Name: induction and characterization of pulmonary hypertension in mice using the hypoxia/su5416 model
Uploaded: 2020-06-03T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model at JoVE.com

이 작품은 미국 심장 협회 (AHA-17SDG337012 및 18IPA34170258)의 보조금에 의해 지원되었으며, 건강 NIH K01 HL135474에서 Y.S. O.B에 대한 국립 보건 원에서 도이치 헤르츠스티프퉁 (Deutsche Herzstiftung)에 의해 지원되었습니다.

동물 실험에 앞서 지역 기관 동물 관리 위원회의 승인을 받아야 합니다. 현재 실험은 마운트 시나이의 아이칸 의과 대학에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인 후 수행되었다.
1. PH 유도
<ol><li>준비<ol>
<li>연구를 시작하기 전에 실험 설계를 신중하게 계획하십시오. 마우스가 첫 번째 SU5416 주사와 동시에 저산소증을 받는지 확인하십시오. 저산소증/SU5416 방법을 사용?...

<ol>
	<li>Galie, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2015+ESC/ERS+Guidelines+for+the+diagnosis+and+treatment+of+pulmonary+hypertension:+The+Joint+Task+Force+for+the+Diagnosis+and+Treatment+of+Pulmonary+Hypertension+of+the+European+Society+of+Cardiology+(ESC)+and+the+European+Respiratory+Society+(ERS):+Endorsed+by:+Association+for+European+Paediatric+and+Congenital+Cardiology+(AEPC),+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation+(ISHLT).">2015 ESC/ERS Guidelines for the diagnosis and treatment of pulmonary hypertension: The Joint Task Force for the Diagnosis and Treatment of Pulmonary Hypertension of the European Society of Cardiology (ESC) and the European Respiratory Society (ERS): Endorsed by: Association for European Paediatric and Congenital Cardiology (AEPC), International Society for Heart and Lung Transplantation (ISHLT).</a> European Heart Journal. 37 (1), 67-119 (2016).</li><li>Stenmark, K. R., Meyrick, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+pulmonary+arterial+hypertension:+the+hope+for+etiological+discovery+and+pharmacological+cure.">Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure.</a> American Journal of Physiology-Lung Cell Molecular Physiology. 297 (6), 1013-1032 (2009).</li><li>Maarman, G., Lecour, S., Butrous, G., Thienemann, F., Sliwa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+review:+the+evolution+of+animal+models+in+pulmonary+hypertension+research;+are+we+there+yet.">A comprehensive review: the evolution of animal models in pulmonary hypertension research; are we there yet.</a> Pulmonary Circulation. 3 (4), 739-756 (2013).</li><li>Gomez-Arroyo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+overview+of+mouse+models+of+pulmonary+arterial+hypertension:+problems+and+prospects.">A brief overview of mouse models of pulmonary arterial hypertension: problems and prospects.</a> American Journal of Physiology-Lung Cell Molecular Physiology. 302 (10), 977-991 (2012).</li><li>Ciuclan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+murine+model+of+severe+pulmonary+arterial+hypertension.">A novel murine model of severe pulmonary arterial hypertension.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 184 (10), 1171-1182 (2011).</li><li>Taraseviciene-Stewart, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+the+VEGF+receptor+2+combined+with+chronic+hypoxia+causes+cell+death-dependent+pulmonary+endothelial+cell+proliferation+and+severe+pulmonary+hypertension.">Inhibition of the VEGF receptor 2 combined with chronic hypoxia causes cell death-dependent pulmonary endothelial cell proliferation and severe pulmonary hypertension.</a> FASEB Journal. 15 (2), 427-438 (2001).</li><li>Vitali, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sugen+5416/hypoxia+mouse+model+of+pulmonary+hypertension+revisited:+long-term+follow-up.">The Sugen 5416/hypoxia mouse model of pulmonary hypertension revisited: long-term follow-up.</a> Pulmonary Circulation. 4 (4), 619-629 (2014).</li><li>Breen, E. C., Scadeng, M., Lai, N. C., Murray, F., Bigby, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+magnetic+resonance+imaging+for+in+vivo+quantification+of+pulmonary+hypertension+in+the+Sugen+5416/hypoxia+mouse.">Functional magnetic resonance imaging for in vivo quantification of pulmonary hypertension in the Sugen 5416/hypoxia mouse.</a> Experimental Physiology. 102 (3), 347-353 (2017).</li><li>Wang, Z., Schreier, D. A., Hacker, T. A., Chesler, N. 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B., Karpati, G., Carpenter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lectin+histochemistry+of+human+skeletal+muscle.">Lectin histochemistry of human skeletal muscle.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 29 (4), 542-546 (1981).</li><li>Bueno-Beti, C., Hadri, L., Hajjar, R. J., Sassi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sugen+5416/Hypoxia+Mouse+Model+of+Pulmonary+Arterial+Hypertension.">The Sugen 5416/Hypoxia Mouse Model of Pulmonary Arterial Hypertension.</a> Methods in Molecular Biology. 1816, 243-252 (2018).</li><li>Colvin, K. L., Yeager, M. 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W., Rosenbaum, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+toxicology+of+dimethyl+sulfoxide+(DMSO).">The toxicology of dimethyl sulfoxide (DMSO).</a> Headache. 6 (3), 127-136 (1966).</li><li>Jacob, S. W., Wood, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethyl+sulfoxide+(DMSO).+Toxicology,+pharmacology,+and+clinical+experience.">Dimethyl sulfoxide (DMSO). Toxicology, pharmacology, and clinical experience.</a> American Journal of Surgery. 114 (3), 414-426 (1967).</li><li>Abraham, D., Mao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Pressure-Volume+Loop+Analysis+Using+Conductance+Catheters+in+Mice.">Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice.</a> Journal of Visualized Experiment. (103), 52942 (2015).</li><li>Ma, Z., Mao, L., Rajagopal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+Characterization+of+Rodent+Models+of+Pulmonary+Arterial+Hypertension.">Hemodynamic Characterization of Rodent Models of Pulmonary Arterial Hypertension.</a> Journal of Visualized Experiment. (110), 53335 (2016).</li><li>Townsend, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pressure+Volume+Loops+in+the+Mouse.">Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse.</a> Journal of Visualized Experiment. (111), 53810 (2016).</li><li>Penumatsa, K. C., Warburton, R. R., Hill, N. S., Fanburg, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CrossTalk+proposal:+The+mouse+SuHx+model+is+a+good+model+of+pulmonary+arterial+hypertension.">CrossTalk proposal: The mouse SuHx model is a good model of pulmonary arterial hypertension.</a> Journal of Physiology. 597 (4), 975-977 (2019).</li></ol>

이 프로토콜은 만성 저산소증과 SU5416 주입 (Hypoxia/SU5416)18의두 가지 병리학 적 자극을 결합하여 마우스에서 PH를 모델링하는 방법을 설명합니다. 이 마우스 모델을 인간 PH 조건과 상호 연관시키려면 표 1에표시된 현재 PH 분류를 필연적으로 살펴봐야 합니다. 거의 모든 형태의 PH는 내피 및 부드러운 근육 세포의 폐 혈관 수축 및 비정상적인 증식을 특징으로합니다. 이?...

폐 고혈압(PH)은 병리학적 상태이며, 오른쪽 심장 카테터화1,,2에의해 평가되는 바와 같이, 휴식 시 25mm Hg를 초과하는 평균 폐 동맥(PA) 압력에 의해 정의된다. PH로 이어질 수 있는 다양한 질병이 있습니다. PH 관련 조건을 구성하기 위해 여러 분류 시스템이 개발되었습니다. 현재 임상 분류는 5개의 다른 그룹1에서다중 PH 관련 질병을 분류합니다. 이러한 구분은 다양한 환자 그룹이 임상 발표, 병리학, 예후 및 치료에 대한 반응2에서다른 질병을 가지고 있기 때문에 중요합니다. 표 1은 각 질병의 기본적인 조직 병리학적 특성으로 보완된 현재 분류를 요약합니다.
<img alt="Table 1" src="/files/ftp_upload/59252/59252tbl1.jpg"> 표 1: PH의 임상 분류에 대한 개요와 그룹 내의 주요 조직 병리학 적 특징. 모델링 PH를 위한 저산소증/SU5416 프로토콜의 적합성. 이 테이블은19에서수정되었습니다. PH: 폐 고혈압, PAH: 폐 동맥 고혈압
PH 관련 질병의 처리에 있는 중요한 어드밴스에 에도 불구하고, PH는 아직도 20%와 80% 사이에서 구역 수색하는 3 년 사망률과 함께 치료없이 남아있습니다. 이것은 PH의 근본적인 기계장치를 이해하기 위한 필수적필요를 나타내고, 그 후에, 진행을 방지하고, 느리게 하고, 질병을 치료하기 위하여 새로운 치료의 발달을 나타냅니다. 동물 모델은 이 범위에 매우 중요합니다. 현재 PH를 연구하기 위해 다양한 모델이 존재합니다. 관심있는 독자는이 주제에 대한 우수한 리뷰를참조2,,3,,4. PH로 이어지는 다양한 질병을 염두에 두고, 인간 PH의 다양한 조건이 한 동물 모델에서 완벽하게 재구성될 수 없다는 것은 명백합니다. 사용 가능한 동물 모델은 i) 단일 히트, ii) 투히트, iii) 녹아웃, iv) 과발현 모델3로분류될 수 있다. 단일 히트 모델에서 PH는 단일 병리학 적 자극에 의해 유도되는 반면, 2 히트 모델은 두 개의 병리학적 자극을 더 심한 PH를 유도하는 목표와 결합하여 복잡한 인간 질병을 보다 밀접하게 모방합니다. 이외에도, 몇몇 자극은 동물의 종 및 유전적 배경에 의존하는 PH 모델링차이귀착됩니다 4.
가장 일반적으로 사용되는 고전적인 PH 설치류 모델 중 하나는 만성 저산소증 모델2입니다. 저산소증은 여러 동물 종뿐만 아니라 인간에서 PH를 유도하는 것으로 알려져있다. 저산소증은PH(표 1)에대한 생리학적 자극이라는 장점이 있다. 그러나 설치류에서 PH를 유도하는 데 사용되는 저산소증의 정도는 인간보다 훨씬 더 심각하지만 단일 모욕 (저산소증)은 혈관 리모델링의 온화한 형태로만 이어집니다. 이것은 인간 적인 질병의 엄격을 모방하지 않습니다. 두 번째 히트의 추가, PH 유도에 대한 추가 자극, 유망한 결과를 보여 주었다: 저산소 자극과 결합 된 설치류에 화합물 SU5416의 주입은 더 심각한 PH 표현형2,,5,,6을유도한다. SU5416은 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체-2의 억제제이다. It blocks the VEGF receptors and leads to endothelial cell apoptosis. 저산소 조건하에서, 이것은 세포증 저항하는 내피 세포의 부분 집합의 증식을 자극합니다. 또한, SU5416은 원활한 근육 세포 증식으로 이어집니다. 이러한 효과의 조합은 폐 순환의 병리학적인 혈관 리모델링을 초래하고 높은 PA 압력 및 오른쪽 심실 리모델링2,,5,,7로이어집니다. 모델은 쥐6에서 처음 기술되었고 나중에 마우스4,,5,,7에적용되었다. 마우스 모델은 쥐에 비해 덜 심한 혈관 리모델링을 나타낸다. 더욱이, 노목기로 돌아왔을 때, PH는 쥐에서 계속 진행되고, 쥐에서는 부분적으로 가역적이다.
다음 프로토콜은 Hypoxia/SU5416 메서드(계획, 타임라인, 실행)를 사용하여 마우스에서 PH모델링을 위한 모든 단계를 설명합니다. 추가적으로, 모델의 특성화는 이 프로토콜에 기술됩니다: 기능적으로 (개방된 가슴 기술을 사용하여 오른쪽 심실(RV) 압력을 침습적으로 측정함으로써), 형태 (좌우 심실을 해부하고 계량하여), 뿐만 아니라 조직학적으로 (폐 혈관 리모델링, 오른쪽 심실 심근 경전경을 평가하여).
이 프로토콜에 설명된 모든 단계와 메서드는 모든 경험 수준에서 조사관에 의해 쉽게 구현될 수 있습니다. 오픈 가슴 기술을 이용한 RV의 기능적 측정(here 편설명)은 현장에서 금본위제 방법이 아니지만, 경험이 부족한 실험가에서도 빠르게 학습하고 정확하게 재현할 수 있다는 장점이 있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:731px;" width="730">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Acetic acid glacial</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">3738.1</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Acetone, Histology Grade</td>
			<td style="width:231px;">The Lab Depot</td>
			<td style="width:119px;">VT110D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">ADVantage Pressure-Volume System</td>
			<td style="width:231px;">Transonic</td>
			<td style="width:119px;">ADV500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Bouin&#39;s solution</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">Ht10132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Cautery System</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Connection tubing and valves</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td style="width:231px;">Covidien</td>
			<td style="width:119px;">8884541300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Coverslips, 24 x50 mm</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">1871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Data Acquisition and Analysis</td>
			<td>Emka</td>
			<td style="width:119px;">iox2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Direct Red 80</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">365548-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">DMSO (Dimethyl Sulfoxide)</td>
			<td style="width:231px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">276855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Dry ice</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Dumont # 5 forceps</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11251-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Dumont # 7 Fine Forceps</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Embedding molds</td>
			<td style="width:231px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E-6032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Eosin Solution Aqueous</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">HT110216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:319px;">Ethanol, laboratory Grade</td>
			<td style="width:231px;">Carolina Biological Supply Company</td>
			<td style="width:119px;">861285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fast Green FCF</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F7252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fine scissors</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:231px;">invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">16210-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Heating pad&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Gaymar&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T/Pump</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Hematoxylin 2</td>
			<td style="width:231px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">7231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Hypoxic chamber</td>
			<td style="width:231px;">Biospherix</td>
			<td style="width:119px;">A30274P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Induction chamber</td>
			<td style="width:231px;">DRE Veterinary</td>
			<td>12570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:319px;">Intubation catheter (i.v. catheter SurFlash (20 G x 1&#34;) )</td>
			<td style="width:231px;">Terumo&#160;</td>
			<td>SR*FF2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Iris scissors</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:319px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:231px;">Baxter</td>
			<td style="width:119px;">NDC-10019-360-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Isoflurane vaporizer</td>
			<td style="width:231px;">DRE Veterinary</td>
			<td>12432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Mice (C57BL/6)</td>
			<td style="width:231px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Needles 25 G x 5/8&#34;</td>
			<td style="width:231px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">OCT</td>
			<td style="width:231px;">Tissue Tek</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">PBS (Phosphate Buffered Saline)</td>
			<td style="width:231px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Piric Acid- Saturated Solution 1.3 %</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P6744-1GA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Pressure volume catheter</td>
			<td style="width:231px;">Transonic</td>
			<td style="width:119px;">FTH-1212B-4018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Retractor</td>
			<td style="width:231px;">Kent Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SURGI-5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Static oxygen Controller ProOx 360</td>
			<td style="width:231px;">Biospherix</td>
			<td style="width:119px;">P360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">SU 5416</td>
			<td style="width:231px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S8442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Surgical Suture, black braided silk, 5.0</td>
			<td style="width:231px;">Surgical Specialties Corp.&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SP116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Surgical tape</td>
			<td style="width:231px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Syringe 10 ml</td>
			<td style="width:231px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">303134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Syringes with needle 1 ml</td>
			<td style="width:231px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Sytox Green Nuclein Acid Stain</td>
			<td style="width:231px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S7020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Tenotomy scissors</td>
			<td style="width:231px;">Pricon</td>
			<td style="width:119px;">60-521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Toluol</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">9558.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Ventilator&#160;</td>
			<td style="width:231px;">CWE</td>
			<td style="width:119px;">SAR-830/P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">WGA Alexa Fluor&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">W11261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Xylene</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction and characterization of pulmonary hypertension in mice using the hypoxia/su5416 model

폐 고혈압 (PH)은 오른쪽 심장 카테터화에 의해 평가된 바와 같이, 휴식시 25mm Hg를 초과하는 평균 폐 동맥 압력에 의해 정의된 병리학적 상태입니다. 질병의 광범위 한 스펙트럼 PH로 이어질 수 있습니다., 그들의 병 인에서 다른, 조직 병리학, 임상 발표, 예 후, 그리고 치료에 응답. 지난 몇 년 동안 상당한 진전에도 불구하고, PH는 치료되지 않은 질병으로 남아 있습니다. 근본적인 기계장치를 이해하는 것은 새로운 치료의 발달을 위한 도로를 포장할 수 있습니다. 동물 모델은 이 목표를 달성하기 위한 중요한 연구 도구입니다. 현재, PH를 다시 수상에 사용할 수 있는 몇 가지 모델이 있다. 이 프로토콜은 2개의 적중 마우스 PH 모델을 설명합니다. PH 개발을 위한 자극은 저산소증및 SU5416의 주사, 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 길항제이다. Hypoxia/SU5416의 개시 3 주 후에, 동물은 인간 PH에서 관찰된 조직병리학적인 변경을 모방하는 폐 혈관 리모델링을 개발합니다 (주로 그룹 1). 폐 순환에서 혈관 리모델링은 오른쪽 심실(RV)의 리모델링을 초래한다. RV 압력을 측정하기 위한 절차(오픈 가슴 방법을 사용하여), RV의 형태 분석(심장 심실을 해부하고 계량하여) 및 리모델링의 조직학적 평가(RV 심근세포 비대및 섬유증을 평가하여 혈관 리모델링 및 심장을 평가하여 폐 모두)가 상세히 설명되어 있습니다. 이 프로토콜의 장점은 야생 유형과 유전자 변형 마우스 모두에서 응용 프로그램의 가능성, 상대적으로 쉽고 저렴한 구현, 관심있는 질병의 빠른 개발 (3 주). 이 방법의 한계는 마우스가 심각한 표현형을 개발하지 않고 PH는 노목시아로 돌아오면 되돌릴 수 있다는 것이다. 예방, 뿐만 아니라 치료 연구, 쉽게 이 모델에서 구현될 수 있습니다., 고급 기술의 필요 없이 (외과 설치류 모델 반대).

이 프로토콜에서, 우리는 마우스에서 PH를 유도하기위한 저산소증 / SU5416 모델의 생성을 자세히 설명합니다. 또한 관찰 기간이 끝날 때 폐 혈관 및 심장 평가를 수행하기 위해 필요한 모든 단계를 자세히 설명합니다.
이 모델에 대한 실험 설계에 대한 개요는 도 1A 13,13,14에나와 있다. 마우스는 노르...

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Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model (Video) | JoVE

이 프로토콜은 저산소증에 노출및 VEGF 수용체 길항제의 주입에 근거하여 마우스에 있는 폐 고혈압 (PH)의 유도를 기술합니다. 동물은 프로토콜의 개시 후에 PH 및 오른쪽 심실 (RV) 비대 3 주를 개발합니다. 모델의 기능적 및 형태특성도 표시됩니다.

저산소증/SU5416 모델을 사용하여 마우스에서 폐 고혈압의 유도 및 특성화

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...

이 프로토콜은 폐 고혈압을 유도하고 오른쪽 심실의 기능적 측정을 수행하는 데 사용할 수 있습니다. Sugen 저산소증 모델은 구현하기 쉽고 유도 후 2 ~ 3 주 이내에 폐 고혈압의 특징 중 일부를 다시 회수 할 수 있습니다. 이 모형을 사용하여, 우리는 질병의 발달에 관련시킨 새로운 통로를 확인할 수 있습니다.우리는 새로운 표적을 확인하고 그들의 치료 잠재력을 시험할 수 있습니다. 유도 절차를 시작하기 전에 저산소 챔버 근처의 질소 탱크를 확보하고 산소 컨트롤러를 10 %의 산소 지점에서 설정하십시오. 다음으로, 새로 준비된 SU5416 용액을 25 게이지 바늘을 장착한 1밀리리터 주사기에 적재하고 주입할 첫 번째 동물을 수동으로 억제합니다.마우스에 의한 잠재적인 물린 부상을 피하기 위하여 머리의 뒤쪽을 단단히 붙잡도록 하는 등뼈에 평행하게 텐트를 형성하기 위하여 피부를 붙잡습니다. 바늘을 피부에 평행하게 접을 때 측면 측면에 피하로 삽입하고 주사기 내용물의 100 마이크로리터를 전달합니다. 10초 후 바늘을 철회하고 동물을 케이지로 돌려놓습니다.모든 동물이 주입되었을 때, 통풍이 좋은 저산소증 챔버에 마우스를 놓습니다. 저산소증 노출의 경우, 챔버에는 산소 수준을 측정하고 3일마다 20분 간격으로 챔버를 열어 음식과 물을 청소하고 추가하는 산소 센서가 장착되어 있는지 확인하십시오. 매일 동물을 검사하여 스트레스의 징후를 검사하고 3주 연속 SU5416 주사를 반복합니다.압력 측정 절차를 시작하기 전에 Y 튜브 커넥터를 준비하고 수동 모드를 사용하여 인공호흡기의 기능을 확인합니다. 기압을 피하기 위해 피의 자식기압을 1센티미터 미만으로 설정하고 호흡 속도를 분당 110호흡으로 설정합니다. 20 게이지 인트라바스칸 카테터를 잘라 내막 튜브를 만들고 압력 볼륨 제어 장치를 켭니다.데이터 수집 소프트웨어를 시작하고 37도 섭씨 수조에 PBS의 15 밀리리터 원심분리기 튜브에 압력 볼륨 카테터를 배치합니다. 그런 다음 제조업체의 프로토콜에 따라 카테터를 보정합니다. 가열 패드에 마우스를 놓고 체온 모니터링을 위해 직장 프로브를 배치합니다.다음으로, 마취 된 마우스에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인하고 목과 가슴 부위를 면도합니다. 수술 용 테이프로 마우스의 사지를 고정하고 내측 자궁 경부 피부에 1 센티미터 절개를합니다. 면 기울어진 어플리케이터를 사용하여, 기관의 근본적인 근육을 드러내기 위하여 parotid 및 감하성 타액 땀샘을 무뚝뚝하게 분리합니다.조심스럽게 기관을 완전히 노출하고 기관 연골 사이의 작은 절개를 만들기 위해 가위를 사용하여 근육을 잘라. 준비된 내트라큐어 튜브를 삽입하고 내트라바스 내 카테터의 금속 가이드를 제거합니다. 그런 다음 카테터를 인공호흡기에 연결하고 폐를 수동으로 부드럽게 팽창시켜 기관관 위치를 확인합니다.테이프로 위치를 고정합니다. 오른쪽 심실 압력 측정을 위해, xiphoid 과정과 상부 복부를 통해 1 센티미터 피부 절개를 하고 xiphoid에 단면중간 선에서 시작하고 조심스럽게 양쪽에 측면으로 이동, 가슴과 복부 벽 에 피부를 분리. 복강을 열고 다이어프램을 조심스럽게 자르고, 심장이나 폐를 다치게하지 않도록 주의하십시오.그리고 면 기울어진 어플리케이터를 사용하여 심낭을 부드럽게 제거합니다. 마우스 근처에 압력 카테터를 가져와 바늘이 장착 된 면 팁 어플리케이터를 사용하여 오른쪽 심실의 비정형 탈스부분에 찔린 상처를 만듭니다. 조심스럽게 압력 카테터로 바늘을 교체, 폐 동맥을 향한 팁과 오른쪽 심실의 방향에 평행 압력 카테터를 삽입.카테터의 올바른 위치를 보장하기 위해 압력 파 추적을 시청하십시오. 압력 신호가 안정화되면 호흡을 일시 중지하고 적어도 세 가지 측정을 얻습니다. 모든 측정값이 기록되면 카테터를 수조의 PBS 채워진 원심분리기 튜브로 조심스럽게 반환하십시오.여기서, 관찰 기간이 끝날 때 의대표적인 압력 곡선 및 오른쪽 심실 압력의 정량적 분석이 도시된다. 저산소증 과 SU5416 치료 후 리모델링 된 폐 동맥의 조직학적 분석은 노목 동물에 비해 내측 벽 두께의 증가를 나타낸다. 심근세포 비대증을 평가하기 위한 밀 배암 agglutinin 염색은 저산소증 과 SU5416 노출이 심근세포 크기와 오른쪽 심실 비대에서 현저한 증가를 초래한다는 것을 나타냅니다.또한, 풀턴 지수의 측정에 의한 오른쪽 심실 비대의 형태측정 평가는 저산소 동물의 오른쪽 심실 비대증의 증가를 확인한다. 이 연구의 결과에 부정적인 영향을 미칠 수 있기 때문에 기능 적 측정을 수행하는 것은 출혈을 방지하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜은 또한 약간의 수정으로 쥐에 있는 폐 고혈압을 유도하기 위하여 이용될 수 있습니다.특히, 쥐에 있는 단지 1개의 수겐 주사는 폐 고혈압을 유도하기 위하여 충분합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets

Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets (Video) | JoVE

증가 폐 동맥 박동 흐름 새끼 돼지의 저산소 폐 고혈압을 개선

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries (PA). These arteries are deformed, leading to right ventricular ...

연구

의학

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension and Assessment of Right Ventricular Function in the Piglet

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만성 혈전 색 전성 폐 고혈압과 돼지에서 마우스 오른쪽 심실 기능의 평가

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. ...

Hemodynamic Characterization of Rodent Models of Pulmonary Arterial Hypertension

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폐동맥 고혈압의 설치류 모델의 혈역학 특성

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a rare disease of the pulmonary vasculature characterized by endothelial cell apoptosis, smooth muscle ...

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

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흐름 유도 된 폐동맥 고혈압에 대한 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Induction and Phenotyping of Acute Right Heart Failure in a Large Animal Model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension

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만성 혈전색전성 폐 고혈압의 큰 동물 모델에서 급성 오른쪽 심부전의 유도 및 표고

The development of acute right heart failure (ARHF) in the context of chronic pulmonary hypertension (PH) is associated with poor short-term outcomes. The ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography (Video) | JoVE

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat (Video) | JoVE

왼쪽된 심 방 협 유발 쥐에서 그룹 2 폐 동맥 고혈압과 폐 정 맥 Arterialization

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats

The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats (Video) | JoVE

쥐에 폐 고혈압의 모델로 Monocrotaline 또는 Sugen와 함께 왼쪽된 Pneumonectomy

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats ...