Name: analysis of fucosylated human milk trisaccharides in biotechnological context using genetically encoded biosensors
Uploaded: 2019-04-13T15:00:00
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Diese Arbeit wurde von Iowa State University Startup Fonds unterstützt. Z.B. wurde teilweise durch die NSF Trinect Fellowship und Manley Hoppe Professur finanziert. T.J.M. wurde teilweise von Karen und Denny Vaughn Faculty Fellowship unterstützt. Die Autoren danken die Iowa State Universität Flow Cytometry Anlage und des w.m. Keck Metabolomik Forschungslabors für Hilfe mit Fluoreszenz und LC-MS-Studien.

(1) Zelle Kultur und Induktion Bedingungen
Hinweis: In den folgenden Experimenten werden drei Sorten verwendet: E. Coli BL21 (DE3) mit ein leerer Vektor, E. Coli BL21 (DE3) mit Plasmide pAfcA14 und pET28:green fluoreszierenden Proteins (GFP) und E. Coli BL21 (DE3) mit Plasmiden pAfcB14 und pET28:GFP. Alle Stämme wachsen im Luria-Bertani Brühe (LB) oder minimale Medien mit geeigneten Antibiotika. Stammlösungen von 1.000 X Kanamycin (50 mg/mL) un...

<ol>
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Wir präsentieren eine Hochdurchsatz-Strategie für die Gestänge-spezifische Erkennung des Fucosylated der Muttermilch-Oligosaccharide. Dies wurde erreicht durch den Bau der ganzen Zelle Biosensoren durch genetisch Technik Escherichia Coli die auf Induktion mit spezifischen Glykane mit ein Fluoreszenzsignal reagieren. Das Protokoll auch details wie der Biosensor zu erkennen und zu quantifizieren HMOs in ein metabolisch veränderter Bakterienstamm eingesetzt werden kann.
Unser Protoko...

Muttermilch-Oligosaccharide (HMOs) sind Laktose-abgeleitete Oligosaccharide, meist bestehend aus drei bis acht Zucker Monomere. Sie haben eine Laktose (Gal-β1, 4-Glc) verringern zu beenden und sind weiter durch Glykosid-Links länglich (β-1,3 - oder β-1,6-) Glukose (Glc), Galaktose (Gal) oder N-Acetylglucosamin (GlcNAc). Darüber hinaus Fucose (Fuc, α-1,2 - oder α-1,3-) oder Sialinsäure Säure (Sia oder NeuAc, α-2,3 - oder α-2,6-) Rückstände werden oft1hinzugefügt.
Aktuelle Analyse der Oligosaccharide und anderen Kohlenhydraten wird durch die Notwendigkeit spektrometrische chromatographische/Masse (MS) Technologie2,3,4,5, Durchsatz und Umfang begrenzt. 6 , 7, was ungefähr dauern kann eine Stunde pro Probe, ganz zu schweigen von der Notwendigkeit für teure Ausrüstung, spezielle Spalten und derivatizing Agenten und Know-how über die Funktionsweise dieser Geräte8. Oligosaccharid-Verbindungen sind besonders schwer zu bestimmen, erfordert fortgeschrittene MS9,10 oder Kernspinresonanz (NMR) Techniken11. Schnelle Optimierung der Synthese von diese Oligosaccharide ist somit durch den Durchsatz dieser langsamen analytischen Schritt begrenzt.
In der vorliegenden Studie zeigen wir Gestänge-spezifischen Nachweis von Fucosylated Trisaccharide Laktose-basierte HMOs, mit Schwerpunkt auf 2'-Fucosyllactose (2'-FL), die am häufigsten vorkommende HMO in der Muttermilch ist, mit Hilfe einer genetisch codierte Escherichia coli ganze Zelle Biosensor mit einem Limit von Erkennung bei 4 mg/L. Ein wichtiges Merkmal dieser Biosensor ist seine Fähigkeit, zwischen Isomeren Trisaccharides unterscheiden. Das Konstruktionsprinzip basiert auf die Expression von bestimmten Fucosidases in E. Coli , die Laktose von HMOs, befreien das Vorhandensein von Lac -Operon, erkannt wird, die wiederum ein Fluoreszenzsignal erzeugt. Dies erreichen wir durch den Bau eines zwei-Plasmid-System, ein beherbergen die Gestänge-spezifische Fucosidase und andererseits eine fluoreszierende Reporter-Protein. Diese Biosensor-Plattform eignet sich für Hochdurchsatz-Screening von Durchflusszytometrie oder Mikro-Platte-Leser. Wir zeigen auch die Auslastung der Biosensor in 2'-FL produziert durch ein veränderter Belastung12zu quantifizieren. Im Rahmen dieser Studie präsentieren wir auch drei Strategien auf selektive Entfernung von Laktose, die false positives Signal aus der Biosensor ergeben können, angesichts der Tatsache, dass die technische Produzent Belastung auf Laktose angebaut wird.
Zusammen genommen, der genetisch codierten Biosensoren ermöglichen es uns, zu erkennen und zu quantifizieren HMOs Gestänge-spezifisch, die schwer selbst mit chromatographischen, MS oder NMR Techniken. Aufgrund seiner hohen Durchsatz und Benutzerfreundlichkeit sollte diese Methode weit verbreitete Anwendungen in das metabolic Engineering und Synthese von HMOs haben.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:993px;" width="992">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">2&#8217;-Fucosyllactose&#160;</td>
			<td style="width:247px;">Carbosynth&#160;</td>
			<td style="width:204px;">41263-94-9</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3-Fucosyllactose&#160;</td>
			<td>Carbosynth&#160;</td>
			<td>41312-47-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP9744500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium Chloride, Dihydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carbenicillin&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP26481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextrose (D-Glucose), Anhydrous</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D16-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow Cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>FACSCanto Plus RUO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HPLC</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td>1100 Series HPLC system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HPLC Column</td>
			<td>Luna</td>
			<td></td>
			<td>C18 reversed phase column</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kanamycin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11815024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LB Broth, Miller&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-795-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lactose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64044-51-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">M9, Minimimal Salts, 5x</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate, Anhydrous</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M65-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MS</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Mass Selective Trap SL detector</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>13472-35-0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of fucosylated human milk trisaccharides in biotechnological context using genetically encoded biosensors

