Name: three-dimensional bone extracellular matrix model for osteosarcoma
Uploaded: 2019-04-12T14:30:00
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Les auteurs apprécient le soutien de Liuying Chen pour son assistance administrative et Zhao Long pour son excellente assistance technique lors de la construction d’échafaudages de matrice extracellulaire osseuse. Cette étude est financée par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (31871413).

Utilisation et protection des animaux sont menées selon les instituts nationaux de Guide de santé pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire (publication n ° 80-23, révisé en 1996 de NIH) après approbation par le Comité éthique animale de Sun Yat-sen University.
1. préparation de l’OS
<ol><li>Obtenir 4 à des souris BALB/c 6 semaines (sans condition de sexe). Euthanasier une souris aseptiquement par dislocation cervicale et coupés frais péroné, du tibia et du f?...

<ol>
	<li>Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+bone+osteosarcoma+in+the+pediatric+age:+State+of+the+art.">Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art.</a> Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).</li><li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+originates+from+mesenchymal+stem+cells+in+consequence+of+aneuploidization+and+genomic+loss+of+Cdkn2.">Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2.</a> Journal of Pathology. 219, 294-305 (2009).</li><li>Mutsaers, A. J., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+of+origin+in+osteosarcoma:+mesenchymal+stem+cells+or+osteoblast+committed+cells.">Cells of origin in osteosarcoma: mesenchymal stem cells or osteoblast committed cells.</a> Bone. 62, 56-63 (2014).</li><li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+tumors+can+derive+from+Ng2/Cspg4-Expressing+pericytes+with+&#946;-Catenin+modulating+the+neoplastic+phenotype.">Mesenchymal tumors can derive from Ng2/Cspg4-Expressing pericytes with &#946;-Catenin modulating the neoplastic phenotype.</a> Cell Reports. 16, 917-927 (2016).</li><li>Patane, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MET+overexpression+turns+human+primary+osteoblasts+into+osteosarcomas.">MET overexpression turns human primary osteoblasts into osteosarcomas.</a> Cancer Research. 66, 4750-4757 (2006).</li><li>Poos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+heterogeneity+of+osteosarcoma+-+shift+from+single+candidates+to+functional+modules.">Genomic heterogeneity of osteosarcoma - shift from single candidates to functional modules.</a> PLoS One. 10, 123082 (2015).</li><li>Martin, J. W., Squire, J. A., Zielenska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+osteosarcoma.">The genetics of osteosarcoma.</a> Sarcoma. 2012, 1-11 (2012).</li><li>Alfranca, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+microenvironment+signals+in+osteosarcoma+development.">Bone microenvironment signals in osteosarcoma development.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 72, 3097-3113 (2015).</li><li>Alford, A. I., Kozloff, K. M., Hankenson, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+networks+in+bone+remodeling.">Extracellular matrix networks in bone remodeling.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 65, 20-31 (2015).</li><li>Sawkins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+derived+from+demineralized+and+decellularized+bone+extracellular+matrix.">Hydrogels derived from demineralized and decellularized bone extracellular matrix.</a> Acta Biomaterialia. 9, 7865-7873 (2013).</li><li>Alom, N., Peto, H., Kirkham, G. R., Shakesheff, K. M., Bone White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+extracellular+matrix+hydrogel+enhances+osteogenic+differentiation+of+C2C12+myoblasts+and+mouse+primary+calvarial+cells.">Bone extracellular matrix hydrogel enhances osteogenic differentiation of C2C12 myoblasts and mouse primary calvarial cells.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B-Applied Biomaterials. 106, 900-908 (2018).</li><li>Datta, N., Holtorf, H. L., Sikavitsas, V. I., Jansen, J. A., Mikos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bone+extracellular+matrix+synthesized+in+vitro+on+the+osteoblastic+differentiation+of+marrow+stromal+cells.">Effect of bone extracellular matrix synthesized in vitro on the osteoblastic differentiation of marrow stromal cells.</a> Biomaterials. 26, 971-977 (2005).</li><li>Rubio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+environment+is+essential+for+osteosarcoma+development+from+transformed+mesenchymal+stem+cells.">Bone environment is essential for osteosarcoma development from transformed mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 32, 1136-1148 (2014).</li><li>Sadr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+the+biological+performance+of+synthetic+polymeric+materials+by+decoration+with+engineered,+decellularized+extracellular+matrix.">Enhancing the biological performance of synthetic polymeric materials by decoration with engineered, decellularized extracellular matrix.</a> Biomaterials. 33, 5085-5093 (2012).</li><li>Gautschi, O. P., Frey, S. P., Zellweger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+proteins+in+clinical+applications.">Bone morphogenetic proteins in clinical applications.</a> Anz Journal of Surgery. 77, 626-631 (2007).</li><li>Rochet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+gene+expression+induced+in+human+osteogenic+and+osteosarcoma+cells+by+culture+on+a+biphasic+calcium+phosphate+bone+substitute.">Modification of gene expression induced in human osteogenic and osteosarcoma cells by culture on a biphasic calcium phosphate bone substitute.</a> Bone. 32, 602-610 (2003).</li><li>Spang, M. T., Christman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+hydrogel+therapies:+in+vivo+applications+and+development.">Extracellular matrix hydrogel therapies: in vivo applications and development.</a> Acta Biomaterialia. 68, 1-14 (2018).</li><li>Schenke-Layland, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+decellularization+of+xenogeneic+tissue+on+extracellular+matrix+integrity+for+tissue+engineering+of+heart+valves.">Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves.</a> Journal of Structural Biology. 143, 201-208 (2003).</li><li>Klein, M. J., Siegal, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma:+anatomic+and+histologic+variants.">Osteosarcoma: anatomic and histologic variants.</a> American Journal of Clinical Pathology. 125, 555-581 (2006).</li><li>Lipinski, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+evolution+and+the+limits+of+predictability+in+precision+cancer+medicine.">Cancer evolution and the limits of predictability in precision cancer medicine.</a> Trends in Cancer. 2, 49-63 (2016).</li><li>McGranahan, N., Swanton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+heterogeneity+and+tumor+evolution:+past,+present,+and+the+future.">Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future.</a> Cell. 168, 613-628 (2017).</li><li>Brown, H. K., Schiavone, K., Gouin, F., Heymann, M., Heymann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+bone+sarcomas+and+new+therapeutic+developments.">Biology of bone sarcomas and new therapeutic developments.</a> Calcified Tissue International. 102, 174-195 (2018).</li><li>Abarrategi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma:+cells-of-origin,+cancer+stem+cells,+and+targeted+therapies.">Osteosarcoma: cells-of-origin, cancer stem cells, and targeted therapies.</a> Stem Cells International. 2016, 1-13 (2016).</li><li>Tsukamoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+promote+tumor+engraftment+and+metastatic+colonization+in+rat+osteosarcoma+model.">Mesenchymal stem cells promote tumor engraftment and metastatic colonization in rat osteosarcoma model.</a> International Journal of Oncology. 40, 163-169 (2012).</li><li>Rodriguez, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerosol+gemcitabine:+preclinical+safety+and+in+vivo+antitumor+activity+in+osteosarcoma-bearing+dogs.">Aerosol gemcitabine: preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs.</a> Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 23, 197-206 (2010).</li><li>Rodriguez, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+canine+osteosarcoma+as+a+model+to+assess+efficacy+of+novel+therapies:+Can+old+dogs+teach+us+new+tricks.">Using canine osteosarcoma as a model to assess efficacy of novel therapies: Can old dogs teach us new tricks.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 237-256 (2014).</li><li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+osteosarcoma+zebrafish+model+implicates+Mmp-19+and+Ets-1+as+well+as+reduced+host+immune+response+in+angiogenesis+and+migration.">An osteosarcoma zebrafish model implicates Mmp-19 and Ets-1 as well as reduced host immune response in angiogenesis and migration.</a> Journal of Pathology. 227, 245-253 (2012).</li><li>Saalfrank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+porcine+model+of+osteosarcoma.">A porcine model of osteosarcoma.</a> Oncogenesis. 5, 210 (2016).</li><li>Zhang, Y., Pan, Y., Xie, C., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiR-34a+exerts+as+a+key+regulator+in+the+dedifferentiation+of+osteosarcoma+via+PAI-1&#8211;Sox2+axis.">MiR-34a exerts as a key regulator in the dedifferentiation of osteosarcoma via PAI-1&#8211;Sox2 axis.</a> Cell Death &amp; Disease. 9, (2018).</li><li>Hashimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+decellularized+bone/bone+marrow+produced+by+high-hydrostatic+pressurization+on+the+osteogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells.">The effect of decellularized bone/bone marrow produced by high-hydrostatic pressurization on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 32, 7060-7067 (2011).</li><li>Benders, K. E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration.">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in Biotechnology. 31, 169-176 (2013).</li><li>Grayson, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+initial+seeding+density+and+fluid+perfusion+rate+on+formation+of+tissue-engineered+bone.">Effects of initial seeding density and fluid perfusion rate on formation of tissue-engineered bone.</a> Tissue Engineering Part A. 14, 1809-1820 (2008).</li><li>Mikulic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+angiogenesis+and+outcome+in+osteosarcoma.">Tumor angiogenesis and outcome in osteosarcoma.</a> Pediatric Hematology and Oncology. 21, 611-619 (2004).</li><li>Ren, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+mimicry:+a+new+prognostic+sign+of+human+osteosarcoma.">Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma.</a> Human Pathology. 45, 2120-2129 (2014).</li><li>Bonuccelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+mesenchymal+stem+cells+in+osteosarcoma+and+metabolic+reprogramming+of+tumor+cells.">Role of mesenchymal stem cells in osteosarcoma and metabolic reprogramming of tumor cells.</a> Oncotarget. 5, 7575-7588 (2014).</li></ol>

