Name: sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle
Uploaded: 2020-02-03T12:00:00
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北京農学部、原子力応用研究所(中国農学院)、北京林業大学生物研究センター、山金教授の多大な支援に感謝します。中国科学院動物学研究所の張。この研究は、中国国家主要研究開発プログラム(2017YFD0600103)、中国自然科学財団(グラントNo.31570643、81774015)、中国の公共福祉における森林科学研究(201504304)、内モンゴルによって支援されました。農業大学ハイレベル人材研究立ち上げ計画(203206038)、内モンゴル自治区高等教育研究プロジェクト(NJZZ18047)、内モンゴル自治区臨行「ダブルファーストクラス」建設プロジェクト(170001)

注意: 試薬を使用する前に、材料安全データシートを参照してください。サンプル調製中に使用される化学物質のいくつかは、毒性、突然変異原性、発癌性、および/または再増殖性である。個人用保護具(手袋、ラボコート、フルレングスパンツ、クローズドトゥシューズ)を使用し、サンプルを扱いながらヒュームフードの下で作業します。
1. SEM サンプル調製とイメージ?...

<ol>
	<li>Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+Electron+Microscope+Technology+of+Insect+Material.">Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material.</a> Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+the+scanning+electron+microscopy+(sem)+and+its+application+in+polymer+materials+research.">The development of the scanning electron microscopy (sem) and its application in polymer materials research.</a> Journal of the Graduates Sun Yat-Sen University (Natural Sciences Medicine). 34, 7-12 (2008).</li><li>Gan, L., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+tomography+of+cells.">Electron tomography of cells.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 45, 27-56 (2011).</li><li>Lucic, V., Rigort, A., Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-electron+tomography:+the+challenge+of+doing+structural+biology+in+situ.">Cryo-electron tomography: the challenge of doing structural biology in situ.</a> The Journal of Cell Biology. 202, 407-419 (2013).</li><li>Trepout, S., Bastin, P., Marco, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Observation+of+Thick+Biological+Samples+by+Scanning+Transmission+Electron+Tomography.">Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55215 (2017).</li><li>Zhang, X. J., Sun, W., Zhang, J., Zuo, T. T., Wang, Z. Q., Zhao, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+coleopteran+insect+species+antennal+sensilla.">Research progress of coleopteran insect species antennal sensilla.</a> Journal of Anhui Agricultural Sciences. 41, 2932-2935 (2013).</li><li>Aldrich, J. R., Bartelt, R. J., Dickens, J. C., Knight, A. L., Light, D. M., Tumlinson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+chemical+ecology+research+in+the+United+States+Department+of+Agriculture-Agricultural+Research+Service.">Insect chemical ecology research in the United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service.</a> Pest Management Science. 59, 777-787 (2003).</li><li>Thomas, C. B., Marlin, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone+mating+disruption:+Novel,+non-toxic+control+of+the+European+corn+borer.">Pheromone mating disruption: Novel, non-toxic control of the European corn borer.</a> Leopold Center. 8, 57-60 (1999).</li><li>Chen, X. F., Hu, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+specimen+preparation+techniques+of+scanning+electron+microscope+of+Ficus+simplicissima+Lour.">Studies on the specimen preparation techniques of scanning electron microscope of Ficus simplicissima Lour.</a> Journal of Zhongkai Agrotechnical College. 14, 68-70 (2001).</li><li>Zhou, W., Apkarian, R., Wang, Z. L., Joy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+Scanning+Electron+Microscopy+(SEM).">Fundamentals of Scanning Electron Microscopy (SEM).</a> Scanning Microscopy for Nanotechnology. , 1-40 (2006).</li><li>Kothekar, S. C., Ware, A. M., Waghmare, J. T., Momin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Analysis+of+the+Properties+of+Tween-20,+Tween-60,+Tween-80,+Arlacel-60,+and+Arlacel-80.">Comparative Analysis of the Properties of Tween-20, Tween-60, Tween-80, Arlacel-60, and Arlacel-80.