Name: sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle
Uploaded: 2020-02-03T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle at JoVE.com

Wij waarderen de genereuze hulp van de Beijing Vocational College of Agriculture, het Institute for the Application of Atomic Energy (Chinese Academy of Agricultural Science), het Bioresearch Center van Beijing Forestry University en professor Shan-gan Zhang van het Instituut voor Zoölogie, Chinese Academie van Wetenschappen. Dit onderzoek werd ondersteund door National Key R&D Program of China (2017YFD0600103), de National Natural Science Foundation of China (Grant No. 31570643, 81774015), Forest Scientific Research in the Public Welfare of China (201504304), Inner Mongolië Landbouwuniversiteit High-level Talent Research Startup Plan (203206038), en Binnen-Mongolië Autonome Regio Hoger Onderwijs Research Project (NJZZ18047), Binnen-Mongolië Autonome Regio Linxue "Double First-class" Bouwproject (170001).

LET OP: Raadpleeg de materiaalveiligheidsinformatiebladen van reagentia voordat u ze gebruikt. Verscheidene van de chemische stoffen die tijdens het monsterpreparaat worden gebruikt, zijn giftig, mutageen, kankerverwekkend en/of reprotoxisch. Gebruik persoonlijke beschermingsmiddelen (handschoenen, labjas, broek over de hele lengte en schoenen met gesloten teen) en werk onder een rookkap tijdens het hanteren van het monster.
1. SEM-monstervoorbereiding en beeldvorming
<ol><li>Proeffixatie en...

