Name: sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle
Uploaded: 2020-02-03T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle at JoVE.com

ونحن نقدر المساعدة السخية التي قدمتها كلية بيجين المهنية للزراعة، ومعهد تطبيق الطاقة الذرية (الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية)، ومركز البحوث البيولوجية التابع لجامعة بيجين للغابات، والبروفيسور شان - غان تشانغ من معهد علم الحيوان، الأكاديمية الصينية للعلوم. تم دعم هذا البحث من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2017YFD0600103)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 31570643، 81774015)، البحث العلمي للغابات في الرفاه العام في الصين (201504304)، منغوليا الداخلية الجامعة الزراعية عالية المستوى خطة بدء تشغيل البحوث المواهب (203206038)، ومنطقة منغوليا الداخلية ذاتية الحكم مشروع بحوث التعليم العالي (NJZZ18047)، منطقة منغوليا الداخلية ذاتية الحكم Linxue "مزدوجة من الدرجة الأولى" مشروع البناء (170001).

تنبيه: راجع أوراق بيانات سلامة المواد الخاصة بالكواشف قبل استخدامها. العديد من المواد الكيميائية المستخدمة أثناء إعداد العينة سامة، مطفرة، مسرطنة، و / أو سامة. استخدام معدات الحماية الشخصية (القفازات، معطف المختبر، والسراويل كامل الطول، والأحذية مغلقة إصبع القدم) والعمل تحت غطاء الدخان ?...