En général, les OS peuvent être classés comme ostéoblastique, chondroblastiques et ﬁbroblastic des sous-types selon sa composante histologique dominant. Son pronostic dépend non seulement des paramètres histologiques mais aussi sur son site anatomique. Il peut se produire à l’intérieur de l’OS (dans intramédullaire ou compartiment intracortical), à la surface des os et sites extraosseous19. L’émergence et l’hétérogénéité du système d’exploitation peuvent être élucid...

Ostéosarcome (OS) se produit habituellement dans les régions, la métaphyse des os longs, en croissance active durant l’adolescence. Plus de 80 % des sites touchés par OS ont la préférence pour la métaphyse du tibia proximal et humérus proximal, mais aussi du fémur distal et proximal, correspondant à l’emplacement de la plaque de croissance1. OS compose de plusieurs sous-types de cellules mésenchymateuses propriétés et une grande diversité dans les caractéristiques histologiques et grades. Évidences soutiennent des cellules souches mésenchymateuses (CSM), précurseurs engagés ostéoblastes et péricytes comme les cellules d’origine2,3,4,5. Ces cellules peuvent accumuler des altérations génétiques ou épigénétiques et donner lieu à des OS sous l’influence de certains signaux micro-environnementales de l’os. Les mécanismes intrinsèques et extrinsèques entraîner l’instabilité génomique et l’hétérogénéité du système d’exploitation, avec plusieurs phénotypes morphologiques et cliniques6,7. Pour des thérapies individualisées ou projection de nouveaux médicaments, nouveaux modèles doivent être générées pour contre l’hétérogénéité ou d’autres troubles cliniques.
Système d’exploitation est une tumeur solide maligne intra osseuse. La complexité et l’activité entourant les éléments microenvironnement confèrent des différences phénotypiques et fonctionnelles sur des cellules d’OS dans différents endroits d’une tumeur. La matrice osseuse extracellulaire (BEM) fournit un échafaudage biochimique et structural de dépôts minéraux et remodelage osseux. La partie organique de la matrice extracellulaire (ECM) se compose principalement de type j’ai collagène sécrété par les cellules de la lignée ostéoblastique, tandis que sa partie minéralisée est composée de phosphate de calcium sous forme d’hydroxyapatite8. Le rôle dynamique des réseaux de l’ECM est de réglementer l’adhésion cellulaire, la différenciation, la diaphonie et tissu la fonction maintenance9.
Déminéralisée hydrogels BEM et ECM ont été utilisées avec succès dans la culture de cellules et peut renforcer la cellule prolifération10,11. Synthétisés comme OS ECM peut régler la taille du pool, la décisions sort et la progression de la lignée MSCs12,13,14. En outre, résultats témoignent de son importance clinique pour fournir l’activité ostéogénique en stimulant les processus cellulaires durant OS formation et régénération15,16,17.
Dans cet article, notre groupe établit un modèle modifié et l’alternative favorable pour la culture à long terme en trois dimensions. Cellules d’OS injectés dans le tissus dérivés BEM présentent un phénotype hétérogène mésenchymateux facilement par rapport aux cultures bidimensionnelles en plastique. BEM dérivé spectacle des tissus homologues in situ de son avantage dramatique comme étant une niche native pour OS cellules in vitro et a un grand potentiel en recherche clinique et théorique des OS. Cette plate-forme BEM caractérisée est simple mais efficace pour la recherche in vitro et pourra être prolongée dans la modélisation des divers types de cancer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1049px;" width="1049">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21">15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>227270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">6 cm cell culture dish</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>628160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">6-well plate</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Ampicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">C57-BL/6J mouse</td>
			<td>Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25">CO2 incubator</td>
			<td>SHEL LAB</td>
			<td>SCO5A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">Dibasic sodium phosphate</td>
			<td>Guangzhou Chemical Reagent Factory</td>
			<td>BE14-GR-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">DMEM/F12</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Fetal bovine serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30084.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Hemocytometer</td>
			<td>BLAU</td>
			<td>717805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Kanamycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">MG-63</td>
			<td>Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank</td>
			<td></td>
			<td>Human osteosarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">MNNG/HOS</td>
			<td>Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank</td>
			<td></td>
			<td>Human osteosarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">Phenol red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4633</td>
			<td>A solution of phenol red is used as a pH indicator: its color exhibits a gradual transition from yellow to red over the pH range 6.6 to 8.0.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Potassium chloride</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Sodium chloride</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501218</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional bone extracellular matrix model for osteosarcoma

L’ostéosarcome (OS) est le plus commun et une tumeur osseuse primaire très agressifs. Il est caractérisé par des variations anatomiques et histologiques avec les difficultés diagnostiques et pronostiques. OS compose de cellules cancéreuses génotypiquement et phénotypiquement hétérogènes. Éléments du microenvironnement osseux sont prouvés pour tenir compte de l’hétérogénéité et la maladie de la progression tumorale. La matrice osseuse extracellulaire (BEM) conserve les matrices de microstructures et les composantes biochimiques de la matrice extracellulaire native. Ce créneau spécifique des tissus fournit un échafaudage favorable et à long terme de prolifération et de cellules d’OS ensemencement. Cet article fournit un protocole pour la préparation du modèle BEM et son application la plus expérimentale. Cellules d’OS peuvent croître et se différencier en plusieurs phénotypes compatibles avec la complexité histopathologique des échantillons cliniques d’OS. Le modèle permet également la visualisation de morphologies diverses et leur association avec des altérations génétiques et mécanismes réglementaires. Comme l’homologue de l’OS humain, ce modèle de BEM-OS peut être mis au point et appliqué à la pathologie et de la recherche clinique de l’OS.

Après déminéralisation et décellularisation, BEM semble être translucide avec la plus forte résistance et ténacité par rapport à l’OS natif de souris. Un petit résidu de muscle et de l’espace de la cavité médullaire peuvent clairement observer (Figure 1A, B). Pour déterminer l’effective décellularisation de BEM, BEM est incorporé à la paraffine après fixation et puis découpé en 3 à 5 μm sections pour l’hématoxyline-éosine (H & E) coloration. L?...

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Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

Le modèle de la matrice extracellulaire (BEM) OS pour l’ostéosarcome (OS) est bien établie et illustré ici. Il peut être utilisé comme un échafaudage approprié pour imiter tumeur primitive la croissance in vitro et fournissant un modèle idéal pour l’étude de l’hétérogénéité histologique et cytogéniques des OS.

Modèle de matrice extracellulaire OS en trois dimensions pour l’ostéosarcome

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Cette méthode fournit une stratégie efficace pour préparer des échafaudages fonctionnels pour la recherche de tumeur d’os. Decellularized la matrice extracelullar d’os, a montré la sérocompatibilité variable pour la survie et les activités des cellules d’osteosarcoma. Le principal avantage de cette technique est que la culture de cellules d’ostéosarcome dans la matrice os-dérivée montrent la morphologie fortement hétérogène semblable à une histopathologie clinique d’ostéosarcome.La méthode fournit le modèle idéal pour étudier le développement, la progression des sensibilités de drogue des tumeurs d’os, telles que l’ostéosarcome, le sarcome d’Ewing, et les autres métastases malignes de tumeurs à l’os. Pour commencer, obtenir des souris BALB/c âgées de quatre à six semaines, après avoir euthanasié une souris à l’aide de ciseaux chirurgicaux stériles, coupé le péroné frais, le tibia et le fémur d’un membre postérieur. À l’aide d’une pince à épiler, décoller le tissu épithélial, puis enlever autant de tissus mous que possible.Rincez les os des jambes avec une solution stérile de 10 mM PBS deux fois pour enlever le sang dans un plat de six centimètres. Plonger les os dans un plat avec 75% d’éthanol pendant trois minutes, puis rincer avec PBS deux fois. Conservez les os propres dans un tube stérile de centrifugeuse de 50 millilitres avec un tube PBS stérile à 80 degrés Celsius.Décongeler les os congelés à température ambiante, puis congeler à nouveau à 80 degrés Celsius pendant une heure. Soumettez les os à plus de deux cycles gel-dégel pour la lyse cellulaire et la dégradation des tissus. Ensuite, placez les os dans un tube stérile centrifugeuse de 50 millilitres rempli de 0,5 HCl normal et incubez pendant la nuit à température ambiante sur un shaker orbital avec des secousses douces pour assurer une couverture complète et même des os.Après décalcification, décanter complètement la solution d’acide chlorhydrique et rincer complètement les os sous l’eau courante pendant une heure. Ensuite, utilisez de l’eau distillée pour laver les os deux fois pendant 15 minutes par lavage sur un shaker orbital. Décanter complètement la solution.Pour extraire les lipides dans un os déminéralisé, placez les os dans un tube de centrifugeuse de 50 millilitres avec un mélange 1:1 de méthanol et de chloroforme. Envelopper le tube de papier d’aluminium pour éviter la lumière pour prévenir la décomposition du chloroforme. Et mettez le tube sur un shaker orbital pendant une heure.Ensuite, utilisez des pinces à épiler pour transférer les os dans un autre tube de méthanol avec du papier d’aluminium pendant 30 minutes. Retirer complètement le méthanol et laver avec de l’eau distillée deux fois pendant 15 minutes sur un shaker orbital. Décanter l’eau finale de lavage et procéder dans un état stérile.Rincer les os dans un plat de six centimètres avec du PBS stérile pendant trois minutes. Ajouter 40 millilitres de solution stérile de 0,05 % TE dans un tube de centrifugeuse de 50 millilitres et incuber les os pendant 23 heures dans un incubateur de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius. Jetez la solution TE et rincez deux fois avec du PBS stérile complété par de l’ampicilline de 90 g/mL et de la kanamycine de 90 g/mL pendant 15 minutes chacun sur le shaker orbital.Après avoir décanté complètement le lavage final, réapprovisionner à nouveau avec 40 millilitres de PBS stérile avec des antibiotiques. Lavez soigneusement pendant 24 heures à température ambiante avec des secousses douces pour obtenir une stérilisation efficace des espaces poreux. Ensuite, transférez les os dans un tube de centrifugeuse de 50 millilitres rempli de PBS stérile avec des antibiotiques.La matrice extracellulaire osseuse préparée peut être stockée à quatre degrés Celsius pendant deux mois. Plonger bem dans 75% d’éthanol dans un plat et secouer doucement le plat à la main pendant 30 secondes. Rincez ensuite avec PBS pendant 30 secondes, deux fois.Transférer le BEM sur une plaque de culture cellulaire propre de six puits. Ajouter deux millilitres de milieu de culture complet à chaque puits. Incuber le BEM pendant la nuit dans un incubateur de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius.Obtenez des lignées cellulaires d’OS humaines dans 100 microlitres de PBS préchauffé contenant le phénol rouge indicateur. Utilisez une pipette pour suspendre les cellules OS avec une concentration approximative de 1 fois 10 à la 5ème. Une fois que le BEM est entièrement trempé dans le milieu, des épiphyses proximales ou distales, percer l’aiguille à la cavité médullaire de BEM et injecter des cellules OS dans BEM.Incuber le modèle OS-BEM pendant au moins deux heures dans une atmosphère humidifiée de dioxyde de carbone de 5 % à 37 degrés Celsius afin de s’assurer que les cellules injectées adhèrent fermement au BEM. Ensuite, sortez la plaque de l’incubateur. Ajouter un milieu de culture millilitre sur l’assiette, et le garder dans l’incubateur pendant la nuit pour enrober complètement la surface de la culture BEM.Transférez doucement le modèle OS-BEM dans un nouveau puits d’une plaque de six puits avec une pince stérile, et redyez un milieu de culture frais millilitre. Culture du modèle pendant 14 jours dans l’incubateur. Pendant l’incubation de 14 jours, continuez à surveiller la couleur moyenne.Si le milieu se transforme en orange, voire jaune, rafraîchissez immédiatement le milieu en jetant la moitié de l’ancien milieu et en ajoutant un nouveau milieu pour maintenir un environnement sain pour les cellules OS. Continuez à surveiller l’état des cellules sous le microscope à fluorescence inversé. Lorsque les cellules OS se dilatent à la plaque, transférez doucement le modèle OS-BEM dans un autre nouveau puits avec des pinces stériles.Après 14 jours de culture, rincer doucement le modèle OS-BEM avec PBS pour enlever le milieu de culture. Puis transférer dans un tube de centrifugeuse de 15 millilitres et ajouter 10% de formaline tamponnée à fixer pour l’identification histologique. Après déminéralisation et décellularisation, BEM semble translucide avec une résilience et une ténacité plus fortes par rapport à l’os de souris indigène.Un peu de résidus musculaires dans l’espace de la cavité médullaire peut être clairement observé. La formation image de champ lumineux de l’os indigène et du BEM décellularisé, montre l’enlèvement complet des noyaux cellulaires. La structure poreuse naturelle dans l’arrangement de réseau de collagène est bien maintenue dans bem décellularisé.En outre, la coloration immunohistochimique pour le collagène I et le collagène IV montre que les principaux composants de la matrice extracellulaire sont conservés dans le tibia de souris après la décellularisation. Pendant la culture de 14 jours, le périoste et l’endostée sont infiltrés par l’expansion des cellules d’OS. Les cellules d’OS sur le BEM décellularisé montrent la morphologie fortement hétérogène semblable aux dispositifs cytopathologiques d’une section d’OS.L’analyse immunohistochimique après la culture dans le modèle BEM pendant 14 jours montre de grands avantages dans les cultures à long terme. En outre, les cellules d’OS et la culture de BEM, glycoprotéine fortement expresse de matrice d’os, qui est spécifique pour la matrice ostéoïde. Ce modèle tridimensionnel in vitro a été utilisé pour démontrer une hétérogénéité phénotypique et un mécanisme réglementaire de dédifferentiation de l’ostéosarcome avec succès.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

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Déplacement vers le haut : Un Simple et Flexible In Vitro Invasion en trois dimensions Assay protocole

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract (ECME)-based Three-dimensional System

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Analyser la Communication entre les Monocytes et les cellules cancéreuses du sein primitif dans une matrice extracellulaire extrait (ECME)-système tridimensionnel

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A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

Un modèle de souris préclinique de l’ostéosarcome pour définir la Communication médiée par les vésicules extracellulaire entre la tumeur et les cellules souches mésenchymateuses

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Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Génération des sphéroïdes High-Throughput tumeur en trois dimensions pour le dépistage des drogues

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Étudier les effets normaux du rayonnement tissulaire à l'aide d'hydrogels de matrice extracellulaire

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Establishment and Analysis of Three-Dimensional (3D) Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

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Établissement et analyse des organoïdes tridimensionnels (3D) dérivés des spécimens de métastasie osseuse du cancer de la prostate du patient et de leurs Xénogreffes

Three-dimensional (3D) culture of organoids from tumor specimens of human patients and patient-derived xenograft (PDX) models of prostate cancer, referred ...

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