<ol>
	<li>Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+Electron+Microscope+Technology+of+Insect+Material.">Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material.</a> Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+the+scanning+electron+microscopy+(sem)+and+its+application+in+polymer+materials+research.">The development of the scanning electron microscopy (sem) and its application in polymer materials research.</a> Journal of the Graduates Sun Yat-Sen University (Natural Sciences Medicine). 34, 7-12 (2008).</li><li>Gan, L., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+tomography+of+cells.">Electron tomography of cells.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 45, 27-56 (2011).</li><li>Lucic, V., Rigort, A., Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-electron+tomography:+the+challenge+of+doing+structural+biology+in+situ.">Cryo-electron tomography: the challenge of doing structural biology in situ.</a> The Journal of Cell Biology. 202, 407-419 (2013).</li><li>Trepout, S., Bastin, P., Marco, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Observation+of+Thick+Biological+Samples+by+Scanning+Transmission+Electron+Tomography.">Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55215 (2017).</li><li>Zhang, X. J., Sun, W., Zhang, J., Zuo, T. T., Wang, Z. Q., Zhao, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+coleopteran+insect+species+antennal+sensilla.">Research progress of coleopteran insect species antennal sensilla.</a> Journal of Anhui Agricultural Sciences. 41, 2932-2935 (2013).</li><li>Aldrich, J. R., Bartelt, R. J., Dickens, J. C., Knight, A. L., Light, D. M., Tumlinson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+chemical+ecology+research+in+the+United+States+Department+of+Agriculture-Agricultural+Research+Service.">Insect chemical ecology research in the United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service.</a> Pest Management Science. 59, 777-787 (2003).</li><li>Thomas, C. B., Marlin, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone+mating+disruption:+Novel,+non-toxic+control+of+the+European+corn+borer.">Pheromone mating disruption: Novel, non-toxic control of the European corn borer.</a> Leopold Center. 8, 57-60 (1999).</li><li>Chen, X. F., Hu, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+specimen+preparation+techniques+of+scanning+electron+microscope+of+Ficus+simplicissima+Lour.">Studies on the specimen preparation techniques of scanning electron microscope of Ficus simplicissima Lour.</a> Journal of Zhongkai Agrotechnical College. 14, 68-70 (2001).</li><li>Zhou, W., Apkarian, R., Wang, Z. L., Joy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+Scanning+Electron+Microscopy+(SEM).">Fundamentals of Scanning Electron Microscopy (SEM).</a> Scanning Microscopy for Nanotechnology. , 1-40 (2006).</li><li>Kothekar, S. C., Ware, A. M., Waghmare, J. T., Momin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Analysis+of+the+Properties+of+Tween-20,+Tween-60,+Tween-80,+Arlacel-60,+and+Arlacel-80.">Comparative Analysis of the Properties of Tween-20, Tween-60, Tween-80, Arlacel-60, and Arlacel-80.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 28, 477-484 (2007).</li><li>Chai, J. L., Liu, N., Bai, T. T., Zhang, H. M., Liu, N. N., Wang, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compositions+and+Physicochemical+Properties+of+Tween+Type+Surfactants-Based+Microemulsions.">Compositions and Physicochemical Properties of Tween Type Surfactants-Based Microemulsions.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 35, 441-447 (2014).</li><li>Zhang, L. D., Zhao, L., Han, F., Xu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+and+applications+of+surfactants+(XV)+Detergency+of+surfactants+and+its+applications.">Performance and applications of surfactants (XV) Detergency of surfactants and its applications.</a> China Surfactant Detergent and Cosmetics. 45, 132-137 (2015).</li><li>Waghmare, P. R., Das, S., Mitra, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Under-water+superoleophobic+glass:+unexplored+role+of+the+surfactant-rich+solvent.">Under-water superoleophobic glass: unexplored role of the surfactant-rich solvent.</a> Scientific Reports. 3, 1-25 (2013).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtomy+of+insect+sensilla+embedded+in+resin+blocks+for+transmission+electronic+microscopy.">Microtomy of insect sensilla embedded in resin blocks for transmission electronic microscopy.</a> Chinese Journal of Applied Entomology. 50, 1479-1483 (2013).</li><li>Zong, S. X., Liu, X. H., Cao, C. J., Luo, Y. Q., Ren, L. L., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semiochemical+attractants+for+monitoring+and+controlling+Chlorophorus+caragana.">Development of semiochemical attractants for monitoring and controlling Chlorophorus caragana.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 68, 243-252 (2013).</li><li>Sumner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epoxy+resins+for+light+and+transmission+electron+microscopy.">Epoxy resins for light and transmission electron microscopy.</a> Plant Microtechniques and Protocols. , 83-101 (2015).