Name: induction and characterization of pulmonary hypertension in mice using the hypoxia/su5416 model
Uploaded: 2020-06-03T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model at JoVE.com

Bu çalışma Amerikan Kalp Derneği (AHA- 17SDG33370112 ve 18IPA34170258) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri NIH K01 HL135474 Y.S. O.B'nin hibeleri ile desteklenmiştir.

Herhangi bir hayvan deneyi öncesinde yerel kurumsal hayvan bakım komitesi izni alın. Mevcut deneyler, Sina Dağı'ndaki Icahn Tıp Fakültesi'nde Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin (IACUC) onayı alındıktan sonra yapılmıştır.
1. PH indüksiyonu
<ol><li>Hazırlık<ol>
<li>Çalışmaya başlamadan önce, deneysel tasarımı dikkatlice planlayın. Farelerin ilk SU5416 enjeksiyonu ile aynı anda hipoksiye maruz kaldığından emin olun. Hypoxia/SU5416 yöntemikullanılarak...

<ol>
	<li>Galie, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2015+ESC/ERS+Guidelines+for+the+diagnosis+and+treatment+of+pulmonary+hypertension:+The+Joint+Task+Force+for+the+Diagnosis+and+Treatment+of+Pulmonary+Hypertension+of+the+European+Society+of+Cardiology+(ESC)+and+the+European+Respiratory+Society+(ERS):+Endorsed+by:+Association+for+European+Paediatric+and+Congenital+Cardiology+(AEPC),+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation+(ISHLT).">2015 ESC/ERS Guidelines for the diagnosis and treatment of pulmonary hypertension: The Joint Task Force for the Diagnosis and Treatment of Pulmonary Hypertension of the European Society of Cardiology (ESC) and the European Respiratory Society (ERS): Endorsed by: Association for European Paediatric and Congenital Cardiology (AEPC), International Society for Heart and Lung Transplantation (ISHLT).</a> European Heart Journal. 37 (1), 67-119 (2016).</li><li>Stenmark, K. R., Meyrick, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+pulmonary+arterial+hypertension:+the+hope+for+etiological+discovery+and+pharmacological+cure.">Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure.</a> American Journal of Physiology-Lung Cell Molecular Physiology. 297 (6), 1013-1032 (2009).</li><li>Maarman, G., Lecour, S., Butrous, G., Thienemann, F., Sliwa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+review:+the+evolution+of+animal+models+in+pulmonary+hypertension+research;+are+we+there+yet.">A comprehensive review: the evolution of animal models in pulmonary hypertension research; are we there yet.</a> Pulmonary Circulation. 3 (4), 739-756 (2013).</li><li>Gomez-Arroyo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+overview+of+mouse+models+of+pulmonary+arterial+hypertension:+problems+and+prospects.">A brief overview of mouse models of pulmonary arterial hypertension: problems and prospects.</a> American Journal of Physiology-Lung Cell Molecular Physiology. 302 (10), 977-991 (2012).</li><li>Ciuclan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+murine+model+of+severe+pulmonary+arterial+hypertension.">A novel murine model of severe pulmonary arterial hypertension.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 184 (10), 1171-1182 (2011).</li><li>Taraseviciene-Stewart, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+the+VEGF+receptor+2+combined+with+chronic+hypoxia+causes+cell+death-dependent+pulmonary+endothelial+cell+proliferation+and+severe+pulmonary+hypertension.">Inhibition of the VEGF receptor 2 combined with chronic hypoxia causes cell death-dependent pulmonary endothelial cell proliferation and severe pulmonary hypertension.</a> FASEB Journal. 15 (2), 427-438 (2001).</li><li>Vitali, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sugen+5416/hypoxia+mouse+model+of+pulmonary+hypertension+revisited:+long-term+follow-up.">The Sugen 5416/hypoxia mouse model of pulmonary hypertension revisited: long-term follow-up.</a> Pulmonary Circulation. 4 (4), 619-629 (2014).</li><li>Breen, E. C., Scadeng, M., Lai, N. C., Murray, F., Bigby, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+magnetic+resonance+imaging+for+in+vivo+quantification+of+pulmonary+hypertension+in+the+Sugen+5416/hypoxia+mouse.">Functional magnetic resonance imaging for in vivo quantification of pulmonary hypertension in the Sugen 5416/hypoxia mouse.</a> Experimental Physiology. 102 (3), 347-353 (2017).</li><li>Wang, Z., Schreier, D. A., Hacker, T. A., Chesler, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+right+ventricular+functional+and+structural+changes+in+a+mouse+model+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Progressive right ventricular functional and structural changes in a mouse model of pulmonary arterial hypertension.</a> Physiological Reports. 1 (7), 00184 (2013).</li><li>Momcilovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+18F-FDG+PET/CT+Imaging+and+Quantitative+Histology+to+Measure+Dynamic+Changes+in+the+Glucose+Metabolism+in+Mouse+Models+of+Lung+Cancer.">Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer.</a> Journal of Visualized Experiment. (137), 57167 (2018).