Name: sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle
Uploaded: 2020-02-03T12:00:00
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हम बीजिंग वोकेशनल कॉलेज ऑफ एग्रीकल्चर की उदार सहायता की सराहना करते हैं, परमाणु ऊर्जा के आवेदन के लिए संस्थान (कृषि विज्ञान की चीनी अकादमी), बीजिंग वानिकी विश्वविद्यालय के जैव अनुसंधान केंद्र और प्रोफेसर शान-गन जूलॉजी संस्थान, चाइनीज एकेडमी ऑफ साइंसेज की झांग । इस शोध को चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान एवं विकास कार्यक्रम (2017YFD0600103), चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 31570643, 81774015), चीन के लोक कल्याण में वन वैज्ञानिक अनुसंधान (201504304), इनर मंगोलिया द्वारा समर्थित किया गया था कृषि विश्वविद्यालय उच्च स्तरीय प्रतिभा अनुसंधान स्टार्टअप योजना (203206038), और इनर मंगोलिया स्वायत्त क्षेत्र उच्च शिक्षा अनुसंधान परियोजना (NJZZ18047), इनर मंगोलिया स्वायत्त क्षेत्र Linxue "डबल प्रथम श्रेणी" निर्माण परियोजना (170001)।

सावधानी: उनका उपयोग करने से पहले अभिकर्ताओं की सामग्री सुरक्षा डेटा शीट से परामर्श करें। नमूना तैयार करने के दौरान उपयोग किए जाने वाले कई रसायन जहरीले, उत्पत्ति, कैंसरजनक, और/या रिप्रोटॉक्सिक हैं। व्य...