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+antennae.">Insect antennae.</a> Annual Review of Entomology. 9, 103-122 (1964).</li><li>Zacharuk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennae+and+sensilla.">Antennae and sensilla.</a> Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 6, 1-69 (1985).</li><li>Zacharuk, R., Albert, P., Bellamy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+digitiform+sensilla+on+the+labial+palp+of+a+larval+elaterid+(Coleoptera).">Ultrastructure and function of digitiform sensilla on the labial palp of a larval elaterid (Coleoptera).</a> Canadian Journal of Zoology. 55, 569-578 (1977).</li><li>Shanbhag, S., M&#252;ller, B., Steinbrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atlas+of+olfactory+organs+of+Drosophila+melanogaster:+1,+Types,+external+organization,+innervation+and+distribution+of+olfactory+sensilla.">Atlas of olfactory organs of Drosophila melanogaster: 1, Types, external organization, innervation and distribution of olfactory sensilla.</a> International Journal of Insect Morphology and Embryology. 28, 377-397 (1999).</li><li>Tarumingkeng, R. C., Coppel, H. C., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+ultrastructure+of+the+antennal+chemoreceptors+and+mechanoreceptors+of+worker+Coptotermes+formosanus+Shiraki.">Morphology and ultrastructure of the antennal chemoreceptors and mechanoreceptors of worker Coptotermes formosanus Shiraki.</a> Cell Tissue Res. 173, 173-178 (1976).</li><li>Zacharuk, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+insect+chemosensilla.">Ultrastructure and function of insect chemosensilla.</a> Annual Review of Entomology. 25, 27-47 (1980).</li><li>Li, Y. Z., Zhong, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+detergents+and+floating+carriers+for+treating+potato+golden+nematode+cysts+to+improve+the+original+appearance+of+electron+microscopy.">Screening of detergents and floating carriers for treating potato golden nematode cysts to improve the original appearance of electron microscopy.</a> Plant quarantine. 8, 72-75 (1994).</li><li>Marzio, L. D., Marianecci, C., Petrone, M., Rinaldi, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+pH-sensitive+non-ionic+surfactant+vesicles:+comparison+between+tween+21+and+tween+20.">Novel pH-sensitive non-ionic surfactant vesicles: comparison between tween 21 and tween 20.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 82, 18-24 (2011).</li><li>Ren, L. L., Wu, Y., Shi, J., Zhang, L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+morphology+and+sensilla+ultrastructure+of+Tetrigus+lewisi+Cand&#232;ze+(Coleoptera:+Elateridae).">Antenna morphology and sensilla ultrastructure of Tetrigus lewisi Cand&#232;ze (Coleoptera: Elateridae).</a> Micron. 60, 29-38 (2014).</li><li>Ren, L., Shi, J., Zhang, Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennal+morphology+and+sensillar+ultrastructure+of+Dastarcus+helophoroides+(Fairmaire)+(Coleoptera:+Bothrideridae).">Antennal morphology and sensillar ultrastructure of Dastarcus helophoroides (Fairmaire) (Coleoptera: Bothrideridae).</a> Micron. 43, 921-928 (2012).</li><li>Teng, X. H., Liu, X. L., Xie, G. Y., Tang, Q. B., Li, W. Z., Zhao, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+distribution+of+ovipositor+sensilla+of+female+Helicoverpa+armigera+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Morphology and distribution of ovipositor sensilla of female Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae).</a> The 11th Henan Plant Protection Society, the 10th Henan Insect Society, and the 5th Member Congress and Academic Symposium of Henan Plant Pathology Society. , 138-142 (2017).</li><li>Yang, R., Zhang, L. N., Fan, J. W., Wang, J. L., Fang, K. F., Yu, T. Q., Wang, S. H., Du, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+specimens+for+scanning+electron+microscopy.">Insect specimens for scanning electron microscopy.</a> Journal of Beijing University of Agriculture. 29, 33-36 (2014).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Zhang, L., Wang, R., Yu, Y., Lu, P. F., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+distribution+of+sensilla+on+the+maxillary+and+labial+palps+of+Chlorophorus+caragana+(Coleoptera:+Cerambycidae).">Ultrastructure and distribution of sensilla on the maxillary and labial palps of Chlorophorus caragana (Coleoptera: Cerambycidae).</a> Journal of Morphology. 279, 574-588 (2018).</li><li>Harrison, J. D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+preparing+adult+beetles+(Coleoptera)+for+light+and+scanning+electron+microscopy.">Cleaning and preparing adult beetles (Coleoptera) for light and scanning electron microscopy.</a> African Entomology. 20, 395-401 (2012).</li><li>Xiao, Y., Liu, W., Wang, Y., Zuo, Y. X., Hu, R., Li, T. T., Cui, Z. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+methods+of+biological+sample+preparation+for+scanning+electron+microscope.">Drying methods of biological sample preparation for scanning electron microscope.</a> Research and Exploration Laboratory. 32, 46-53 (2013).</li><li>Graef, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Conventional Transmission Electron Microscopy. , 1 (2003).</li></ol>