<ol>
	<li>Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+Electron+Microscope+Technology+of+Insect+Material.">Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material.</a> Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+the+scanning+electron+microscopy+(sem)+and+its+application+in+polymer+materials+research.">The development of the scanning electron microscopy (sem) and its application in polymer materials research.</a> Journal of the Graduates Sun Yat-Sen University (Natural Sciences Medicine). 34, 7-12 (2008).</li><li>Gan, L., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+tomography+of+cells.">Electron tomography of cells.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 45, 27-56 (2011).</li><li>Lucic, V., Rigort, A., Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-electron+tomography:+the+challenge+of+doing+structural+biology+in+situ.">Cryo-electron tomography: the challenge of doing structural biology in situ.</a> The Journal of Cell Biology. 202, 407-419 (2013).</li><li>Trepout, S., Bastin, P., Marco, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Observation+of+Thick+Biological+Samples+by+Scanning+Transmission+Electron+Tomography.">Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55215 (2017).</li><li>Zhang, X. J., Sun, W., Zhang, J., Zuo, T. T., Wang, Z. Q., Zhao, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+coleopteran+insect+species+antennal+sensilla.">Research progress of coleopteran insect species antennal sensilla.</a> Journal of Anhui Agricultural Sciences. 41, 2932-2935 (2013).</li><li>Aldrich, J. R., Bartelt, R. J., Dickens, J. C., Knight, A. L., Light, D. M., Tumlinson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+chemical+ecology+research+in+the+United+States+Department+of+Agriculture-Agricultural+Research+Service.">Insect chemical ecology research in the United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service.</a> Pest Management Science. 59, 777-787 (2003).</li><li>Thomas, C. B., Marlin, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone+mating+disruption:+Novel,+non-toxic+control+of+the+European+corn+borer.">Pheromone mating disruption: Novel, non-toxic control of the European corn borer.</a> Leopold Center. 8, 57-60 (1999).</li><li>Chen, X. F., Hu, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+specimen+preparation+techniques+of+scanning+electron+microscope+of+Ficus+simplicissima+Lour.">Studies on the specimen preparation techniques of scanning electron microscope of Ficus simplicissima Lour.</a> Journal of Zhongkai Agrotechnical College. 14, 68-70 (2001).</li><li>Zhou, W., Apkarian, R., Wang, Z. L., Joy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+Scanning+Electron+Microscopy+(SEM).">Fundamentals of Scanning Electron Microscopy (SEM).</a> Scanning Microscopy for Nanotechnology. , 1-40 (2006).</li><li>Kothekar, S. C., Ware, A. M., Waghmare, J. T., Momin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Analysis+of+the+Properties+of+Tween-20,+Tween-60,+Tween-80,+Arlacel-60,+and+Arlacel-80.">Comparative Analysis of the Properties of Tween-20, Tween-60, Tween-80, Arlacel-60, and Arlacel-80.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 28, 477-484 (2007).</li><li>Chai, J. L., Liu, N., Bai, T. T., Zhang, H. M., Liu, N. N., Wang, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compositions+and+Physicochemical+Properties+of+Tween+Type+Surfactants-Based+Microemulsions.">Compositions and Physicochemical Properties of Tween Type Surfactants-Based Microemulsions.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 35, 441-447 (2014).</li><li>Zhang, L. D., Zhao, L., Han, F., Xu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+and+applications+of+surfactants+(XV)+Detergency+of+surfactants+and+its+applications.">Performance and applications of surfactants (XV) Detergency of surfactants and its applications.</a> China Surfactant Detergent and Cosmetics. 45, 132-137 (2015).</li><li>Waghmare, P. R., Das, S., Mitra, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Under-water+superoleophobic+glass:+unexplored+role+of+the+surfactant-rich+solvent.">Under-water superoleophobic glass: unexplored role of the surfactant-rich solvent.</a> Scientific Reports. 3, 1-25 (2013).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtomy+of+insect+sensilla+embedded+in+resin+blocks+for+transmission+electronic+microscopy.">Microtomy of insect sensilla embedded in resin blocks for transmission electronic microscopy.</a> Chinese Journal of Applied Entomology. 50, 1479-1483 (2013).</li><li>Zong, S. X., Liu, X. H., Cao, C. J., Luo, Y. Q., Ren, L. L., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semiochemical+attractants+for+monitoring+and+controlling+Chlorophorus+caragana.">Development of semiochemical attractants for monitoring and controlling Chlorophorus caragana.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 68, 243-252 (2013).</li><li>Sumner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epoxy+resins+for+light+and+transmission+electron+microscopy.">Epoxy resins for light and transmission electron microscopy.</a> Plant Microtechniques and Protocols. , 83-101 (2015).