Muttermilch-Oligosaccharide (HMOs) sind komplexe Kohlenhydrate Komponenten der menschlichen Muttermilch, die reichlich Vorteile auf Kleinkinder Gesundheit aufweisen. Optimierung ihrer biotechnologischen Synthese ist jedoch durch den relativ geringen Durchsatz der Erkennung und Quantifizierung von Monosaccharid und Verbindungen beschränkt. Konventionelle Techniken der Glycan Analyse gehören chromatographische/Masse-spektrometrische Methoden mit Durchsatz in der Größenordnung von Hunderten von Proben pro Tag ohne Automatisierung. Wir zeigen hier eine genetisch codierte bakterielle Biosensor für den Hochdurchsatz-, Gestänge-spezifische Erkennung und Quantifizierung von Fucosylated HMO Strukturen, 2'-Fucosyllactose und 3-Fucosyllactose, die wir über heterologe erreicht Ausdruck von Fucosidases. Da das Vorhandensein von Laktose in der Milch oder in biotechnologischen Prozessen zu Fehlalarmen führen kann, zeigen wir auch die Reduzierung des Signals aus Laktose mit unterschiedlichen Strategien. Aufgrund der hohen Durchsatz dieser Technik könnte vielen Reaktionsbedingungen oder Bioreaktor Parameter parallel in einer Angelegenheit von Stunden, ermöglicht die Optimierung der HMO Fertigung untersucht.

Wir entwarfen eine ganze Zelle Biosensor spezifisch für 2'-FL, die in Verbindung mit der biotechnologischen Produktion von der Oligosaccharid verwendet werden kann. Diese stützt sich auf die spezifische enzymatische Spaltung terminal Zucker erzeugen Laktose zu verändern und somit Aktivierung des Lac -Operon, führt zum Ausdruck eines Reporter fluoreszierenden Proteins unter einer Laktose induzierbaren Promoter, im Verhältnis zu den Menge von 2'-FL. Um seine Besonderheit Gest?...

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Analysis of Fucosylated Human Milk Trisaccharides in Biotechnological Context Using Genetically Encoded Biosensors

Wir beschreiben hier die Hochdurchsatz-Erkennung und Quantifizierung von Fucosylated Muttermilch-Oligosaccharide (HMOs) mit einer ganzen Zelle Biosensor. Wir zeigen auch hier, die Anpassung dieser Plattform zur Analyse von HMO Produktionsstämme, mit Schwerpunkt auf das Signal-Rausch-Verhältnis zu verbessern.