In dit artikel presenteerden we een monster voorbereiding sschema voor scanning en transmissie elektronenmicroscopie voor houtboring kever. Met behulp van insectenaanhangsel als representatief studieonderwerp hebben we verschillende verbeteringen ten opzichte van traditionele monsterbereidingsmethoden aangetoond.
De vloeibare olie die loskomt van het vaste oppervlak wordt geëmulgeerd tot kleine druppeltjes, die goed kunnen worden verspreid en opgehangen in het wasmedium om het opnieuw storten...

Scanning elektronenmicroscopie is een belangrijk instrument in veel morfologie studies, dat SEM oppervlaktestructuren1,2toont. De aantrekkingskracht van transmissieelektronenmicroscopie is dat het kan worden gebruikt om een breed scala aan biologische structuren op nanometerschaal te bestuderen, van de architectuur van cellen en de ultrastructuur van organellen, tot de structuur van macromoleculaire complexen en eiwitten. TEM toont binnenstructuren3,4,5.
Coleoptera is de grootste groep insecten, waaronder ongeveer 182 families en 350.000 soorten. De meeste coleopteran insecten, in het bijzonder houtboring kever, voeden zich met planten, waarvan vele belangrijke plagen van bossen en fruitbomen, waardoor verwoestende schade aan bomen6. Op dit moment hebben preventie en bestrijding van plagen op basis van chemische ecologie theorie steeds meer aandacht gekregen7. Efficiënte, laag-toxische, vervuiling-vrije feromoon controle methoden zijn uitgegroeid tot een effectieve manier8. Het bestuderen van de sensilla morfologie en ultrastructuur van insecten is een belangrijk onderdeel van het onderzoek naar de chemische ecologie van insecten. De scanning en transmissie elektronenmicroscopie (SEM en TEM, respectievelijk) worden gebruikt om hun morfologie en interne anatomie te bestuderen. Tijdens de bereiding van insectenmonsters voor elektronenmicroscopie (EM) kunnen de objectiviteit en authenticiteit van de observatieplaats echter worden aangetast9. In het algemeen vereist SEM-monstervoorbereiding van insecten reiniging, weefselfixatie, uitdroging, metathesis, drogen en sputtercoating10. Door de complexe omgeving waarin houtboring kever leven, het lichaamsoppervlak heeft vaak verschillende verontreinigende stoffen en hun aanhangsels hebben vaak veel fijne lange sensilla of haren. In het bijzonder zijn sommige houtborers niet beschikbaar bij laboratoriumverhoging, die rechtstreeks in het veld werden verzameld, en vervolgens in bevestigingsvloeistof worden gestopt om de versheid te garanderen en vervolgens in het laboratorium te wassen. Als het monster eerst wordt bevestigd en vervolgens gewassen, is het natuurlijk veel moeilijker om puin te verwijderen, omdat glutaraldehyde het sterk aan het monster bevestigt. Tween 20 is een oppervlakteactievestof 11,12,13,14, die een belangrijke rol speelt in het wasproces, waaronder het verminderen van de oppervlaktespanning van water en het verbeteren van de nattbaarheid van water op het oppervlak van de wasserij. In deze studie werd Tween 20 toegevoegd aan de bevestigingsoplossing en PBS-reinigingsoplossing om de oppervlaktespanning van de vloeistof te verminderen en te voorkomen dat het vuil op het lichaamsoppervlak van de houtboorkever terechtkwam, waardoor het lichaamsoppervlak schoner werd in SEM.
Met behulp van TEM kan sensilla op verschillende organen van insecten worden gesneden om de duidelijke structuren in hen te onthullen, waardoor een basis wordt gelegd voor het analyseren van sensilla-functies. Wanneer het onderwerp insect, zoals houtboring kever, is groot, en het lichaam muur heeft een aanzienlijke mate van sclerotization, dus de fixatie kan niet volledig verzadigen orgaanweefsels in het insectenlichaam. Tween 20 kan de dispersie- en suspensiecapaciteit van het vuil verbeteren. In deze studie werd Tween 20 toegevoegd aan de fixatieve vloeistofpenetratie in de insectenlichaamwand van houtboringkever, waardoor vervorming en instorting van de opperhuid11,12,13werd voorkomen. Bovendien, met behulp van algemene snijtechnologie, is het moeilijk om nauwkeurig te lokaliseren verschillende soorten sensilla, met name voor een aantal kleine sensilla15. Op basis van traditionele TEM monstervoorbereiding combineerde deze studie fluorescentiemicroscopie en SEM om de positie van insectensensilla in het ingebedde blok te bepalen, waardoor de snijnauwkeurigheid werd verbeterd.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical lens</td>
			<td>Chongqing Auto Optical 
			limited liability company</td>
			<td>1425277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon adhesive tape</td>
			<td>SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.</td>
			<td>7311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon tetrachloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids</td>
			<td>GilderGrids</td>
			<td>G300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sinopharm group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>10039-32-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding molds</td>
			<td>Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td>Anhydrous EM Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isophorone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78-59-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>512-26-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monobasic sodium phosphate</td>
			<td>Its group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective micrometer</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>0-001-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>541-09-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>1998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Gillette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Spurr</td>
			<td>ERL4221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Lianhui</td>
			<td>GB/T19001-2008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>S-3400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel desiccant</td>
			<td>Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd.</td>
			<td>112926-00-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td>Martol</td>
			<td>G1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter ion instrument</td>
			<td>Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>E-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EZ4 HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Tianjin Damao Chemical Reagent</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>UC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>GT Sonic</td>
			<td>GT-X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>6159-44-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle

Dit rapport beschreef monsterbereidingsmethoden die waarnemingen van elektronenmicroscoops scannen en transmissieën, aangetoond door het voorbereiden van aanhangsels van de houtboorkever, Chlorophorus caragana Xie & Wang (2012), voor beide soorten elektronenmicroscopie. Het protocol voor de voorbereiding van het monster van scanning electron microscopy (SEM) was gebaseerd op monsterchemische fixatie, uitdroging in een reeks ethanolbaden, drogen en sputtercoating. Door Tween 20 (Polyoxyethyleen sorbitan laurate) toe te voegen aan de fixatieve en wasoplossing, werd het insectenlichaamsoppervlak van houtboringkever gereinigder gewassen in SEM. Deze studie transmissie elektronenmicroscopie (TEM) monster voorbereiding betrokken een reeks stappen, waaronder fixatie, ethanol uitdroging, inbedding in hars, positionering met behulp van fluorescentie microscopie, sectioning, en vlekken. Fixatief met Tween 20 ingeschakeld doordringen de insecten lichaam muur van houtboring kever gemakkelijker dan het zou zijn geweest zonder Tween 20, en vervolgens beter vaste weefsels en organen in het lichaam, dus leverde duidelijke transmissie elektronenmicroscoop waarnemingen van insect sensilla ultrastructuren. De volgende stap van dit preparaat was het bepalen van de posities van insectensensilla in het monster ingebed in het harsblok met behulp van fluorescentiemicroscopie om de precisie van de positionering van het doel sensilla te verhogen. Dit verbeterde snijnauwkeurigheid.

Met behulp van reinigings- en fixatieve oplossing met Tween 20 werd een schoner SEM-beeld waargenomen dan dat zonder Tween 20 (figuur 3). Tween 20 bevestigingsoplossing drong door tot de glutaraldehydebevestigingsoplossing in het weefsel. Microtubuli structuur was duidelijk te zien. TEM-afbeelding van de interne structuur van het monster is vervaagd zonder Tween 20 (figuur 4).
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-p...

Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle at JoVE.com

Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

Om ultrastructuur van insectensensilla te observeren, werd in de studie het protocol voor de voorbereiding van de insectenensilla, scanning en transmissieelektronenmicroscopie (SEM en TEM) in de studie gepresenteerd. Tween 20 werd toegevoegd aan de fixatie om monstervervorming in SEM te voorkomen. Fluorescentiemicroscopie was nuttig voor het verbeteren van de snijnauwkeurigheid in TEM.

Monster voorbereiding methode van scannen en transmissie elektronenmicroscoop voor de aanhangsels van woodboring Kever

