 섹션을 검색합니다.연기 후드에서, 조직에 물의 보존을 피하기 위해 뚜껑에 실리카 젤을 포함하는 플라스틱 냉동 상자 내부의 섹션을 해동. 물 격퇴 펜으로 선을 그려 한 슬라이드에 두 개의 조직 섹션을 분리합니다. 원심분리기 반응 용액은 13, 실온에서 300배, 수조를 이용한 섭씨 37도까지 미리 따뜻합니다.그런 다음 1X 반응 버퍼를 사용하여 섭씨 37도에서 5분 동안 조직 섹션을 다시 수분하게 합니다. 5분 후 1X 반응 버퍼를 부어 넣습니다. 조직 섹션에 반응 용액을 추가하고 섭씨 37도에서 4 시간 동안 배양하십시오.그런 다음 슬라이드를 이중 증류수로 5번 세척합니다. 이제 실온에서 PBS로 한 번 세척하기 전에 영하 20도에서 얼음 차가운 메탄올로 5 분 동안 섹션을 수정하십시오. 섹션에 PBS에 1 %BSA를 추가하고 실온에서 20 분 동안 배양하십시오.그런 다음 조직에서 슬라이드를 뒤집어 섹션에서 버퍼를 폐기합니다. 섹션에 1 차적인 항체 칵테일을 추가하고 실온에서 1 시간 동안 배양하십시오. PBS로 섹션을 두 번 세척 한 후, 이차 항체 칵테일을 추가하고 실온에서 1 시간 동안 배양하십시오.그런 다음 PBS로 섹션을 두 번 세척하고 미끄럼 에 포함 된 용액을 장착합니다. 실온에서 밤새 장착 된 섹션을 건조하게 한 후 형광 현미경을 사용하여 염색 된 조직 섹션을 분석하십시오. EAE 질병 심각도는 EAE 유도 후 16일과 20일 사이에 예상될 수 있는 질병의 피크까지 증가합니다.임상 EAE의 절정에, 마우스는 또한 질병의 면제 단계에서 EAE의 개량에 상관 관계에 있는 증가 하는 가장 낮은 체중을 보였다. 여기에 는 EAE로 고통받는 C57-Black/6 마우스의 코로이드 신경총과 인접한 뇌 의 parenchyma의 대표적인 그림이 있습니다. 마우스는 희생하기 전에 15 분 간 정맥 주사했다.트레이서는 호로이드 신경질의 장루로 회귀된 미생물을 가로질러 쉽게 확산되는 반면, 혈액-뇌 장벽은 순환 추적자가 뇌 parenchyma로 확산되는 것을 허용하지 않으며, 이는 형광 신호가 없습니다. 이 심상은 EAE때문에 손해를 입은 C57-Black/6 마우스의 소뇌에 있는 대표적인 새는 혈관을 보여줍니다. 화살장은 뇌 미세 혈관을 통해 CNS parenchyma로 확산된 추적자를 나타내며, 이는 혈액-뇌 장벽 기능이 이러한 혈관에서 손상되었음을 시사합니다.CNS parenchyma에서, 녹색과 적색 형광 신호는 혈관 벽의 외부에 볼 수 있습니다. MOG-CFA 에멀젼의 올바른 피하 배치는 EAE로 이어지는 적절한 면역 반응을 탑재하는 데 필수적이다. 복막 내 및 근육 주사를 피해야 한다.감쇠된 진균테리움의 흡입을 피하기 위해 연기 후드 아래에서 CFA를 준비하십시오. 또한, MOG-CFA 에멀젼으로 자체 주사를 피하십시오, 이것은 condyloma를 일으키는 원인이 되거나 유전으로 걸리기 쉬운 개별에 있는 EAE로 이끌어 낼 수 있기 때문에. 뇌침투 면역 세포는 유동 세포측정에 의한 신경염증 시 면역 세포 하위 집합에 침투하는 면역 세포 하위 집합을 정량화하기 위해 EAE로부터 고통받는 마우스의 CNS로부터 분리될 수 있다.내피성 및 신경교 뇌 장벽의 무결성을 평가하는 것은 유전자 변형 마우스 모델의 분석 또는 다른 신경 장애의 모델로 번역 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

연구

면역학 및 감염병학

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

입양 이전 및 Antigenic 챌린지에 의해 실험적 면역 Encephalomyelitis (EAE) 모성 마우스 변종에 응답하지 않는 문제를 극복

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

수초 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 쥐에 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 유도

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

챔버의 coverglass 모델을 사용하여 바이오 필름 개발에 객담의 효과를 시각화

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

실험적인 자가면역 뇌척수염 중 중추신경계에서 림프구 침투의 흐름 세포 분석

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

A Rapid, Simple, and Standardized Homogenization Method to Prepare Antigen/Adjuvant Emulsions for Inducing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

실험적 자가면역 뇌척수염 유도를 위한 항원/보조 에멀젼을 제조하기 위한 빠르고 간단하며 표준화된 균질화 방법

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) shares similar immunological and clinical features with multiple sclerosis (MS), and is therefore widely ...

자가면역뇌척수염에서 Mycobacterium paratuberculosis에 의한 면역원성 향상

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

저자 스포트라이트: 실험적 자가면역 뇌척수염 중 자가항원의 면역원성 향상에 대한 Mycobacterium paratuberculosis의 보조 활성  

실험적 자가면역 뇌척수염 동안 자가항원의 면역원성을 향상시키는 Mycobacterium paratuberculosis 의 보조 활성

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...