Name: a galleria mellonella oral administration model to study commensal-induced innate immune responses
Uploaded: 2019-03-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses at JoVE.com

Bu eser enfeksiyon araştırma (DZIF) (SPP1656) DFG, DFG araştırma eğitim grubu 1708, Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF) ve Alman Merkezi tarafından finanse edildi.

1. G. mellonella yetiştirme ve deneyler için larvalar hazırlanması
Not: Son larva biçim yumurtadan döngüsü yaklaşık 5-6 hafta sürer.
<ol><li>Balmumu güve substrat (% 22 Mısır ezmesi, % 22 buğday yemek, % 17.5 balmumu, % 11 yağsız süt tozu, % 11 tatlım, % 11 gliserol, kurutulmuş % 5.5 Maya) içeren 2 L kutularına yetişkin güveler barındırmanın yumurtaları aktarın. Karanlıkta 30 ° C'de ıslahı bütün gerçekleştirin.</li>
	<li>Yaklaşık 1-2 ne zaman k...

<ol>
	<li>Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+the+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).</li><li>Muniz, L. R., Knosp, C., Yeretssian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+antimicrobial+peptides+during+homeostasis,+infection,+and+disease.">Intestinal antimicrobial peptides during homeostasis, infection, and disease.</a> Frontiers in Immunology. 3, 310 (2012).</li><li>Ivanov, I. I., Honda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+commensal+microbes+as+immune+modulators.">Intestinal commensal microbes as immune modulators.</a> Cell Host Microbe. 12 (4), 496-508 (2012).</li><li>Ayres, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammasome-microbiota+interplay+in+host+physiologies.">Inflammasome-microbiota interplay in host physiologies.</a> Cell Host Microbe. 14 (5), 491-497 (2013).</li><li>Champion, O. L., Titball, R. W., Bates, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+G.+mellonella+Larvae+to+Provide+Reliable+and+Reproducible+Results+in+the+Study+of+Fungal+Pathogens.">Standardization of G. mellonella Larvae to Provide Reliable and Reproducible Results in the Study of Fungal Pathogens.</a> Journal of Fungi (Basel). 4 (3), (2018).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Insect Science. , (2016).</li><li>Buchmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+Innate+Immunity:+Clues+from+Invertebrates+via+Fish+to+Mammals.">Evolution of Innate Immunity: Clues from Invertebrates via Fish to Mammals.</a> Frontiers in Immunology. 5, 459 (2014).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella:+A+Novel+Invertebrate+Model+to+Distinguish+Intestinal+Symbionts+From+Pathobionts.">Galleria mellonella: A Novel Invertebrate Model to Distinguish Intestinal Symbionts From Pathobionts.</a> Frontiers in Immunology. 9 (2114), (2018).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. , 1-16 (2016).</li><li>Bolouri Moghaddam, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+the+Galleria+mellonella+innate+immune+system+is+maximized+by+the+co-presentation+of+diverse+antimicrobial+peptides.">The potential of the Galleria mellonella innate immune system is maximized by the co-presentation of diverse antimicrobial peptides.</a> Biological Chemistry. 397 (9), 939-945 (2016).</li><li>Casanova-Torres, A. M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Signaling+and+Antimicrobial+Peptide+Expression+in+Lepidoptera.">Immune Signaling and Antimicrobial Peptide Expression in Lepidoptera.</a> Insects. 4 (3), 320-338 (2013).</li><li>Mukherjee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+system+for+studying+Listeria+pathogenesis.">Galleria mellonella as a model system for studying Listeria pathogenesis.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (1), 310-317 (2010).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunological and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Miyata, S., Casey, M., Frank, D. W., Ausubel, F. M., Drenkard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+Galleria+mellonella+caterpillar+as+a+model+host+to+study+the+role+of+the+type+III+secretion+system+in+Pseudomonas+aeruginosa+pathogenesis.">Use of the Galleria mellonella caterpillar as a model host to study the role of the type III secretion system in Pseudomonas aeruginosa pathogenesis.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2404-2413 (2003).</li><li>Waidmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteroides+vulgatus+protects+against+Escherichia+coli-induced+colitis+in+gnotobiotic+interleukin-2-deficient+mice.">Bacteroides vulgatus protects against Escherichia coli-induced colitis in gnotobiotic interleukin-2-deficient mice.</a> Gastroenterology. 125 (1), 162-177 (2003).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extensive+Mobilome-Driven+Genome+Diversification+in+Mouse+Gut-Associated+Bacteroides+vulgatus+mpk.">Extensive Mobilome-Driven Genome Diversification in Mouse Gut-Associated Bacteroides vulgatus mpk.</a> Genome Biology and Evolution. 8 (4), 1197-1207 (2016).</li><li>Hermann-Bank, M. L., Skovgaard, K., Stockmarr, A., Larsen, N., Molbak, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiotassay:+a+high-throughput+qPCR+approach+combinable+with+next+generation+sequencing+to+study+gut+microbial+diversity.">The Gut Microbiotassay: a high-throughput qPCR approach combinable with next generation sequencing to study gut microbial diversity.</a> BMC Genomics. 14, 788 (2013).</li><li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OmpA+variants+affecting+the+adherence+of+ulcerative+colitis-derived+Bacteroides+vulgatus.">OmpA variants affecting the adherence of ulcerative colitis-derived Bacteroides vulgatus.</a> Journal of Medical and Dental Science. 57 (1), 55-64 (2010).</li><li>Freitak, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+maternal+transfer+of+bacteria+can+mediate+trans-generational+immune+priming+in+insects.">The maternal transfer of bacteria can mediate trans-generational immune priming in insects.</a> Virulence. 5 (4), 547-554 (2014).</li><li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR.">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Research. 29 (9), 45 (2001).</li><li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis.">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (70), e4392 (2012).</li><li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis.">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (70), e4392 (2012).</li></ol>