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

Woodboring kever hun lichaamsoppervlak zijn altijd hard in SEM. De Tween-20 wordt toegevoegd aan fixatieve en wasoplossing. Het lichaamsoppervlak van houtborenkever In TEM kan de Tween-20 de fixatieve penetratie in de lichaamswand verbeteren en weefsel en orgaan in het lichaam beter fixeren.De fluorescentie microscoop is nuttig voor het verbeteren van snijden nauwkeurigheid. De techniek is nuttig voor het wassen van het lichaamsoppervlak en penetreren in de lichaamswand in de houtboring kever. Zo zou het sem en TEM visie duidelijk.Fluorescentie microscoop is nuttig voor het verbeteren van snijden nauwkeurigheid in TEM. Het aantonen van de procedure zal Zhang Yanru zijn, een afgestudeerde student van ons laboratorium. In een gebied waar Chlorophorus caragana wonen, plaats veld vallen aas met planten attractanten zoals isoforone op een trechter val.Aantrekken houtboring kever volwassenen in de vallen. Bewaar de schone lichamen van volwassen Chlorophorus caragana in 0,1 mol per liter PBS bij pH 7.2, 2,5% volume glutaraldehyde en 0,06% volume volume tween-20. Bevestig het monster drie dagen op vier graden Celsius.Verwijder de lichamen uit de conserveringsvloeistof en spoel in PBS. Gebruik onder een stereomicroscoop tangen om de aanhangsels te verwijderen en ultrasoon te reinigen op 40 kilohertz in PBST. Breng het monster na 100 seconden schoonmaken over naar de microscoop om te controleren of het schoon is.Maak niet langer dan 400 seconden schoon om schade te voorkomen. Dompelen vervolgens de monsters onder in ethanol in een reeks concentraties gedurende 20 minuten elk uitdroging uit te voeren. Na de uitdroging, onder een stereomicroscoop, gebruik koolstof dubbelzijdige plakband om afzonderlijk vast te stellen drie observatieoppervlakken, dorsale, ventrale, en laterale, op stompen.Zorg ervoor dat alle kijkoppervlakken schoon en vrij van verontreiniging worden gehouden. Plaats het monster stadium in een petrischaal met een silica gel desiccant voor 48 uur. Draai vervolgens op een ionenputterend instrument de hoofdklep naar de open positie, verwijder de deksel van de monsterkamer en plaats het monster in de kamer.Zet de aan/uit-schakelaar aan en zorg ervoor dat het klaarlicht aan staat. Stel de sputtertijd in op 45 seconden en de coatingdikte op 70.875 angstrom. Zodra de mechanische pomp vacuüm wijzerplaat index daalt tot onder de zeven, druk op ontlading en beginnen met het spuiten platina.Schakel aan het einde van de procedure de voeding uit en haal het monster uit de kamer. Bereken de spray film dikte D in angstrom gelijk aan K keer I keer V keer T.K is een constante bepaald door de sputtered metaal en gas. Ik is de plasmastroom in milliampères terwijl V de spanning is die in kilovolts wordt toegepast en T is de tijd in seconden.Plaats de stomp met het monster in het stadium van de SEM. Zorg ervoor dat de monsterfase met de monsterstub voldoende hoogte heeft om een goede afbeelding mogelijk te maken. Open de SEM-software en selecteer de gewenste bedrijfsspanning vanaf 20 kilovolts.Na het verkrijgen van de aanhangsels van volwassen Chlorophorus caragana, was de monsters in PBST in een ultrasoon bad gedurende drie uur en dan post-fix ze in 1%gewicht door volume osmium tetroxide in PBS gedurende een uur op 25 graden Celsius. Dehydrateer de monsters met behulp van opeenvolgende behandelingen van 20 minuten in 50%60%70%80%85%90%95%100%en 100% volume ethanol bij kamertemperatuur. Breng met tangen verwarmde hars aan in een platte inbeddingsmal en sluit de monsters in de hars in.Zorg ervoor dat het monster zich aan de onderkant van de plaat bevindt en zo dicht mogelijk bij de rand van de verzonken groef wordt geplaatst. Etiketteren en vervolgens de plaat met het monster 72 uur lang bij 60 graden Celsius uitbroeden. Verwijder na incubatie de plaat uit de couveuse en controleer of de hars gepolymeriseerd is.Zodra het monster is gestold, plaats elk hars blok onder een fluorescentie microscoop, verplaats de microscoop fluorescerende lichtbron om het monster te bestralen met blauw licht van bovenaf en fotografeer ze. Zorg ervoor dat de sensilla in het harsblok duidelijk zichtbaar zijn. Meet de afstand tussen de rand van het harsblok en de doelsensor om de sensilla te targeten.Raadpleeg de SEM-afbeelding van de palps en snijd het harsblok ruwweg door met een scheermesje dicht bij de doelreceptor. Pas vervolgens onder een blauw licht fluorescentiemicroscopie de lichtbron van bovenaf aan, zodat de sensilla duidelijk worden waargenomen. Voeg de objectieve micrometer toe aan de fluorescentiemicroscoopfase.Fotografeer het ruwweg gesneden harsblok en meet vervolgens de afstand tussen het doel en de rand van de hars. Plaats het harsmonster op een ultramicrotome en snijd 50 tot 60 nanometer dikke secties totdat de doelpositie is bereikt. Monteer de secties op formvar-gecoate 100 mesh koperen roosters in petrischaaltjes.Bevlek de roosters met een verzadigde gefilterde oplossing van uranylacetaat bij kamertemperatuur. Bedek de secties tijdens het bekladden om licht-geïnduceerde neerslag te blokkeren. Vlek gedurende 10 minuten.In een rookkap spoel je twee keer in 50% methanol en vervolgens twee keer in gefilterd ontgast water. Plaats druppels van voorbereide lood citraat vlek op de pleinen van de plastic petrischaaltjes en laat ze zitten voor acht minuten. Spoel in ontgast gefilterd water en droog.Monteer de rasters op een voorbeeldfase in de TEM-machine. Stel de spanning in op 80 kilovolt en onderzoek de secties. In dit protocol, met behulp van reinigings- en fixatieve oplossing met Tween-20, werd een duidelijk SEM-beeld waargenomen dan dat zonder Tween-20.Met de Tween-20 bevestigingsoplossing waardoor de glutaraldehydebevestigingsoplossing het weefsel kon binnendringen, werden microtubbulestructuren duidelijk gezien in het TEM-beeld, terwijl de interne structuur van het monster bereid zonder Tween-20 wazig was. Continue dwarsdoorsnede weergaven van de pin van het type een sensilla twig basiconica op de maxillaire palps bleek dat de dendritische schede omgeven de buitenste dendritische segmenten en uitgebreid tot de tip porie. In de binnenste receptorlymfeholte, die omgeven was door een buitenste holte, bestonden zeven ongebranchede buitenste dendritische segmenten.Het buisvormige lichaam werd gescheiden door een dendritische schede van andere buitenste dendritische segmenten op elke sensillar socket basis. In het ciliarygebied werden acht dendrieten van verschillende diameters geïdentificeerd die de aanwezigheid van acht bipolaire neuronen aangeven. De techniek kan worden gebruikt om de functie van zenuwen verder te bestuderen, zoals eencellige opname of in situ hybridisatie.