</li><li>Guma, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+cell+therapy+and+aerosol+interleukin-2+for+the+treatment+of+osteosarcoma+lung+metastasis.">Natural killer cell therapy and aerosol interleukin-2 for the treatment of osteosarcoma lung metastasis.</a> Pediatric Blood Cancer. 61 (4), 618-626 (2014).</li><li>Lattouf, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picrosirius+red+staining:+a+useful+tool+to+appraise+collagen+networks+in+normal+and+pathological+tissues.">Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 62 (10), 751-758 (2014).</li><li>Penumatsa, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transglutaminase+2+in+pulmonary+and+cardiac+tissue+remodeling+in+experimental+pulmonary+hypertension.">Transglutaminase 2 in pulmonary and cardiac tissue remodeling in experimental pulmonary hypertension.</a> American Journal of Physiology-Lung Cell Molecular Physiology. 313 (5), 752-762 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ-level+right+ventricular+dysfunction+with+preserved+Frank-Starling+mechanism+in+a+mouse+model+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Organ-level right ventricular dysfunction with preserved Frank-Starling mechanism in a mouse model of pulmonary arterial hypertension.</a> Journal of Applied Physiology. 124 (5), 1244-1253 (2018).</li><li>van de Veerdonk, M. C., Bogaard, H. J., Voelkel, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+right+ventricle+and+pulmonary+hypertension.">The right ventricle and pulmonary hypertension.</a> Heart Failure Reviews. 21 (3), 259-271 (2016).</li><li>Emde, B., Heinen, A., Godecke, A., Bottermann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wheat+germ+agglutinin+staining+as+a+suitable+method+for+detection+and+quantification+of+fibrosis+in+cardiac+tissue+after+myocardial+infarction.">Wheat germ agglutinin staining as a suitable method for detection and quantification of fibrosis in cardiac tissue after myocardial infarction.</a> European Journal of Histochemistry. 58 (4), 2448 (2014).</li><li>Pena, S. D., Gordon, B. B., Karpati, G., Carpenter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lectin+histochemistry+of+human+skeletal+muscle.">Lectin histochemistry of human skeletal muscle.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 29 (4), 542-546 (1981).</li><li>Bueno-Beti, C., Hadri, L., Hajjar, R. J., Sassi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sugen+5416/Hypoxia+Mouse+Model+of+Pulmonary+Arterial+Hypertension.">The Sugen 5416/Hypoxia Mouse Model of Pulmonary Arterial Hypertension.</a> Methods in Molecular Biology. 1816, 243-252 (2018).</li><li>Colvin, K. L., Yeager, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Pulmonary+Hypertension:+Matching+Disease+Mechanisms+to+Etiology+of+the+Human+Disease.">Animal Models of Pulmonary Hypertension: Matching Disease Mechanisms to Etiology of the Human Disease.</a> Journal of Pulmonary and Respiratory Medicine. 4 (4), (2014).</li><li>Benza, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+survival+in+pulmonary+arterial+hypertension:+insights+from+the+Registry+to+Evaluate+Early+and+Long-Term+Pulmonary+Arterial+Hypertension+Disease+Management+(REVEAL).">Predicting survival in pulmonary arterial hypertension: insights from the Registry to Evaluate Early and Long-Term Pulmonary Arterial Hypertension Disease Management (REVEAL).</a> Circulation. 122 (2), 164-172 (2010).</li><li>Jacob, S. W., Rosenbaum, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+toxicology+of+dimethyl+sulfoxide+(DMSO).">The toxicology of dimethyl sulfoxide (DMSO).</a> Headache. 6 (3), 127-136 (1966).</li><li>Jacob, S. W., Wood, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethyl+sulfoxide+(DMSO).+Toxicology,+pharmacology,+and+clinical+experience.">Dimethyl sulfoxide (DMSO). Toxicology, pharmacology, and clinical experience.</a> American Journal of Surgery. 114 (3), 414-426 (1967).</li><li>Abraham, D., Mao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Pressure-Volume+Loop+Analysis+Using+Conductance+Catheters+in+Mice.">Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice.</a> Journal of Visualized Experiment. (103), 52942 (2015).</li><li>Ma, Z., Mao, L., Rajagopal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+Characterization+of+Rodent+Models+of+Pulmonary+Arterial+Hypertension.">Hemodynamic Characterization of Rodent Models of Pulmonary Arterial Hypertension.</a> Journal of Visualized Experiment. (110), 53335 (2016).</li><li>Townsend, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pressure+Volume+Loops+in+the+Mouse.">Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse.</a> Journal of Visualized Experiment. (111), 53810 (2016).</li><li>Penumatsa, K. C., Warburton, R. R., Hill, N. S., Fanburg, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CrossTalk+proposal:+The+mouse+SuHx+model+is+a+good+model+of+pulmonary+arterial+hypertension.">CrossTalk proposal: The mouse SuHx model is a good model of pulmonary arterial hypertension.</a> Journal of Physiology. 597 (4), 975-977 (2019).</li></ol>