Analyse der Fucosylated menschlichen Milch Trisaccharides in biotechnologischen Zusammenhang mit genetisch codierte Biosensoren

Human milk oligosaccharides (HMOs) are complex carbohydrate components of human breast milk that exhibit plentiful benefits on infant health. However, ...

Diese Methode kann helfen, mehrere Schlüsselfragen bei der Herstellung von Muttermilch-Oligosacchariden zu beantworten. Erstens, wie viel von dem Produkt habe ich? Und zweitens, was ist die spezifische Kohlenhydrat-Verbindung?Das Ziel dabei ist, den Prozess der Quantifizierung und Charakterisierung dieser Menschlichen Milcholigosaccharide zu vereinfachen und zu beschleunigen. Diese Methode hat zwei Vorteile gegenüber dem aktuellen Stand der Technik. Erstens ist es für Einführ-Screenings mit hohem Durchsatz zugänglich.Also, Sie können sich vorstellen, Tausende von verschiedenen Bedingungen oder vielleicht sogar eine Bibliothek von Syntheseenzymen an einem Tag mit dieser Technik zu testen. Außerdem nutzt es die einzigartige Substratspezifität, die die Natur in Enzymen entwickelt hat, um uns Informationen über die Kohlenhydratverknüpfung dieser Oligosaccharide zu geben. Wir glauben, dass diese Methode die Produktion von Muttermilch-Oligosacchariden verbessern kann, was wiederum zu einer qualitativ besseren Säuglingsnahrung führen kann, die die Muttermilch besser nachahmt und dazu beiträgt, die Kluft zwischen gestillten und formelgefütterten Babys zu schließen.Benutzer Diskretion wird empfohlen, wenn sie entscheiden, welche Methode für die Laktose-Entfernung auf der Grundlage von Kosten, Durchsatz und Geräteverfügbarkeit zu verwenden. Es sollte darauf geachtet werden, dass eine optimale Laktoseentfernung gewährleistet ist. Am Tag vor dem Experiment, Samen 5 Milliliter LB Medium ergänzt mit Kanamycin und Carbenicillin aus einer frischen Bakterienkolonie mit sterilen Techniken.Alle Kulturen über Nacht bei 37 Grad Celsius mit Aufregung bebrüten. Am nächsten Tag 50 Mikroliter einer Nachtkultur in fünf Milliliter frischeLB M9-Medien mit Kanamycin und Carbenicillin übertragen. Inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius mit kontinuierlichem Schütteln, bis die Kultur eine OD600 zwischen Nullpunkt fünf und NullPunkt sieben erreicht hat.Übertragen Sie zunächst die Nachtkulturen in einen Punkt fünf Milliliter-Röhren und Zentrifuge bei 12, 500 mal g für eine Minute. Entsorgen Sie den Überstand und hängen Sie das Pellet in 500 Mikroliter1x PBS wieder auf, um eine Einzelzellsuspension vorzubereiten. Übertragen Sie die einzelzellenaufhängung in Faxröhren.Verwenden Sie ein Durchflusszytometer, um GFP zu anregen und FITC-Fluoreszenzniveaus zu sammeln, wie im Textprotokoll beschrieben. Um eine Kalibrierkurve zu erstellen, machen Sie acht bis zehn Verdünnungen der Standard 2'FL im Bereich zwischen null und 2500 Milligramm pro Liter. Kultur die 2'FL Bio-Sensing-Zellen und induzieren sie mit den Standardverdünnungen, wie im Textprotokoll beschrieben.Starten Sie eine Kultur einer 2'FL produzierenden Sorte in fünf MilliliterLB-Medien und wachsen Sie sie über Nacht bei 37 Grad Celsius an. Am nächsten Tag Subkultur bei 1% in 250 Milliliter von vorbereiteten minimalen Medien und fügen Sie Glycerin zu einer endgültigen Konzentration von 10 Gramm pro Liter. Inkubieren Bei 37 Grad Celsius, bis die Kultur erreicht und OD600 zwischen NullPunkt fünf und Null Punkt sieben.Dann ipTG zu einer Endkonzentration von Null Punkt fünf Millimolar und Laktose auf eine endgültige Konzentration von zwei Gramm pro Liter hinzufügen. Bei 37 Grad Celsius mit kontinuierlichem Schütteln 24 Stunden inkubieren. Übertragen Sie am nächsten Tag die Nachtkultur auf sterile 50-Milliliter-Rohre und Zentrifuge bei 900-fachem g für 15 Minuten.Entsorgen Sie den Überstand und hängen Sie das Pellet in entionisiertem Wasser wieder auf. Wiederholen Sie diese Wäsche dreimal, um Restlaktose zu entfernen. Danach das Pellet in fünf Milliliter entionisiertem Wasser wieder aufhängen.Legen Sie die Zellen auf Eis und verwenden Sie einen Beschallungsgerät mit 30% Leistung in 30 Sekunden Impulsen, um die Zellsuspension zu lysen. Zentrifugieren Sie die lysierten Zellen 25 Minuten lang mit 2 000 mal g. Entfernen Sie den Überstand und leiten Sie ihn durch einen sterilen Filter.Bewahren Sie den gefilterten Überstand bei vier Grad Celsius auf, bis er zur Analyse bereit ist. Als nächstes impfen Sie eine Kultur von 2'FL-Bio-Sensing-Zellen. In der mittleren Logphase induzieren Sie die Zellen mit der Zelle lysieren in Konzentrationen, die denen von 2'FL entsprechen, die zur Herstellung der Kalibrierkurve verwendet werden.Führen Sie die Kalibrierung wie im Textprotokoll beschrieben durch. Führen Sie danach die Proben auf einem Durchflusszytometer aus. Generieren Sie eine Dosis-Wirkungskurve, indem Sie die Fluoreszenzleistung mit der Oligosaccharidkonzentration vergleichen und vergleichen Sie die Reaktion der Standards mit dem