Name: sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle
Uploaded: 2020-02-03T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle at JoVE.com

Pekin Tarım Meslek Yüksekokulu, Atom Enerjisi Uygulama Enstitüsü (Çin Tarım Bilimleri Akademisi), Pekin OrmanCılık Üniversitesi Biyoaraştırma Merkezi ve Profesör Shan-gan'ın cömert yardımlarını takdir ediyoruz. Zooloji Enstitüsü'nden Zhang, Çin Bilimler Akademisi. Bu araştırma, Çin Ulusal Temel Ar-Ge Programı (2017YFD0600103), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Grant No. 31570643, 81774015), Çin Kamu Refahı Orman Bilimsel Araştırması (201504304), İç Moğolistan tarafından desteklenmiştir. Tarım Üniversitesi Yüksek Seviyeli Yetenek Araştırma Başlangıç Planı (203206038) ve İç Moğolistan Özerk Bölgesi Yüksek Öğretim Araştırma Projesi (NJZZ18047), İç Moğolistan Özerk Bölgesi Linxue "Çift Birinci Sınıf" İnşaat Projesi (170001).

DİkKAT: Reaktiflerin malzeme güvenlik veri sayfalarını kullanmadan önce danışın. Numune hazırlama sırasında kullanılan kimyasalların bir çoğu toksik, mutajenik, kanserojen ve/veya reprotoksiktir. Kişisel koruyucu ekipman (eldiven, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon ve kapalı ayak ayakkabıları) kullanın ve numuneyi kullanırken duman kaputunun altında çalışın.
1. SEM Örnek Hazırlama ve Görüntüleme
<ol><li>Örnek Fiksasyon ve Temizlik<ol>
<li>C. ca...