Research

JoVE Journal

Environment

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

Geoptimaliseerd Negatieve kleuring: een High-throughput protocol voor de behandeling Kleine en Asymmetric Protein Structure door Electron Microscopy

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

Een Geoptimaliseerd Verrijking Techniek voor de isolatie van<em&gt; Arthrobacter</em&gt; Bacteriophage Soorten uit Soil Sample Isoleert

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Protocol for Measuring the Thermal Properties of a Supercooled Synthetic Sand-water-gas-methane Hydrate Sample

Protocol voor het meten van de thermische eigenschappen van een onderkoelde synthetische zand-water-gas-methaanhydraat Sample

Methane hydrates (MHs) are present in large amounts in the ocean floor and permafrost regions. Methane and hydrogen hydrates are being studied as future ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP, een verbeterde INEX Methode voor het<em&gt; In Situ</em&gt; Meten van Particulate en opgeloste componenten verwerkt door Active Suspension Voeders

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Protocol voor microplastics bemonstering op het zeeoppervlak en Sample Analysis

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Thermal Scanning Conductometry (TSC) as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

Thermal Scanning Conductometry TSC as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

Thermische Conductometry (TSC) scannen als een algemene methode voor het bestuderen van en het beheren van het gedrag van de fase van geleidende fysieke Gels

The thermal scanning conductometry protocol is a new approach in studying ionic gels based on low molecular weight gelators. The method is designed to ...

On the Preparation and Testing of Fuel Cell Catalysts Using the Thin Film Rotating Disk Electrode Method

Op de voorbereiding en het testen van de brandstofcel katalysatoren met behulp van de methode roterende schijf elektrode van dunne Film

We present a step-by-step tutorial to prepare proton exchange membrane fuel cell (PEMFC) catalysts, consisting of Pt nanoparticles (NPs) supported on a ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus Murayama, Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Meten van het vermogen van de vlucht van de Ambrosia kever, Platypus Quercivorus (Murayama), met behulp van een Low-Cost, kleine en eenvoudig geconstrueerd vlucht molen

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

A Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

Een lus-gemedieerde isotherme amplificatie (LAMP) Assay voor snelle identificatie van Bemisia tabaci

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

Xylem water distributie in houtachtige planten gevisualiseerd met een Cryo-Scanning elektronenmicroscoop

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...