Zelllysat.Lösen Sie zunächst FL alphalysierte Betagalactosidase auf 1.000 Einheiten pro Milliliter in einem Millimolaren Magnesiumchlorid auf. Um die optimale Konzentration des benötigten Enzyms zu bestimmen, wachsen Sie ein Inokulum von 2'FL-Bio-Sensing-Zellen und in der Mid-Log-Phase mit Laktose und 2'FL induzieren. Zu 100 Mikroliterkulturen, fügen Sie variable Mengen an Beta-Galactosidase bis zu 12 Einheiten.Lassen Sie die Kulturen über Nacht bei 37 Grad Celsius mit kontinuierlichem Schütteln wachsen. Messen Sie die Fluoreszenz, wie im Textprotokoll beschrieben, und berechnen Sie die optimalen Einheiten des Enzyms, die durch die Bestimmung der minimalen Enzymkonzentration erforderlich sind, um die gewünschte Dämpfung des Signals zu erreichen. Zu 2'FL produzierenden Zellen, die 24 Stunden lang angebaut werden, fügen Sie die optimalen Einheiten der Beta-Galactosidase hinzu und brüten über Nacht bei 37 Grad Celsius, bestimmen Sie den 2'FL-Titer wie zuvor beschrieben.Beginnen Sie zunächst eine 25-Milliliter-Kultur einer 2'FL produzierenden Sorte. Sobald die Sorte in der Mittleren Logphase induziert wird, bebrüten Sie die Kultur bei 37 Grad Celsius für 24 Stunden. Als nächstes impfen Sie eine E.coli BL21-Kultur in LB-Medien.Wachsen Sie es bis zur Mittleren Log-Phase bei 37 Grad Celsius und fügen Sie dann 15 Milliliter dieser Kultur zur 24-Stunden-Kultur 2'FL hinzu. Drei Stunden lang bei 37 Grad Celsius inkubieren. Bestimmen Sie dann den 2'FL-Titer, wie zuvor beschrieben.Beginnen Sie zunächst mit einer 25-Milliliter-Kultur einer 2'FL produzierenden Sorte. Sobald die Sorte in der Mittleren Logphase induziert wird, bebrüten Sie die Kultur bei 37 Grad Celsius für 24 Stunden. Fügen Sie zwei Bände von 100% Ethanol in die Kultur und schütteln Sie gut.Vier Stunden lang bei 37 Grad Celsius inkubieren. Zentrifugieren Sie dann die Suspension bei 900 mal g für 15 Minuten. Sammeln Sie den Überstand und brüten Über nachtbeiviert bei vier Grad Celsius, um die Laktose zu fällen.Übergeben Sie die Lösung durch Filterpapier, um die gefällte Laktose zu entfernen. Sammeln Sie das Filtrat, das das Zelllysat enthält, und bestimmen Sie den 2'FL-Titer wie zuvor beschrieben. In dieser Studie wird eine Strategie mit hohem Durchsatz für den linkagespezifischen Nachweis von fukosylierten Humanmilcholigosacchariden verwendet.Dies wird durch den Bau von ganzen Zellbiosensoren durch gentechnisch veränderte E.Coli erreicht, die nach Induktion mit spezifischen Glykanen mit einem fluoreszierenden Signal reagieren. Das fluoreszierende Signal unter verschiedenen Induktionsbedingungen, wie es auf einem Durchflusszytometer analysiert wird, zeigt mit dem 2'FL-Biosensor eine über 100-fache Erhöhung der Fluoreszenz im Vergleich zur Vektorsteuerung oder dem Biosensor für 3'FL. Dies zeigt die hohe Verbindungsspezifität des Biosensors.Die Empfindlichkeit des Assays kann durch die Erzeugung einer Dosis-Wirkungskurve mit unterschiedlichen Kohlenhydratspiegeln bestimmt werden. Der dynamische lineare Erfassungsbereich von 2'FL liegt zwischen 40 und 400 Milligramm pro Liter und der Nachweisgrenzwert liegt bei vier Milligramm pro Liter. Dieser Test kann im Laufe eines Arbeitstages durchgeführt werden, wie in den Schnappschussmessungen der Dynamik des Reporterausdrucks zu sehen ist.Die Bio-Sensing-Zellen können verwendet werden, um 2'FL aus einem konstruierten 2'FL-Produzentenstamm zu erkennen und zu quantifizieren, indem eine Reihe von Strategien verwendet werden, um das Signal aus exogener Laktose zu reduzieren, so dass das ausgelesene Signal direkt der 2'FL-Konzentration entsprechen würde. Eine Strategie ist es, die Laktose mit einer Beta-Galactosidase, die nicht auf modifizierte Laktose wirkt, enzymatisch zu degradieren. Eine weitere Strategie nutzte Ethanol, das nicht nur selektiv Lactose ausfällt, sondern auch die Erzeugerzellen limt, da die Zelllyse ein notwendiger Schritt nach unten ist.Schließlich ist die effektivste, aber zeitaufwändigste Methode, die Zellen vor der Zelllyse zu pellet und zu waschen, um die intrazelluläre 2'FL freizusetzen. Sobald wir diese Methode etabliert haben, konnten wir das Repertoire an Oligosaccharid-Targets mit verschiedenen Enzymen erweitern. Derzeit können wir neun verschiedene Oligosaccharide erkennen und wir arbeiten an mehr.Bei der Optimierung dieses Assays bemerkten wir die Robustheit unserer Enzyme, die es uns ermöglichte, eine Technik zu erarbeiten, die eine Verknüpfungsspezifische sende in etwa fünf Minuten ausliest. Obwohl keines der hier verwendeten Reagenzien besonders gefährlich ist, sollten diejenigen, die diese Methode anwenden, die üblichen Biogefährdungs- und Biocontainment-Verfahren einschließlich des Tragens ordnungsgemäßer PSA befolgen.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Reinigung und Kristallisation des menschlichen Serotonin-Transporter-Bound<em&gt; S</em&gt; -Citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