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+antennae.">Insect antennae.</a> Annual Review of Entomology. 9, 103-122 (1964).</li><li>Zacharuk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennae+and+sensilla.">Antennae and sensilla.</a> Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 6, 1-69 (1985).</li><li>Zacharuk, R., Albert, P., Bellamy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+digitiform+sensilla+on+the+labial+palp+of+a+larval+elaterid+(Coleoptera).">Ultrastructure and function of digitiform sensilla on the labial palp of a larval elaterid (Coleoptera).</a> Canadian Journal of Zoology. 55, 569-578 (1977).</li><li>Shanbhag, S., M&#252;ller, B., Steinbrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atlas+of+olfactory+organs+of+Drosophila+melanogaster:+1,+Types,+external+organization,+innervation+and+distribution+of+olfactory+sensilla.">Atlas of olfactory organs of Drosophila melanogaster: 1, Types, external organization, innervation and distribution of olfactory sensilla.</a> International Journal of Insect Morphology and Embryology. 28, 377-397 (1999).</li><li>Tarumingkeng, R. C., Coppel, H. C., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+ultrastructure+of+the+antennal+chemoreceptors+and+mechanoreceptors+of+worker+Coptotermes+formosanus+Shiraki.">Morphology and ultrastructure of the antennal chemoreceptors and mechanoreceptors of worker Coptotermes formosanus Shiraki.</a> Cell Tissue Res. 173, 173-178 (1976).</li><li>Zacharuk, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+insect+chemosensilla.">Ultrastructure and function of insect chemosensilla.</a> Annual Review of Entomology. 25, 27-47 (1980).</li><li>Li, Y. Z., Zhong, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+detergents+and+floating+carriers+for+treating+potato+golden+nematode+cysts+to+improve+the+original+appearance+of+electron+microscopy.">Screening of detergents and floating carriers for treating potato golden nematode cysts to improve the original appearance of electron microscopy.</a> Plant quarantine. 8, 72-75 (1994).</li><li>Marzio, L. D., Marianecci, C., Petrone, M., Rinaldi, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+pH-sensitive+non-ionic+surfactant+vesicles:+comparison+between+tween+21+and+tween+20.">Novel pH-sensitive non-ionic surfactant vesicles: comparison between tween 21 and tween 20.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 82, 18-24 (2011).</li><li>Ren, L. L., Wu, Y., Shi, J., Zhang, L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+morphology+and+sensilla+ultrastructure+of+Tetrigus+lewisi+Cand&#232;ze+(Coleoptera:+Elateridae).">Antenna morphology and sensilla ultrastructure of Tetrigus lewisi Cand&#232;ze (Coleoptera: Elateridae).</a> Micron. 60, 29-38 (2014).</li><li>Ren, L., Shi, J., Zhang, Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennal+morphology+and+sensillar+ultrastructure+of+Dastarcus+helophoroides+(Fairmaire)+(Coleoptera:+Bothrideridae).">Antennal morphology and sensillar ultrastructure of Dastarcus helophoroides (Fairmaire) (Coleoptera: Bothrideridae).</a> Micron. 43, 921-928 (2012).</li><li>Teng, X. H., Liu, X. L., Xie, G. Y., Tang, Q. B., Li, W. Z., Zhao, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+distribution+of+ovipositor+sensilla+of+female+Helicoverpa+armigera+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Morphology and distribution of ovipositor sensilla of female Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae).</a> The 11th Henan Plant Protection Society, the 10th Henan Insect Society, and the 5th Member Congress and Academic Symposium of Henan Plant Pathology Society. , 138-142 (2017).</li><li>Yang, R., Zhang, L. N., Fan, J. W., Wang, J. L., Fang, K. F., Yu, T. Q., Wang, S. H., Du, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+specimens+for+scanning+electron+microscopy.">Insect specimens for scanning electron microscopy.</a> Journal of Beijing University of Agriculture. 29, 33-36 (2014).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Zhang, L., Wang, R., Yu, Y., Lu, P. F., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+distribution+of+sensilla+on+the+maxillary+and+labial+palps+of+Chlorophorus+caragana+(Coleoptera:+Cerambycidae).">Ultrastructure and distribution of sensilla on the maxillary and labial palps of Chlorophorus caragana (Coleoptera: Cerambycidae).</a> Journal of Morphology. 279, 574-588 (2018).</li><li>Harrison, J. D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+preparing+adult+beetles+(Coleoptera)+for+light+and+scanning+electron+microscopy.">Cleaning and preparing adult beetles (Coleoptera) for light and scanning electron microscopy.</a> African Entomology. 20, 395-401 (2012).</li><li>Xiao, Y., Liu, W., Wang, Y., Zuo, Y. X., Hu, R., Li, T. T., Cui, Z. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+methods+of+biological+sample+preparation+for+scanning+electron+microscope.">Drying methods of biological sample preparation for scanning electron microscope.</a> Research and Exploration Laboratory. 32, 46-53 (2013).</li><li>Graef, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Conventional Transmission Electron Microscopy. , 1 (2003).</li></ol>