G. mellonella modeli bir sistemik enfeksiyon yaklaşım21bakteriyel virülans faktörleri değerlendirmek için sık kullanılan bir modeldir. Bu yana birçok patojenler ve bakteri ana bilgisayar yolu ile sözlü kolonizasyon veya enfeksiyon yol girin, yeni anlayışlar G. mellonella sözlü kolonizasyon ve enfeksiyon için bir model olarak değerlendirmek için bulunmak gerekiyor.
Vücut sıcaklığı 37 ° C5en memeli modeller...

Bağırsak microbiome homeostazı bakım için gerekli bir bileşenidir ve her ikisi de doğuştan gelen ve edinilmiş bağışıklık yanıtı1,2içerir. Komensal microbiota toplum tarafından farklı ana komensal bileşenlerinin karakterizedir: yararlı etkileri önemli immunomodulatory fonksiyonları ve zararlı etkileri genetik olarak yatkın olabilir pathobionts tarafından tevdi simbiont ev sahipliği yapan ve teşvik ve bağırsak iltihabı3,4tetikler. Birçok çalışma simbiont ve pathobionts ve onların etkisi ana bağışıklık sistemi esas olarak edinilmiş bağışıklık yanıtı eğitim yayınlanmıştır.
İncelemeler ve korunması için birçok hayvan dahil bu çalışmaları ve kamu yararı artan deney için kullanılan hayvanların yerini beri immünojenik farklı bakteriyel bir tarama için izin vermek için model değiştirme bulmak için aramak özellikleri. Böcekler, özellikle Galleria mellonella, enfeksiyon araştırma bir çok kullanılan yedek modeli olan. G. mellonella düşük maliyet ve yüksek işlem hacmi gibi farklı avantajlarını birleştiren; bakteri doğal poz yol olan sözlü yönetimine izin verir ve sistemik enfeksiyon5,6için sağlar. G. mellonella daha da kuluçka 37 ° c °, memeliler ve bakteriyel virülans faktörü ifade5için optimum fizyolojik vücut sıcaklığını sağlar. Korunmuş doğuştan gelen bağışıklık sistemi kendi kendine ayırımcılığa karşı olmayan kendine sağlar ve desen tanıma reseptörleri apolipophorin veya bağlar hemolin6, gibi çeşitli kodlar G. mellonella büyük avantajı olduğunu 7. mikrop tanıma farklı akış aşağı humoral bağışıklık yanıtı G. mellonella tetikleyebilir. Bu oksidatif stres yanıt teşvik ve Reaktif oksijen türlerine (ROS) NOS (nitrik oksidaz synthase) ve NOX (NADPH oksidaz)6,8aktivite içeren salgılar. Buna ek olarak, gloverin, moricin, cecropin veya defensin benzeri gallerimycin6, gibi farklı amper karışımı salgılanmasını sonuçlanan bir güçlü antimikrobiyal peptid (AMP) yanıt G. mellonella etkinleştirir 8,9,10. Genellikle, amper gram pozitif ve gram-negatif bakteri ve mantar karşı oldukça geniş ana bilgisayar özgüllük ve böcekler herhangi bir adaptif yanıt10eksik olan bu yana güçlü bir yanıt sağlamak zorunda. Gloverin bakteri ve mantar karşı etkin bir AMFİ ve dış membran oluşumu6,11engeller. Moricins membran delici ve gözenek9,11şekillendirme antimikrobiyal işlevlerine gram pozitif ve gram-negatif bakteri karşı sergi. Cecropins bakteri ve mantar karşı etkinliği sağlamak ve membran moricins9,10gibi benzer şekilde permeabilize. Gallerimycin anti-mantar özellikleri9defensin benzeri peptid var. İlginçtir, bu cecropin ve gallerimycin ile birlikte E. coli10karşı sinerjik bir etkinlik vardı bulundu.
Onların kullanımı kolay karakter G. mellonella nedeniyle larva bakteriyel patojenitesi değerlendirmek için bir sık kullanılan enfeksiyon modeli vardır. Özellikle, G. mellonella elde edilen veri çalışmalarda fareler çekmek--dan bu alternatif ana modeli gücünü elde edilen verilerle aralarındaki ilişkileri belirlemektir. Listeria Monositogenez en patojenik serotipleri bir fare enfeksiyon modelinde de G. mellonella yüksek mortalite oranları için sistemik enfeksiyon sonra yol bulundu. Daha fazla, daha az öldürücü serotipleri de G. mellonella model12' daha az zehirli olduğu ortaya çıktı. Benzer gözlemler insan patojenik mantarlar Candida albicansile yapılmıştır. Virülans farklı C. albicans suşları değerlendirildi sistemik enfeksiyon ve sonraki larva yaşama izleyerek. Fare olmayan suşlar da olmayan ya da sergilenen fare öldürücü soy da yüksek larva ölüm13kurşun ise G. mellonella, virülans azaltılmış. G. mellonella modeli daha fazla tür 3 salgı sistemi patojenitesi faktörler Pseudomonas aeruginosa14tanımlamak için kullanılabilir.
Çoğu araştırmalar G. mellonella içeren sistemik enfeksiyon yaklaşımı kullanarak virülans faktörleri üzerinde durulmuştur beri biz bir sözlü kuvvet içinde bağırsak commensals analizi için uygun bir yöntem sağlayan özellikle ilgi vardı hangi biz bakteri larva başına ayrı bir doz uygulanır ve larva ölüm oranı sadece gözlemlemek ama doğuştan gelen bağışıklık yanıtı bağırsak homeostazı korumak için farklı işaretlerinden analiz modeli.
Bizim yöntem biz bakteri uygulanması ve RNA ifade analizi birleştirmek beri model değiştirme olarak G. mellonella kullanımını artırmak için yardımcı olur. Sadece sözlü yönetim ve sadece ölüm oranları gözlem sistemik enfeksiyon sonra sonra bağışıklık yanıtı analizi de dahil olmak üzere zaman bakteriyel Patogenez çalışmalar anlamını güçlendirmek yararlı değildir. Bizim yöntemleri sağlar bakteriyel immünojenik özellikleri analiz için patojenik olmayan bu yana commensals yaşayan bir organizma bir bağırsak bariyer sunarak hücre kültürü daha daha karmaşık koşullar sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:701px;" width="702">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1.5 mL tubes</td>
			<td style="width:200px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 bp DNA ladder&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15628019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1-Bromo-3-Chloropropane (BCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">B9673</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2 mL tubes</td>
			<td style="width:200px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">0030120094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2x Mangomix</td>
			<td style="width:200px;">Bioline</td>
			<td style="width:119px;">BIO-25033</td>
			<td>Colony PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL tubes</td>
