Name: a galleria mellonella oral administration model to study commensal-induced innate immune responses
Uploaded: 2019-03-21T15:00:00
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이 작품은 DFG (SPP1656), DFG 연구 훈련 그룹 1708, Bundesministerium 위한 Bildung und Forschung (BMBF) 독일 센터에 의해 감염 연구 (DZIF)에 대 한 투자 되었다.

1. G. mellonella 양육 및 실험에 대 한 애벌레의 준비
참고: 마지막 유 충 탈피를 달걀에서 주기 약 5-6 주 걸립니다.
<ol><li>성인 나 방 2 L 상자 포함 하는 왁 스 나 방 기판 (22% 옥수수 밀가루, 22% 밀 식사, 17.5% 밀랍, 11% 무 지방 우유 분말, 꿀 11%, 11% 글리세롤, 5.5% 건조 효 모)에 의해 누워 계란을 전송 합니다. 어둠 속에서 30 ° C에서 번 식 하는 전체를 수행 합니다.</li>
	<li>애?...

<ol>
	<li>Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+the+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).</li><li>Muniz, L. R., Knosp, C., Yeretssian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+antimicrobial+peptides+during+homeostasis,+infection,+and+disease.">Intestinal antimicrobial peptides during homeostasis, infection, and disease.</a> Frontiers in Immunology. 3, 310 (2012).</li><li>Ivanov, I. I., Honda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+commensal+microbes+as+immune+modulators.">Intestinal commensal microbes as immune modulators.</a> Cell Host Microbe. 12 (4), 496-508 (2012).</li><li>Ayres, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammasome-microbiota+interplay+in+host+physiologies.">Inflammasome-microbiota interplay in host physiologies.</a> Cell Host Microbe. 14 (5), 491-497 (2013).</li><li>Champion, O. L., Titball, R. W., Bates, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+G.+mellonella+Larvae+to+Provide+Reliable+and+Reproducible+Results+in+the+Study+of+Fungal+Pathogens.">Standardization of G. mellonella Larvae to Provide Reliable and Reproducible Results in the Study of Fungal Pathogens.</a> Journal of Fungi (Basel). 4 (3), (2018).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Insect Science. , (2016).</li><li>Buchmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+Innate+Immunity:+Clues+from+Invertebrates+via+Fish+to+Mammals.">Evolution of Innate Immunity: Clues from Invertebrates via Fish to Mammals.</a> Frontiers in Immunology. 5, 459 (2014).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella:+A+Novel+Invertebrate+Model+to+Distinguish+Intestinal+Symbionts+From+Pathobionts.">Galleria mellonella: A Novel Invertebrate Model to Distinguish Intestinal Symbionts From Pathobionts.</a> Frontiers in Immunology. 9 (2114), (2018).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. , 1-16 (2016).</li><li>Bolouri Moghaddam, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+the+Galleria+mellonella+innate+immune+system+is+maximized+by+the+co-presentation+of+diverse+antimicrobial+peptides.">The potential of the Galleria mellonella innate immune system is maximized by the co-presentation of diverse antimicrobial peptides.</a> Biological Chemistry. 397 (9), 939-945 (2016).</li><li>Casanova-Torres, A. M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Signaling+and+Antimicrobial+Peptide+Expression+in+Lepidoptera.">Immune Signaling and Antimicrobial Peptide Expression in Lepidoptera.</a> Insects. 4 (3), 320-338 (2013).</li><li>Mukherjee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+system+for+studying+Listeria+pathogenesis.">Galleria mellonella as a model system for studying Listeria pathogenesis.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (1), 310-317 (2010).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunological and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Miyata, S., Casey, M., Frank, D. W., Ausubel, F. M., Drenkard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+Galleria+mellonella+caterpillar+as+a+model+host+to+study+the+role+of+the+type+III+secretion+system+in+Pseudomonas+aeruginosa+pathogenesis.">Use of the Galleria mellonella caterpillar as a model host to study the role of the type III secretion system in Pseudomonas aeruginosa pathogenesis.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2404-2413 (2003).</li><li>Waidmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteroides+vulgatus+protects+against+Escherichia+coli-induced+colitis+in+gnotobiotic+interleukin-2-deficient+mice.">Bacteroides vulgatus protects against Escherichia coli-induced colitis in gnotobiotic interleukin-2-deficient mice.</a> Gastroenterology. 125 (1), 162-177 (2003).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extensive+Mobilome-Driven+Genome+Diversification+in+Mouse+Gut-Associated+Bacteroides+vulgatus+mpk.">Extensive Mobilome-Driven Genome Diversification in Mouse Gut-Associated Bacteroides vulgatus mpk.</a> Genome Biology and Evolution. 8 (4), 1197-1207 (2016).</li><li>Hermann-Bank, M. L., Skovgaard, K., Stockmarr, A., Larsen, N., Molbak, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiotassay:+a+high-throughput+qPCR+approach+combinable+with+next+generation+sequencing+to+study+gut+microbial+diversity.">The Gut Microbiotassay: a high-throughput qPCR approach combinable with next generation sequencing to study gut microbial diversity.</a> BMC Genomics. 14, 788 (2013).</li><li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OmpA+variants+affecting+the+adherence+of+ulcerative+colitis-derived+Bacteroides+vulgatus.">OmpA variants affecting the adherence of ulcerative colitis-derived Bacteroides vulgatus.</a> Journal of Medical and Dental Science. 57 (1), 55-64 (2010).</li><li>Freitak, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+maternal+transfer+of+bacteria+can+mediate+trans-generational+immune+priming+in+insects.">The maternal transfer of bacteria can mediate trans-generational immune priming in insects.</a> Virulence. 5 (4), 547-554 (2014).</li><li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR.">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Research. 29 (9), 45 (2001).</li><li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis.">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (70), e4392 (2012).</li><li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis.">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (70), e4392 (2012).</li></ol>

G. mellonella 모델은 조직의 감염 접근21세균 독성 요인 평가 하기 위해 자주 사용된 모델. 이후 많은 병원 균과 박테리아 구두 식민지 또는 감염 경로 통해 호스트를 입력, 새로운 통찰력 G. mellonella 구두 식민과 감염에 대 한 모델로 평가를 찾이 필요가 있다.
G. mellonella 15-37 ° C 사이 가능성은 큰 장점이 있기 때문에 대부분 포유류 모델 37 ° C...

장내 미생물의 항상성 유지를 위한 필수 구성 요소 이며 모두 타고 난 및 적응형 면역 반응1,2를 포함 한다. 공생 microbiota 커뮤니티 다른 주요 공생 성분에 의해 특징입니다: symbionts 중요 한 immunomodulatory 기능을 가질 수 있는 해로운 효과 유전으로 predisposed pathobionts 효능 효과 부여 호스트 및 홍보 하 고 방 아 쇠 창 자 염증3,4. Symbionts 및 pathobionts에 대 한 많은 연구와 숙주 면역 체계에 영향을 미치는 그들의 주로 공부 적응 면역 응답 출판 되었습니다.
이러한 연구 조사와 보호에 대 한 많은 동물 포함 동물 실험에 대 한 사용의 공공 이익 증가의 이후 우리는 찾을 수 있도록 다른 박테리아의 심사에 대 한 면역성 대체 모델 추구 속성입니다. 곤충, 특히 갤러리아 mellonella, 감염 연구에서 널리 사용 되는 대체 모델은. G. mellonella 는 낮은 비용, 높은 처리량; 등 다른 장점 결합 그것은 자연 노출 경로 박테리아의 구강 관리를 허용 하 고 조직의 감염5,6있습니다. G. mellonella 더 포유류와 세균 독성 인자 식5에 대 한 최적의 생리 적 체온은 37 ° C에 외피를 수 있습니다. G. mellonella 의 주요 장점은 보존된 타고 난 면역 시스템을 비 자체에서 자기의 차별 하 고 인코딩합니다 opsonin hemolin6, 또는 apolipophorin 같은 패턴 인식 수용 체의 다양 한 7. 미생물 인식 시 G. mellonella 다른 다운스트림 체액 면역 응답을 실행할 수 있습니다. 그것은 산화 긴장 응답을 유도 하 고 개 (질소 산화 효소 synthase)와 NOX (NADPH 산화 효소)6,8의 활동을 포함 하는 반응성 산소 종 (선생님)을 분 비 수 있습니다. G. mellonella gloverin, moricin, cecropin 또는 defensin 같은 gallerimycin6, 등의 다른 혼합물의 분 비에 결과 강력한 항균 성 펩 티 드 (AMP) 응답을 활성화 하는 또한, 8,,910. 일반적으로, 앰프 그람 양성 및 그람 음성 박테리아와 곰 팡이 대 한 매우 광범위 한 호스트 특이성 있고 곤충 어떤 적응 응답10부족 이후 강력한 응답을 제공 해야 합니다. Gloverin 앰프 박테리아와 곰 팡이 대 한 활성 이며 외부 막 형성6,11을 억제. Moricins 막 관통과 기 공9,11을 형성 하 여 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대해 항균 기능을 전시 한다. Cecropins는 박테리아와 곰 팡이 대 한 활동을 제공 하 고 moricins9,10처럼 비슷하게 막 permeabilize. Gallerimycin 곰 팡이 방지 속성9defensin 같은 펩 티 드 이다. 흥미롭게도, 그것은 발견 했다 cecropin 및 gallerimycin의 조합 대장균10에 대 한 시너지 활동 했다.
때문에 그들의 사용 하기 쉬운 문자 G. mellonella 애벌레는 세균성 pathogenicity를 평가 하기 위해 종종 사용된 감염 모델입니다. 특히, G. mellonella 에서 얻은 데이터 연구가 대체 호스트 모델의 강도 마우스 지원에서 얻은 데이터와 연관. 그것은 조직의 감염 후 감염 마우스 모델에서의 Listeria monocytogenes 가장 병원 성 serotypes G. mellonella 에서 높은 사망 율에 또한 지도 발견 했다. 또한, 악성 serotypes 덜 밝혀졌다 G. mellonella 모델12에서 보다 적게 악성도 될. 인간 병원 성 균 류 칸디 다 albicans와 비슷한 관찰 되었습니다. 독성 다른 C. albicans 의 종자는 조직의 감염 및 애벌레 생존의 후속 모니터링에 의해 부과 되었습니다. 마우스 avirulent 긴장은 또한 avirulent 또는 전시 마우스 악성 변종 리드 하 고 또한 애벌레 사망률13반면 G. mellonella에 독성을 감소. G. mellonella 모델 추가 녹 농 균14의 유형 3 분 비 시스템 pathogenicity 요소를 식별 하기 위해 사용 될 수 있습니다.
G. mellonella 관련 된 대부분의 조사 조직의 감염 방식을 사용 하 여 독성 요인에 초점을 했다 이후 우리 메서드는 구두 강제로에 장내 공생의 분석에 적합 제공에 특히 흥미 있었다 모델은 우리 수 애벌레 당 박테리아의 다른 복용량을 적용 하 고 뿐만 아니라 애벌레 사망률을 관찰 하지만 장내 항상성 유지를 타고 난 면역 반응의 다른 특징을 분석.
우리의 방법은 우리가 박테리아의 응용 프로그램 및 RNA 발현의 분석을 결합 하는 이후 대체 모델로 G. mellonella 의 사용을 증가 하는 데 도움이 됩니다. 만 때 구강 관리 및 조직의 감염 후 사망률 뿐만 아니라 관찰 후 면역 반응의 분석을 포함 한 세균 병 인 연구의 의미를 강화 하기 위해 유용 하다. 우리의 방법을 수 있습니다 박테리아의 면역성 속성의 분석에 대 한 비 병원 성 공생 이후 살아있는 유기 체에는 장 방 벽을 제공 하 여 세포 배양 보다 더 복잡 한 조건을 제공 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:701px;" width="702">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1.5 mL tubes</td>
			<td style="width:200px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 bp DNA ladder&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15628019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1-Bromo-3-Chloropropane (BCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">B9673</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2 mL tubes</td>
			<td style="width:200px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">0030120094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2x Mangomix</td>
			<td style="width:200px;">Bioline</td>
			<td style="width:119px;">BIO-25033</td>
			<td>Colony PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL tubes</td>
			<td style="width:200px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:119px;">210 261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:200px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">840004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beeswax</td>
			<td style="width:200px;">Mixed-Store.de</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brain heart infusion broth</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">CM1135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CloneJET PCR Cloning Kit</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">K1232</td>
			<td>Cloning vector for 16S fragments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Corn grits</td>
			<td style="width:200px;">Osterm&#252;hle Naturkost GmbH</td>
			<td style="width:119px;">306</td>
			<td>Organic cultivation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Difco LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">BD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Difoco LB Broth, Miller (Luria-Bertani)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">244610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNA-free DNA Removal Kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">244510</td>
			<td>&#160;Dnase digestion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dried yeast</td>
			<td style="width:200px;">Rapunzel</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td>Organic cultivation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">20821.330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">W252506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Honey</td>
			<td style="width:200px;">Osterm&#252;hle Naturkost GmbH</td>
			<td style="width:119px;">487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropanol&#160;</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">20842.330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lightcycler 480 Instrument II</td>
			<td style="width:200px;">Roche Molecular Systems</td>
			<td style="width:119px;">5015278001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LightCycler 480 Multiwell Plate 96, white</td>
			<td style="width:200px;">Roche Molecular Systems</td>
			<td style="width:119px;">4729692001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Manual Microsyringe Pump with Digital Display</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DMP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-Fine+ U-100 insulin syringe 0.3 x 8 mm</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">324826</td>
			<td>Oral administration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mortar, unglazed</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td>410-9327&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nanodrop</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-400-518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nuclease-free water&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10977035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxoid AnaeroGen sachets&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AN0025A</td>
			<td>Quality and quantity of RNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PCR stripes</td>
			<td style="width:200px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">710970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pestle, unglazed grinding surface</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td>410-9324&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phusion proof-reading enzyme&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F553S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Primers</td>
			<td style="width:200px;">Biomers</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PureYield Plasmid Miniprep System</td>
			<td style="width:200px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">A1222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantiFast SYBR Green PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">204056</td>
			<td>qPCR for bacterial copy number measurment</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen</td>
			<td>204156</td>
			<td>qRT-PCR for gene expression measurements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantiTect Reverse Transcription Kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">205311</td>
			<td>cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Qubit Assay Tubes</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Q32856</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Qubit dsHS DNA kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Q32851</td>
			<td>Quantification of plasmid and cDNA samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Qubit fluorometer</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Q33226</td>
			<td>Quantification of plasmid and cDNA samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RNase-ExitusPlus</td>
			<td style="width:200px;">AppliChem</td>
			<td style="width:119px;">A7153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rnasin Ribonuclease Inhibitor</td>
			<td style="width:200px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">N2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Skimmed milk powder</td>
			<td>Sucofin</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SYBR safe DNA Gel Stain</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S33102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRI reagent&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T9424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Weighing boat</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:119px;">10803-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wheat meal</td>
			<td style="width:200px;">Osterm&#252;hle Naturkost GmbH</td>
			<td style="width:119px;">6462</td>
			<td>Organic cultivation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a galleria mellonella oral administration model to study commensal-induced innate immune responses

숙주 면역 체계에 공생 박테리아의 면역성 잠재력의 조사 장 호스트-미생물 상호 작용을 공부 하면 한 필수 구성 요소입니다. 그것은 잘 다른 공생 호스트 장 면역 체계를 자극 하는 다른 잠재력을 전시 설립. 이러한 조사는 척추 동물, 특히 설치류를 포함 한다. 이후 증가 윤리적인 우려 척추 동물을 포함 하는 실험과 함께 연결, 무척 추 동물 대체 모델에 대 한 높은 수요가 있다.
여기, 우리는 G. mellonella 면역 시스템에 공생 비 병원 성 박테리아와 공생의 면역성 잠재력의 가능한 평가 사용 하 여 갤러리아 mellonella 구강 관리 모델을 제공 합니다. G. mellonella Bacteroides vulgatus , 대장균등 다른 면역성 잠재력과 공생의 분석을 허용 하는 유용한 다른 무척 추 동물 대체 모델은 설명 합니다. 흥미롭게도, 박테리아 전시는 포유류와 비슷한 애벌레에 죽이 효과가 없습니다. G. mellonella 의 면역 반응 척 추가 있는 타고 난 면역 반응에 대 등 했다 하 고 박테리아의 인식 및 항균 분자의 생산을 포함 한다. 우리가 제안 하는 G. mellonella 건강 한 포유류 개인에서 잘 알려진 이전 microbiota 균형을 복구할 수 있었다. 제공 하는 G. mellonella 및 척추 동물에 비해 타고 난 면역 반응, 비록 G. mellonella 는 적합 한 면역 계통 항구 하지 않습니다. 타고 난 면역 체계의 구성 하는 조사 요소는 진화 보존, 모델 세균 면역성 속성의 첫 번째 해 분석을 수 있습니다.

G. mellonella hemolymph 감염 모델에는 다양 한 병원 체의 독성 요인 분석에 널리 사용. 대부분 측정 애벌레 사망률은 매우 쉬운 방법의 분석을 포함 합니다. 그럼에도 불구 하 고,이 메서드는 일반적 면역 반응에 대 한 결론을 허용 하지 않습니다 고 척 추가 있는 면역 메커니즘 G. mellonella 면역 반응의 결과 연결. G. mellonella 구강 관리 모델 다른 한편으로 거의...

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A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

여기, 우리 갤러리아 mellonella 애벌레를 사용 하는 구강 관리 모델에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 하 고 특성화 하는 방법을 타고 난 면역 반응 유도. 이 프로토콜을 사용 하 여, 실제적인 경험 없이 연구원 G. mellonella 강제로 메서드를 사용할 수 있게 됩니다.

갤러리아 mellonella 구강 관리 모델 Study Commensal-Induced 타고 난 면역 반응에

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

우리의 프로토콜은 전신 감염 모델에서 천연 구강 경로를 통해 세균 투여를 허용하는 모델로 G.mellonella의 사용을 확장합니다. G.mellonella는 유충이 인간 병원성 박테리아에 사용될 수 있기 때문에 타고난 마이크로 포스트 상호 작용의 다른 특징을 분석하는 설치류를 위한 적합한 대체 모델입니다. 먼저 성인 나방이 낳은 알을 어둠 속에서 섭씨 30도에서 왁스 나방 기판이 들어있는 두 리터 상자로 옮기는 것으로 시작합니다.1 ~ 2 주 후에, 작고 작은 애벌레가 눈에 띄게 될 때, 신선한 기판으로 기판을 포함하는 애벌레의 25 그램을 전송합니다. 그들의 크기에 따라 2 주 후에 애벌레를 동기화, 왁스 나방 기판에 새로운 두 리터 용기에 30 ~ 40 애벌레의 그룹으로. 2 주 후, 무게에 의해 실험에 대 한 애벌레를 선택 합니다.180~200밀리그램의 질량을 가진 창백하고 빠르게 움직이는 애벌레만 사용하십시오. 애벌레를 강제로 먹이려면, 경구 용 무딘 바늘로 인슐린 주사기를 적재하고, 애벌레 당 DPBS의 10 마이크로 리터 당 일곱 번째 박테리아에 1회 10을 로드합니다. 주사기를 미세 주사기 펌프에 적재합니다.하악골 사이에 주사기를 조심스럽게 삽입하고 박테리아를 전달하기 전에 유충이 입 부분을 열 때까지 기다립니다. 모든 애벌레가 먹이를 주었을 때, 어둠 속에서 동물을 섭씨 37도에서 1~24시간 사이 배양하십시오. 유충 가공의 경우 RNase 오염을 방지하기 위해 에탄올과 스프레이 시약으로 안전 후드를 청소하십시오.스냅 액체 질소에 살아있는 애벌레를 동결. 박격포와 유봉및 소량의 액체 질소를 사용하여 각 개별 냉동 유충을 균질화합니다. 분말 균주가 생성되면, 일회용 대기 보트로 균류를 전송하고 액체 질소가 증발 할 때까지 기다립니다.모든 애벌레가 균질화되었을 때, 2 밀리리터 튜브에 TRIzol의 1 밀리리터와 분말 균질화를 혼합합니다. 1 시간 동안 실온에서 혼합물을 배양. 인큐베이션의 끝에서, 원심 분리에 의해 균동화 펠릿.상체를 새 튜브로 옮기습니다. 1-브로모-3-클로로프로판 또는 BCP의 200 마이크로리터와 상수체를 섞는다. 소용돌이와 실내 온도에서 5 분 동안 배양하고 얼음에 10 분 배양.두 번째 인큐베이션의 끝에서, 원심분리기 BCP는 반응을 추가하고 새로운, 두 밀리리터 튜브로 상부 투명 층을 전송. 5분 동안 튜브를 혼합하고 반전시킴으로써 500마이크로리터의 이소프로판올을 통해 이송된 상층의 RNA를 침전시한다. 그런 다음 원심분리에 의해 침전RNA를 수집한다.침전된 RNA 펠릿을 75%에탄올의 500마이크로리터로 세척하고 실온에서 5~10분 동안 RNA를 건조시하십시오. 에탄올이 증발하면, 말린 RNA 펠릿에 뉴클레아제없는 물에 100 마이크로리터를 추가하고 펠릿이 완전히 용해 될 때까지 튜브를 조심스럽게 소용돌이시킵니다. 표준 프로토콜에 의한 RNA 품질 및 수량을 측정하여 260 대 280 비율이 약 2이고 260 대 230 비율은 2~ 2.2의 범위에 있습니다.그런 다음 표준 프로토콜에 따라 DNase 소화 및 유전자 발현 분석을 위해 절연 된 RNA의 5 마이크로 그램을 사용합니다. G.mellonella는 박테리아가 검출될 수 없을 때까지 세균 부하를 공급하는 초기 힘을 지울 수 있습니다. B.vulgatus와 E.coli 둘 다의 16s 유전자 복사 수로 실질적으로 24 시간 안에 감소했습니다.G.mellonella 애벌레를 투여한 Commensal은 다양한 선천성 면역 마커 유전자의 RNA 유전자 발현을 유도한다. 예를 들어, LPS 인식 분자, 아폴리포포린 및 헤몰린은 일반적으로 B.vulgatus 투여애벌레에 비해 대장균 투여 애벌레에서 더 높게 발현된다. 또한, 반응성 산소 및 질소 종의 생산은 B.vulgatus뿐만 아니라 항산화 GST 유전자 발현에 비해 대장균력 공급에 강하게 강화된다.또한, 차동 미생물 펩티드 발현은 B.vulgatus 힘 공급에 반응하는 것보다 대장균 투여 후 더 강하게 유도된다. 건강하고 흰색이며 빠르게 움직이는 애벌레만 사용하여 유충을 강조하는 것을 피하고 필요한 모든 컨트롤을 포함하기 위해 힘 먹이 기 동안 인내심을 사용해야합니다. G.mellonella 면역 마커의 활성화는 RUS 또는 GST 활성 작용체에 의해 직접 결정될 수 있으며 ANP의 풍부는 세균 성장 억제 작용에 의해 결정될 수 있다.이 기술은 근생 및 병원성 박테리아를 위한 검열 공구로 이용되고 많은 척추동물의 희생 없이 장 공생및 병원체를 탐구하기 위한 것입니다. 액체 질소, BCP 또는 TRIzol 물질로 작업 할 때 항상 적절한 개인 보호 장비를 사용합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

곤충<em&gt; 갤러리아 mellonella</em&gt; 세균 Pathogenesis를 조사 할 수있는 강력한 감염 모델로

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

연구

면역학 및 감염병학

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

사용<em&gt; 갤러리아 mellonella</em&gt; 모델 생물로 공부하기<em&gt; 레지오넬라 뉴모 필라</em&gt; 감염

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

사이토 카인 생산의 바이러스 성 회피에 타고난 면역 신호를 해부

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

마우스 대 식세포의 타고난 면역 반응을 조사하기 위해 RNA 간섭을 사용하여

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

의 Zebrafish의 애벌레 모델의 선천성 면역 반응의 비 침습적 영상<em&gt; 연쇄상 구균 iniae</em&gt; 감염

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

복구 시간 증가 및 제한 염증 반응에서 미주 신경 자극 메커니즘을 연구에 LPS 관리를 감소

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

갤러리아 mellonella Waxworm 감염 모델 전파 칸디 다에 대 한

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

마우스 모델을 평가 타고 난 면역 반응 포도 상 구 균 감염

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

결핵 균복합체를 연구하기 위한 감염 모델로 무척추동물 갤러리아 멜로넬라 사용

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...