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	<li>Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+Electron+Microscope+Technology+of+Insect+Material.">Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material.</a> Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+the+scanning+electron+microscopy+(sem)+and+its+application+in+polymer+materials+research.">The development of the scanning electron microscopy (sem) and its application in polymer materials research.</a> Journal of the Graduates Sun Yat-Sen University (Natural Sciences Medicine). 34, 7-12 (2008).</li><li>Gan, L., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+tomography+of+cells.">Electron tomography of cells.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 45, 27-56 (2011).</li><li>Lucic, V., Rigort, A., Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-electron+tomography:+the+challenge+of+doing+structural+biology+in+situ.">Cryo-electron tomography: the challenge of doing structural biology in situ.</a> The Journal of Cell Biology. 202, 407-419 (2013).</li><li>Trepout, S., Bastin, P., Marco, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Observation+of+Thick+Biological+Samples+by+Scanning+Transmission+Electron+Tomography.">Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55215 (2017).</li><li>Zhang, X. J., Sun, W., Zhang, J., Zuo, T. T., Wang, Z. Q., Zhao, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+coleopteran+insect+species+antennal+sensilla.">Research progress of coleopteran insect species antennal sensilla.</a> Journal of Anhui Agricultural Sciences. 41, 2932-2935 (2013).</li><li>Aldrich, J. R., Bartelt, R. J., Dickens, J. C., Knight, A. L., Light, D. M., Tumlinson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+chemical+ecology+research+in+the+United+States+Department+of+Agriculture-Agricultural+Research+Service.">Insect chemical ecology research in the United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service.</a> Pest Management Science. 59, 777-787 (2003).</li><li>Thomas, C. B., Marlin, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone+mating+disruption:+Novel,+non-toxic+control+of+the+European+corn+borer.">Pheromone mating disruption: Novel, non-toxic control of the European corn borer.</a> Leopold Center. 8, 57-60 (1999).</li><li>Chen, X. F., Hu, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+specimen+preparation+techniques+of+scanning+electron+microscope+of+Ficus+simplicissima+Lour.">Studies on the specimen preparation techniques of scanning electron microscope of Ficus simplicissima Lour.</a> Journal of Zhongkai Agrotechnical College. 14, 68-70 (2001).</li><li>Zhou, W., Apkarian, R., Wang, Z. L., Joy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+Scanning+Electron+Microscopy+(SEM).">Fundamentals of Scanning Electron Microscopy (SEM).</a> Scanning Microscopy for Nanotechnology. , 1-40 (2006).</li><li>Kothekar, S. C., Ware, A. M., Waghmare, J. T., Momin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Analysis+of+the+Properties+of+Tween-20,+Tween-60,+Tween-80,+Arlacel-60,+and+Arlacel-80.">Comparative Analysis of the Properties of Tween-20, Tween-60, Tween-80, Arlacel-60, and Arlacel-80.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 28, 477-484 (2007).</li><li>Chai, J. L., Liu, N., Bai, T. T., Zhang, H. M., Liu, N. N., Wang, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compositions+and+Physicochemical+Properties+of+Tween+Type+Surfactants-Based+Microemulsions.">Compositions and Physicochemical Properties of Tween Type Surfactants-Based Microemulsions.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 35, 441-447 (2014).</li><li>Zhang, L. D., Zhao, L., Han, F., Xu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+and+applications+of+surfactants+(XV)+Detergency+of+surfactants+and+its+applications.">Performance and applications of surfactants (XV) Detergency of surfactants and its applications.</a> China Surfactant Detergent and Cosmetics. 45, 132-137 (2015).</li><li>Waghmare, P. R., Das, S., Mitra, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Under-water+superoleophobic+glass:+unexplored+role+of+the+surfactant-rich+solvent.">Under-water superoleophobic glass: unexplored role of the surfactant-rich solvent.</a> Scientific Reports. 3, 1-25 (2013).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtomy+of+insect+sensilla+embedded+in+resin+blocks+for+transmission+electronic+microscopy.">Microtomy of insect sensilla embedded in resin blocks for transmission electronic microscopy.</a> Chinese Journal of Applied Entomology. 50, 1479-1483 (2013).</li><li>Zong, S. X., Liu, X. H., Cao, C. J., Luo, Y. Q., Ren, L. L., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semiochemical+attractants+for+monitoring+and+controlling+Chlorophorus+caragana.">Development of semiochemical attractants for monitoring and controlling Chlorophorus caragana.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 68, 243-252 (2013).</li><li>Sumner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epoxy+resins+for+light+and+transmission+electron+microscopy.">Epoxy resins for light and transmission electron microscopy.</a> Plant Microtechniques and Protocols. , 83-101 (2015).