في هذه المقالة ، قدمنا مخطط إعداد عينة للمسح الضوئي والمجهر الإلكتروني لنقل هينخة مملة الخشب. باستخدام ملحق الحشرات كموضوع دراسة تمثيلي ، أظهرنا العديد من التحسينات على طرق إعداد العينة التقليدية.
يتم استحلاب الزيت السائل المنفصل عن السطح الصلب إلى قطرات صغيرة ، والتي يمك?...

المسح المجهري الإلكترون هو أداة هامة في العديد من الدراسات مورفولوجيا، أن SEM يظهر هياكل السطح1،2. نداء المجهر الإلكتروني ناقل الحركة هو أنه يمكن استخدامه لدراسة مجموعة واسعة من الهياكل البيولوجية على مقياس نانومتر، من الهندسة المعمارية للخلايا والبنية الفائقة للorganelles، إلى بنية المجمعات الجزيئية الكلية والبروتينات. TEM يظهر الهياكل الداخلية3،4،5.
Coleoptera هي أكبر مجموعة من الحشرات ، بما في ذلك حوالي 182 أسرة و 350،000 نوع. معظم الحشرات الكولوبثران ، ولا سيما الخنفساء الخشبية ، تتغذى على النباتات ، وكثير منها آفات مهمة من الغابات وأشجار الفاكهة ، مما يسبب أضرارًا مدمرة للأشجار6. في الوقت الحاضر ، والوقاية من ومكافحة السكان من الآفات على أساس نظرية الإيكولوجيا الكيميائية قد تلقت اهتماما متزايدا7. أصبحت أساليب التحكم فعالة ومنخفضة السمية وخالية من التلوث فيرومون طريقة فعالة8. دراسة مورفولوجيا sensilla وultrastructure من الحشرات هو جزء مهم من بحوث البيئة الكيميائية الحشرية. يتم استخدام المجهر الإلكتروني المسح الضوئي وانتقال (SEM و TEM، على التوالي) لتأثير كبير لدراسة مورفولوجيا والتشريح الداخلي. ومع ذلك ، أثناء إعداد عينات الحشرات للمجهر الإلكتروني (EM) ، قد تتأثر موضوعية وأصالة موقع المراقبة9. بشكل عام ، يتطلب إعداد عينة SEM من الحشرات التنظيف ، تثبيت الأنسجة ، الجفاف ، الميتاسب ، التجفيف ، وطلاء السطاق10. نظرًا للبيئة المعقدة التي تعيش فيها الخنفساء الخشبية ، غالبًا ما يكون لسطح الجسم ملوثات مختلفة وغالبًا ما تحتوي الزوائد عليها على العديد من السينسيلا الطويلة الجميلة أو الشعيرات. على وجه الخصوص ، لا تتوفر بعض الحطابين من تربية المختبرات ، والتي تم جمعها مباشرة في الحقل ، ثم وضعها في إصلاح السوائل لضمان نضارة ثم غسلها في المختبر. إذا تم إصلاح العينة أولاثم غسلها، فمن الواضح أنه من الصعب جدا لإزالة الحطام لأن الجلوتارالدهيد يصلح بقوة إلى العينة. Tween 20 هو السطحي11،12،13،14، الذي يلعب دورا هاما في عملية الغسيل ، بما في ذلك الحد من التوتر السطحي للمياه وتحسين قابلية المياه على سطح الغسيل. في هذه الدراسة ، تمت إضافة Tween 20 إلى محلول التثبيت ومحلول تنظيف PBS لتقليل التوتر السطحي للسائل ، ومنع الأوساخ من الترسب على سطح الجسم من الخنفساء الخشبية ، مما جعل سطح الجسم أنظف في SEM.
باستخدام TEM ، يمكن تقطيع sensilla على أعضاء مختلفة من الحشرات إلى شرائح للكشف عن الهياكل الواضحة داخلها ، مما يوفر أساسًا لتحليل وظائف sensilla. عندما تكون الحشرة الخاضعة ، مثل الخنفساء الخشبية ، كبيرة ، وجدار جسمها يحتوي على درجة كبيرة من التصلب ، لذلك قد لا تشبع المثبت أنسجة الأعضاء بالكامل داخل جسم الحشرة. Tween 20 يمكن أن تعزز قدرة التشتت والتعليق من الأوساخ. في هذه الدراسة ، تمت إضافة Tween 20 إلى المثبت لتعزيز تغلغل السوائل المثبت في جدار جسم الحشرات من الخنفساء الخشبية ، وتجنب تشوه وانهيار البشرة11،12،13. وبالإضافة إلى ذلك، وذلك باستخدام تكنولوجيا تشريح العامة، فمن الصعب تحديد بدقة أنواع مختلفة من sensilla، ولا سيما بالنسبة لبعض sensilla الصغيرة15. استنادًا إلى إعداد عينة TEM التقليدية ، جمعت هذه الدراسة بين المجهر الفلوري وSEM لتحديد موقف سينسيلا الحشرات في الكتلة المضمنة ، وبالتالي تحسين دقة التقطيع.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical lens</td>
			<td>Chongqing Auto Optical 
			limited liability company</td>
			<td>1425277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon adhesive tape</td>
			<td>SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.</td>
			<td>7311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon tetrachloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids</td>
			<td>GilderGrids</td>
			<td>G300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sinopharm group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>10039-32-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding molds</td>
			<td>Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td>Anhydrous EM Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isophorone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78-59-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>512-26-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monobasic sodium phosphate</td>
			<td>Its group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective micrometer</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>0-001-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>541-09-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>1998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Gillette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Spurr</td>
			<td>ERL4221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Lianhui</td>
			<td>GB/T19001-2008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>S-3400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel desiccant</td>
			<td>Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd.</td>
			<td>112926-00-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td>Martol</td>
			<td>G1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter ion instrument</td>
			<td>Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>E-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EZ4 HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Tianjin Damao Chemical Reagent</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>UC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>GT Sonic</td>
			<td>GT-X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>6159-44-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle

وصف هذا التقرير طرق إعداد العينة التي تقوم بمسح وانتقال ملاحظات المجهر الإلكتروني ، التي تجلت من خلال إعداد الزوائد من الخنفساء الخشبية ، Chlorophorus caragana Xie & Wang (2012) ، لكلا النوعين من المجهر الإلكتروني. واستند بروتوكول إعداد عينة المجهر الإلكتروني المسح (SEM) على تثبيت عينة الكيميائية، والجفاف في سلسلة من حمامات الإيثانول، والتجفيف، وطلاء البولتر. بإضافة Tween 20 (Polyoxyethylene sorbitan laurate) إلى محلول الغسيل والمثبت ، تم غسل سطح جسم الحشرات من خنفساء الخشب بشكل أكثر نظافة في SEM. هذه الدراسة المجهرية الإلكترونية انتقال (TEM) إعداد عينة شملت سلسلة من الخطوات بما في ذلك التثبيت، وجفاف الإيثانول، والتضمين في الراتنج، وتحديد المواقع باستخدام المجهر الفلوري، والقسمة، وتلطيخ. Fixative مع Tween 20 تمكين اختراق جدار جسم الحشرات من خنفساء الخشب أكثر سهولة مما كان عليه من دون Tween 20 ، وبالتالي أفضل الأنسجة الثابتة والأعضاء في الجسم ، وبالتالي أسفرت عن ملاحظات المجهر الإلكتروني انتقال واضح من الهياكل الفائقة sensilla الحشرات. وكانت الخطوة التالية من هذا الإعداد تحديد مواقف sensilla الحشرات في العينة جزءا لا يتجزأ من كتلة الراتنج باستخدام المجهر الفلوري لزيادة دقة تحديد المواقع sensilla الهدف. هذا تحسين دقة تشريح.

باستخدام التنظيف والحل المثبت مع Tween 20 ، لوحظت صورة SEM أنظف من ذلك بدون Tween 20(الشكل 3). Tween 20 حل تحديد اخترقت حل تحديد glutaraldehyde في الأنسجة. وشوهد هيكل Microtubule بوضوح. صورة TEM للهيكل الداخلي للعينة كانت غير واضحة دون Tween 20(الشكل 4).
<p class="jove_content" fo:keep-...

Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle at JoVE.com

Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

من أجل مراقبة البنية الفائقة للsensilla الحشرات ، تم عرض المسح الضوئي والمجهر الإلكتروني للإرسال (SEM و TEM ، على التوالي) بروتوكول إعداد العينة في الدراسة. تمت إضافة Tween 20 إلى المثبت لتجنب تشوه العينة في SEM. كان المجهر الفلوري مفيدًا لتحسين دقة التقطيع في TEM.

طريقة إعداد عينة من المسح الضوئي وانتقال المجهر الإلكتروني لزوائد خنفساء الخشب

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

خنفساء الخشب سطح الجسم دائما من الصعب في SEM. يتم إضافة Tween-20 إلى حل التثبيت والغسيل. سطح الجسم من خنفساء الخشب في TEM، و Tween-20 يمكن أن تعزز الاختراق المثبت في جدار الجسم وتحسين إصلاح الأنسجة والجهاز في الجسم.المجهر الفلوريسنس مفيد لتحسين دقة التقطيع. هذه التقنية مفيدة لغسل سطح الجسم والتغلغل في جدار الجسم في خنفساء الخشب. وهكذا ، فإنه واضح SEM ورؤية TEM.المجهر Fluorescence مفيد لتحسين دقة التقطيع في TEM. وسوف يكون الإجراء هو تشانغ يانرو، وهو طالب دراسات عليا من مختبرنا. في منطقة حيث يعيش Chlorophorus caragana، وضع الفخاخ الحقل الطعم معبات النباتات مثل إيسوبوروني على فخ القمع.جذب الخنفساء الحطب البالغين في الفخاخ. الحفاظ على الهيئات النظيفة من Chlorophorus caragana الكبار في 0.1 الخلد لكل لتر برنامج تلفزيوني في 7.2، 2.5٪ الوزن من قبل جلولالدهيد حجم، و 0.06٪ حجم من قبل حجم Tween-20. إصلاح العينة في أربع درجات مئوية لمدة ثلاثة أيام.إزالة الهيئات من السائل الحفاظ وشطف في برنامج تلفزيوني. تحت مجهر ستيريو، واستخدام ملقط لإزالة الزوائد وتنظيفها بالموجات فوق الصوتية في 40 كيلوهيرتز في PBST. بعد التنظيف لمدة 100 ثانية، قم بنقل العينة إلى المجهر للتحقق مما إذا كانت نظيفة.لا تنظف أكثر من 400 ثانية لتجنب الضرر. ثم تزج العينات في الإيثانول في سلسلة من التركيزات لمدة 20 دقيقة لكل من إجراء الجفاف. بعد الجفاف، تحت مجهر ستيريو، واستخدام الكربون على الوجهين شريط لاصق لإصلاح منفصل ثلاثة أسطح المراقبة، الظهرية، البطنية، والجانبية، على كعب.تأكد من أن جميع أسطح المشاهدة نظيفة وخالية من التلوث. ضع مرحلة العينة في طبق بيتري يحتوي على هلام السيليكا للديوكيانت لمدة 48 ساعة. المقبل، على أداة بصق الأيون، تدوير الصمام الرئيسي إلى موقف مفتوح، وإزالة غطاء غرفة عينة ووضع العينة في الغرفة.قم بتشغيل مفتاح الطاقة وتأكد من تشغيل الضوء الجاهز. تعيين الوقت sputtering 45 ثانية وسمك الطلاء كما 70.875 angstrom. مرة واحدة في مضخة الميكانيكية فراغ مؤشر الطلب ينخفض إلى أقل من سبعة، والتفريغ الصحافة والبدء في رش البلاتين.في نهاية الإجراء، إيقاف التيار الكهربائي وأخذ العينة من الغرفة. حساب سمك فيلم رذاذ D في angstrom يساوي K مرات أنا مرات V مرات T.K هو ثابت يحدده المعدن والغاز sputtered. أنا تدفق البلازما في milliamps في حين V هو الجهد المطبقة في كيلوفولت و T هو الوقت في ثوان.إدراج كعب الروتين الذي يحتوي على العينة على المرحلة من SEM. تأكد من أن مرحلة العينة مع كعب العينة لديها ارتفاع كاف للسماح صورة جيدة. افتح برنامج SEM وحدد الجهد التشغيلي المطلوب ابتداء من 20 كيلوفولت.بعد الحصول على الزوائد من Chlorophorus caragana الكبار، وغسل العينات في PBST في حمام بالموجات فوق الصوتية لمدة ثلاث ساعات ومن ثم بعد إصلاح لهم في 1٪ الوزن من قبل حجم أوسميوم تتروكسيد في برنامج تلفزيوني لمدة ساعة واحدة في 25 درجة مئوية. تجفيف العينات باستخدام العلاجات المتعاقبة لمدة 20 دقيقة في 50٪60٪70٪80٪85٪90٪95٪100٪و100٪ حجم من قبل الإيثانول الحجمي في درجة حرارة الغرفة. مع ملقط، وتطبيق الراتنج ساخنة في قالب التضمين شقة وتضمين العينات في الراتنج.تأكد من أن العينة في الجزء السفلي من لوحة ووضعها في أقرب وقت ممكن إلى حافة الأخدود راحة. تسمية ثم احتضان لوحة تحتوي على عينة في 60 درجة مئوية لمدة 72 ساعة. بعد الحضانة، وإزالة لوحة من الحاضنة والتحقق من أن الراتنج قد بلمرة.بمجرد أن تتوطد العينة، ضع كل كتلة راتنج تحت مجهر الفلوريسنس، حرك مصدر الضوء الفلوري للمجهر لتشعيع العينة بالضوء الأزرق من الأعلى وتصويرها. تأكد من أن سينسيلا في كتلة الراتنج واضحة للعيان. قياس المسافة بين حافة كتلة الراتنج وأجهزة الاستشعار الهدف لاستهداف sensilla.الرجوع إلى صورة SEM من ابال وقطع تقريبا كتلة الراتنج مع شفرة حلاقة قريبة من مستقبلات الهدف. بعد ذلك، تحت المجهر الفلوري الضوء الأزرق، وضبط مصدر الضوء من فوق بحيث يتم رصد sensilla بوضوح. إضافة ميكرومتر الهدف إلى مرحلة المجهر الفلوريسين.تصوير كتلة الراتنج قطع تقريبا ثم باستخدام ImageJ قياس المسافة بين الهدف وحافة الراتنج. ضع عينة الراتنج على استئصال فائق الانبعاثات وقطع 50 إلى 60 جزءًا من نانومتر سميكًا حتى يتم الوصول إلى الموضع المستهدف. جبل المقاطع على formvar المغلفة 100 شبكات النحاس شبكة في أطباق بيتري.وصمة عار الشبكات مع محلول مشبّه من خلات أورانيل في درجة حرارة الغرفة. تغطية المقاطع أثناء تلطيخ لمنع الترسبات الناجمة عن الضوء. وصمة لمدة 10 دقائق.في غطاء الدخان، شطف مرتين في 50٪ الميثانول، ثم مرتين في المياه المصفاة ديغاوس. مكان قطرات من الرصاص إعداد سيترات وصمة عار على الساحات من أطباق بيتري البلاستيكية والسماح لهم الجلوس لمدة ثماني دقائق. شطف في المياه المصفاة دي الغاز وجافة.قم بتركيب الشبكات على مرحلة عينة داخل جهاز TEM. تعيين الجهد إلى 80 كيلو فولت ودراسة المقاطع. في هذا البروتوكول ، وذلك باستخدام التنظيف والحل المثبت مع Tween - 20 ، لوحظ صورة واضحة SEM من ذلك دون Tween - 20.مع حل إصلاح Tween-20 السماح لحل تحديد الجلوتارالدهيد لاختراق الأنسجة، وشوهدت هياكل ميكروتوبول بوضوح في الصورة TEM في حين أن الهيكل الداخلي للعينة أعدت دون Tween-20 كان ضبابية. أظهرت وجهات النظر المقطعية المستمرة للر بيغ من النوع واحد سينسيلا غصن basiconica على عابس maxillary أن غمد التشعب تحيط شرائح dendritic الخارجي وامتدت إلى مسام تلميح. سبعة أجزاء dendritic الخارجي غير متشعب موجودة داخل تجويف اللمفية مستقبلات الداخلية التي كانت محاطة تجويف الخارجي.تم فصل الجسم الأنبوبي بواسطة اغمد متشعب من أجزاء التشعب الخارجية الأخرى في كل قاعدة مقبس سنسيلار. في المنطقة الهدّية، تم تحديد ثمانية تشعبات من أقطار مختلفة تشير إلى وجود ثمانية خلايا عصبية ثنائية القطب. ويمكن استخدام هذه التقنية لمواصلة دراسة وظيفة الأعصاب مثل تسجيل خلية واحدة أو التهجين في الموقع.

Research

JoVE Journal

Environment

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

الأمثل تلطيخ سلبي: بروتوكول عالية الإنتاجية للدراسة صغيرة وغير المتناظر هيكل البروتين بواسطة المجهر الإلكتروني

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

تقنية التخصيب الأمثل للعزل<em&gt; الفصلاء</em&gt; أنواع الجراثيم من عزلات عينة التربة

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Protocol for Measuring the Thermal Properties of a Supercooled Synthetic Sand-water-gas-methane Hydrate Sample

بروتوكول لقياس الخصائص الحرارية من فائق التبريد الاصطناعية الرمال والغاز والمياه، هيدرات الميثان عينة

Methane hydrates (MHs) are present in large amounts in the ocean floor and permafrost regions. Methane and hydrogen hydrates are being studied as future ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP، وتحسين أسلوب INEX ل<em&gt; في الموقع</em&gt; قياس الجسيمات والمذاب المركبات التي تتم معالجتها بواسطة مغذيات تعليق النشطة

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

بروتوكول للجزيئات البلاستيك الصغيرة أخذ العينات على سطح البحر وتحليل عينة

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Thermal Scanning Conductometry (TSC) as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

Thermal Scanning Conductometry TSC as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

الحرارية المسح يتضمن (TSC) كأسلوب العامة لدراسة ومراقبة سلوك المرحلة البدنية موصلة الهلام

The thermal scanning conductometry protocol is a new approach in studying ionic gels based on low molecular weight gelators. The method is designed to ...

On the Preparation and Testing of Fuel Cell Catalysts Using the Thin Film Rotating Disk Electrode Method

الإعداد واختبار من المواد الحفازة خلية الوقود استخدام أسلوب قطب القرص تدوير رقيقة

We present a step-by-step tutorial to prepare proton exchange membrane fuel cell (PEMFC) catalysts, consisting of Pt nanoparticles (NPs) supported on a ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus Murayama, Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

قياس قدرة الطيران خنفساء الطعام الشهي، كويرسيفوروس خلد الماء (موراياما)، استخدام منخفضة التكلفة، والصغيرة، ومطحنة رحلة المركبة بسهولة

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

A Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

مقايسة متحاور تضخيم (مصباح) بوساطة حلقة "التعرف السريع على" دراسة حيث

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

توزيع المياه Xylem في النباتات الخشبية تصور مع مجهر إلكترون المسح بالتبريد

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...