Bu protokol, farelerde PH modelinin iki patolojik uyaranla nasıl modellendirilebildiğini açıklar: kronik hipoksi ve SU5416 enjeksiyonu (Hypoxia/SU5416)18. Bu fare modelini insan PH durumuyla ilişkilendirmek amacıyla, kaçınılmaz olarak Tablo 1'degösterilen mevcut PH sınıflandırmasına bakmak gerekir. Ph hemen hemen tüm formlarda pulmoner vazokonstriksiyon ve endotel ve düz kas hücrelerinin anormal proliferasyonu ile karakterizedir. Bu pulmoner arterlerde yüksek bas...

Pulmoner Hipertansiyon (PH) bir patofizyolojik durumdur, ortalama pulmoner arteriyel ile tanımlanan (PA) basınç istirahatte 25 mm Hg aşan, sağ kalp kateterizasyonu ile değerlendirildiği gibi1,2. PH yol açabilir hastalıkların çeşitli vardır. PH ile ilişkili koşulları düzenlemek amacıyla çeşitli sınıflandırma sistemleri geliştirilmiştir. Mevcut klinik sınıflandırma 5 farklı grupta birden fazla PH ilişkili hastalıkları kategorize1. Çeşitli hasta gruplarının klinik bulguları, patolojisi, prognozu ve tedaviye yanıtı farklı hastalıklara sahip olması nedeniyle bu ayrım önem taşımaktadır2. Tablo 1, her hastalığın temel histopatolojik özellikleri ile tamamlanan mevcut sınıflandırmayı özetler.
<img alt="Table 1" src="/files/ftp_upload/59252/59252tbl1.jpg"> Tablo 1: PH'nin klinik sınıflandırılmasına genel bakış ve gruplar daki ana histopatolojik özellikler. PH modellemeiçin Hipoksi/SU5416 protokolünün uygunluğu. Bu tablo19'dandeğiştirildi. PH: Pulmoner Hipertansiyon, PAH: Pulmoner Arteriyel Hipertansiyon
PH ile ilişkili hastalıkların tedavisinde önemli gelişmelere rağmen, PH hala bir tedavi olmadan kalır, 3 yıllık mortalite oranı arasında değişen ile 20% ve 80%3. Bu PH altta yatan mekanizmaları anlamak için zorunlu ihtiyaç gösterir ve bundan sonra, önlemek için yeni tedavilerin geliştirilmesi, ilerlemesini yavaşlatmak, ve hastalığı tedavi. Hayvan modelleri bu kapsamda hayati önem taşımaktadır. Şu anda, ph çalışmak için çeşitli modeller mevcuttur. İlgilenen okuyucu bu konuda mükemmel değerlendirmeleri sevkedilir 2,3,4. PH'ye yol açan hastalıkların çeşitliliğini göz önünde bulundurarak, insan PH'sinin çeşitli koşullarının tek bir hayvan modelinde mükemmel bir şekilde özetlenemez olduğu açıktır. Mevcut hayvan modelleri kategorize edilebilir i) tek vuruşlu, ii) iki isabet, iii) nakavt, ve iv) overexpression modelleri3. Tek vuruşlu modellerde, PH tek bir patolojik uyarıcı tarafından indüklenir, iki isabetli modeller daha şiddetli PH indükleme ve böylece daha yakından karmaşık insan hastalığı taklit amacı ile iki patolojik uyaranları birleştirmek ise. Etyolojik farklılıkların yanı sıra, çeşitli uyaranlar ph modelleme farklılıkları ile sonuçlanır ve bu da türlerine ve hayvanların genetik arka planına bağlıdır4.
En sık kullanılan klasik PH kemirgen modellerinden biri kronik hipoksi modeli2. Hipoksi insanlarda PH yanı sıra çeşitli hayvan türlerinde neden olduğu bilinmektedir. Hipoksi PH için fizyolojik bir uyarıcı olma avantajına sahiptir(Tablo 1). Ancak, kemirgenlerde PH indüklemek için kullanılan hipoksi derecesi insanlarda çok daha şiddetli iken, tek hakaret (hipoksi) vasküler remodeling sadece hafif bir formu yol açar. Bu insan hastalığının şiddetini taklit etmez. İkinci bir hit eklenmesi, PH indükleyen için ekstra bir uyarıcı, umut verici sonuçlar gösterdi: hipoksik uyarıcı ile birlikte kemirgenler için bileşik SU5416 enjeksiyonu daha şiddetli PH fenotip 2,2,5,6neden olur . SU5416 vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) reseptör-2 inhibitörüdür. VEGF reseptörlerini bloke eder ve endotel hücreli apoptosise yol açar. Hipoksik koşullar altında, bu apoptoza dirençli endotel hücrelerinin bir alt kümesinin çoğalmasını uyarır. Ayrıca, SU5416 düz kas hücresi çoğalması yol açar. Bu etkilerin kombinasyonu pulmoner dolaşımın patolojik vasküler remodeling sonuçları ve yüksek PA basınç ve sağ ventrikül remodeling yol açar2,5,7. Model ilk sıçanlarda tarif edildi6 ve daha sonra farelere uygulanan4,5,7. Fare modeli sıçanlara göre daha az şiddetli vasküler remodeling sergiler. Ayrıca, normoksia geri döndüğünde, PH sıçanlarda ilerlemeye devam ederken, farelerde kısmen geri dönüşümlüdür.
Aşağıdaki protokol, Hypoxia/SU5416 yöntemini (planlama, zaman çizelgesi, yürütme) kullanarak farelerde PH modellemesi için tüm adımları açıklar. Ayrıca, modelin karakterizasyonu bu protokolde açıklanmıştır: fonksiyonel (açık göğüs tekniği kullanılarak sağ ventrikül (RV) basıncının invaziv olarak ölçülmesi), morfometrik (sağ ve sol ventriküllerin hem diseksiyonu hem de tartılması ile), histolojik olarak (pulmoner vasküler remodeling, sağ ventrikül kardiyomiyosit hipertrofisi ve fibrozis değerlendirilerek).
Bu protokolde açıklanan tüm adımlar ve yöntemler herhangi bir deneyim düzeyinde araştırmacılar tarafından kolayca uygulanabilir. Açık göğüs tekniğini kullanarak RV fonksiyonel ölçümleri (burada açıklanan) alanında altın standart yöntem olmasa da, hızlı bir şekilde öğrenilebilir ve doğru bir daha az deneyimli deneyci tarafından çoğaltılabilir avantajı vardır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:731px;" width="730">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Acetic acid glacial</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">3738.1</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Acetone, Histology Grade</td>
			<td style="width:231px;">The Lab Depot</td>
			<td style="width:119px;">VT110D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">ADVantage Pressure-Volume System</td>
			<td style="width:231px;">Transonic</td>
			<td style="width:119px;">ADV500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Bouin&#39;s solution</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">Ht10132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Cautery System</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Connection tubing and valves</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td style="width:231px;">Covidien</td>