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+antennae.">Insect antennae.</a> Annual Review of Entomology. 9, 103-122 (1964).</li><li>Zacharuk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennae+and+sensilla.">Antennae and sensilla.</a> Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 6, 1-69 (1985).</li><li>Zacharuk, R., Albert, P., Bellamy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+digitiform+sensilla+on+the+labial+palp+of+a+larval+elaterid+(Coleoptera).">Ultrastructure and function of digitiform sensilla on the labial palp of a larval elaterid (Coleoptera).</a> Canadian Journal of Zoology. 55, 569-578 (1977).</li><li>Shanbhag, S., M&#252;ller, B., Steinbrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atlas+of+olfactory+organs+of+Drosophila+melanogaster:+1,+Types,+external+organization,+innervation+and+distribution+of+olfactory+sensilla.">Atlas of olfactory organs of Drosophila melanogaster: 1, Types, external organization, innervation and distribution of olfactory sensilla.</a> International Journal of Insect Morphology and Embryology. 28, 377-397 (1999).</li><li>Tarumingkeng, R. C., Coppel, H. C., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+ultrastructure+of+the+antennal+chemoreceptors+and+mechanoreceptors+of+worker+Coptotermes+formosanus+Shiraki.">Morphology and ultrastructure of the antennal chemoreceptors and mechanoreceptors of worker Coptotermes formosanus Shiraki.</a> Cell Tissue Res. 173, 173-178 (1976).</li><li>Zacharuk, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+insect+chemosensilla.">Ultrastructure and function of insect chemosensilla.</a> Annual Review of Entomology. 25, 27-47 (1980).</li><li>Li, Y. Z., Zhong, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+detergents+and+floating+carriers+for+treating+potato+golden+nematode+cysts+to+improve+the+original+appearance+of+electron+microscopy.">Screening of detergents and floating carriers for treating potato golden nematode cysts to improve the original appearance of electron microscopy.</a> Plant quarantine. 8, 72-75 (1994).</li><li>Marzio, L. D., Marianecci, C., Petrone, M., Rinaldi, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+pH-sensitive+non-ionic+surfactant+vesicles:+comparison+between+tween+21+and+tween+20.">Novel pH-sensitive non-ionic surfactant vesicles: comparison between tween 21 and tween 20.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 82, 18-24 (2011).</li><li>Ren, L. L., Wu, Y., Shi, J., Zhang, L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+morphology+and+sensilla+ultrastructure+of+Tetrigus+lewisi+Cand&#232;ze+(Coleoptera:+Elateridae).">Antenna morphology and sensilla ultrastructure of Tetrigus lewisi Cand&#232;ze (Coleoptera: Elateridae).</a> Micron. 60, 29-38 (2014).</li><li>Ren, L., Shi, J., Zhang, Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennal+morphology+and+sensillar+ultrastructure+of+Dastarcus+helophoroides+(Fairmaire)+(Coleoptera:+Bothrideridae).">Antennal morphology and sensillar ultrastructure of Dastarcus helophoroides (Fairmaire) (Coleoptera: Bothrideridae).</a> Micron. 43, 921-928 (2012).</li><li>Teng, X. H., Liu, X. L., Xie, G. Y., Tang, Q. B., Li, W. Z., Zhao, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+distribution+of+ovipositor+sensilla+of+female+Helicoverpa+armigera+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Morphology and distribution of ovipositor sensilla of female Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae).</a> The 11th Henan Plant Protection Society, the 10th Henan Insect Society, and the 5th Member Congress and Academic Symposium of Henan Plant Pathology Society. , 138-142 (2017).</li><li>Yang, R., Zhang, L. N., Fan, J. W., Wang, J. L., Fang, K. F., Yu, T. Q., Wang, S. H., Du, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+specimens+for+scanning+electron+microscopy.">Insect specimens for scanning electron microscopy.</a> Journal of Beijing University of Agriculture. 29, 33-36 (2014).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Zhang, L., Wang, R., Yu, Y., Lu, P. F., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+distribution+of+sensilla+on+the+maxillary+and+labial+palps+of+Chlorophorus+caragana+(Coleoptera:+Cerambycidae).">Ultrastructure and distribution of sensilla on the maxillary and labial palps of Chlorophorus caragana (Coleoptera: Cerambycidae).</a> Journal of Morphology. 279, 574-588 (2018).</li><li>Harrison, J. D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+preparing+adult+beetles+(Coleoptera)+for+light+and+scanning+electron+microscopy.">Cleaning and preparing adult beetles (Coleoptera) for light and scanning electron microscopy.</a> African Entomology. 20, 395-401 (2012).</li><li>Xiao, Y., Liu, W., Wang, Y., Zuo, Y. X., Hu, R., Li, T. T., Cui, Z. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+methods+of+biological+sample+preparation+for+scanning+electron+microscope.">Drying methods of biological sample preparation for scanning electron microscope.</a> Research and Exploration Laboratory. 32, 46-53 (2013).</li><li>Graef, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Conventional Transmission Electron Microscopy. , 1 (2003).</li></ol>