			<td style="width:200px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:119px;">210 261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:200px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">840004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beeswax</td>
			<td style="width:200px;">Mixed-Store.de</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brain heart infusion broth</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">CM1135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CloneJET PCR Cloning Kit</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">K1232</td>
			<td>Cloning vector for 16S fragments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Corn grits</td>
			<td style="width:200px;">Osterm&#252;hle Naturkost GmbH</td>
			<td style="width:119px;">306</td>
			<td>Organic cultivation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Difco LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">BD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Difoco LB Broth, Miller (Luria-Bertani)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">244610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNA-free DNA Removal Kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">244510</td>
			<td>&#160;Dnase digestion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dried yeast</td>
			<td style="width:200px;">Rapunzel</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td>Organic cultivation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">20821.330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">W252506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Honey</td>
			<td style="width:200px;">Osterm&#252;hle Naturkost GmbH</td>
			<td style="width:119px;">487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropanol&#160;</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">20842.330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lightcycler 480 Instrument II</td>
			<td style="width:200px;">Roche Molecular Systems</td>
			<td style="width:119px;">5015278001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LightCycler 480 Multiwell Plate 96, white</td>
			<td style="width:200px;">Roche Molecular Systems</td>
			<td style="width:119px;">4729692001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Manual Microsyringe Pump with Digital Display</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DMP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-Fine+ U-100 insulin syringe 0.3 x 8 mm</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">324826</td>
			<td>Oral administration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mortar, unglazed</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td>410-9327&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nanodrop</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-400-518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nuclease-free water&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10977035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxoid AnaeroGen sachets&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AN0025A</td>
			<td>Quality and quantity of RNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PCR stripes</td>
			<td style="width:200px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">710970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pestle, unglazed grinding surface</td>
			<td style="width:200px;">VWR</td>
			<td>410-9324&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phusion proof-reading enzyme&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F553S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Primers</td>
			<td style="width:200px;">Biomers</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PureYield Plasmid Miniprep System</td>
			<td style="width:200px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">A1222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantiFast SYBR Green PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">204056</td>
			<td>qPCR for bacterial copy number measurment</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen</td>
			<td>204156</td>
			<td>qRT-PCR for gene expression measurements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantiTect Reverse Transcription Kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">205311</td>
			<td>cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Qubit Assay Tubes</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Q32856</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Qubit dsHS DNA kit&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Q32851</td>
			<td>Quantification of plasmid and cDNA samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Qubit fluorometer</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Q33226</td>
			<td>Quantification of plasmid and cDNA samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RNase-ExitusPlus</td>
			<td style="width:200px;">AppliChem</td>
			<td style="width:119px;">A7153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rnasin Ribonuclease Inhibitor</td>
			<td style="width:200px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">N2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Skimmed milk powder</td>
			<td>Sucofin</td>
			<td style="width:119px;">&#160;-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SYBR safe DNA Gel Stain</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S33102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRI reagent&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T9424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Weighing boat</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:119px;">10803-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wheat meal</td>
			<td style="width:200px;">Osterm&#252;hle Naturkost GmbH</td>
			<td style="width:119px;">6462</td>
			<td>Organic cultivation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a galleria mellonella oral administration model to study commensal-induced innate immune responses

Ana bağışıklık sistemi üzerinde Komensal bakteriler immünojenik potansiyelinin incelenmesi bir temel bağırsak ana bilgisayar-mikrop etkileşimleri okurken bileşenidir. De farklı commensals ana bağırsak bağışıklık sistemini uyarmak için farklı bir potansiyel sergi kuruldu. Bu tür araştırmalar omurgalı hayvanlar, özellikle kemirgenler içerir. Beri artan etik kaygılar omurgalılar içeren deneyler ile bağlantılı, omurgasız yedek modelleri için yüksek bir talep vardır.
Burada, biz komensal sigara Patojen bakteriler ve commensals immünojenik potansiyelini ortaya çıkarmak mümkün değerlendirmenin G. mellonella bağışıklık sistemi üzerinde kullanarak Galleria mellonella sözlü yönetim modeli sağlar. G. mellonella Bacteroides vulgatus ve Escherichia coligibi farklı immünojenik potansiyeli olan commensals analiz sağlar model yararlı alternatif omurgasız değiştirme olduğunu ispat. İlginçtir, bakteri öldürme etkilemez larvalar, memeliler için benzer olduğu sergiledi. G. mellonella bağışıklık yanıtı omurgalı doğuştan gelen bağışıklık yanıtı ile karşılaştırılabilir ve bakteri tanınması ve antimikrobiyal moleküllerin üretimini içerir. Önerdiğimiz G. mellonella sağlıklı memeli bireylerin bilinen önceki microbiota dengeyi yeniden başardı. G. mellonella ve omurgalıların karşılaştırılabilir doğuştan gelen bağışıklık yanıtları sağlayan rağmen G. mellonella edinilmiş bağışıklık sistemi liman değil. Doğuştan gelen bağışıklık sisteminin incelenen bileşenleri korunmuş evrimsel olduğundan, model bakteriyel immünojenik özellikleri prescreening ve ilk analiz sağlar.

G. mellonella hemolymph enfeksiyon modelinde çok çeşitli patojenler virülans faktörleri analiz için yaygın olarak kullanılan. Çoğu ölçümleri oldukça kolay bir yöntem larva ölüm analizini içerir. Yine de, bu yöntem değil genel olarak bağışıklık yanıtı hakkında sonuçlar izin ve G. mellonella bağışıklık yanıtı sonuçlarını omurgalı bağışıklık mekanizmasını kullanarak bağlayın. G. mellonella sözlü yönetim modeli di?...

Watch this Scientific Journal Video about A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses at JoVE.com

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Burada, biz Galleria mellonella larva kullanarak bir sözlü yönetim modeli için detaylı bir protokol sağlar ve doğuştan gelen bağışıklık yanıtı nasıl karakterize indüklenen. Bu iletişim kuralını kullanan, pratik deneyimi olmayan araştırmacılar G. mellonella yöntemi kuvvet kullanmak mümkün olacak.

Bir Galleria mellonella Oral yönetim modeli için Study Commensal-Induced doğuştan gelen bağışıklık yanıtı

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Protokolümüz G.mellonella kullanımını sistemik enfeksiyon modelinden doğal oral yol ile bakteriyel uygulama sağlayan bir modele genişletir. G.mellonella larvalar insan patojenik bakteriler için kullanılabilir gibi doğuştan gelen mikro-post etkileşimleri farklı işaretleri analiz kemirgenler için uygun bir yedek modeldir. Yetişkin güveler tarafından döşenen yumurtaları karanlıkta 30 derecede balmumu güve substratı içeren iki litrelik kutulara aktararak başlayın.1-2 hafta sonra, küçük ve küçük larva görünür hale geldiğinde, taze substrat içine substrat içeren larva 25 gram aktarın. Larvaları boyutlarına göre iki hafta sonra, balmumu güve substratı üzerinde yeni iki litrelik kaplarda 30-40 larva gruplarına senkronize edin. İki hafta sonra, kiloya göre deney için larvaları seçin.180 ila 200 miligram lık bir kütleye sahip sadece soluk, hızlı hareket eden larvalar kullanıyor. Larvaları beslemeye zorlamak için, insülin şırıngasını oral uygulama için künt uçlu bir iğneyle yükleyin, larva başına 10 mikrolitrede 10'dan 7'sine kadar. Şırıngayı bir mikroşun pompasına yükleyin.Bir larva mandibulalar arasında dikkatlice eklemeve bakteri teslim önce ağız parçaları açmak için bekleyin. Tüm larvalar beslendiğinde, karanlıktaki hayvanları 37 derecede, 1 ila 24 saat arasında kuluçkaya yatırın. Larva işleme için, RNase kontaminasyonunu önlemek için bir güvenlik başlığını etanol ve sprey reaktifi ile temizleyin.Canlı larvayı sıvı nitrojende dondurun. Bir harç ve havaneli ve sıvı azot küçük bir hacim kullanarak her bir dondurulmuş larva homojenize. Bir toz homojen üretildiğinde, homojeni tek kullanımlık bir bekleme teknesine aktarın ve sıvı nitrojenin buharlaşmasını bekleyin.Tüm larvahomojenize edildiğinde, toz homojenleri bir mililitre TRIzol ile iki mililitrelik bir tüpe karıştırın. Karışımı oda sıcaklığında bir saat kuluçkaya yatırın. Kuluçka sonunda, santrifüj ile homogenate pelet.Supernatant'ı yeni bir tüpe aktarın. 1-Bromo-3-kloropropan veya BCP 200 mikrolitre ile supernatant karıştırın. Girdap ve oda sıcaklığında beş dakika kuluçka, buz üzerinde 10 dakikalık kuluçka takip.İkinci kuluçka sonunda, BCP santrifüj reaksiyon ekledi ve yeni bir üst şeffaf tabaka transfer, iki mililitrelik tüp. Tüpü beş dakika karıştırıp ters çevirerek 500 mikrolitre izopropanol ile aktarılan üst katmanın RNA'sını çökeltin. Sonra santrifüj ile çökelti RNA toplamak.Çökelmiş RNA peletini %75 etanol500 mikrolitre ile yıkayın ve Oda sıcaklığında 5 ila 10 dakika boyunca RNA kurulayın. Etanol buharlaştığında, kurutulmuş RNA peletine çekirdeksiz suya 100 mikrolitre ribonükleaz inhibitörü ekleyin ve pelet tamamen eriyene kadar tüpü dikkatlice girdaplayın. RNA kalitesini ve miktarını standart protokollere göre ölçün, 260-280 oranının yaklaşık iki, 260-230 oranının ise iki ila 2,2 aralığında olmasını sağlar.Daha sonra standart protokollere göre, DNase sindirim ve gen ekspresyonu analizi için izole RNA beş mikrogram kullanın. G.mellonella hiçbir bakteri tespit edilene kadar ilk kuvvet bakteri yükü beslenen temizlemek mümkün. B.vulgatus ve E.coli'nin 16'lı gen kopya sayıları 24 saat içinde önemli ölçüde azaldı.Commensal çeşitli doğuştan gelen bağışıklık belirteç genlerinin RNA gen ekspresyonunu indüklenen g.mellonella larvaları uyguladı. Örneğin, LPS tanıma molekülleri, apolipophorin ve hemolin genellikle Daha yüksek E.coli uygulanan larvalar b.vulgatus uygulanan larvalar ile karşılaştırıldığında daha yüksek ifade edilir. Ayrıca, reaktif oksijen ve azot türlerinin üretimi, B.vulgatus'a göre E.coli kuvvet beslemesi ve antioksidatif GST gen ekspresyonu ile güçlü bir şekilde düzenlenir.Buna ek olarak, diferansiyel mikrobiyal peptit ekspresyonu B.vulgatus kuvvet beslemeyanıt daha E.coli uygulamasından sonra daha güçlü indüklenir. Larvaları strese sokmamak ve gerekli tüm kontrolleri dahil etmek için kuvvet besleme sırasında sabır kullanmak için sadece sağlıklı, beyaz, hızlı hareket eden larvaları kullanmayı unutmayın. G.mellonella immün belirteçlerinin aktivasyonu doğrudan RUS veya GST aktivitesi tahlilleri ile belirlenebilir ve ANP bolluğu bakteriyel büyüme inhibisyonu tahlilleri ile belirlenebilir.Bu teknik kommensal ve patojenik bakteriler için bir tarama aracı olarak ve birçok omurgalı kurban olmadan bağırsak simbiyomları ve patobiyomlar keşfetmek için kullanılabilir. Sıvı nitrojen, BCP veya TRIzol maddelerle çalışırken her zaman uygun kişisel koruyucu ekipmanı kullanın.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Böcek<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bakteriyel Patogenez İnceleyecek Güçlü Enfeksiyon Model olarak

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Kullanımı<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bir Model Organizma olarak Eğitim için<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Enfeksiyon

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

Sitokin Üretimi Viral Evasion Doğuştan Bağışıklık Sinyalizasyonu Diseksiyon

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Bir Zebra balığı Larva Modeli Doğuştan Bağışıklık Tepki Non-invaziv Görüntüleme<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Enfeksiyon

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

Kurtarma Zamanı Artan ve Sınırlı Enflamatuar Yanıtları içinde Vagus sinir stimülasyonu Mekanizmaları Eğitim için LPS İdaresi Azalmış

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella Waxworm enfeksiyon modeli Dissemine kandidiyazis için

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Mycobacterium tüberküloz kompleksinin incelenmesi Için bir enfeksiyon modeli olarak ınvertebrate Galleria mellonella kullanımı

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...