			<td style="width:119px;">8884541300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Coverslips, 24 x50 mm</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">1871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Data Acquisition and Analysis</td>
			<td>Emka</td>
			<td style="width:119px;">iox2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Direct Red 80</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">365548-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">DMSO (Dimethyl Sulfoxide)</td>
			<td style="width:231px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">276855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Dry ice</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Dumont # 5 forceps</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11251-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Dumont # 7 Fine Forceps</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Embedding molds</td>
			<td style="width:231px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E-6032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Eosin Solution Aqueous</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">HT110216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:319px;">Ethanol, laboratory Grade</td>
			<td style="width:231px;">Carolina Biological Supply Company</td>
			<td style="width:119px;">861285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fast Green FCF</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F7252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fine scissors</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:231px;">invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">16210-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Heating pad&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Gaymar&#160;</td>
			<td style="width:119px;">T/Pump</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Hematoxylin 2</td>
			<td style="width:231px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">7231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Hypoxic chamber</td>
			<td style="width:231px;">Biospherix</td>
			<td style="width:119px;">A30274P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Induction chamber</td>
			<td style="width:231px;">DRE Veterinary</td>
			<td>12570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:319px;">Intubation catheter (i.v. catheter SurFlash (20 G x 1&#34;) )</td>
			<td style="width:231px;">Terumo&#160;</td>
			<td>SR*FF2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Iris scissors</td>
			<td style="width:231px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:319px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:231px;">Baxter</td>
			<td style="width:119px;">NDC-10019-360-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Isoflurane vaporizer</td>
			<td style="width:231px;">DRE Veterinary</td>
			<td>12432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Mice (C57BL/6)</td>
			<td style="width:231px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Needles 25 G x 5/8&#34;</td>
			<td style="width:231px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">OCT</td>
			<td style="width:231px;">Tissue Tek</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">PBS (Phosphate Buffered Saline)</td>
			<td style="width:231px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Piric Acid- Saturated Solution 1.3 %</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P6744-1GA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Pressure volume catheter</td>
			<td style="width:231px;">Transonic</td>
			<td style="width:119px;">FTH-1212B-4018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Retractor</td>
			<td style="width:231px;">Kent Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SURGI-5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Static oxygen Controller ProOx 360</td>
			<td style="width:231px;">Biospherix</td>
			<td style="width:119px;">P360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">SU 5416</td>
			<td style="width:231px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S8442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Surgical Suture, black braided silk, 5.0</td>
			<td style="width:231px;">Surgical Specialties Corp.&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SP116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Surgical tape</td>
			<td style="width:231px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Syringe 10 ml</td>
			<td style="width:231px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">303134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Syringes with needle 1 ml</td>
			<td style="width:231px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Sytox Green Nuclein Acid Stain</td>
			<td style="width:231px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S7020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Tenotomy scissors</td>
			<td style="width:231px;">Pricon</td>
			<td style="width:119px;">60-521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Toluol</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">9558.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Ventilator&#160;</td>
			<td style="width:231px;">CWE</td>
			<td style="width:119px;">SAR-830/P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">WGA Alexa Fluor&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">W11261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Xylene</td>
			<td style="width:231px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction and characterization of pulmonary hypertension in mice using the hypoxia/su5416 model