इस लेख में, हमने वुडबोरिंग बीटल के लिए स्कैनिंग और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए एक नमूना तैयारी योजना प्रस्तुत की। एक प्रतिनिधि अध्ययन विषय के रूप में कीट उपांग का उपयोग करना, हमने पारं?...

स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी कई आकृति विज्ञान अध्ययनों में एक महत्वपूर्ण उपकरण है, जो एसईएम सतह संरचनाओंको दिखाताहै1,2। ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की अपील यह है कि इसका उपयोग नैनोमीटर पैमाने पर जैविक संरचनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है, कोशिकाओं की वास्तुकला और ऑर्गेनेल्स के अल्ट्रास्ट्रक्चर से, मैक्रोमॉलिक्यूलर कॉम्प्लेक्स और प्रोटीन की संरचना तक। टेम आंतरिक संरचनाओं3,4,5दिखाता है ।
कोलोप्टेरा कीड़ों का सबसे बड़ा समूह है, जिसमें लगभग 182 परिवार और 350,000 प्रजातियां शामिल हैं। विशेष रूप से वुडबोरिंग बीटल में अधिकांश कोलोप्टरन कीड़े पौधों को खिलाते हैं, जिनमें से कई जंगलों और फलों के पेड़ों की महत्वपूर्ण कीट हैं, जिससे6पेड़ों को विनाशकारी नुकसान होता है। वर्तमान में, रासायनिक पारिस्थितिकी सिद्धांत पर आधारित कीटों की रोकथाम और नियंत्रण आबादी को बढ़ते ध्यान7प्राप्त हुए हैं । कुशल, कम विषैले, प्रदूषण मुक्त फेरोमोन नियंत्रण विधियां 8 का एक प्रभावीतरीकाबन गई हैं । सेंसिला आकृति विज्ञान और कीड़ों के अल्ट्रास्ट्रक्चर का अध्ययन कीट रासायनिक पारिस्थितिकी अनुसंधान का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है। स्कैनिंग और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम और टीईएम, क्रमशः) का उपयोग उनकी आकृति विज्ञान और आंतरिक शरीर रचना विज्ञान का अध्ययन करने के लिए काफी प्रभाव के लिए किया जाता है। हालांकि, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (ईएम) के लिए कीट के नमूने तैयार करने के दौरान, अवलोकन स्थल की वस्तुनिष्ठता और प्रामाणिकता9प्रभावित हो सकती है। सामान्य तौर पर, कीड़ों के एसईएम नमूना तैयार करने के लिए सफाई, ऊतक निर्धारण, निर्जलीकरण, मेटाथेसिस, सुखाने और स्पटर-कोटिंग10की आवश्यकता होती है। जटिल वातावरण के कारण जिसमें वुडबोरिंग बीटल रहते हैं, शरीर की सतह में अक्सर विभिन्न प्रदूषक होते हैं और उनके उपांगों में अक्सर कई ठीक लंबे सेंसिला या ब्रिस्टल होते हैं। विशेष रूप से, कुछ वुडबोरप्रयोगशाला स्थापना से उपलब्ध नहीं हैं, जो सीधे क्षेत्र में एकत्र होते हैं, और फिर ताजगी सुनिश्चित करने के लिए तरल पदार्थ को ठीक करने में डालते हैं और बाद में प्रयोगशाला में धोए जाते हैं। यदि नमूना पहले तय किया जाता है और फिर धोया जाता है, तो जाहिर है कि मलबे को हटाना बहुत अधिक कठिन है क्योंकि ग्लूटाराल्डिहाइड दृढ़ता से इसे नमूने में ठीक करता है। ट्वीन 20 एक सर्फेक्टेंट11,12,13,14है, जो धोने की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जिसमें पानी की सतह के तनाव को कम करना और कपड़े धोने की सतह पर पानी की गीलाता में सुधार करना शामिल है। इस अध्ययन में, ट्वीन 20 को तरल की सतह तनाव को कम करने के लिए फिक्सिंग समाधान और पीबीएस सफाई समाधान में जोड़ा गया था, और गंदगी को वुडबोरिंग बीटल के शरीर की सतह पर जमा करने से रोकता था, जिसने एसईएम में शरीर की सतह को क्लीनर बना दिया।
TEM का उपयोग करना, कीड़ों के विभिन्न अंगों पर सेंसिला को उनके अंदर स्पष्ट संरचनाओं को प्रकट करने के लिए कटा हुआ किया जा सकता है, इस प्रकार सेंसिला कार्यों का विश्लेषण करने के लिए एक आधार प्रदान करता है। जब लकड़ी की बीटल जैसे विषय कीट बड़ी होती है, और इसके शरीर की दीवार में स्क्लेरोटाइजेशन की पर्याप्त मात्रा होती है, इसलिए फिक्सिव कीट शरीर के अंदर अंग ऊतकों को पूरी तरह से संतृप्त नहीं कर सकता है। ट्वीन 20 गंदगी के फैलाव और निलंबन क्षमता को बढ़ा सकता है। इस अध्ययन में, ट्वीन 20 को वुडबोरिंग बीटल की कीट शरीर की दीवार में फिक्सेटिव द्रव प्रवेश को बढ़ाने के लिए फिक्सेटिव में जोड़ा गया था, जो एपिडर्मी11,12,13के विरूपण और पतन से बचता था। इसके अलावा, सामान्य टुकड़ा करने की तकनीक का उपयोग करके, विशेष रूप से कुछ छोटे सेंसिला15के लिए विभिन्न प्रकार के सेंसिला का सही पता लगाना मुश्किल है। पारंपरिक टेम नमूना तैयारी के आधार पर, इस अध्ययन ने एम्बेडेड ब्लॉक में कीट सेंसिला की स्थिति निर्धारित करने के लिए फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी और एसईएम को संयुक्त किया, इस प्रकार टुकड़ा करने की सटीकता में सुधार हुआ।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical lens</td>
			<td>Chongqing Auto Optical 
			limited liability company</td>
			<td>1425277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon adhesive tape</td>
			<td>SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.</td>
			<td>7311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon tetrachloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids</td>
			<td>GilderGrids</td>
			<td>G300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sinopharm group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>10039-32-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding molds</td>
			<td>Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td>Anhydrous EM Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isophorone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78-59-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>512-26-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monobasic sodium phosphate</td>
			<td>Its group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective micrometer</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>0-001-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>541-09-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>1998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Gillette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Spurr</td>
			<td>ERL4221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Lianhui</td>
			<td>GB/T19001-2008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>S-3400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel desiccant</td>
			<td>Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd.</td>
			<td>112926-00-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td>Martol</td>
			<td>G1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter ion instrument</td>
			<td>Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>E-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EZ4 HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Tianjin Damao Chemical Reagent</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>UC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>GT Sonic</td>
			<td>GT-X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>6159-44-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle

इस रिपोर्ट में नमूना तैयारी विधियों का वर्णन किया गया है कि स्कैनिंग और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप टिप्पणियों, वुडबोरिंग बीटल, क्लोरोफोरस कैरागण Xie और वांग (२०१२) के उपांग तैयार करके प्रदर्शन किया, दोनों प्रकार के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए । स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) नमूना तैयारी प्रोटोकॉल नमूना रासायनिक निर्धारण, इथेनॉल स्नान, सुखाने और स्पंदन-कोटिंग की एक श्रृंखला में निर्जलीकरण पर आधारित था। स्थिर और वॉश समाधान में ट्वीन 20 (पॉलीऑक्सीएथिलीन सोर्बियन लॉरेट) जोड़कर, सेम में वुडबोरिंग बीटल की कीट शरीर की सतह को अधिक सफाई से धोया गया था। इस अध्ययन के ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (TEM) नमूना तैयार करने में निर्धारण, इथेनॉल निर्जलीकरण, राल में एम्बेडिंग, फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी, सेक्शनिंग और धुंधला होने सहित कई कदम शामिल थे। ट्वीन 20 सक्षम के साथ फिक्स्टिव वुडबोरिंग बीटल की कीट शरीर की दीवार को अधिक आसानी से प्रवेश करता है, जो ट्वीन 20 के बिना होता था, और बाद में बेहतर निश्चित ऊतकों और शरीर में अंगों को, इस प्रकार कीट सेंसिला अल्ट्रास्ट्रक्चर के स्पष्ट ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप अवलोकन मिले। इस तैयारी का अगला कदम लक्ष्य सेंसिला पोजिशनिंग की सटीकता बढ़ाने के लिए फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके राल ब्लॉक में एम्बेडेड नमूने में कीट सेंसिला की स्थिति का निर्धारण करना था। यह टुकड़ा करने की क्रिया सटीकता में सुधार हुआ ।

ट्वीन 20 के साथ सफाई और फिक्सिव समाधान का उपयोग करते हुए, क्लीनर एसईएम छवि ट्वीन 20(चित्रा 3)के बिना देखी गई थी। ट्वीन 20 फिक्सिंग समाधान ऊतक में ग्लूटाराल्डिहाइड फिक्सिंग समाधान मे?...