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 28, 477-484 (2007).</li><li>Chai, J. L., Liu, N., Bai, T. T., Zhang, H. M., Liu, N. N., Wang, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compositions+and+Physicochemical+Properties+of+Tween+Type+Surfactants-Based+Microemulsions.">Compositions and Physicochemical Properties of Tween Type Surfactants-Based Microemulsions.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 35, 441-447 (2014).</li><li>Zhang, L. D., Zhao, L., Han, F., Xu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+and+applications+of+surfactants+(XV)+Detergency+of+surfactants+and+its+applications.">Performance and applications of surfactants (XV) Detergency of surfactants and its applications.</a> China Surfactant Detergent and Cosmetics. 45, 132-137 (2015).</li><li>Waghmare, P. R., Das, S., Mitra, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Under-water+superoleophobic+glass:+unexplored+role+of+the+surfactant-rich+solvent.">Under-water superoleophobic glass: unexplored role of the surfactant-rich solvent.</a> Scientific Reports. 3, 1-25 (2013).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtomy+of+insect+sensilla+embedded+in+resin+blocks+for+transmission+electronic+microscopy.">Microtomy of insect sensilla embedded in resin blocks for transmission electronic microscopy.</a> Chinese Journal of Applied Entomology. 50, 1479-1483 (2013).</li><li>Zong, S. X., Liu, X. H., Cao, C. J., Luo, Y. Q., Ren, L. L., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semiochemical+attractants+for+monitoring+and+controlling+Chlorophorus+caragana.">Development of semiochemical attractants for monitoring and controlling Chlorophorus caragana.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 68, 243-252 (2013).</li><li>Sumner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epoxy+resins+for+light+and+transmission+electron+microscopy.">Epoxy resins for light and transmission electron microscopy.</a> Plant Microtechniques and Protocols. , 83-101 (2015).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+antennae.">Insect antennae.</a> Annual Review of Entomology. 9, 103-122 (1964).</li><li>Zacharuk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennae+and+sensilla.">Antennae and sensilla.</a> Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 6, 1-69 (1985).</li><li>Zacharuk, R., Albert, P., Bellamy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+digitiform+sensilla+on+the+labial+palp+of+a+larval+elaterid+(Coleoptera).">Ultrastructure and function of digitiform sensilla on the labial palp of a larval elaterid (Coleoptera).</a> Canadian Journal of Zoology. 55, 569-578 (1977).</li><li>Shanbhag, S., M&#252;ller, B., Steinbrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atlas+of+olfactory+organs+of+Drosophila+melanogaster:+1,+Types,+external+organization,+innervation+and+distribution+of+olfactory+sensilla.">Atlas of olfactory organs of Drosophila melanogaster: 1, Types, external organization, innervation and distribution of olfactory sensilla.</a> International Journal of Insect Morphology and Embryology. 28, 377-397 (1999).</li><li>Tarumingkeng, R. C., Coppel, H. C., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+ultrastructure+of+the+antennal+chemoreceptors+and+mechanoreceptors+of+worker+Coptotermes+formosanus+Shiraki.">Morphology and ultrastructure of the antennal chemoreceptors and mechanoreceptors of worker Coptotermes formosanus Shiraki.</a> Cell Tissue Res. 173, 173-178 (1976).</li><li>Zacharuk, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+insect+chemosensilla.">Ultrastructure and function of insect chemosensilla.</a> Annual Review of Entomology. 25, 27-47 (1980).</li><li>Li, Y. Z., Zhong, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+detergents+and+floating+carriers+for+treating+potato+golden+nematode+cysts+to+improve+the+original+appearance+of+electron+microscopy.">Screening of detergents and floating carriers for treating potato golden nematode cysts to improve the original appearance of electron microscopy.</a> Plant quarantine. 8, 72-75 (1994).</li><li>Marzio, L. D., Marianecci, C., Petrone, M., Rinaldi, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+pH-sensitive+non-ionic+surfactant+vesicles:+comparison+between+tween+21+and+tween+20.">Novel pH-sensitive non-ionic surfactant vesicles: comparison between tween 21 and tween 20.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 82, 18-24 (2011).</li><li>Ren, L. L., Wu, Y., Shi, J., Zhang, L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+morphology+and+sensilla+ultrastructure+of+Tetrigus+lewisi+Cand&#232;ze+(Coleoptera:+Elateridae).">Antenna morphology and sensilla ultrastructure of Tetrigus lewisi Cand&#232;ze (Coleoptera: Elateridae).</a> Micron. 60, 29-38 (2014).</li><li>Ren, L., Shi, J., Zhang, Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennal+morphology+and+sensillar+ultrastructure+of+Dastarcus+helophoroides+(Fairmaire)+(Coleoptera:+Bothrideridae).">Antennal morphology and sensillar ultrastructure of Dastarcus helophoroides (Fairmaire) (Coleoptera: Bothrideridae).</a> Micron. 43, 921-928 (2012).</li><li>Teng, X. H., Liu, X. L., Xie, G. Y., Tang, Q. B., Li, W. Z., Zhao, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+distribution+of+ovipositor+sensilla+of+female+Helicoverpa+armigera+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Morphology and distribution of ovipositor sensilla of female Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae).</a> The 11th Henan Plant Protection Society, the 10th Henan Insect Society, and the 5th Member Congress and Academic Symposium of Henan Plant Pathology Society. , 138-142 (2017).</li><li>Yang, R., Zhang, L. N., Fan, J. W., Wang, J. L., Fang, K. F., Yu, T. Q., Wang, S. H., Du, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+specimens+for+scanning+electron+microscopy.">Insect specimens for scanning electron microscopy.</a> Journal of Beijing University of Agriculture. 29, 33-36 (2014).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Zhang, L., Wang, R., Yu, Y., Lu, P. F., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+distribution+of+sensilla+on+the+maxillary+and+labial+palps+of+Chlorophorus+caragana+(Coleoptera:+Cerambycidae).">Ultrastructure and distribution of sensilla on the maxillary and labial palps of Chlorophorus caragana (Coleoptera: Cerambycidae).</a> Journal of Morphology. 279, 574-588 (2018).</li><li>Harrison, J. D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+preparing+adult+beetles+(Coleoptera)+for+light+and+scanning+electron+microscopy.">Cleaning and preparing adult beetles (Coleoptera) for light and scanning electron microscopy.</a> African Entomology. 20, 395-401 (2012).</li><li>Xiao, Y., Liu, W., Wang, Y., Zuo, Y. X., Hu, R., Li, T. T., Cui, Z. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+methods+of+biological+sample+preparation+for+scanning+electron+microscope.">Drying methods of biological sample preparation for scanning electron microscope.</a> Research and Exploration Laboratory. 32, 46-53 (2013).</li><li>Graef, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Conventional Transmission Electron Microscopy. , 1 (2003).</li></ol>

本稿では、木材用カブトムシの走査および透過電子顕微鏡のサンプル調製スキームを紹介した。代表的な研究対象として虫の付属物を用いて、従来のサンプル調製方法に対していくつかの改良点を実証した。
固体表面から切り離された液体油は、小さな液滴に乳化され、被用物の表面への再沈着を低減するために洗浄媒体中に十分に分散および懸濁することができる。?...

走査型電子顕微鏡は、多くの形態研究において重要なツールであり、SEMは表面構造1、2を示している。透過型電子顕微鏡法の魅力は、細胞のアーキテクチャや小器官の超構造から、高分子複合体やタンパク質の構造まで、ナノメートルスケールで幅広い生体構造を研究できるということです。TEM は内部構造3、4、5を示しています。
Coleopteraは、約182の家族と350,000種を含む昆虫の最大のグループです。コレオプテランの昆虫、特に木を退屈するカブトムシのほとんどは植物を食べ、その多くは森林や果樹の重要な害虫であり、木に壊滅的な被害を与える6.現在、化学生態学説に基づく害虫の予防・防除集団は、7.1.1の注目を集めている。効率的で低毒性、無公害のフェロモン制御法が有効な方法8となっている。昆虫の形態と超構造を研究することは、昆虫化学生態学研究の重要な部分です。走査電子顕微鏡と透過電子顕微鏡(SEMとTEM)は、それらの形態と内部解剖学を研究するために大きな効果を発揮します。しかし、電子顕微鏡(EM)用の昆虫試料の調製中に、観察部位の客観性および真正性が9に影響を受ける可能性がある。一般に、昆虫のSEM試料調製には、洗浄、組織固定、脱水、メタセシス、乾燥、およびスパッタコーティング10が必要である。木をつなぐカブトムシが生きる複雑な環境のために、体表面はしばしば様々な汚染物質を有し、その付属物はしばしば多くの細長い長いセンシラまたは毛先を有する。特に、一部の木ボラーは、現場で直接収集し、その後、新鮮さを確保するために液体を固定するために入れて、その後、実験室で洗浄実験室で利用できない。サンプルが最初に固定され、次に洗浄された場合、グルタルアルデヒドがサンプルに強く固定するため、明らかに破片を除去することははるかに困難です。トゥイーン20は、水の表面張力を低下させ、洗濯物表面の水の濡れ性を向上させるなど、洗浄工程において重要な役割を果たす界面活性剤11、12、13、14である。本研究では、液体の表面張力を低減する固定液とPBS洗浄液にTween20を添加し、SEMで体表面をクリーナーさせた木張りカブトムシの体表面に汚れが付着するのを防止した。
TEMを使用して、昆虫の異なる器官上のセンシラをスライスして、その中の明確な構造を明らかにし、感覚機能を分析するための基礎を提供することができる。木除けカブトムシのような被検昆虫が大きく、体壁がかなりの程度の硬化を有する場合、固定剤は昆虫体内の臓器組織を十分に飽和させることができない。トゥイーン20は、汚れの分散および懸濁能力を高めることができる。本研究では、Tween 20を固定液に加えて、木張りカブトムシの昆虫体壁への固定液の浸透を促進し、表皮11、12、13の変形および崩壊を回避した。さらに、一般的なスライス技術を使用して、特にいくつかの小さなセンシラ15のために、センシラの異なるタイプを正確に見つけることが困難である。従来のTEMサンプル調製に基づいて、本研究は蛍光顕微鏡とSEMを組み合わせて埋め込みブロック内の昆虫感覚の位置を決定し、スライス精度を向上させた。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical lens</td>
			<td>Chongqing Auto Optical 
			limited liability company</td>
			<td>1425277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon adhesive tape</td>
			<td>SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.</td>
			<td>7311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon tetrachloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids</td>
			<td>GilderGrids</td>
			<td>G300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sinopharm group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>10039-32-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding molds</td>
			<td>Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td>Anhydrous EM Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isophorone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78-59-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>512-26-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monobasic sodium phosphate</td>
			<td>Its group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective micrometer</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>0-001-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>541-09-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>1998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Gillette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Spurr</td>
			<td>ERL4221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Lianhui</td>
			<td>GB/T19001-2008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>S-3400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel desiccant</td>
			<td>Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd.</td>
			<td>112926-00-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td>Martol</td>
			<td>G1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter ion instrument</td>
			<td>Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>E-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EZ4 HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Tianjin Damao Chemical Reagent</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>UC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>GT Sonic</td>
			<td>GT-X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>6159-44-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle

このレポートでは、両方のタイプの電子顕微鏡に対して、木管粉カブトムシ、クロロフォラス・カラガナ・シー&ワン(2012)の付属物を調製して実証したサンプル調製法および透過型電子顕微鏡観察方法について説明した。走査型電子顕微鏡(SEM)サンプル調製プロトコルは、一連のエタノール浴におけるサンプル化学固定、脱水、乾燥、スパッタコーティングに基づいていました。Tween20(ポリオキシエチレンソルビタンラウレート)を固定液と洗浄液に添加することにより、木除けカブトムシの昆虫体表面をよりきれいに洗浄した。本研究では、透過電子顕微鏡(TEM)の試料調製には、固定、エタノール脱水、樹脂への埋め込み、蛍光顕微鏡を用いた位置決め、切除、染色を含む一連のステップが含まれる。Tween 20を用いた固定剤は、木田の虫体壁をTween 20なしでより簡単に貫通し、その後体内の組織や臓器をより良く固定し、昆虫感覚超構造の透明な透過電子顕微鏡観察を生み出した。この調製の次のステップは、蛍光顕微鏡法を用いて標的感覚位置の精度を高めることによって、樹脂ブロックに埋め込まれた試料中の昆虫感覚の位置を決定することでした。これにより、スライス精度が向上しました。

Tween 20での洗浄および固定液を用いて、Tween 20を使用しないものよりもクリーンなSEM画像が観察された(図3)。Tween 20固定液は、グルタルアルデヒド固定溶液を組織に浸透させた。微小管構造がはっきりと見られた。サンプルの内部構造のTEM画像は、Tween 20なしでぼやけました(図4)。
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="...