Pulmoner Hipertansiyon (PH), sağ kalp kateterizasyonu ile değerlendirildiği gibi, istirahatte 25 mm Hg'yi aşan ortalama pulmoner arteriyel basınç ile tanımlanan patofizyolojik bir durumdur. Hastalıkların geniş bir yelpazede PH yol açabilir, onların etiyolojisi farklı, histopatoloji, klinik sunum, prognoz, ve tedaviye yanıt. Son yıllarda kayda değer ilerlemelere rağmen, PH bir hastalığı olmaya devam etmektedir. Altta yatan mekanizmaları anlamak yeni tedavilerin geliştirilmesinin önünü açabilir. Hayvan modelleri bu amaca ulaşmak için önemli araştırma araçlarıdır. Şu anda, PH recapitulating için çeşitli modeller vardır. Bu protokol, iki isabetli fare PH modelini açıklar. PH gelişimi için uyaranlar hipoksi ve SU5416 enjeksiyonu, bir vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) reseptör antagonist. Hipoksi/SU5416'nın başlamasından üç hafta sonra, hayvanlarda insan PH'sinde (ağırlıklı olarak Grup 1) gözlenen histopatolojik değişiklikleri taklit eden pulmoner vasküler remodeling gelişir. Pulmoner dolaşımda vasküler remodeling sağ ventrikül remodeling sonuçları (RV). RV basınçlarının ölçülmesi (açık göğüs yöntemi kullanılarak), RV'nin morfometrik analizleri (her iki kardiyak ventriküllerin kesişmesi ve tartılarak) ve remodelinghistolojik değerlendirmeleri (rv kardiyomiyosit hipertrofisi ve fibrozis ideğerlendirerek vasküler remodeling ve kardiyak değerlendirilerek hem pulmoner hem de kardiyak) ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Bu protokolün avantajları hem yabani tipte hem de genetiği değiştirilmiş farelerde uygulamanın imkanı, nispeten kolay ve düşük maliyetli uygulama ve ilgi hastalığının hızlı gelişimidir (3 hafta). Bu yöntemin sınırlamaları farelerde ciddi bir fenotip gelişmemesi ve NORMOKSIA'ya döndükten sonra PH'nin geri döndürülebilir olmasıdır. Önleme, hem de tedavi çalışmaları, kolayca bu modelde uygulanabilir, gelişmiş beceri gerek kalmadan (cerrahi kemirgen modelleri aksine).