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Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

अध्ययन में कीट सेंसिला, स्कैनिंग और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम और टीईएम, क्रमशः) नमूना तैयारी प्रोटोकॉल के अल्ट्रास्ट्रक्चर का निरीक्षण करने के लिए प्रस्तुत किया गया था। Tween 20 को सेम में नमूना विरूपण से बचने के लिए फिक्सेटिव में जोड़ा गया था । फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी TEM में टुकड़ा करने की क्रिया सटीकता में सुधार के लिए मददगार था ।

वुडबोरिंग बीटल के परिशिष्ट के लिए स्कैनिंग और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का नमूना तैयारी विधि

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

वुडबोरिंग बीटल उनके शरीर की सतह एसईएम में हमेशा कठिन होती है। ट्वीन-20 को फिक्सेटिव और वॉशिंग सॉल्यूशन में जोड़ा जाता है। TEM में वुडबोरिंग बीटल के शरीर की सतह, ट्वीन-20 शरीर की दीवार में सुधारात्मक प्रवेश को बढ़ा सकता है और शरीर में ऊतक और अंग को बेहतर तरह से ठीक कर सकता है।फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप स्लाइसिंग सटीकता में सुधार के लिए मददगार है। यह तकनीक शरीर की सतह को धोने और वुडबोरिंग बीटल में शरीर की दीवार में मर्मज्ञ के लिए उपयोगी है। इस प्रकार, यह एसईएम और TEM दृष्टि स्पष्ट होगा ।फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप TEM में टुकड़ा करने की क्रिया में सुधार के लिए उपयोगी है। प्रक्रिया का प्रदर्शन झांग यानरू, हमारी प्रयोगशाला से एक स्नातक छात्र होगा । एक ऐसे क्षेत्र में जहां क्लोरोफोरस कारगना रहते हैं, क्षेत्र जाल को पौधे के आकर्षित करने वाले जैसे कीप जाल पर आइसोफोरोन के साथ रखें।जाल में लकड़ी की बीटल वयस्कों को आकर्षित करें। पीएच 7.2 पर 0.1 तिल प्रति लीटर पीबीएस में वयस्क क्लोरोफोरस कारागना के स्वच्छ निकायों को संरक्षित करें, मात्रा ग्लूटारल्डिहाइड द्वारा 2.5% वजन, और वॉल्यूम ट्वीन-20 द्वारा 0.06% मात्रा। तीन दिन के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर नमूना तय करें।संरक्षण तरल से निकायों को निकालें और पीबीएस में कुल्ला। एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत, उपांगों को हटाने और उन्हें PBST में 40 किलोहर्ट्ज पर अल्ट्रासोनिक रूप से साफ करने के लिए संदंश का उपयोग करें। 100 सेकंड तक सफाई करने के बाद, नमूना को माइक्रोस्कोप में स्थानांतरित करें ताकि यह जांच सके कि यह साफ है या नहीं।नुकसान से बचने के लिए 400 सेकंड से अधिक समय तक साफ न करें। फिर निर्जलीकरण करने के लिए प्रत्येक 20 मिनट के लिए सांद्रता की एक श्रृंखला में इथेनॉल में नमूनों को विसर्जित करें। निर्जलीकरण के बाद, एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत, तीन अवलोकन सतहों, पृष्ठीय, वेंट्रल और पार्श्व को अलग से ठीक करने के लिए कार्बन डबल-तरफा चिपकने वाले टेप का उपयोग स्टब्स पर करें।सुनिश्चित करें कि सभी देखने वाली सतहों को साफ और प्रदूषण से मुक्त रखा जाता है। 48 घंटे के लिए एक सिलिका जेल डेसिकेंट युक्त पेट्री डिश में नमूना चरण रखें। इसके बाद, आयन स्पंदन यंत्र पर, मुख्य वाल्व को खुली स्थिति में घुमाएं, नमूना कक्ष कवर को हटा दें और नमूना कक्ष में डाल दें।पावर स्विच चालू करें और सुनिश्चित करें कि तैयार प्रकाश चालू है। 45 सेकंड के रूप में स्पंदन समय और 70.875 अंगस्ट्रॉम के रूप में कोटिंग मोटाई निर्धारित करें। एक बार जब मैकेनिकल पंप वैक्यूम डायल इंडेक्स सात से नीचे गिर जाता है, तो डिस्चार्ज दबाएं और प्लेटिनम का छिड़काव शुरू कर दें।प्रक्रिया के अंत में, बिजली की आपूर्ति बंद करें और नमूना कक्ष से बाहर ले जाएं। एंग्स्ट्रॉम में स्प्रे फिल्म मोटाई डी की गणना करें कश्मीर बार मैं बार वी बार टीके एक निरंतर स्पंदित धातु और गैस द्वारा निर्धारित किया जाता है । मैं मिलीमैंप में प्लाज्मा प्रवाह है जबकि वी किल्वोल्ट में लागू वोल्टेज है और टी सेकंड में समय है।एसईएम के चरण पर नमूना युक्त स्टब डालें। सुनिश्चित करें कि नमूना स्टब के साथ नमूना चरण में एक अच्छी छवि की अनुमति देने के लिए पर्याप्त ऊंचाई है। एसईएम सॉफ्टवेयर खोलें और 20 किलोवोल्ट से शुरू होने वाले वांछित ऑपरेटिंग वोल्टेज का चयन करें।वयस्क क्लोरोफोरस कारगना से उपांग प्राप्त करने के बाद, पीबीएसटी में नमूनों को तीन घंटे के लिए अल्ट्रासोनिक बाथ में धोएं और फिर उन्हें पीबीएस में वॉल्यूम ऑस्मियम टेट्रोऑक्साइड द्वारा 1% वजन में 25 डिग्री सेल्सियस पर एक घंटे के लिए ठीक करें। कमरे के तापमान पर वॉल्यूम इथेनॉल द्वारा 50%60%70%80%85%90%90%100%और 100% वॉल्यूम में 20 मिनट लगातार उपचार का उपयोग करके नमूनों को निर्जलित करें। संदंश के साथ, एक फ्लैट एम्बेडिंग मोल्ड में गर्म राल लागू करें और राल में नमूनों को एम्बेड करें।सुनिश्चित करें कि नमूना प्लेट के नीचे है और अवकाश वाले नाली के किनारे के जितना संभव हो उतना करीब रखा गया है। लेबल और फिर 72 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर नमूना युक्त प्लेट को इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन के बाद, इनक्यूबेटर से प्लेट निकालें और सत्यापित करें कि राल बहुलक है।एक बार नमूना जम जाने के बाद, प्रत्येक राल ब्लॉक को फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप के नीचे रखें, माइक्रोस्कोप के फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत को ऊपर से नीली रोशनी के साथ नमूने को विकिरणित करने और उनकी तस्वीर लेने के लिए स्थानांतरित करें। सुनिश्चित करें कि राल ब्लॉक में सेंसिला स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे हैं। सेंसिला को लक्षित करने के लिए राल ब्लॉक के किनारे और लक्ष्य सेंसर के बीच की दूरी को मापें।पाल्प्स की एसईएम छवि को देखें और मोटे तौर पर लक्ष्य रिसेप्टर के करीब एक रेजर ब्लेड के साथ राल ब्लॉक में कटौती करें। इसके बाद, नीली रोशनी फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी के तहत, ऊपर से प्रकाश स्रोत को समायोजित करें ताकि सेंसिला स्पष्ट रूप से मनाया जा सके। फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप चरण में उद्देश्य माइक्रोमीटर जोड़ें।मोटे तौर पर कटौती राल ब्लॉक तस्वीर और फिर ImageJ का उपयोग लक्ष्य और राल के किनारे के बीच की दूरी को मापने । राल के नमूने को अल्ट्रामाइक्रोटोम पर रखें और लक्ष्य की स्थिति तक पहुंचने तक 50 से 60 नैनोमीटर मोटी धाराओं को काट लें। पेट्री व्यंजनों में फॉर्मवर-लेपित 100 जाल तांबे ग्रिड पर वर्गों को माउंट करें।कमरे के तापमान पर यूरेनिल एसीटेट के संतृप्त फ़िल्टर समाधान के साथ ग्रिड को दाग दें। प्रकाश-प्रेरित वर्षा को ब्लॉक करने के लिए धुंधला करने के दौरान वर्गों को कवर करें। 10 मिनट के लिए दाग।एक धुएं हुड में, 50% मेथनॉल में दो बार कुल्ला, फिर दो बार फ़िल्टर किए गए डिगास्ड पानी में। प्लास्टिक पेट्री व्यंजनों के चौकों पर तैयार लेड साइट्रेट दाग की बूंदों को रखें और उन्हें आठ मिनट तक बैठने दें। डिगास्ड फ़िल्टर किए गए पानी में कुल्ला करें और सूखें।TEM मशीन के भीतर एक नमूना चरण पर ग्रिड माउंट। वोल्टेज को 80 किलोवोल्ट में सेट करें और अनुभागों की जांच करें। इस प्रोटोकॉल में, ट्वीन-20 के साथ सफाई और सुधारात्मक समाधान का उपयोग करके, ट्वीन-20 के बिना एक स्पष्ट एसईएम छवि देखी गई थी।ट्वीन-20 फिक्सिंग समाधान के साथ ग्लूटारल्डिहाइड फिक्सिंग समाधान ऊतक में प्रवेश करने की अनुमति देता है, माइक्रोट्यूबुल संरचनाएं तेम छवि में स्पष्ट रूप से देखी गई थीं जबकि ट्वीन-20 के बिना तैयार नमूने की आंतरिक संरचना धुंधली थी। मैक्सिलरी पाल्स पर टाइप वन सेंसिला टहनी बेसिकोनिका के खूंटी के निरंतर क्रॉस-सेक्शनल दृश्यों से पता चला कि डेंड्रिटिक म्यान ने बाहरी डेंड्रिटिक सेगमेंट को घेर लिया और टिप पोर तक बढ़ाया। आंतरिक रिसेप्टर लिम्फ गुहा के अंदर सात अनशारित बाहरी डेंड्रिटिक सेगमेंट मौजूद थे जो बाहरी गुहा से घिरा हुआ था।ट्यूबलर शरीर को प्रत्येक सेंसिलर सॉकेट बेस पर अन्य बाहरी डेंड्रिटिक सेगमेंट से एक डेंड्रिटिक म्यान द्वारा अलग किया गया था। सिलियरी क्षेत्र में, विभिन्न व्यासों के आठ डेंड्राइट्स की पहचान की गई थी जो आठ द्विध्रुवी न्यूरॉन्स की उपस्थिति को दर्शाते हैं। इस तकनीक का उपयोग नसों के कार्य जैसे एकल सेल रिकॉर्डिंग या सीटू संकरण में आगे अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Environment

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

अनुकूलित नकारात्मक धुंधला: इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा लघु और असममित प्रोटीन संरचना की जांच के लिए एक उच्च throughput प्रोटोकॉल

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An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

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के अलगाव के लिए एक अनुकूलित संवर्धन तकनीक<em&gt; Arthrobacter</em&gt; जीवाणुभोजी प्रजाति मिट्टी का नमूना आइसोलेट्स से

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Protocol for Measuring the Thermal Properties of a Supercooled Synthetic Sand-water-gas-methane Hydrate Sample

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Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

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Thermal Scanning Conductometry (TSC) as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

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अध्ययन और प्रवाहकीय शारीरिक जैल के चरण व्यवहार को नियंत्रित करने के लिए एक सामान्य विधि के रूप में थर्मल स्कैनिंग Conductometry (टीएससी)

The thermal scanning conductometry protocol is a new approach in studying ionic gels based on low molecular weight gelators. The method is designed to ...

On the Preparation and Testing of Fuel Cell Catalysts Using the Thin Film Rotating Disk Electrode Method

तैयारी और पतली फिल्म घूर्णन डिस्क इलेक्ट्रोड विधि का उपयोग कर ईंधन सेल उत्प्रेरक के परीक्षण पर

We present a step-by-step tutorial to prepare proton exchange membrane fuel cell (PEMFC) catalysts, consisting of Pt nanoparticles (NPs) supported on a ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus Murayama, Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

अम्ब्रोसिया बीटल, Platypus Quercivorus (मुरायामा) की उड़ान की क्षमता को मापने, एक कम लागत, छोटे, और आसानी से निर्माण उड़ान मिल का उपयोग

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

A Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

बेमिसिया टेबासी की तेजी से पहचान के लिए एक पाश मध्यस्थता इज़ोटेर्माल प्रवर्धन (लैंप) परख

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

वुडी पौधों में Xylem जल वितरण एक Cryo-स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के साथ कल्पना

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...