<ol>
	<li>Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+Electron+Microscope+Technology+of+Insect+Material.">Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material.</a> Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+the+scanning+electron+microscopy+(sem)+and+its+application+in+polymer+materials+research.">The development of the scanning electron microscopy (sem) and its application in polymer materials research.</a> Journal of the Graduates Sun Yat-Sen University (Natural Sciences Medicine). 34, 7-12 (2008).</li><li>Gan, L., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+tomography+of+cells.">Electron tomography of cells.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 45, 27-56 (2011).</li><li>Lucic, V., Rigort, A., Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-electron+tomography:+the+challenge+of+doing+structural+biology+in+situ.">Cryo-electron tomography: the challenge of doing structural biology in situ.</a> The Journal of Cell Biology. 202, 407-419 (2013).</li><li>Trepout, S., Bastin, P., Marco, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Observation+of+Thick+Biological+Samples+by+Scanning+Transmission+Electron+Tomography.">Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55215 (2017).</li><li>Zhang, X. J., Sun, W., Zhang, J., Zuo, T. T., Wang, Z. Q., Zhao, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+coleopteran+insect+species+antennal+sensilla.">Research progress of coleopteran insect species antennal sensilla.</a> Journal of Anhui Agricultural Sciences. 41, 2932-2935 (2013).</li><li>Aldrich, J. R., Bartelt, R. J., Dickens, J. C., Knight, A. L., Light, D. M., Tumlinson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+chemical+ecology+research+in+the+United+States+Department+of+Agriculture-Agricultural+Research+Service.">Insect chemical ecology research in the United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service.</a> Pest Management Science. 59, 777-787 (2003).</li><li>Thomas, C. B., Marlin, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone+mating+disruption:+Novel,+non-toxic+control+of+the+European+corn+borer.">Pheromone mating disruption: Novel, non-toxic control of the European corn borer.</a> Leopold Center. 8, 57-60 (1999).</li><li>Chen, X. F., Hu, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+specimen+preparation+techniques+of+scanning+electron+microscope+of+Ficus+simplicissima+Lour.">Studies on the specimen preparation techniques of scanning electron microscope of Ficus simplicissima Lour.</a> Journal of Zhongkai Agrotechnical College. 14, 68-70 (2001).</li><li>Zhou, W., Apkarian, R., Wang, Z. L., Joy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+Scanning+Electron+Microscopy+(SEM).">Fundamentals of Scanning Electron Microscopy (SEM).</a> Scanning Microscopy for Nanotechnology. , 1-40 (2006).</li><li>Kothekar, S. C., Ware, A. M., Waghmare, J. T., Momin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Analysis+of+the+Properties+of+Tween-20,+Tween-60,+Tween-80,+Arlacel-60,+and+Arlacel-80.">Comparative Analysis of the Properties of Tween-20, Tween-60, Tween-80, Arlacel-60, and Arlacel-80.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 28, 477-484 (2007).</li><li>Chai, J. L., Liu, N., Bai, T. T., Zhang, H. M., Liu, N. N., Wang, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compositions+and+Physicochemical+Properties+of+Tween+Type+Surfactants-Based+Microemulsions.">Compositions and Physicochemical Properties of Tween Type Surfactants-Based Microemulsions.</a> Journal of Dispersion Science and Technology. 35, 441-447 (2014).</li><li>Zhang, L. D., Zhao, L., Han, F., Xu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+and+applications+of+surfactants+(XV)+Detergency+of+surfactants+and+its+applications.">Performance and applications of surfactants (XV) Detergency of surfactants and its applications.</a> China Surfactant Detergent and Cosmetics. 45, 132-137 (2015).</li><li>Waghmare, P. R., Das, S., Mitra, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Under-water+superoleophobic+glass:+unexplored+role+of+the+surfactant-rich+solvent.">Under-water superoleophobic glass: unexplored role of the surfactant-rich solvent.</a> Scientific Reports. 3, 1-25 (2013).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtomy+of+insect+sensilla+embedded+in+resin+blocks+for+transmission+electronic+microscopy.">Microtomy of insect sensilla embedded in resin blocks for transmission electronic microscopy.</a> Chinese Journal of Applied Entomology. 50, 1479-1483 (2013).</li><li>Zong, S. X., Liu, X. H., Cao, C. J., Luo, Y. Q., Ren, L. L., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semiochemical+attractants+for+monitoring+and+controlling+Chlorophorus+caragana.">Development of semiochemical attractants for monitoring and controlling Chlorophorus caragana.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 68, 243-252 (2013).</li><li>Sumner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epoxy+resins+for+light+and+transmission+electron+microscopy.">Epoxy resins for light and transmission electron microscopy.</a> Plant Microtechniques and Protocols. , 83-101 (2015).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+antennae.">Insect antennae.</a> Annual Review of Entomology. 9, 103-122 (1964).</li><li>Zacharuk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennae+and+sensilla.">Antennae and sensilla.</a> Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 6, 1-69 (1985).</li><li>Zacharuk, R., Albert, P., Bellamy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+digitiform+sensilla+on+the+labial+palp+of+a+larval+elaterid+(Coleoptera).">Ultrastructure and function of digitiform sensilla on the labial palp of a larval elaterid (Coleoptera).</a> Canadian Journal of Zoology. 55, 569-578 (1977).</li><li>Shanbhag, S., M&#252;ller, B., Steinbrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atlas+of+olfactory+organs+of+Drosophila+melanogaster:+1,+Types,+external+organization,+innervation+and+distribution+of+olfactory+sensilla.">Atlas of olfactory organs of Drosophila melanogaster: 1, Types, external organization, innervation and distribution of olfactory sensilla.</a> International Journal of Insect Morphology and Embryology. 28, 377-397 (1999).</li><li>Tarumingkeng, R. C., Coppel, H. C., Matsumura, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+ultrastructure+of+the+antennal+chemoreceptors+and+mechanoreceptors+of+worker+Coptotermes+formosanus+Shiraki.">Morphology and ultrastructure of the antennal chemoreceptors and mechanoreceptors of worker Coptotermes formosanus Shiraki.</a> Cell Tissue Res. 173, 173-178 (1976).</li><li>Zacharuk, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+function+of+insect+chemosensilla.">Ultrastructure and function of insect chemosensilla.</a> Annual Review of Entomology. 25, 27-47 (1980).</li><li>Li, Y. Z., Zhong, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+detergents+and+floating+carriers+for+treating+potato+golden+nematode+cysts+to+improve+the+original+appearance+of+electron+microscopy.">Screening of detergents and floating carriers for treating potato golden nematode cysts to improve the original appearance of electron microscopy.</a> Plant quarantine. 8, 72-75 (1994).</li><li>Marzio, L. D., Marianecci, C., Petrone, M., Rinaldi, F., Carafa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+pH-sensitive+non-ionic+surfactant+vesicles:+comparison+between+tween+21+and+tween+20.">Novel pH-sensitive non-ionic surfactant vesicles: comparison between tween 21 and tween 20.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 82, 18-24 (2011).</li><li>Ren, L. L., Wu, Y., Shi, J., Zhang, L., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+morphology+and+sensilla+ultrastructure+of+Tetrigus+lewisi+Cand&#232;ze+(Coleoptera:+Elateridae).">Antenna morphology and sensilla ultrastructure of Tetrigus lewisi Cand&#232;ze (Coleoptera: Elateridae).</a> Micron. 60, 29-38 (2014).</li><li>Ren, L., Shi, J., Zhang, Y., Luo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennal+morphology+and+sensillar+ultrastructure+of+Dastarcus+helophoroides+(Fairmaire)+(Coleoptera:+Bothrideridae).">Antennal morphology and sensillar ultrastructure of Dastarcus helophoroides (Fairmaire) (Coleoptera: Bothrideridae).</a> Micron. 43, 921-928 (2012).</li><li>Teng, X. H., Liu, X. L., Xie, G. Y., Tang, Q. B., Li, W. Z., Zhao, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+distribution+of+ovipositor+sensilla+of+female+Helicoverpa+armigera+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Morphology and distribution of ovipositor sensilla of female Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae).</a> The 11th Henan Plant Protection Society, the 10th Henan Insect Society, and the 5th Member Congress and Academic Symposium of Henan Plant Pathology Society. , 138-142 (2017).</li><li>Yang, R., Zhang, L. N., Fan, J. W., Wang, J. L., Fang, K. F., Yu, T. Q., Wang, S. H., Du, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+specimens+for+scanning+electron+microscopy.">Insect specimens for scanning electron microscopy.</a> Journal of Beijing University of Agriculture. 29, 33-36 (2014).</li><li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Zhang, L., Wang, R., Yu, Y., Lu, P. F., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+and+distribution+of+sensilla+on+the+maxillary+and+labial+palps+of+Chlorophorus+caragana+(Coleoptera:+Cerambycidae).">Ultrastructure and distribution of sensilla on the maxillary and labial palps of Chlorophorus caragana (Coleoptera: Cerambycidae).</a> Journal of Morphology. 279, 574-588 (2018).</li><li>Harrison, J. D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+preparing+adult+beetles+(Coleoptera)+for+light+and+scanning+electron+microscopy.">Cleaning and preparing adult beetles (Coleoptera) for light and scanning electron microscopy.</a> African Entomology. 20, 395-401 (2012).</li><li>Xiao, Y., Liu, W., Wang, Y., Zuo, Y. X., Hu, R., Li, T. T., Cui, Z. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+methods+of+biological+sample+preparation+for+scanning+electron+microscope.">Drying methods of biological sample preparation for scanning electron microscope.</a> Research and Exploration Laboratory. 32, 46-53 (2013).</li><li>Graef, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Conventional Transmission Electron Microscopy. , 1 (2003).</li></ol>