Bu protokolde, farelerde PH'yi indükleyen Hypoxia/SU5416 modelinin oluşturulmasını ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Ayrıca, gözlem süresi nin sonunda pulmoner vasküler ve kardiyak değerlendirme nin yapılması için gerekli tüm adımları ayrıntılı olarak belirtmektedir.
Bu model için deneysel tasarıma genel bir bakış Şekil 1A13,14'tegösterilmiştir. Fareler normobari...

Watch this Scientific Journal Video about Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model at JoVE.com

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

Bu protokol, hipoksiye maruz kalma ve VEGF reseptör antagonistinin enjeksiyonuna bağlı olarak farelerde pulmoner hipertansiyonun (PH) indüksiyonunu tanımlar. Hayvanlarda protokolün başlamasından 3 hafta sonra PH ve sağ ventrikül (RV) hipertrofisi gelişir. Modelin fonksiyonel ve morfometrik karakterizasyonu da sunulmuştur.

Hipoksi/SU5416 Modeli kullanılarak Farelerde Pulmoner Hipertansiyonun İndüksiyonu ve Karakterizasyonu

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...

Bu protokol pulmoner hipertansiyonu indüklemek ve sağ ventrikülün fonksiyonel ölçümlerini yapmak için kullanılabilir. Sugen Hipoksi Modeli'nin uygulanması kolaydır ve indüksiyondan sonraki iki ila üç hafta içinde pulmoner hipertansiyonun bazı özelliklerini özetleyebilir. Bu modeli kullanarak, hastalığın gelişiminde rol oynayan yeni yolları belirleyebiliriz.Yeni hedefleri belirleyebilir ve tedavi potansiyellerini test edebiliriz. İndüksiyon işlemine başlamadan önce, azot tanklarını hipoksik haznenin yakınına sabitler ve oksijen kontrol cihazını %10 oksijen noktasına ayarlayın. Daha sonra, taze hazırlanmış SU5416 çözeltisini 25 gauge iğneile donatılmış bir mililitreşşile rendelendirve enjekte edilecek ilk hayvanı el ile dizginler.Fare tarafından olası bir ısırık yaralanmasını önlemek için sıkıca başın arka kavramak için emin olmak omurga paralel bir çadır oluşturmak için deri kavramak. İğneyi deri altı bir şekilde gevşek deri kıvrımına yan tarafa yerleştirin ve şırınga içeriğinin 100 mikrolitresini teslim edin. 10 saniye sonra iğneyi geri çekin ve hayvanı kafesine geri getirin.Tüm hayvanlara enjekte edildiğinde, fareleri havalandırmalı bir hipoksi odasına yerleştirin. Hipoksiye maruz kalmak için, odaların oksijen seviyesini ölçmek için bir oksijen sensörü ile donatılmış olduğunu onaylayın ve temizlik ve yiyecek ve su eklemek için her üç günde en fazla 20 dakika için odaları açın. Stres belirtileri için günlük hayvanları inceleyin ve üç hafta üst üste SU5416 enjeksiyon haftalık tekrarlayın.Basınç ölçüm işlemini başlatmadan önce Y tüp konektörünü hazırlayın ve ventilatörün işlevini kontrol etmek için manuel modda kullanın. Barotravmadan kaçınmak için inspiratuar basıncı bir santimetreden daha az suya ayarlayın ve solunum hızını dakikada 110 nefese ayarlayın. Bir endotrakeal tüp oluşturmak ve basınç hacmi kontrol ünitesi açmak için 20 gauge intravasküler kateter kesin.Veri toplama yazılımını başlatın ve basınç hacmi kateterini 37 derece lik bir su banyosunda 15 mililitrelik bir PBS santrifüj tüpüne yerleştirin. Daha sonra kateteri üreticinin protokolüne göre kalibre edin. Fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin ve vücut ısısını izlemek için rektal bir prob yerleştirin.Daha sonra, anestezili bir farede parmak kıskacına yanıt eksikliğini onaylayın ve boyun ve göğüs bölgelerini tıraş edin. Farenin uzuvlarını cerrahi bantla sabitleyin ve medial servikal deride bir santimetrelik kesi yapın. Bir pamuk uçlu aplikatör kullanarak, trakea altında yatan kasları ortaya çıkarmak için açık sözlü ve submandibular tükürük bezleri nizve.Dikkatle trakea ortaya çıkarmak için kasları kesin ve trakeal kıkırdak arasında küçük bir kesi yapmak için makas kullanın. Hazırlanan endotrakeal tüpü takın ve intravasküler kateterin metal rehberini çıkarın. Daha sonra kateteri ventilatöre bağlayın ve akciğerleri elle hafifçe şişirerek trakeal tüp pozisyonunu doğrulayın.Pozisyonu bantla sabitleyin. Sağ ventrikül basınç ölçümü için, ksifoid süreci ve üst karın üzerinde bir santimetre lik deri kesiyapmak ve orta çizgi distal ile xiphoid başlayan ve dikkatle her iki tarafta yanal hareket, göğüs ve karın duvarı üzerinde deri ayırın. Karın boşluğu açılması, dikkatle diyafram kesilmiş, atan kalp veya akciğerlerzarar değil dikkat.Ve nazikçe perikard kaldırmak için bir pamuk uçlu aplikatör kullanın. Farenin yanına basınç kateteri getirin ve sağ ventriküla atipik distal kısmında bir bıçak yarası yapmak için bir iğne ile donatılmış bir pamuk uçlu aplikatör kullanın. İğneyi basınç kateteri ile dikkatlice değiştirin, basınç kateterini sağ ventrikülyonuna paralel olarak pulmoner artere bakacak uçlatın.Kateterin doğru konumlandırIlmesini sağlamak için basınç dalgasının izini izleyin. Basınç sinyali dengelendikten sonra solunumları duraklatın ve en az üç ölçüm alın. Tüm ölçümler kaydedildiğinde kateteri dikkatlice su banyosundaki PBS dolu santrifüj tüpüne geri döndürün.Burada, gözlem periyodunun sonunda temsili basınç eğrileri ve sağ ventrikül basıncının nicel analizi gösterilmiştir. Hipoksi artı SU5416 tedavisinden sonra remodele pulmoner arterlerin histolojik analizi normoksik hayvanlara göre medial duvar kalınlığında bir artış olduğunu ortaya koymaktadır. Kardiyomiyosit hipertrofisi değerlendirmek için buğday germ agglutinin boyama hipoksi artı SU5416 maruziyetkardiyomiyosit boyutu ve sağ ventrikül hipertrofisi belirgin bir artış ile sonuç gösterir.Ayrıca Fulton indeksi ölçümü ile sağ ventrikül hipertrofisinin morfometrik değerlendirilmesi hipoksik hayvanlarda sağ ventrikül hipertrofisinde bir artışı doğrular. Fonksiyonel ölçümlerin gerçekleştirilmesi kanamayı önlemek için önemlidir, çünkü bu çalışmanın sonuçlarını olumsuz etkileyebilir. Bu protokol aynı zamanda sadece hafif değişiklikler ile sıçanlarda pulmoner hipertansiyon indüklemek için kullanılabilir.Özellikle, sıçanlarda sadece bir Sugen enjeksiyonu pulmoner hipertansiyon indüklemek için yeterlidir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Increasing Pulmonary Artery Pulsatile Flow Improves Hypoxic Pulmonary Hypertension in Piglets

