Name: sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle
Uploaded: 2020-02-03T12:00:00
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우리는 베이징 전문 대학, 원자력 응용 연구소 (중국 농업 과학 아카데미), 베이징 임업 대학의 바이오 연구 센터 및 산간 교수의 관대 한 지원에 감사드립니다. 동물학 연구소의 장, 중국 과학 아카데미. 이 연구는 중국의 국가 핵심 R&D 프로그램(2017YFD0600103), 중국 국립자연과학재단(보조금 제31570643, 81774015), 중국 공공복지 산림과학연구(201504304), 내몽골의 지원을 받았습니다. 농업대학 고위인재연구창업계획(203206038) 및 내몽골 자치구 고등교육연구사업(NJZZ18047), 내몽골 자치구 린수 "더블 퍼스트 클래스" 건설사업(170001)

주의: 시약의 재료 안전 데이터 시트를 사용하기 전에 참조하십시오. 샘플 준비 중에 사용되는 여러 화학 물질은 독성, 돌연변이, 발암 성 및 / 또는 재현독성입니다. 개인 보호 장비(장갑, 실험실 코트, 전신 바지 및 닫힌 발가락 신발)를 사용하고 샘플을 처리하는 동안 연기 후드 아래에서 작업하십시오.
1. SEM 견본 준비 및 화상 진찰
<ol><li>샘플 고정 및 세척<ol>
<li>C. 카라?...

