Name: microinjection-based system for in vivo implantation of embryonic cardiomyocytes in the avian embryo
Uploaded: 2019-02-17T14:00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von Grant R00HL122360 vom National Institutes of Health, National Heart, Lung und Blood Institute (NHLBI) unterstützt.

Alle beschriebene Methoden befolgen Tierbetreuung Richtlinien der University of North Carolina in Chapel Hill.
1. Vorbereitung der Mikro-Injektion Pipetten
<ol><li>Ziehen Sie mit einer Mikropipette Puller Glaskapillaren. Für einige Injektionen ist Nadel Abschrägung empfohlen, da es eine extrem scharfe Oberfläche frei von strukturellen Verunreinigungen bietet. Zu diesem Zweck polnische ein gezogener Nadelspitze auf einem abschrägen Rad in einem Winkel von 45° 15−20 Minuten. Hinweis: Genaue Einstellung für das Ziehen von variiert je nach der Abzieher verwendet wird. Der endgültige inneren Durchmesser der Abschrägung sollte zwischen 20−40 µm betragen.</li>
	<li>Bestreichen Sie die inneren und äußeren Oberflächen des Glases Kapillare mit Silikon. Zunächst Tauchen Sie die Nadeln in den siliconizing Agenten, die äußere Oberfläche der Nadel und dann Backload die siliconizing Agents Lösung in jedem Mikropipette zur Beschichtung von der inneren Oberfläche zu beschichten. Hinweis: Beschichtung von der Glaskapillaren sollte 24 h vor der Implantation-Experiment durchgeführt werden. Glaskapillaren mit Silikon Beschichtung sorgt für eine chemisch inerte Oberfläche auf das Glas. Wenn die Kapillaren übrig sind wird unbehandelt, die Zellsuspension in späteren Schritten generiert und halten uns an das Glas stecken Sie die Nadel. Beschichtung ist daher notwendig und entscheidend für den Erfolg der Methode. Achtung: Der siliconizing Agent ist eine fertige handelsübliche Mischung aus Heptan und 1,7-Dichlor-1,1,3,3,5,5,7,7-Octamethyltetrasiloxane (Table of Materials). Es ist hochentzündlich und akut toxisch. Fassen Sie immer mit richtigen PSA innerhalb einer Abzugshaube.<ol>
<li>Backload die Nadel, laden ~ 5−10 µL des siliconizing Agents in einem Mikro-Injektion Pipettenspitze (Table of Materials). Setzen Sie die Mikro-Injektion-Spitze in das breite Ende von gezogenem Glas Kapillare und positionieren Sie die Spitze so weit unten wie möglich (in der Nähe der Nadelspitze Glas). Auswerfen des siliconizing Agents beim Entfernen langsam der Beladung Pipette um Luftblasen in der Nadel zu minimieren.</li>
		<li>Verlassen Sie die siliconizing Agents in der Glasnadel für 10 min, entfernen Sie, indem Sie mit einer neuen Laden-Pipette Absaugen und lassen Sie zu, dass Nadeln in einer Abzugshaube über Nacht trocknen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Am Morgen des Experiments, spülen Sie die Glaskapillaren mit entionisiertem Wasser nach dem Verfahren in Schritt 1.2 und 3−4 h trocknen lassen.</li>
</ol>2. Vorbereitung der Lösungen
<ol><li>Bereiten Sie 5 mL Trypsin neutralisierende Lösung durch die Ergänzung von 4,2 mL Dulbeccos modifizierten Eagle Medium und Hams Nährstoff Gemisch F12 (DMEM/F12) mit 750 µL des fetalen Bovine Serum (FBS) und 50 µL von Penicillin/Streptomycin vor. Bei 37 ° C bis zur Verwendung aufbewahren.</li>
	<li>Bereiten Sie 5 µM Kennzeichnung Farbstofflösung durch Pipettieren 5 µL 1 mM Lager Kennzeichnung Farbstoff (in Dimethyl Sulfoxid [DMSO], Table of Materials) in 995 µL Hank Salzlösung (HBSS) ausgeglichen. Vortex für 1 min und bei 37 ° C bis zu seiner Verwendung zu speichern.</li>
	<li>Bereiten Sie frische Paraformaldehyd (PFA) durch die Kombination von 10 mL 32 % PFA-Stammlösung mit 62 mL Molekularbiologie Grad Wasser und 8 mL 10 x Dulbeccos Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (DPBS). Die Endkonzentration beträgt 4 % PFA in 1 X DPBS.</li>
</ol>3. Vorbereitung des Host-Embryonen
<ol><li>Inkubieren Sie fruchtbaren Eier in eine horizontale Ausrichtung in einem befeuchteten Inkubator bei 38 ° C bis zum Hamburger und Hamilton (HH) Etappe 1910. Hinweis: Die Bühne für Manipulation gewählt ist flexibel und völlig abhängig von den Zielen jedes einzelnen Experiment.</li>
	<li>Ergebnis "flache" Ende der Eierschale am Ei Äquator mit abgewinkelten Pinzette, um ein kleines Loch zu machen > 1 mm im Durchmesser. Einfügen ein 18 G-Nadel mit angehängten 10 mL Spritze durch die Punktion und ~ 5 mL Albumin zu entfernen. Hinweis: Diese anatomische Lage ist außerhalb der "Luft-Zelle" innerhalb des Eies und hält Albumin vom lecken, sobald die Punktion erfolgt. Dieser Schritt wird empfohlen, da es "fällt" den Embryo von der Eierschale, Verhinderung von möglichen Schäden in den nachfolgenden Schritten.</li>
	<li>Gelten Sie durchsichtiges Klebeband an die Spitze der Eierschale. Punkten mit abgewinkelten Pinzette und einem ~2.5 cm Fenster mit gebogenen Tenotomie Schere schneiden.</li>
	<li>Prüfen und den Embryo basierend auf Hamburger und Hamilton10 festgelegten Kriterien zu inszenieren und die Punktion von Schritt 3.2 mit Tesafilm zu versiegeln. Hinweis: Hier werden HH 19 Embryonen verwendet, die 37−40 Somiten bis ins Heck Keim haben. Die Punktion sollte nicht bis versiegelt werden, nachdem das Fenster am oberen Rand das Ei (Schritt 3.3) geöffnet ist.</li>
	<li>Tusche/HBSS Mischung (1:5) unter den Embryo mit einer 32 G-Nadel mit angehängten 1 mL Spritze ~ 200 µL zu injizieren. Hinweis: Indien Tinte bietet visuellen Kontrast zwischen dem Embryo und das Eigelb unter. Alternative Farbstoffe wie neutral rot oder handelsüblichen Cyan fluoreszierenden Proteins (GFP) oder blau fluoreszierenden Proteins (BFP) Fluoreszenz Filtersätze eingesetzt werden, um Kontrast zu verbessern.</li>
	<li>Fügen Sie 1 mL HBSS tropfenweise auf der embryonalen Scheibe und Dichtung Fenstermodus Schalen mit Paraffin Film. Legen Sie Eier zurück in den befeuchteten Inkubator bis bereit zur Injektion.</li>
</ol>4. Isolierung von Spendergewebe
<ol><li>Inkubieren Sie Spender fruchtbaren Hühnereier in einem befeuchteten Inkubator bei 38 ° C bis Stufe HH 19 (oder gewünschte Stufe).</li>
	<li>Entfernen Sie den Embryo aus dem Ei zu und in ein 100 x 15 mm Petrischale mit sterilem HBSS bei Raumtemperatur (RT).</li>
	<li>Chirurgisch Microdissect Vorhofflimmern Spendergewebe von jedem Embryo indem zuerst das gesamte embryonale Herz des Embryos zu isolieren und dann durch die Isolierung der Vorhöfe aus dem Herzen Zange, Tenotomie Scheren und Microspatula unter einem Stereo Mikroskop seziert. Pool in einem sterilen 1,5 mL Microcentrifuge Schlauch mit 1 mL HBSS auf Eis.</li>
	<li>Sobald alle Spendergewebe gesammelt hat, pellet-das Gewebe durch Zentrifugation bei 1000 X g für 5 min bei 4 ° C in einem festen Winkel Microcentrifuge.</li>
</ol>(5) Trypsin-Verdauung von Spendergewebe
<ol><li>Aufschwemmen Sie Zelle Pellets in 1 mL vorgewärmte 0,05 % Trypsin-EDTA und bei 37 ° C für 15 min in ein Schütteln Heizblock bei 300 u/min inkubieren. Alternativ können Sie ein Wasserbad mit periodischer Erregung der Probe.</li>
	<li>Pipette der Aufschlusslösung rauf und runter um jede verbleibende Gewebe aufzubrechen, und wie in Schritt 4.4 pellet.</li>
	<li>Aufzuwirbeln Sie das Pellet in 1 mL der Trypsin neutralisierende Lösung und Zentrifuge wie in Schritt 4.4.</li>
	<li>Zellen in 400 µL rot fluoreszierende Farbstofflösung Kennzeichnung Aufschwemmen und Inkubation bei 37 ° C für 20 min in einem Hitze-Block. Alternativ können Sie ein Wasserbad.</li>
	<li>Sobald die Kennzeichnung Reaktion abgeschlossen ist, die Zellen wie in Schritt 4.4 pellet und waschen mit 1 mL HBSS (Anzahl der Wäsche, die Schritte 1 bis 3 variiert werden können).</li>
	<li>Aufzuwirbeln Sie die beschrifteten, gebeizte Zellen in einer Konzentration von ~ 50.000 Zellen/µL, die in der Regel ergibt sich eine 5−10 µL Arbeitsvolumen abhängig von der gesamten Zellausbeute. Hinweis: Zelle Konzentrationen unterhalb ~ 50.000 Zellen/µL können schlechte Injektion Effizienz führen.</li>
</ol>6. in-Vivo-Injektion
<ol><li>BackLoad die Zellsuspension in eine Silikon behandelten Kapillare Glaspipette nach den Verfahren in Schritt 1.2. Montieren Sie die Pipette in den Druck-Microinjector-Apparat.</li>
	<li>Entfernen Sie Host Embryonen aus befeuchteten Inkubator und setzen Sie in ein Ei-Halter unter den fluoreszierenden Stereo Mikroskop seziert.<ol>
<li>Öffnen Sie die Dotterhäutchen Membran mit sterilen feinen Pinzette und machen Sie einen kleinen Schnitt (~0.5−1.0 mm in der Länge) in den Herzbeutel. Weitere Manipulation/Dissektion kann je nach Zielregion zur Injektion erforderlich sein.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Positionieren Sie die Microinjector so, dass die Mikroinjektion Nadelspitze dringt in das Zielgewebe.<ol>
<li>Druck injizieren Zellen und das fluoreszierende Label zu verwenden, um festzustellen, dass die implantierte Zellen in gewünschte Gewebe vorhanden sind. Typische Injektionen beantragen, Einzelimpulse von weniger als 0,5 s Dauer von 100-400 Hektopascal in Druck. Hinweis: Pulslänge und Absolutdruck ist abhängig von der Anzahl der Zellen injiziert werden und können individuell geändert werden.</li>
		<li>Einfahren Sie der Microinjector Apparat und entfernen Sie das Ei nach der Injektion von Druck aus der Halterung zu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fügen Sie 1 mL warmen HBSS tropfenweise auf den Embryo, Eier mit transparentem Klebeband versiegeln und brüten in den befeuchteten Inkubator bei 38 ° C für 24 h Post Implantation.</li>
</ol>(7) Isolierung und Analyse
<ol><li>Host-Embryonen in RT HBSS mit Zange, Tenotomie Schere und Microspatula ähnlich wie Schritt 4.3 isolieren und in 4 % PFA über Nacht bei 4 ° C mit sanftes Schaukeln zu beheben.</li>
	<li>Waschen Sie Embryonen 3 x 5 min in HBSS bei RT mit sanftes Schaukeln, und speichern Sie in HBSS bei 4 ° C für weitere nachgelagerte Analyse (Mikroskopie, Immunohistochemistry, in-Situ-Hybridisierung, etc.).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Guo, Y. X., Pu, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Mosaics+for+Greater+Precision+in+Cardiovascular+Research.">Genetic Mosaics for Greater Precision in Cardiovascular Research.</a> Circulation Research. 123, 27-29 (2018).</li><li>Guo, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Cardiac+Myocyte+Maturation+Using+CASAAV,+a+Platform+for+Rapid+Dissection+of+Cardiac+Myocyte+Gene+Function+In+Vivo.">Analysis of Cardiac Myocyte Maturation Using CASAAV, a Platform for Rapid Dissection of Cardiac Myocyte Gene Function In Vivo.</a> Circulation Research. 120 (12), 1874-1888 (2017).</li><li>Rugh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Experimental embryology; techniques and procedures. 3rd edition. , (1962).</li><li>Slack, J. M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Essential developmental biology. 3rd edition. , (2013).</li><li>Reinecke, H., Zhang, M., Bartosek, T., Murray, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival,+integration,+and+differentation+of+cardiomyocyte+grafts:+a+study+in+normal+and+injured+rat+hearts.">Survival, integration, and differentation of cardiomyocyte grafts: a study in normal and injured rat hearts.</a> Circulation. 100, 193-202 (1999).</li><li>Rojas, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+purified+iPSC-derived+cardiomyocytes+in+myocardial+infarction.">Transplantation of purified iPSC-derived cardiomyocytes in myocardial infarction.</a> PLOS ONE. 12, 0173222 (2017).</li><li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+Grafting+for+Cardiac+Repair:+Graft+Cell+Death+and+Anti-Death+Strategies.">Cardiomyocyte Grafting for Cardiac Repair: Graft Cell Death and Anti-Death Strategies.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 33 (5), 907-921 (2001).</li><li>Bressan, M., Liu, G., Mikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+mesodermal+cues+assign+avian+cardiac+pacemaker+fate+potential+in+a+tertiary+heart+field.">Early mesodermal cues assign avian cardiac pacemaker fate potential in a tertiary heart field.</a> Science. 340 (6133), 744-748 (2013).</li><li>Bressan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+myocardial-endocardial+interactions+pattern+the+delay+in+atrioventricular+junction+conduction.">Reciprocal myocardial-endocardial interactions pattern the delay in atrioventricular junction conduction.</a> Development. 141 (21), 4149-4157 (2014).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Die Fähigkeit, wie microenvironmental Bedingungen Auswirkungen Herzmuskelzellen Schicksal Spezifikation und Abstammung Stabilisierung zu definieren ist grundlegend für die Schaffung eines zusammenpressende Verständnisses von angeborenen Herzerkrankungen sowie effiziente Protokolle für die richtige Entwicklung Reifung von Stammzellen oder somatischen Zellen umprogrammieren-basierte Kardiomyozyten. Das Protokoll beschriebenen gibt Ermittler die Möglichkeit, direkt assay Entwicklung der Herzmuskelzellen unter in vivo Bedingungen, zulassend Zellprozesse autonomen Reifung von parakrine/Juxtacrine und/oder hämodynamischen Signale getrennt werden verändert. In Kombination mit hochauflösenden Bildgebung, Genanalyse und physiologischen Assays kann diese Technik als eine leistungsstarke Ergänzung zu bestehenden transgene Modelle dienen.
Bilden eine technischen Standpunkt, der hier vorgestellten Protokoll setzt auf effiziente Isolierung, Kennzeichnung und präzise Implantation von Herzen Spenderzellen in Host embryonalen Gewebe. Die Verwendung eines Mikroinjektion stark hilft bei der Ausrichtung der die Spenderzellen und ermöglicht eine erfolgreiche Implantation ohne die Notwendigkeit der Schaffung einer großen Engraftment Website in das Wirtsgewebe. Einige operative Geschick ist erforderlich, um diese Technik jedoch durchführen wie reduzierte Tragfähigkeit führen kann, wenn die Injektionsnadel nicht sorgfältig in das Zielgewebe (wodurch Bruch des Herzens oder der lokalen Gefäßsystem) platziert wird. Pflege und Gedanken sollten auch die Isolierung und Kennzeichnung Schritte eingeräumt werden. Über Verdauung des Spenders kann Gewebe führen zu schlechten Implantation Effizienz und Transient Kennzeichnung Techniken kann das Zeitfenster über dem Spenderzellen verfolgt werden können (wie Zellteilung das Label verdünnen kann) zu begrenzen.
Diese Technik ist hochgradig modifizierbar und kann für vielfältige Zwecke angepasst werden. Z. B. werden Spender Zellen aus einer Vielzahl von Geweben und Stufen können isoliert werden, (obwohl Optimierung der enzymatischen Verdauung benötigt wird) und in ähnlicher Weise können injiziert in einer Vielzahl von Host-Gewebe in unterschiedlichen Entwicklungsstadien. Ebenso kann die Kennzeichnung Ansatz geändert werden, um Zellen in verschiedenen zeitlichen Fenster, einschließlich der Verwendung von fluoreszierenden anorganische Halbleiter-Nanokristallen für mehr vorübergehende Kennzeichnung und Implantation von Wachteln Zellen oder Zellen von Grün zu verfolgen fluoreszierendes Protein transgenen (GLP +) Spender Embryonen11 für permeationsfähigen beschriften.
Während wir derzeit diese Technik für Vogelgrippe Implantation Studien verwenden, halten wir es für eine Vielzahl von Chimären Studien in der Zukunft verwendet werden könnten. Beispielsweise könnte genetisch veränderte Herzmuskelzellen aus transgenen Organismen isoliert und in die Vogelgrippe Herz mit einem sehr ähnlichen Protokoll mikroinjiziert. Darüber hinaus in Herzzellen von differenzierte Zellen ergibt sich Zellen oder über somatischer Zellen umprogrammieren Ansätze in das embryonale Herz, ihre Integration in das Gewebe und/oder die Reifung unter in-vivo biomechanischen bewerten mikroinjiziert werden könnte Bedingungen.

Kardiale Entwicklungsforschung hat enorm aus dem Aufkommen der Keimbahn transgenen Modellsysteme profitiert hätten viele der genregulatorischer Netzwerke dieser Muster andere Zelle Linien und Funktionsbereiche im Herzen ausgewiesen. Allerdings kann erkennen wie diese Gen-Netzwerken interagieren und auf microenvironmental Bedingungen reagieren, einschließlich parakrine/Juxtacrine Signale und biophysikalischen Eingänge (dehnen, Dehnung, hämodynamische Flow), schwierig sein. Als solches ist es nicht immer leicht zu bestimmen, ob ein zellulärer Phänotyp als direkte Folge von einer genetischen Störung oder als sekundäre Folge einer Anpassung an Veränderungen der kardialen Biomechanik oder höherer Ordnung Gewebe Zusammensetzung1,2 entsteht .
Pfropfen Experimente, die klassisch zu Adresse Konzepte der Schicksal-Spezifikation verwendet wurden, wäre Engagement, Induktion und Kompetenz3,4, einen idealen Ansatz, einige der Herausforderungen zu umgehen definieren Zelle autonomen gegenüber Umwelteinflüssen im Herzen. Leider erschweren Herz Kontraktionen Standardansätze Pfropfen. Schnelle Bewegung des Gewebes verhindert oft transplantierten Zellen von der Einhaltung der Herzen und großen Gewebe sticht (normalerweise für die Pfropfung erforderlich) führen häufig zu Herzinsuffizienz und embryonale Tödlichkeit5,6,7. Daher haben wir eine Druck-basierte, Mikroinjektion System für Präzision zellulären Implantation in die entwickelnden Küken Herz, umgehen die technischen Hürden der Gewebe Pfropfen beschriebenen8,9. Mit dieser Technik können einzelne oder kleine Gruppen von Herzzellen von einem Spender Embryo isoliert mikroinjiziert werden in verschiedenen Regionen ein Host embryonale Herz, wodurch die Notwendigkeit für umfangreiche Host Vorbereitung und die großen Gewebe Beleidigungen, die entstehen, mit Standard-Pfropfen-Techniken. Die Mikroinjektion Nadeln verwendet für diese Implantation Studien haben einen Außendurchmesser von ~ 30−40 µm, was bedeutet, dass die Nadel direkt in das Zielgewebe platziert werden kann (z.B. dringen die embryonale myokardiale Wand) und Zellen mit fokal lieferbar minimaler Beschädigung des umgebenden Gewebes. Das Protokoll kann verwendet werden, um eine Vielzahl von Isotopen, heterotopisch, Isochore und Heterochronic Manipulationen, bietet einen schnelle, flexiblen und kostengünstige Ansatz zur klassischen experimentellen embryologische Paradigmen in den Entwicklungsländern direkt untersuchen durchführen vier-Kammer-Herz.
Im unten beschriebenen Protokoll, beschriften wir Spender Zellen mit einer Zelle permeationsfähigen Leuchtstofffärbung, die für den Erfolg einer Mikroinjektion Experiment ermöglicht in Echtzeit überwacht werden und die Lage des eingepflanzt Zellen ohne die Notwendigkeit für irgendwelche dokumentiert werden zusätzliche Färbung. Allerdings ist darauf hinzuweisen, dass dieser Ansatz am besten geeignet für kurzfristige Experimente (ca. 48 h) ist, wie der Fluoreszenzfarbstoff durch Zellteilung verloren gehen kann. Alternative Ansätze können für längere Laufzeit Experimente verwendet werden.
Während wir diese Technik im Rahmen der kardialen Entwicklung präsentiert, haben wir es mit großem Erfolg zur Implantation Zellexperimente Mesoderm, Kopf, Gliedmaßen und Somiten eingesetzt. Als solche der Grundansatz beschrieben ist sehr gefügig und kann in einer Vielzahl von Organsystemen verwendet werden.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1133px;" width="1133">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">1 mL Insulin Syringe</td>
			<td style="width:257px;">BD</td>
			<td style="width:268px;">329654</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:441px;">1.7 mL Microtubes, Clear</td>
			<td style="width:257px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:268px;">24-282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;">10 ml Syringe</td>
			<td style="width:257px;">BD</td>
			<td style="width:268px;">305482</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1000ul Reach Barrier Tip Racked, Sterile</td>
			<td style="width:257px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:268px;">24-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">15 mL Centriguge Tubes, Racked</td>
			<td style="width:257px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:268px;">28-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">1588 Genesis Hova-Bator Incubator</td>
			<td style="width:257px;">GQF</td>
			<td>813927021221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G x 1 1/2 Needle</td>
			<td style="width:257px;">BD</td>
			<td style="width:268px;">305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200ul Barrier Tip Low Binding, Racked, Sterile</td>
			<td style="width:257px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:268px;">24-412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">32G x 1/2&#34; Needle</td>
			<td style="width:257px;">TSK Steriject Air-Tite</td>
			<td style="width:268px;">TSK3213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Alchohol Wipes 70%</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>19015744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Angled Forceps</td>
			<td style="width:257px;">Fine Scientific Tools</td>
			<td style="width:268px;">11260-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Backloading Tips</td>
			<td style="width:257px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:268px;">930001007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Black India Ink</td>
			<td>KOH-I-NOOR</td>
			<td style="width:268px;">3084-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellTracker Green CMF</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C7025</td>
			<td>1 mM in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellTracker Red CMTPX</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34552</td>
			<td>1 mM in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:257px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:268px;">5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Commercial Grade Packing Tape</td>
			<td style="width:257px;">Staples</td>
			<td>2619001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Curved Tenotomy Scissors</td>
			<td style="width:257px;">Fine Scientific Tools</td>
			<td style="width:268px;">14067-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:268px;">11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">DMSO, anhydrous</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:268px;">D12345</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DPBS (10X), no calcium, no magnesium</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Femtojet 4i</td>
			<td style="width:257px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:268px;">5252000021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:268px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Hatching Eggs</td>
			<td style="width:257px;">Pilgrim&#39;s Hatchery</td>
			<td style="width:268px;">--</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:268px;">14025-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Injectman 4</td>
			<td style="width:257px;">Eppendorf</td>
			<td>5192000027D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:257px;">Leica Microsystems&#160;</td>
			<td style="width:268px;">--</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Parafilm</td>
			<td style="width:257px;">SIGMA</td>
			<td>P6543-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde 32% in aqueous solution, EM Grade</td>
			<td style="width:257px;">VWR</td>
			<td>100496-496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:268px;">15140-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Petri Dish</td>
			<td style="width:257px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:268px;">32-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:441px;">Pipette Grinder</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>EG-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Pipette Puller</td>
			<td style="width:257px;">HEKA</td>
			<td style="width:268px;">PIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Scotch Transparent Tape</td>
			<td style="width:257px;">Staples</td>
			<td style="width:268px;">487909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Sigmacote</td>
			<td style="width:257px;">SIGMA</td>
			<td>SL2-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Stereo Microscope</td>
			<td style="width:257px;">Leica</td>
			<td style="width:268px;">--</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">ThermoMixer C</td>
			<td style="width:257px;">Eppendorf</td>
			<td>5382000023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td style="width:257px;">World Precision Instruments</td>
			<td>TW100F-4&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Transfer Pipette</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:268px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td>
			<td style="width:257px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection-based system for in vivo implantation of embryonic cardiomyocytes in the avian embryo

Interpretation der relativen Auswirkung der Zelle autonomen Musterung versus extrinsische microenvironmental Einfluss auf die Zelle Abstammung Bestimmung ist eine allgemeine Herausforderung in der Entwicklungsbiologie Forschung. Im embryonalen Herzen dies als regionale Unterschiede in der Expression von transcriptional Regler, parakrine/Juxtacrine signalisieren Hinweise, besonders schwierig sein kann und hämodynamische Kraft sind alle bekannten Cardiomyocyte Reifung zu beeinflussen. Eine vereinfachte Methode, eine Entwicklung Cardiomyocyte molekulare und biomechanischen Mikroumgebung ändern würde, dienen daher als eine mächtige Technik, wie die lokalen Bedingungen Einfluss Zelle Schicksal und Funktion zu prüfen. Um dieses Problem anzugehen, haben wir eine Methode, um körperlich juvenile Kardiomyozyten Transplantation in ektopische Standorte in das Herz oder die umliegenden embryonalem Gewebe optimiert. Dies ermöglicht es uns, wie microenvironmental Bedingungen Einfluss Cardiomyocyte Schicksal Übergänge bei einzelligen Auflösung innerhalb der intakten Embryo zu untersuchen. Hier beschreiben wir ein Protokoll in der embryonale Myozyten können werden aus einer Vielzahl von kardialen Subdomains isoliert, dissoziiert Eindringmittel beschriftet und mikroinjiziert zu Host Embryonen mit hoher Präzision. Zellen können dann direkt an Ort und Stelle mit einer Vielzahl von bildgebenden und histologischen Techniken analysiert werden. Dieses Protokoll ist eine leistungsstarke Alternative zu traditionellen Pfropfen Experimente, die in einem bewegenden Gewebe wie das Herz übermäßig schwierig sein kann. Die Grundzüge dieser Methode kann auch eine Vielzahl von Spender-Gewebe und Hostumgebungen und seine einfache Bedienung, niedrige Kosten, angepasst werden und Geschwindigkeit machen es eine potenziell nützliche Anwendung für eine Vielzahl von Studien.

Nach 24 h Inkubation, das Herz und die Surround-Gewebe des Hosts Embryonen wurden isoliert, fotografiert (Abb. 1A) und für immunofluorescent Analyse verarbeitet. In diesem Beispiel wurden in der Proepikards eines ähnlichen inszenierten Hosts Spender Vorhofflimmern Myozyten mikroinjiziert Embryo. Der Host-Embryo war dann mit dem Muskel-Marker (MF20 grün) und 4', 6-Diamidino-2-Phenylindole (DAPI; blau) gefärbt. Injizierte Zellen (rot) sind deutlich erkennbar (Abbildung 1B). Mögliche Anpassungen zu berücksichtigen, wenn Zellen nicht sichtbar sind enthalten: Spendergewebe wurde über verdaut (Zellen wäre nicht in der Lage zu befestigen), Kennzeichnung Farbstofflösung war zu verdünnen, Zellen waren übermäßig gewaschenen oder mehrere Zellteilungen führte zu Verlust des Labels.
Um zu bestätigen, dass die injizierten Zellen in diesem Beispiel myokardialen waren, geschnitten wir optisch dieser Embryo mit einem konfokalen Mikroskop (Abbildung 1C-E). Die einzige MF20 positive innerhalb der Proepikards (PE) sind die fluoreszierenden roten positive Zellen, die fokal implantiert wurden.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59267/59267fig1.jpg"> Abbildung 1 : Repräsentative Bilder von Embryonen isoliert 24 Stunden Post Injektion. (A) geringer Vergrößerung Hellfeld Bild der Stamm Region eines 3,5 (HH-Bühne-19)-Küken-Embryos. (B) zusammengeführten Bild zeigt injiziert Zellen (rot), Herzmuskelzellen (grün) und DAPI. Zellen von den Vorhöfen isoliert waren und mikroinjiziert in der Proepikards. (C) hohe Vergrößerung konfokale Bildgebung zeigt mit der Bezeichnung Zellen in den Kern der Proepikards. (D) hoher Vergrößerung konfokale Bildgebung bestätigt CT rot markiert Zellen sind Herzzellen. (E) dreidimensionale (3D) Rekonstruktion des injizierten Zellen aus Paneelen, D und E. At, Atrien; OFT, Ausflusstrakt; PE, Proepikards; VT, Ventrikel; MF20, Myosin 4. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59267/59267fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

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Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

Bei dieser Methode sind embryonale Herz Gewebe chirurgisch Microdissected, dissoziiert, Eindringmittel beschriftet und in Host embryonalen Gewebe implantiert. Dies bietet eine Plattform für das Studium der Einzelperson oder Gewebe Ebene Entwicklungen Organisation unter ektopische hämodynamischen Bedingungen und/oder veränderten parakrine/Juxtacrine Umgebungen.

Mikroinjektion basierenden System für In Vivo Implantation von embryonalen Kardiomyozyten des aviären Embryos

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...

Dieses Protokoll hilft uns zu bestimmen, wie Veränderungen in der lokalen Biomechanik, Gewebearchitektur, parakrinen Umgebungen und Juxtacrin-Wechselwirkungen den zellulären Phänotyp beeinflussen. Diese Technik ermöglicht es uns, klassische Paradigmen und experimentelle Embryologie zu erforschen, ohne die groß angelegten Gewebebeleidigungen zu verursachen, die normalerweise in traditionellen Graphikexperimenten auftreten. Um den richtigen Injektionsdruck zu finden, ist es hilfreich, bei einem niedrigeren Injektionsdruck zu beginnen und schrittweise zu erhöhen, bis ein stetiger Zellfluss erreicht ist.Die Visualisierung dieser Technik hilft, ein direktes Verständnis dafür zu erreichen, wie die Injektionsgeräte in Bezug auf das Zielgewebe positioniert werden müssen. Demonstrierend wird das Verfahren zwei Mitglieder meines Labors sein, Trevor Henley und Kandace Thomas. 24 Stunden vor der Implantation Glaskapillaren auf einem Mikropipettenzieher nach Standardprotokollen ziehen und die Kapillaren in Siliziumisierungsmittel tauchen, um die äußeren Oberflächen der Nadeln zu beschichten.Als nächstes 5 bis 10 Mikroliter Siliziumisierungsmittel in eine Mikroinjektionspipettenspitze laden und die Spitze in das breite Ende einer extern beschichteten Glaskapillare legen. Positionieren Sie die Pipettenspitze so nah wie möglich an der Glasnadelspitze und werfen Sie das Siliziummittel aus, während Sie die Ladepipette langsam zurückziehen, um Luftblasen innerhalb der Nadel zu minimieren. Lassen Sie das Siliziummittel 10 Minuten in der Glasnadel, bevor Sie eine neue Ladepipette verwenden, um die Lösung zu aspirieren.Dann trocknen Sie die Nadeln in einer Rauchhaube über Nacht. Für die Vorbereitung von Wirtsembryonen fruchtbare Hühnereier in horizontaler Ausrichtung in einem befeuchteten Inkubator bei 38 Grad Celsius inkubieren und mit abgewinkelten Zangen eine Punktion von mehr als einem Millimeter Durchmesser im Boden des flachen Endes jedes Eis entlang des Eiäquators vornehmen. Legen Sie eine 18-Meter-Nadel, die an einer 10-Milliliter-Spritze befestigt ist, in die Punktion ein, um etwa fünf Milliliter Albumen zu entfernen.Und tragen Sie transparentes Klebeband auf die Oberseite der Eierschale auf. Bewerten Sie den verklebten Bereich entlang der Oberseite des Eis mit abgewinkelten Zangen und verwenden Sie eine gekrümmte Tenotomieschere, um ein etwa 2,5 Zentimeter großes Fenster im verklebten Teil des Eis zu schneiden. Inspizieren und inszenieren Sie den Embryo auf der Grundlage der von Hamburger und Hamilton festgelegten Kriterien und verwenden Sie eine ein Millimeter Spritze, die mit einer 32-Spur-Nadel ausgestattet ist, um etwa 200 Mikroliter einer ein bis fünf Verdünnung der Indischen Tinte in HBSS unter dem Embryo zu injizieren.Dann versiegeln Sie die Punktion mit transparentem Klebeband und fügen Sie einen Milliliter HBSS tropfenweise auf die embryonale Scheibe, bevor Sie die Fensterschale mit Paraffinfolie versiegeln, um das Ei wieder in den befeuchteten Inkubator zu legen. Wenn die Embryonen das Stadium 19 der Hamburger und Hamilton erreichen, spülen Sie die silikonbeschichteten Glaskapillaren mit entionisiertem Wasser ab und lassen Sie die Kapillaren drei bis vier Stunden bei Raumtemperatur trocknen. In der Zwischenzeit einen Embryo von einem Ei in eine 100 mal 15 Millimeter lange Petrischale mit steriler Raumtemperatur HBSS übertragen und die Schale unter ein Stereomikroskop stellen.Mit Zangen, Tenotomiescheren und einem Mikrospachtel isolieren Sie das gesamte embryonale Herz vom Embryo und isolieren Die Vorhöfe vom Herzen. Legen Sie das Vorhofgewebe in ein steriles 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenrohr, das einen Milliliter HBSS enthält, auf Eis. Wenn das gesamte Spendergewebe gesammelt wurde, pellet das Gewebe durch Zentrifugation in einer fixierten abgewinkelten Mikrozentrifuge.Für die Vergärung des Spendergewebes setzen Sie die Pellets in einem Milliliter vorgewärmter 05%trypsin EDTA für eine 15-minütige Inkubation in einem schüttelnden Wärmeblock bei 300 Umdrehungen pro Minute wieder auf. Am Ende der Inkubation, Pipette die Verdauungslösung mehrmals, um das restliche Gewebe aufzubrechen und pellet das Herzlysat durch Zentrifugation. Setzen Sie das Pellet in einem Milliliter Trypsin-Neutralisationslösung für eine weitere Zentrifugation wieder auf, gefolgt von einer erneuten Suspension in 400 Mikrolitern roter Fluoreszenzfarbstofflösung.Nach 20 Minuten bei 37 Grad Celsius pellet die Zellen durch Zentrifugation für ein bis drei Waschungen in einem Milliliter HBSS pro Waschgang. Dann setzen Sie die beschrifteten Zellen bei fünf mal zehn bis vier Zellen pro Mikroliterkonzentration in frischen HBSS wieder aus. Zur In-vivo-Injektion der Spenderzellen die Zellsuspension wie demonstriert in eine trockene, silikonbehandelte Glaskapillarpipette zurückladen und die Pipette in das Druckmikroinjektorgerät montieren.Übertragen Sie jeden Wirtsembryon, der aus dem befeuchteten Inkubator in einen Eihalter unter einem fluoreszierenden Stereo-Sezierendes Mikroskop injiziert wird. Und verwenden Sie sterile feine Zangen, um die Vitelline-Membran zu öffnen. Machen Sie einen 5 bis 1 Millimeter Schnitt im Perikard und positionieren Sie den Mikroinjektor so, dass die Spitze der Mikroinjektionsnadel in das Zielgewebe eindringt.Stellen Sie den Mikroinjektor so ein, dass einzelne Impulse von 5 Sekunden Dauer und im Bereich von 100 bis 400 Hektopascal im Druck angewendet werden. Und druckinjizieren die Zellen. Es ist wichtig, eine erfolgreiche Zellimplantation zu überprüfen, indem das fluoreszierende Signal vor der erneuten Versiegelung der Eizelle geographiert wird.Der Embryo kann auch fotografiert werden, um dieses Verfahren zu dokumentieren. Wenn alle Zellen injiziert wurden, ziehen Sie den Mikroinjektorapparat zurück und entfernen Sie das Ei aus dem Halter. Dann fügen Sie einen Milliliter warme HBSS tropfenweise auf den Embryo.Versiegeln Sie das Ei mit transparentem Packband und geben Sie das Ei für 24 Stunden nach der Implantation an den befeuchteten Inkubator zurück. Hier wird das Herz und das umgebende Gewebe eines embryonalen Wirtsnachas nach der Vorhofmyozytenimplantation des Spenders gezeigt. In diesem repräsentativen Experiment wurden die Spenderzellen mikroinjiziert in das Proepikardeines eines Wirtsembryons in einem ähnlichen Stadium.Optische Schnitte mit einem konfokalen Mikroskop ergaben, dass die einzigen Herzmuskelmarker-positiven Zellen innerhalb des Proepikardieums die fokal implantierten fluoreszierenden roten positiven Zellen waren. Achten Sie darauf, den Empfängerembryon nicht zu übermanipulieren, da Brüche im Herzen und lokale Vaskulatur, die durch die Injektionsnadel verursacht wird, zu einer verminderten Lebensfähigkeit führen können. Nach diesem Verfahren können eine Vielzahl von nachgelagerten Assays durchgeführt werden, einschließlich Immunhistochemie, In-situ-Hybridisierung und Zellsortierung.Das Siliziummittel ist extrem entzündlich und akut giftig. Es sollte immer mit Sorgfalt und der richtigen persönlichen Schutzausrüstung in einer Dunstabzugshaube behandelt werden.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Charakterisierung von Thymic Einschwingzeit Vorläufern in der Mouse Embryo Verwendung<em&gt; In Vivo</em&gt; Und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Assays

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead Implantation im Zebrafischembryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse von Zebrafisch-Larven Skelettmuskel Integrität mit Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Imaging subzellulärer Strukturen in der Living Zebrafischembryo

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transkriptom Profilieren<em&gt; In-Vivo</em&gt; Produziert Bovine Präimplantationsembryonen Mit Zwei-Farben-Microarray-Plattform

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissektion, Immunofluorescent Färbung der Pilz Körper und Photorezeptor Neuronen im Gehirn Erwachsener Taufliege melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

AFM and Microrheology in the Zebrafish Embryo Yolk Cell

AFM und Microrheology in den Zebrafish Embryos Eigelb Zelle

Elucidating the factors that direct the spatio-temporal organization of evolving tissues is one of the primary purposes in the study of development. ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Anwendung von RNAi und Hitze-Schock-induzierte Transkription Faktor Ausdruck zu programmieren Keimzellen Neuronen in C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Minimal invasiven Embryotransfer und Embryo-Vitrifizierung auf der Optimal-Botn-Bühne im Kaninchenmodell

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualisierung der Knoten und Notochordal Platte In Gastrulating Maus-Embryonen mittels Rasterelektronenmikroskopie und ganze Mount Immunfluoreszenz

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...