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Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

昆虫センシラの超構造を観察するために、走査電子顕微鏡と透過電子顕微鏡(それぞれSEMおよびTEM)のサンプル調製プロトコルを研究で提示した。TEMでサンプル変形を避けるためにTween 20を固定に添加した。蛍光顕微鏡法はTEMにおけるスライス精度を向上させるのに役立った。

木管化カブトムシの付属物の走査型および透過型電子顕微鏡の試料調製方法

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

ウッドボーリングカブトムシ彼らの体面はSEMでは常に難しいです。Tween-20は固定および洗浄の解決に加えられる。木のつまらないカブトムシの体面 TEMでは、Tween-20 は体壁への固定性の浸透を高め、体内の組織や臓器をより良く固定することができます。蛍光顕微鏡は、スライス精度を向上させるのに役立ちます。この技術は、体表面を洗浄し、木のつまらないカブトムシの体壁に浸透するのに役立ちます。したがって、SEMとTEMのビジョンをクリアします。蛍光顕微鏡はTEMのスライスの正確さを改善するために役立つ。この手順のデモンストレーションは、当研究室の大学院生である張上ruです。クロロホルス・カラガナが住んでいる地域では、漏斗トラップにイソフォロンなどの植物誘引物質を餌にしたフィールドトラップを配置します。トラップに木のつまらないカブトムシの大人を引き付けます。pH 7.2で1リットル当たり0.1モルの成人クロロフォラスカラガナのきれいな体を保存し、体積グルタルアルデヒドで2.5%重量、および体積Tween-20で0.06%体積。3日間摂氏4度でサンプルを固定します。保存液から体を取り出し、PBSですすいでください。ステレオ顕微鏡の下で、付属物を取り除き、PBSTで40キロヘルツで超音波洗浄するために鉗子を使用してください。100秒間洗浄した後、サンプルを顕微鏡に移して、清潔かどうかを確認します。損傷を避けるために400秒以上清掃しないでください。次いで、サンプルをエタノールに20分間濃度で浸し、脱水を行います。脱水後、ステレオ顕微鏡下で、カーボン両面粘着テープを使用して、3つの観察面、側側、腹側、および側面をスタブに別々に固定します。すべての表示面が清潔で汚染がないことを確認します。シリカゲル乾燥剤を含むペトリ皿にサンプルステージを48時間置きます。次に、イオンスパッタリング装置で、メインバルブを開いた位置まで回転させ、サンプルチャンバーカバーを取り外し、サンプルをチャンバーに入れます。電源スイッチをオンにして、準備ができたライトが点灯していることを確認します。スパッタリング時間を45秒、コーティング厚さを70.875オングストロームに設定します。機械ポンプの真空ダイヤルインデックスが7を下回ったら、放電を押して白金の散布を開始します。手順の最後に、電源をオフにして、サンプルをチャンバーから取り出します。V回T.K倍のK倍に等しいオングストロームでスプレーフィルム厚Dを算出し、スパッタリングされた金属とガスによって決定される定数である。私はミリアンペアのプラズマ流れであり、Vはキロボルトで印加される電圧であり、Tは秒単位の時間です。サンプルを含むスタブを SEM のステージに挿入します。SEMソフトウェアを開き、20キロボルトから希望の動作電圧を選択します。成体のクロロフォラスカラガナから付属物を得た後、PBSTのサンプルを超音波浴で3時間洗浄し、PBSで1%重量の体積オスミウム四酸化された25°Cで1時間後固定します。室温での体積エタノールで50%60%70%80%85%90%95%100%および100%体積で20分連続処理を使用してサンプルを脱水します。鉗子で、平らな埋め込み型の熱い樹脂を適用し、樹脂にサンプルを埋め込む。サンプルがプレートの底部にあり、埋め込まれた溝の端にできるだけ近づけるようにしてください。ラベルを付け、サンプルを含むプレートを摂氏60度で72時間インキュベートします。インキュベーション後、プレートをインキュベーターから取り出し、樹脂が重合していることを確認します。サンプルが固まったら、各樹脂ブロックを蛍光顕微鏡の下に置き、顕微鏡の蛍光光源を動かして、上から青色光で試料を照射し、それらを撮影します。樹脂ブロック内の感性線がはっきりと見えるようにしてください。樹脂ブロックの端とターゲットセンサとの距離を測定し、センサをターゲットにします。パルプのSEM画像を参照し、ターゲットレセプターに近いカミソリの刃で樹脂ブロックを大まかに切断します。次に、青色光蛍光顕微鏡下で、上記の光源を調整して、感音がはっきりと観察されるようにする。目的マイクロメータを蛍光顕微鏡ステージに追加します。大まかにカットした樹脂ブロックを撮影し、ImageJを使用してターゲットと樹脂のエッジの距離を測定します。樹脂サンプルを超ミクロトーム上に置き、ターゲット位置に達するまで50〜60ナノメートルの厚さのセクションを切断します。ペトリ皿の中で、フォームバーコーティングされた100メッシュの銅グリッドにセクションを取り付けます。室温でウラニル酢酸の飽和濾過溶液でグリッドを染色します。染色時にセクションを覆い、光誘発性沈殿物を遮断します。10分間汚れます。ヒュームフードでは、50%メタノールで2回リンスし、次いで濾過された脱気水で2回リンスする。プラスチックペトリ皿の正方形に準備された鉛クエン酸塩の汚れの滴を置き、8分間座らせます。脱気濾過水ですすいで乾燥します。TEM マシン内のサンプル・ステージにグリッドを取り付けます。電圧を80キロボルトに設定し、セクションを調べます。このプロトコルでは、Tween-20で洗浄および固定溶液を用いて、Tween-20を使用しないよりも明確なSEM画像が観察された。Tween-20固定溶液により、グルタルアルデヒド固定溶液が組織に浸透することを可能にし、Tween-20なしで調製されたサンプルの内部構造がぼやけている間、微小管構造がTEM画像ではっきりと見られた。上顎の触知体上のタイプ1センシラ小枝塩基化のペグの連続的な断面図は、樹状鞘が外側樹状セグメントを取り囲み、先端細孔に伸びることを示した。7つの分岐されていない外側樹状セグメントは、外側の空洞に囲まれた内側の受容体リンパ腔内に存在していた。管状体は、各細径ソケットベースの他の外樹状セグメントから樹状鞘によって分離した。毛様体領域では、8つの双極性ニューロンの存在を示す、異なる直径の8つの樹状突起が同定された。この技術は、単一細胞記録やその時点でのハイブリダイゼーションなどの神経の機能をさらに研究するために使用することができる。

Research

JoVE Journal

Environment

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

最適化された負の染色：電子顕微鏡による小型·非対称蛋白質構造を調べるためのハイスループットプロトコル

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

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の単離のための最適化された濃縮技術<em&gt;アルスロ</em&gt;バクテリオファージ種土壌サンプルの分離株から

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Protocol for Measuring the Thermal Properties of a Supercooled Synthetic Sand-water-gas-methane Hydrate Sample

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VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

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VacuSIP、のための改良INEX方法<em&gt;その場で</em&gt;微粒子と溶解した化合物の測定は、アクティブサスペンションフィーダによって処理します

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Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

海面とサンプル分析にMicroplasticsサンプリングのためのプロトコル

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Thermal Scanning Conductometry (TSC) as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

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熱ゲルの勉強および導電性理学の相挙動を制御するための一般的な方法として、Conductometry (TSC) をスキャン

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On the Preparation and Testing of Fuel Cell Catalysts Using the Thin Film Rotating Disk Electrode Method

準備および薄膜回転ディスク電極法を用いた燃料電池触媒のテストに

We present a step-by-step tutorial to prepare proton exchange membrane fuel cell (PEMFC) catalysts, consisting of Pt nanoparticles (NPs) supported on a ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

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低コスト、小型で、簡単に構築されたフライトのミルを使用してアンブロシア甲虫、カシノナガキクイムシ(村山) の飛行能力を測定

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

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タバココナジラミの迅速同定のループ介在増幅法 (LAMP) アッセイ

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

クライオ走査型電子顕微鏡で可視化された木質植物のキシレム水分布

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...