<ol>
	<li>Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+Electron+Microscope+Technology+of+Insect+Material.">Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material.</a> Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+the+scanning+electron+microscopy+(sem)+and+its+application+in+polymer+materials+research.">The development of the scanning electron microscopy (sem) and its application in polymer materials research.</a> Journal of the Graduates Sun Yat-Sen University (Natural Sciences Medicine). 34, 7-12 (2008).</li><li>Gan, L., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+tomography+of+cells.">Electron tomography of cells.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 45, 27-56 (2011).</li><li>Lucic, V., Rigort, A., Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-electron+tomography:+the+challenge+of+doing+structural+biology+in+situ.">Cryo-electron tomography: the challenge of doing structural biology in situ.</a> The Journal of Cell Biology. 202, 407-419 (2013).</li><li>Trepout, S., Bastin, P., Marco, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Observation+of+Thick+Biological+Samples+by+Scanning+Transmission+Electron+Tomography.">Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55215 (2017).</li><li>Zhang, X. J., Sun, W., Zhang, J., Zuo, T. T., Wang, Z. Q., Zhao, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+coleopteran+insect+species+antennal+sensilla.">Research progress of coleopteran insect species antennal sensilla.</a> Journal of Anhui Agricultural Sciences. 41, 2932-2935 (2013).</li><li>Aldrich, J. R., Bartelt, R. J., Dickens, J. C., Knight, A. L., Light, D. M., Tumlinson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+chemical+ecology+research+in+the+United+States+Department+of+Agriculture-Agricultural+Research+Service.">Insect chemical ecology research in the United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service.</a> Pest Management Science. 59, 777-787 (2003).</li><li>Thomas, C. B., Marlin, E. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Under-water+superoleophobic+glass:+unexplored+role+of+the+surfactant-rich+solvent.">Under-water superoleophobic glass: unexplored role of the surfactant-rich solvent.</a> Scientific Reports. 3, 1-25 (2013).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtomy+of+insect+sensilla+embedded+in+resin+blocks+for+transmission+electronic+microscopy.">Microtomy of insect sensilla embedded in resin blocks for transmission electronic microscopy.</a> Chinese Journal of Applied Entomology. 50, 1479-1483 (2013).</li><li>Zong, S. X., Liu, X. H., Cao, C. J., Luo, Y. Q., Ren, L. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epoxy+resins+for+light+and+transmission+electron+microscopy.">Epoxy resins for light and transmission electron microscopy.</a> Plant Microtechniques and Protocols. , 83-101 (2015).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+antennae.">Insect antennae.</a> Annual Review of Entomology. 9, 103-122 (1964).</li><li>Zacharuk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennae+and+sensilla.">Antennae and sensilla.</a> Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 6, 1-69 (1985).</li><li>Zacharuk, R., Albert, P., Bellamy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+digitiform+sensilla+on+the+labial+palp+of+a+larval+elaterid+(Coleoptera).">Ultrastructure and function of digitiform sensilla on the labial palp of a larval elaterid (Coleoptera).</a> Canadian Journal of Zoology. 55, 569-578 (1977).</li><li>Shanbhag, S., M&#252;ller, B., Steinbrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atlas+of+olfactory+organs+of+Drosophila+melanogaster:+1,+Types,+external+organization,+innervation+and+distribution+of+olfactory+sensilla.">Atlas of olfactory organs of Drosophila melanogaster: 1, Types, external organization, innervation and distribution of olfactory sensilla.</a> International Journal of Insect Morphology and Embryology. 28, 377-397 (1999).</li><li>Tarumingkeng, R. C., Coppel, H. C., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+ultrastructure+of+the+antennal+chemoreceptors+and+mechanoreceptors+of+worker+Coptotermes+formosanus+Shiraki.">Morphology and ultrastructure of the antennal chemoreceptors and mechanoreceptors of worker Coptotermes formosanus Shiraki.</a> Cell Tissue Res. 173, 173-178 (1976).</li><li>Zacharuk, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+insect+chemosensilla.">Ultrastructure and function of insect chemosensilla.</a> Annual Review of Entomology. 25, 27-47 (1980).</li><li>Li, Y. Z., Zhong, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+detergents+and+floating+carriers+for+treating+potato+golden+nematode+cysts+to+improve+the+original+appearance+of+electron+microscopy.">Screening of detergents and floating carriers for treating potato golden nematode cysts to improve the original appearance of electron microscopy.</a> Plant quarantine. 8, 72-75 (1994).</li><li>Marzio, L. D., Marianecci, C., Petrone, M., Rinaldi, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+pH-sensitive+non-ionic+surfactant+vesicles:+comparison+between+tween+21+and+tween+20.">Novel pH-sensitive non-ionic surfactant vesicles: comparison between tween 21 and tween 20.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 82, 18-24 (2011).</li><li>Ren, L. L., Wu, Y., Shi, J., Zhang, L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+morphology+and+sensilla+ultrastructure+of+Tetrigus+lewisi+Cand&#232;ze+(Coleoptera:+Elateridae).">Antenna morphology and sensilla ultrastructure of Tetrigus lewisi Cand&#232;ze (Coleoptera: Elateridae).</a> Micron. 60, 29-38 (2014).</li><li>Ren, L., Shi, J., Zhang, Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennal+morphology+and+sensillar+ultrastructure+of+Dastarcus+helophoroides+(Fairmaire)+(Coleoptera:+Bothrideridae).">Antennal morphology and sensillar ultrastructure of Dastarcus helophoroides (Fairmaire) (Coleoptera: Bothrideridae).</a> Micron. 43, 921-928 (2012).</li><li>Teng, X. H., Liu, X. L., Xie, G. Y., Tang, Q. B., Li, W. Z., Zhao, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+distribution+of+ovipositor+sensilla+of+female+Helicoverpa+armigera+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Morphology and distribution of ovipositor sensilla of female Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae).</a> The 11th Henan Plant Protection Society, the 10th Henan Insect Society, and the 5th Member Congress and Academic Symposium of Henan Plant Pathology Society. , 138-142 (2017).</li><li>Yang, R., Zhang, L. N., Fan, J. W., Wang, J. L., Fang, K. F., Yu, T. Q., Wang, S. H., Du, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+specimens+for+scanning+electron+microscopy.">Insect specimens for scanning electron microscopy.</a> Journal of Beijing University of Agriculture. 29, 33-36 (2014).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Zhang, L., Wang, R., Yu, Y., Lu, P. F., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+distribution+of+sensilla+on+the+maxillary+and+labial+palps+of+Chlorophorus+caragana+(Coleoptera:+Cerambycidae).">Ultrastructure and distribution of sensilla on the maxillary and labial palps of Chlorophorus caragana (Coleoptera: Cerambycidae).</a> Journal of Morphology. 279, 574-588 (2018).</li><li>Harrison, J. D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+preparing+adult+beetles+(Coleoptera)+for+light+and+scanning+electron+microscopy.">Cleaning and preparing adult beetles (Coleoptera) for light and scanning electron microscopy.</a> African Entomology. 20, 395-401 (2012).</li><li>Xiao, Y., Liu, W., Wang, Y., Zuo, Y. X., Hu, R., Li, T. T., Cui, Z. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+methods+of+biological+sample+preparation+for+scanning+electron+microscope.">Drying methods of biological sample preparation for scanning electron microscope.</a> Research and Exploration Laboratory. 32, 46-53 (2013).</li><li>Graef, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Conventional Transmission Electron Microscopy. , 1 (2003).</li></ol>

이 기사에서는 목공 딱정벌레에 대한 주사 및 투과 전자 현미경 검사법을 위한 샘플 준비 계획을 발표했습니다. 곤충 부속을 대표적인 연구 대상자로 사용하여 기존의 시료 전처리 방법에 비해 몇 가지 개선된 방법을 입증했습니다.
고체 표면에서 분리된 액체 오일은 작은 액적으로 유화되어, 이는 물체의 표면에 재증착을 감소시키기 위해 세척 매체에 잘 분산되고 부유될 수...

주사 전자 현미경 검사법은 SEM이 표면 구조를 보여줍니다 많은 형태학 연구에서 중요한 도구입니다1,2. 전송 전자 현미경 검사법의 매력은 세포의 구조와 세포기관의 초구조에서, 거대 분자 복합체 및 단백질의 구조에, 나노 미터 규모에 있는 생물학 구조물의 넓은 범위를 공부하는 것을 이용될 수 있다는 것입니다. TEM은 내부 구조를 보여줍니다3,4,5.
콜레옵테라는 약 182가구와 350,000여 종의 곤충을 포함한 가장 큰 곤충 군이다. 콜레옵테란 곤충의 대부분, 특히 목공 딱정벌레는 식물을 먹고, 그 중 많은 식물은 숲과 과일 나무의 중요한 해충이며, 나무에 치명적인 손상을초래6. 현재, 화학생태이론에 근거한 해충의 예방 및 방제 인구는7. 효율적이고 독성이 낮고 무공해 페로몬 제어 방법이 효과적인방법이되었습니다 8. 곤충의 센실라 형태와 초구조를 연구하는 것은 곤충 화학 생태 연구의 중요한 부분입니다. 스캐닝 및 투과 전자 현미경 검사법 (SEM 및 TEM, 각각)은 그들의 형태및 내부 해부학을 공부하는 큰 효력을 위해 이용됩니다. 그러나, 전자 현미경 검사법(EM)을 위한 곤충 샘플의 제조 도중, 관측 부위의 객관성 및진위도9에영향을 받을 수 있다. 일반적으로 곤충의 SEM 샘플 제제는 세정, 조직 고정, 탈수, 대사, 건조 및 스퍼터코팅(10)을필요로 한다. 나무 보링 딱정벌레가 살고있는 복잡한 환경으로 인해 신체 표면에는 종종 다양한 오염 물질이 있으며 부속물은 종종 많은 미세한 긴 센실라 또는 강모가 있습니다. 특히, 일부 목공은 현장에서 직접 수집 한 실험실 제기에서 사용할 수 없으며 신선도를 보장하기 위해 유체를 고정시키고 실험실에서 세척합니다. 시료가 먼저 고정된 다음 세척되면 글루타랄데히드가 시료에 강하게 고정되기 때문에 이물질을 제거하는 것이 훨씬 더 어렵습니다. 트웬(20)은 계면활성제11,12,13,14,이는 세탁물의 표면 장력을 감소시키고 세탁물의 수면의 습류성을 향상시키는 등 세척 과정에서 중요한 역할을 한다. 본 연구에서, Tween 20은 액체의 표면 장력을 감소시키고, SEM에서 바디 표면을 더 깨끗하게 만든 나무 보링 딱정벌레의 체체 표면에 침전되는 먼지를 방지하기 위해 고정 용액 및 PBS 세정 액에 첨가되었다.
TEM을 사용하여, 곤충의 다른 기관에 센실라는 그 안에 명확한 구조를 밝히기 위하여 슬라이스될 수 있습니다, 따라서 감각증 기능을 분석하기 위한 기초를 제공하. 목공 딱정벌레와 같은 대상 곤충이 크고, 그 몸벽이 경화의 상당 정도를 가지면, 고정제는 곤충 체 내의 장기 조직을 완전히 포화시키지 못할 수 있다. 트위넨(20)은 먼지의 분산 및 현탁용량을 향상시킬 수 있다. 본 연구에서, 트웬(20)은 목초지 딱정벌레의 곤충 체벽내로의 고정유체 침투를 향상시키기 위해 고정식에 첨가하였으며,표피11,12,13의변형 및 붕괴를 피하하였다. 또한, 일반 슬라이스 기술을 사용하면, 특히 일부 작은센실라(15)에대해 다른 유형의 센실라를 정확하게 찾기가 어렵다. 전통적인 TEM 견본 준비에 근거를 두어, 이 연구 결과는 임베디드 블록에 있는 곤충 감각실라의 위치를 결정하기 위하여 형광 현미경 검사법과 SEM을 결합하여, 따라서 슬라이스 정확도를 향상합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical lens</td>
			<td>Chongqing Auto Optical 
			limited liability company</td>
			<td>1425277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon adhesive tape</td>
			<td>SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.</td>
			<td>7311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon tetrachloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids</td>
			<td>GilderGrids</td>
			<td>G300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sinopharm group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>10039-32-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding molds</td>
			<td>Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td>Anhydrous EM Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isophorone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78-59-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>512-26-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monobasic sodium phosphate</td>
			<td>Its group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective micrometer</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>0-001-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>541-09-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>1998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Gillette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Spurr</td>
			<td>ERL4221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Lianhui</td>
			<td>GB/T19001-2008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>S-3400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel desiccant</td>
			<td>Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd.</td>
			<td>112926-00-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td>Martol</td>
			<td>G1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter ion instrument</td>
			<td>Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>E-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EZ4 HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Tianjin Damao Chemical Reagent</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>UC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>GT Sonic</td>
			<td>GT-X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>6159-44-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
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sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle

이 보고서는 주사 및 투과 전자 현미경 관찰, 목공 딱정벌레, 클로로 포러스 카라가나 Xie & 왕 (2012)의 부속물을 제조하여 입증 된 샘플 준비 방법을 설명, 전자 현미경의 두 가지 유형. 스캐닝 전자 현미경(SEM) 샘플 전처리 프로토콜은 일련의 에탄올 목욕, 건조 및 스퍼터 코팅에서 샘플 화학적 고정, 탈수에 기초하였다. Tween 20(폴리옥시에틸렌 소르비탄 라우레이트)을 고정액 및 세척 용액에 첨가함으로써, 목공 딱정벌레의 곤충 체표면을 SEM에서 보다 깨끗하게 세척하였다. 이 연구의 전송 전자 현미경 검사법 (TEM) 견본 준비는 고착, 에탄올 탈수, 수지에 있는 포함, 형광 현미경 검사법을 사용하여 위치, 단면도 및 염색을 포함하여 일련의 단계를 관련시켰습니다. Tween 20을 이용한 고정제는 트웬(20)이 없었을 때보다 더 쉽게 목공 딱정벌레의 곤충 몸벽을 관통하고, 이어서 체내에 더 나은 고정 조직과 장기를 침투시켜 곤충 센실라 울트라구조의 명확한 투과 전자 현미경 관측을 산출하였다. 이 제제의 다음 단계는 형광 현미경을 사용하여 수지 블록에 내장된 샘플에서 곤충 센실라의 위치를 결정하여 표적 센실라 포지셔닝의 정밀도를 높이는 것이었다. 이렇게 하면 슬라이스 정확도가 향상되었습니다.

Tween 20을 사용한 세척 및 고정 용액을 사용하여, 더 깨끗한 SEM 이미지는 트웬 20(그림3)이없는 것보다 더 깨끗한 SEM 영상을 관찰하였다. 트웬 20 고정용액은 글루타랄데히드 고정액을 조직 내로 침투하였다. 미세소관 구조가 명확하게 보였다. 샘플의 내부 구조의 TEM 이미지는 Tween 20(도4)없이흐려졌다.
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Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

곤충 센실라의 초구조를 관찰하기 위해, 스캐닝 및 투과 전자 현미경(SEM 및 TEM) 시료 준비 프로토콜을 각각 연구에서 발표되었다. Tween 20은 SEM에서 샘플 변형을 피하기 위해 고정식에 첨가되었습니다.

목공 딱정벌레의 부속물을 위한 주사 및 투과 전자 현미경의 시료 제조 방법

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

나무 보링 딱정벌레 그들의 몸 표면은 항상 SEM에서 어렵다. Tween-20은 고정 및 세척 용액에 추가됩니다. TEM에서 목보링 딱정벌레의 신체 표면, Tween-20 신체 벽에 고정 침투를 향상 하 고 더 나은 본문에 조직 및 장기를 수정 할 수 있습니다.형광 현미경은 슬라이스 정확도를 향상시키는 데 도움이됩니다. 이 기술은 몸 표면을 씻고 나무 보링 딱정벌레의 체벽에 침투하는 데 도움이됩니다. 따라서 SEM 및 TEM 비전을 지웁시게 됩니다.형광 현미경은 TEM에서 슬라이스 정확도를 개선하는 데 도움이됩니다. 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실에서 대학원생 장 얀루가 될 것입니다. 클로로포루스 카라가나(Chlorophorus caragana)가 살고 있는 지역에서는 깔때기 트랩에 이소포론과 같은 식물 매력이 있는 필드 트랩을 배치합니다.나무 지루한 딱정벌레 어른을 함정에 끌어들입니다. 성인 클로로포루스 카라가나의 깨끗한 몸을 pH 7.2, 부피 글루타랄데히드2.5%, 볼륨+2000000000리터 PBS 당 0.1두더지보존. 샘플을 섭씨 4도에서 3일 동안 수정합니다.보존 액체에서 시체를 제거하고 PBS에서 헹구는 다. 스테레오 현미경에서, 부속물을 제거하고 PBST에서 40 킬로 헤르츠에서 초음파로 청소하는 집게를 사용합니다. 100초 동안 세척한 후 샘플을 현미경으로 전송하여 깨끗한지 확인합니다.손상을 피하기 위해 400초 이상 청소하지 마십시오. 그런 다음 각각 20 분 동안 일련의 농도로 에탄올에 샘플을 담그고 탈수를 수행하십시오. 탈수 후 스테레오 현미경 으로 탄소 양면 접착 테이프를 사용하여 세 가지 관측 표면, 등쪽, 복부 및 측면, 스텁에 별도로 고정하십시오.모든 시야 표면이 오염이 없도록 청결하고 오염이 없도록 하십시오. 샘플 스테이지를 실리카 젤 건조제를 48시간 동안 함유한 페트리 접시에 놓습니다. 다음으로, 이온 스퍼터링 기기에서 메인 밸브를 열린 위치로 회전시키고, 샘플 챔버 커버를 제거하고 샘플을 챔버에 넣습니다.전원 스위치를 켜고 준비 된 조명이 켜져 있는지 확인합니다. 스퍼터링 시간을 45초로 설정하고 코팅 두께를 70.875 앙스트롬으로 설정합니다. 기계식 펌프 진공 다이얼 인덱스가 7이하로 떨어지면 방전을 누르고 백금 분무를 시작합니다.절차가 끝나면 전원 공급 장치를 끄고 샘플을 챔버에서 꺼내십시오. K 시간 T.K와 동등한 앙스트롬에서 스프레이 필름 두께 D를 계산하면 스퍼터링 된 금속 및 가스에 의해 결정되는 상수입니다. V는 킬로볼트에 가해지는 전압이고 T는 초 단위로 시간인 동안 밀리앰프의 플라즈마 흐름입니다.샘플을 포함하는 스텁을 SEM 의 단계에 삽입합니다. 샘플 스텁이 있는 샘플 스테이지에 좋은 이미지를 허용하기에 충분한 높이가 있는지 확인합니다. SEM 소프트웨어를 열고 20킬로볼트에서 원하는 작동 전압을 선택합니다.성인 클로로포루스 카라가나에서 부속물을 얻은 후, 3시간 동안 초음파 욕조에서 PBST의 샘플을 세척한 다음 PBS의 부피 osmium 테트락옥사이드를 섭씨 25도에서 1시간 동안 1%의 무게로 수정합니다. 실온에서 부피 에탄올에 의해 50%60%70%80%80%85%90%와 100%의 부피로 20분 연속 처리를 사용하여 샘플을 탈수한다. 집게를 사용하면 가열 된 수지를 평평한 포함 금형에 바르고 수지에 샘플을 포함시면 됩니다.샘플이 플레이트 의 맨 아래에 있고 오목한 홈의 가장자리에 가능한 한 가깝게 배치되었는지 확인합니다. 라벨을 부착한 다음 샘플을 포함하는 플레이트를 섭씨 60도에서 72시간 동안 배양합니다. 인큐베이션 후 인큐베이터에서 플레이트를 제거하고 수지가 중합되었는지 확인합니다.시료가 고화되면 각 수지 블록을 형광 현미경 아래에 놓고 현미경의 형광원을 이동하여 위에서 푸른 빛으로 샘플을 조사하고 사진을 찍습니다. 수지 블록의 센실라가 명확하게 표시되는지 확인합니다. 수지 블록의 가장자리와 대상 센서 사이의 거리를 측정하여 센실라를 대상으로 합니다.팔프의 SEM 이미지를 참조하고 표적 수용체에 가까운 면도날로 수지 블록을 대략 자른다. 다음으로, 청색광형 현미경검사의 밑에, 센실라가 명확하게 관찰되도록 위에서 광원을 조정합니다. 형광 현미경 단계에 객관적인 마이크로미터를 추가합니다.대략 절단 수지 블록을 촬영한 다음 ImageJ를 사용하여 대상과 수지의 가장자리 사이의 거리를 측정합니다. 수지 샘플을 초미세토메에 놓고 목표 위치에 도달할 때까지 50~60나노미터 두께의 단면을 잘라냅니다. 페트리 접시에 폼바 코팅 100 메쉬 구리 그리드에 섹션을 마운트합니다.실온에서 우란 아세테이트의 포화 필터링 된 용액으로 그리드를 얼룩. 염색 중 단면을 덮어 빛으로 인한 침전을 차단합니다. 10 분 동안 얼룩.연기 후드에 50%의 메탄올에 두 번 헹구고 여과 된 탈가물에서 두 번 헹구습니다. 준비된 납 구연산 얼룩을 플라스틱 페트리 접시 의 사각형에 놓고 8 분 동안 앉게하십시오. 탈가물 여과된 물에 헹구고 건조합니다.그리드를 TEM 기계 내의 샘플 스테이지에 마운트합니다. 전압을 80킬로볼트로 설정하고 단면을 검사합니다. 이 프로토콜에서는 Tween-20을 사용하여 세척 및 고정 솔루션을 사용하여 Tween-20이 없는 것보다 명확한 SEM 이미지가 관찰되었습니다.트웬-20 고정 용액을 통해 글루타랄데히드 고정 용액이 조직을 관통할 수 있게 되면서, TEM 이미지에서 마이크로튜블러 구조가 명확하게 보였고, Tween-20 없이 제조된 시료의 내부 구조는 흐릿했다. 상악 팔프에 있는 1형 센실라 나뭇가지 바시카의 페그(peg)의 연속 단면 전경은 수지상 칼집이 외부 수지상 세그먼트를 둘러싸고 팁 모공으로 확장된 것으로 나타났다. 7개의 분기되지 않은 외부 수지상 세그먼트는 외부 구멍에 둘러싸인 내부 수용체 림프구멍 안에 존재했습니다.관 체는 각 센실라 소켓 베이스의 다른 외부 수지상 세그먼트에서 수지상 칼집에 의해 분리되었습니다. 섬모 영역에서, 다른 직경의 8 개의 점원8 은 8 개의 양극성 뉴런의 존재를 나타내는 확인 되었다. 이 기술은 단일 세포 기록 또는 시상 혼성화와 같은 신경의 기능을 추가로 연구하는 데 사용될 수 있다.

Research

JoVE Journal

Environment

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

최적화 된 음의 염색 : 전자 현미경으로 작은 비대칭 단백질 구조 검사를위한 높은 처리량 프로토콜

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

연구

환경과학

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

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의 분리를위한 최적화 된 농축 기법<em&gt; 박터</em&gt; 박테리오파지 생물 종 토양 샘플에서 격리 된 것

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Protocol for Measuring the Thermal Properties of a Supercooled Synthetic Sand-water-gas-methane Hydrate Sample

과냉각 합성 모래 - 물 - 가스 메탄 하이드레이트 샘플의 열적 특성을 측정하기위한 프로토콜

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VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

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VacuSIP, 개선 INEX 방법에 대한<em&gt; 현장에서</em&gt; 미립자의 측정 및 용존 화합물은 액티브 서스펜션 피더에 의해 처리

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Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

바다 표면 및 샘플 분석에 Microplastics 샘플링을위한 프로토콜

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

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The thermal scanning conductometry protocol is a new approach in studying ionic gels based on low molecular weight gelators. The method is designed to ...

On the Preparation and Testing of Fuel Cell Catalysts Using the Thin Film Rotating Disk Electrode Method

준비 및 연료 전지 촉매 박막 자전 디스크 전극 메서드를 사용 하 여 테스트

We present a step-by-step tutorial to prepare proton exchange membrane fuel cell (PEMFC) catalysts, consisting of Pt nanoparticles (NPs) supported on a ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus Murayama, Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

저가, 소형, 그리고 쉽게 생성 된 비행 밀을 사용 하 여 신들의 딱정벌레, 오리너구리 Quercivorus (무라야마)의 비행 능력을 측정

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

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The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

극저온 스캐닝 전자 현미경으로 시각화된 우디 식물의 자일렘 물 분포

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