Bu makalede, odunböceği için tarama ve iletim elektron mikroskobu için bir numune hazırlama şeması sunulmuştur. Böcek ekini temsili bir çalışma konusu olarak kullanarak, geleneksel numune hazırlama yöntemlerine göre çeşitli iyileştirmeler gösterdik.
Katı yüzeyden ayrılan sıvı yağ, nesnenin yüzeyinde yeniden depolamayı azaltmak için yıkama ortamına iyi dağılabilen ve askıya alınabilen küçük damlacıklara emülsifiye edilir. Yüzey aktif madde yıkama perform...

Taramalı elektron mikroskobu birçok morfoloji çalışmalarında önemli bir araçtır, SEM yüzey yapıları gösterir1,2. İletim elektron mikroskobu'nun cazibesi, hücre mimarisinden organellerin ultrayapısına, makromoleküler komplekslerin ve proteinlerin yapısına kadar nanometre ölçeğinde çok çeşitli biyolojik yapıları incelemek için kullanılabilmedir. TEM iç yapılarıgösterir 3,4,5.
Coleoptera yaklaşık 182 aile ve 350.000 tür de dahil olmak üzere böceklerin en büyük grubudur. Coleopteran böceklerin çoğu, özellikle odun böceği, bitkilerle beslenirler, bunların çoğu ormanların ve meyve ağaçlarının önemli zararlılarıdır,ağaçlarayıkıcı zarar lar ve 6. Şu anda, kimyasal ekoloji teorisine dayalı zararlıların önleme ve kontrol popülasyonu artan ilgi almış7. Verimli, düşük toksik, kirlilik içermeyen feromon kontrol yöntemleri etkili bir yol haline gelmiştir8. Böceklerin sensilla morfolojisi ve ultrayapı incelenmesi böcek kimyasal ekolojisi araştırmalarının önemli bir parçasıdır. Tarama ve iletim elektron mikroskobu (SEM ve TEM, sırasıyla) morfolojisi ve iç anatomisi çalışmada büyük etkisi için kullanılır. Ancak, elektron mikroskobu (EM) için böcek örneklerinin hazırlanması sırasında, gözlem alanının nesnelliği ve orijinalliği etkilenebilir9. Genel olarak, böceklerin SEM örnek hazırlanması temizlik, doku fiksasyonu, dehidratasyon, metatez, kurutma ve püskürtme kaplamagerektirir 10. Hangi woodboring böceği canlı karmaşık ortam nedeniyle, vücut yüzeyi genellikle çeşitli kirleticiler ve uzantıları genellikle çok ince uzun sensilla veya kıllar var. Özellikle, bazı woodborers doğrudan alanında toplanan laboratuvar yetiştirme, mevcut değildir ve daha sonra tazelik sağlamak için sıvı sabitleme koymak ve daha sonra laboratuvarda yıkanır. Eğer numune önce sabitlenir ve yıkanırsa, glutaraldehit numuneye güçlü bir şekilde sabitlediği için enkazı çıkarmak çok daha zordur. Tween 20 bir yüzey aktif madde11,12,13,14, hangi yıkama işleminde önemli bir rol oynar, su yüzey gerilimini azaltmak ve çamaşır yüzeyinde su ıslaklığını artırmak da dahil olmak üzere. Bu çalışmada, Sıvının yüzey gerilimini azaltmak ve kirin, vücut yüzeyini SEM'de temiz yapan odun böceğinin vücut yüzeyine birikmesini önlemek için sabitleme solüsyonuna ve PBS temizleme solüsyonuna Tween 20 eklenmiştir.
TEM kullanılarak, böceklerin farklı organları üzerinde sensilla içlerindeki açık yapıları ortaya çıkarmak için dilimlenebilir, böylece sensilla fonksiyonları analiz için bir temel sağlar. Ne zaman konu böcek, woodboring böceği gibi, büyük, ve vücut duvarı sclerotization önemli bir derecesine sahip, bu nedenle fiksatif tam böcek vücut içinde organ dokuları doygunluk olmayabilir. Tween 20 kirin dağılım ve süspansiyon kapasitesini artırabilir. Bu çalışmada, Tween 20 fiksatif woodboring böceğiböcek vücut duvarına fiksatif sıvı penetrasyon geliştirmek için eklendi, epidermi deformasyon ve çöküşü kaçınarak11,12,13. Buna ek olarak, genel dilimleme teknolojisini kullanarak, doğru sensilla farklı bulmak zordur, bazı küçük sensilla için özellikle15. Geleneksel TEM numune hazırlamasına dayanan bu çalışma, gömülü bloktaki böcek sensillasının konumunu belirlemek için floresan mikroskopi ve SEM'i birleştirerek dilimleme doğruluğunu artırabilmektedir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical lens</td>
			<td>Chongqing Auto Optical 
			limited liability company</td>
			<td>1425277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon adhesive tape</td>
			<td>SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.</td>
			<td>7311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon tetrachloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids</td>
			<td>GilderGrids</td>
			<td>G300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sinopharm group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>10039-32-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding molds</td>
			<td>Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>111-30-8</td>
			<td>Anhydrous EM Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isophorone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78-59-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>512-26-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monobasic sodium phosphate</td>
			<td>Its group chemical reagent co., LTD</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective micrometer</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>0-001-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>541-09-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>1998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Gillette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Spurr</td>
			<td>ERL4221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Lianhui</td>
			<td>GB/T19001-2008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>S-3400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel desiccant</td>
			<td>Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd.</td>
			<td>112926-00-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td>Martol</td>
			<td>G1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter ion instrument</td>
			<td>Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>E-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EZ4 HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Tianjin Damao Chemical Reagent</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>UC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>GT Sonic</td>
			<td>GT-X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>6159-44-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation method of scanning and transmission electron microscope for the appendages of woodboring beetle

Bu rapor, elektron mikroskobu gözlemlerinin her iki tip elektron mikroskobu için de chlorophorus caragana Xie & Wang (2012) adlı ekinin hazırlanmasıyla ortaya çıkan tarama ve iletim elektron mikroskobu gözlemlerini tanımlamıştır. Taramalı elektron mikroskobu (SEM) numune hazırlama protokolü örnek kimyasal fiksasyon, bir dizi etanol banyosunda dehidratasyon, kurutma ve püskürtme kaplamaya dayanıyordu. Fiksatif ve yıkama çözeltisine Tween 20 (Polioksietilen sorbitan laurate) eklenerek, odun böceğinin böcek gövde yüzeyi SEM'de daha temiz bir şekilde yıkandı. Bu çalışmanın iletim elektron mikroskobu (TEM) örneklem hazırlama, fiksasyon, etanol dehidratasyonu, reçine gömme, floresan mikroskopi ile konumlandırma, kesit ve boyama gibi bir dizi adımı içeriyordu. Tween ile Fixative 20 woodboring böceğiböcek vücut duvarı daha kolay Tween 20 olmadan olurdu daha nüfuz sağladı, ve daha sonra daha iyi vücutta ki doku ve organları sabit, böylece böcek sensilla ultrastructures net iletim elektron mikroskop gözlemler ilerlemiş. Bu hazırlık bir sonraki adım hedef sensilla konumlandırma hassasiyetini artırmak için floresan mikroskopisi kullanarak reçine blok gömülü örnekböcek sensilla konumlarını belirlemek oldu. Bu gelişmiş dilimleme doğruluğu.

Tween 20 ile temizlik ve fiksatif çözelti kullanılarak, Daha temiz SEM görüntü Tween 20 olmadan gözlenmiştir(Şekil 3). Tween 20 sabitleme çözeltisi dokuiçine glutaraldehit sabitleme çözeltisi nüfuz etti. Mikrotübül yapısı açıkça görüldü. Örneğin iç yapısının TEM görüntüsü Tween 20 olmadan bulanıklaşmıştır (Şekil 4).
<img alt="Fig...

Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle at JoVE.com

Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

Çalışmada böcek sensillasının ultrayapısını gözlemlemek amacıyla tarama ve iletim elektron mikroskobu (sırasıyla SEM ve TEM) örnek hazırlama protokolü sunulmuştur. SEM.Floresan mikroskopide örnek deformasyonu önlemek için fiksatife ara 20 eklenmiştir.

Woodboring Böceği uzantıları için Tarama ve İletim Elektron Mikroskobu Örnek Hazırlama Yöntemi

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

Woodboring böceği vücut yüzeyi sem her zaman serttir. Tween-20 fiksatif ve yıkama çözeltisi içine eklenir. TEM'de odun böceğinin vücut yüzeyi olan Tween-20, vücut duvarına fiksatif nüfuzu artırabilir ve vücuttaki doku ve organı daha iyi düzeltebilir.Floresan mikroskop dilimleme doğruluğunu artırmak için yararlıdır. Bu teknik, vücut yüzeyinin yıkanması ve odun böceğinin vücut duvarına nüfuz etmek için yararlıdır. Böylece SEM ve TEM vizyonunu temizler.Floresan mikroskop TEM'de dilimleme doğruluğunu artırmak için yararlıdır. Prosedürü gösteren Zhang Yanru, bizim laboratuvardan bir lisansüstü öğrenci olacaktır. Chlorophorus caragana'nın yaşadığı bir bölgede, huni tuzağı nda isofhorone gibi bitki çekicilerle yemlenmiş alan tuzakları yerleştirin.Tuzaklar içine woodboring böcek yetişkin çekin. Yetişkin Chlorophorus caragana temiz organları korumak 0.1 pH pBS başına mol 7.2, hacim glutaraldehit tarafından% 2.5 ağırlık, ve hacim Tween-20 tarafından% 0.06 hacim. Örneği üç gün boyunca dört santigrat derecede düzeltin.Koruma sıvısından gövdeleri çıkarın ve PBS'de durulanın. Bir stereo mikroskop altında, uzantıları kaldırmak ve ultrasonik pbst 40 kilohertz onları temizlemek için forceps kullanın. 100 saniye boyunca temizlendikten sonra, temiz olup olmadığını kontrol etmek için numuneyi mikroskoba aktarın.Hasar görmesini önlemek için 400 saniyeden uzun süre temizlemeyin. Daha sonra dehidratasyon gerçekleştirmek için 20 dakika boyunca konsantrasyonları bir dizi etanol örnekleri batırın. Dehidratasyon dan sonra, bir stereo mikroskop altında, ayrı ayrı üç gözlem yüzeyleri düzeltmek için karbon çift taraflı yapışkan bant kullanın, dorsal, ventral, ve lateral, saplamalar üzerine.Tüm görüntüleme yüzeylerinin temiz ve kontaminasyondan arındırılmış olduğundan emin olun. Örnek aşamayı 48 saat boyunca silika jel kurutucu içeren bir Petri kabına yerleştirin. Daha sonra, bir iyon püskürtme aleti üzerinde, ana valfi açık konuma döndürün, numune haznesinin kapağını çıkarın ve numuneyi hazneye koyun.Güç düğmesini açın ve hazır ışığın yandığından emin olun. Püskürtme süresini 45 saniye, kaplama kalınlığını ise 70.875 angstrom olarak ayarlayın. Mekanik pompa vakum kadran indeksi yedinin altına düştüğünde, deşarja basın ve platin püskürtmeye başlayın.İşlemin sonunda, güç kaynağını kapatın ve numuneyi odadan alın. Sprey film kalınlığı D anvraz eşittir K kez V kez T.K fışkıran metal ve gaz tarafından belirlenen bir sabittir. Ben miliamperdeki plazma akışı, V ise kilovoltlarda uygulanan voltaj ve T saniye cinsinden zaman.Örneği içeren saplamayı SEM'nin aşamasına takın. Örnek saplama ile örnek aşamasının iyi bir görüntü sağlamak için yeterli yüksekliğe sahip olduğundan emin olun. SEM yazılımını açın ve 20 kilovolt'dan başlayarak istediğiniz çalışma gerilimini seçin.Yetişkin Chlorophorus caragana uzantıları elde ettikten sonra, üç saat boyunca bir ultrasonik banyoda PBST örnekleri yıkayın ve daha sonra 25 derece santigrat bir saat boyunca PBS hacim osmiyum tetroksit tarafından% 1 ağırlık onları düzeltmek. 50%60%70%85 %95 %100 ve oda sıcaklığında hacim etanol ile %100 hacimli 20 dakikalık ardışık tedaviler kullanarak numuneleri dehydrate. Forceps ile, düz bir gömme kalıp ısıtmalı rezorin uygulayın ve rezorin örnekleri gömmek.Numunenin plakanın alt kısmında olduğundan ve gömme oluğun kenarına mümkün olduğunca yakın yerleştirildiğinden emin olun. Etiket ve daha sonra 72 saat boyunca 60 santigrat derece numune içeren plaka kuluçka. Kuluçkadan sonra, kuvözden plakayı çıkarın ve resenin polimerize olduğunu doğrulayın.Örnek katıladıktan sonra, her reçine bloğunu floresan mikroskobun altına yerleştirin, mikroskobun floresan ışık kaynağını hareket ettirerek numuneyi yukarıdan gelen mavi ışıkla ışınlayın ve fotoğraflayın. Resin bloğundaki sensillanın açıkça görünür olduğundan emin olun. Sensillayı hedeflemek için rezorb bloğunun kenarı ile hedef sensörü arasındaki mesafeyi ölçün.Palps SEM görüntü bakın ve kabaca hedef reseptöre yakın bir jilet ile rezorin bloğu kesti. Daha sonra, mavi ışık floresan mikroskopisi altında, sensilla net bir şekilde gözlenen böylece yukarıdan ışık kaynağı ayarlayın. Floresan mikroskobu aşamasına objektif mikrometreyi ekleyin.Kabaca kesilmiş rezorb bloğunu fotoğraflayın ve ImageJ kullanarak hedef ile resenin kenarı arasındaki mesafeyi ölçün. Reçineler numunesini ultramikrotome yerleştirin ve hedef konuma ulaşına kadar 50 ila 60 nanometre kalınlığında kesin. Petri kaplarında formvar kaplı 100 örgü bakır ızgaralar üzerine bölümleri monte edin.Oda sıcaklığında uranyl asetat doymuş filtrelenmiş çözeltisi ile ızgaraları lekeleyin. Işık kaynaklı çökeltileri engellemek için boyama sırasında bölümleri kapatın. 10 dakika boyunca leke.Bir duman başlık, iki kez% 50 metanol, sonra iki kez filtrelenmiş gazdan arındırılmış suda durulayın. Plastik Petri yemeklerinin karelerine hazırlanmış kurşun sitrat lekesi damlaları yerleştirin ve sekiz dakika boyunca oturun. Gazdan arındırılmış filtrelenmiş suda durulayın ve kurulayın.Izgaraları TEM makinesi içinde bir örnek aşamaya monte edin. Voltajı 80 kilovolt'a ayarlayın ve bölümleri inceleyin. Bu protokolde, Tween-20 ile temizlik ve fiksatif solüsyon kullanılarak, Tween-20 olmadan net bir SEM görüntüsü gözlenmiştir.Glutaraldehit sabitleme solüsyonunun dokuya nüfuz etmesini sağlayan Tween-20 sabitleme solüsyonu ile TEM görüntüsünde mikrotübül yapıları açıkça görülürken, Tween-20 olmadan hazırlanan numunenin iç yapısı bulanıktı. Maksiller palps üzerinde tip bir sensilla dal basiconica peg sürekli kesitsel görünümler dendritik kılıf dış dendritik segmentleri çevrili ve uç gözenek genişletilmiş gösterdi. Yedi dalsız dış dendritik segmentleri bir dış kavite ile çevrili iç reseptör lenf boşluğu içinde vardı.Boru gövdesi, her sensillar soket tabanındaki diğer dış dendritik segmentlerden dendritik kılıf ile ayrılmıştır. Siliyer bölgede, sekiz bipolar nöron varlığını gösteren farklı çaplarda sekiz dendrit tespit edildi. Bu teknik, tek hücreli kayıt veya yerinde hibridizasyon gibi sinirlerin işlevini daha fazla incelemek için kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Environment

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

Optimize Negatif Boyama: Elektron Mikroskobu ile Küçük ve Asimetrik Protein Yapısı incelenmesi için Yüksek verim Protokolü

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

Yalıtım için bir optimize Zenginleştirme Tekniği<em&gt; Arthrobacter</em&gt; Bakteriyofaj Türlerinin Toprak Numune İzolatlarının gelen

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Protocol for Measuring the Thermal Properties of a Supercooled Synthetic Sand-water-gas-methane Hydrate Sample

Bir süpersoğutmalı Sentetik Kum-su-gaz-metan hidrat Örnek Termal Özelliklerini Ölçmek İçin Protokol

Methane hydrates (MHs) are present in large amounts in the ocean floor and permafrost regions. Methane and hydrogen hydrates are being studied as future ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

VacuSIP, bir Geliştirilmiş INEX Yöntemi için<em&gt; In Situ</em&gt; Partikül Ölçümü ve Çözünmüş bileşikler Aktif Süspansiyon besleme üniteleri İşlenmiş

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Deniz Yüzey ve Numune Analizi Microplastics Örnekleme Protokolü

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Thermal Scanning Conductometry (TSC) as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

Thermal Scanning Conductometry TSC as a General Method for Studying and Controlling the Phase Behavior of Conductive Physical Gels

Eğitim ve iletken fiziksel aşama davranışını denetlemek için bir genel yöntem jelleri gibi Conductometry (TSK) tarama termal

The thermal scanning conductometry protocol is a new approach in studying ionic gels based on low molecular weight gelators. The method is designed to ...

On the Preparation and Testing of Fuel Cell Catalysts Using the Thin Film Rotating Disk Electrode Method

Hazırlık ve ince Film dönen Disk elektrot yöntemi kullanarak yakıt hücresi katalizörler test

We present a step-by-step tutorial to prepare proton exchange membrane fuel cell (PEMFC) catalysts, consisting of Pt nanoparticles (NPs) supported on a ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus Murayama, Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), ucuz, küçük ve kolayca inşa uçuş Mill kullanarak uçuş yeteneği ölçme

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

A Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

Bir döngü-aracılı izotermal amplifikasyon (lamba) tahlil hızlı teşhis edilmesi için kullanılan Bemisia tabaci

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

Cryo-scanning Electron mikroskop ile görselleştirilen Woody bitkilerde xylem su dağılımı

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...