Forschung

Biochemie

Dissection of Human Retina and RPE-Choroid for Proteomic Analysis

Dissektion der menschlichen Netzhaut und RPE-Aderhaut für Proteomic Analysen

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Split-BioID &#8212; Proteomic Analysis of Context-specific Protein Complexes in Their Native Cellular Environment

Split-BioID ÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â Proteomic Analysis of Context-specific Protein Complexes in Their Native Cellular Environment

Split-BioID — Proteomic Analyse der kontextspezifischen Proteinkomplexe in ihrer natürlichen zellulären Umgebung

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Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibrierung-kostenlose In-vitro- Quantifizierung von Protein Homo-Oligomerisierung mit kommerziellen Instrumentierung und kostenlose Open Source-Helligkeit-Analyse-Software

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Rapid Fluorescence-based Characterization of Single Extracellular Vesicles in Human Blood with Nanoparticle-tracking Analysis

Rasche Fluoreszenz basierende Charakterisierung der einzelnen extrazelluläre Vesikel im menschlichen Blut mit Nanopartikel-Tracking Analyse

Extracellular vesicles (EVs), including exosomes, are specialized membranous nano-sized vesicles found in bodily fluids that are constitutively released ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse der Proteinfaltung, Transport und Abbau in lebenden Zellen durch radioaktive Puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impedance-Based GPCR Assays

Stepwise Dosing Protocol for Increased Throughput in Label-Free Impeddance-Based GPCR Assays

Label-free impedance-based assays are increasingly used to non-invasively study ligand-induced GPCR activation in cell culture experiments. The approach ...