Artan Pulmoner Arter Pulsatif Akış Piglets içinde Hipoksik Pulmoner Hipertansiyon Artırır

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries (PA). These arteries are deformed, leading to right ventricular ...

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension and Assessment of Right Ventricular Function in the Piglet

Kronik tromboembolik pulmoner hipertansiyon ve Piglet Sağ Ventrikül Fonksiyonu Değerlendirilmesi

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. ...

Hemodynamic Characterization of Rodent Models of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmoner Hipertansiyon Kemirgen Modeller Hemodinamik Karakterizasyonu

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a rare disease of the pulmonary vasculature characterized by endothelial cell apoptosis, smooth muscle ...

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

Bir Manyetik microbead Oklüzyon Modeli Farelerde Glokom Oküler Hipertansiyon Bağımlı tetikleyebilecek

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

Akış kaynaklı pulmoner hipertansiyon için bir Sıçan Modelinde Şant Cerrahisi, Sağ Kalp kateterizasyonu ve Damar Morfometri

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Induction and Phenotyping of Acute Right Heart Failure in a Large Animal Model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension

Kronik Tromboembolik Pulmoner Hipertansiyonun Büyük Bir Hayvan Modelinde Akut Sağ Kalp Yetmezliğinin İndüksiyonu ve Fenotiplemesi

The development of acute right heart failure (ARHF) in the context of chronic pulmonary hypertension (PH) is associated with poor short-term outcomes. The ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

Sol atriyal stenoz indüklenen pulmoner venöz Arterialization ve Grup 2 sıçan pulmoner hipertansiyon

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats

Sıçanlarda pulmoner hipertansiyon bir Model olarak Monocrotaline ya da Sügen ile birlikte sol Pneumonectomy

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats ...