Name: three-dimensional bone extracellular matrix model for osteosarcoma
Uploaded: 2019-04-12T14:30:00
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Gli autori di valore il supporto di Liuying Chen per la sua assistenza amministrativa e Zhao lungo per la sua eccellente assistenza tecnica durante la costruzione di ponteggi di matrice extracellulare dell'osso. Questo studio è supportato da sovvenzioni dal National Natural Science Foundation of China (31871413).

Uso e cura degli animali sono condotti secondo l'istituti nazionali di salute Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio (pubblicazione NIH No. 80-23, riveduta nel 1996), previa approvazione del Comitato etica animale di Sun Yat-sen University.
1. osso preparazione
<ol><li>Ottenere 4 ai topi BALB/c 6-settimana-vecchio (senza sesso-specifico requisito). Eutanasia di un mouse in modo asettico di dislocazione cervicale e tagliato di fresco perone, tibia e femore da un arto posteriore c...

<ol>
	<li>Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+bone+osteosarcoma+in+the+pediatric+age:+State+of+the+art.">Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art.</a> Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).</li><li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+originates+from+mesenchymal+stem+cells+in+consequence+of+aneuploidization+and+genomic+loss+of+Cdkn2.">Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2.</a> Journal of Pathology. 219, 294-305 (2009).</li><li>Mutsaers, A. J., Walkley, C. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+hydrogel+therapies:+in+vivo+applications+and+development.">Extracellular matrix hydrogel therapies: in vivo applications and development.</a> Acta Biomaterialia. 68, 1-14 (2018).</li><li>Schenke-Layland, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+decellularization+of+xenogeneic+tissue+on+extracellular+matrix+integrity+for+tissue+engineering+of+heart+valves.">Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves.</a> Journal of Structural Biology. 143, 201-208 (2003).</li><li>Klein, M. J., Siegal, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma:+anatomic+and+histologic+variants.">Osteosarcoma: anatomic and histologic variants.</a> American Journal of Clinical Pathology. 125, 555-581 (2006).</li><li>Lipinski, K. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerosol+gemcitabine:+preclinical+safety+and+in+vivo+antitumor+activity+in+osteosarcoma-bearing+dogs.">Aerosol gemcitabine: preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs.</a> Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 23, 197-206 (2010).</li><li>Rodriguez, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+canine+osteosarcoma+as+a+model+to+assess+efficacy+of+novel+therapies:+Can+old+dogs+teach+us+new+tricks.">Using canine osteosarcoma as a model to assess efficacy of novel therapies: Can old dogs teach us new tricks.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 237-256 (2014).</li><li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+osteosarcoma+zebrafish+model+implicates+Mmp-19+and+Ets-1+as+well+as+reduced+host+immune+response+in+angiogenesis+and+migration.">An osteosarcoma zebrafish model implicates Mmp-19 and Ets-1 as well as reduced host immune response in angiogenesis and migration.</a> Journal of Pathology. 227, 245-253 (2012).</li><li>Saalfrank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+porcine+model+of+osteosarcoma.">A porcine model of osteosarcoma.</a> Oncogenesis. 5, 210 (2016).</li><li>Zhang, Y., Pan, Y., Xie, C., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiR-34a+exerts+as+a+key+regulator+in+the+dedifferentiation+of+osteosarcoma+via+PAI-1&#8211;Sox2+axis.">MiR-34a exerts as a key regulator in the dedifferentiation of osteosarcoma via PAI-1&#8211;Sox2 axis.</a> Cell Death &amp; Disease. 9, (2018).</li><li>Hashimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+decellularized+bone/bone+marrow+produced+by+high-hydrostatic+pressurization+on+the+osteogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells.">The effect of decellularized bone/bone marrow produced by high-hydrostatic pressurization on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 32, 7060-7067 (2011).</li><li>Benders, K. E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration.">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in Biotechnology. 31, 169-176 (2013).</li><li>Grayson, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+initial+seeding+density+and+fluid+perfusion+rate+on+formation+of+tissue-engineered+bone.">Effects of initial seeding density and fluid perfusion rate on formation of tissue-engineered bone.</a> Tissue Engineering Part A. 14, 1809-1820 (2008).</li><li>Mikulic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+angiogenesis+and+outcome+in+osteosarcoma.">Tumor angiogenesis and outcome in osteosarcoma.</a> Pediatric Hematology and Oncology. 21, 611-619 (2004).</li><li>Ren, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenic+mimicry:+a+new+prognostic+sign+of+human+osteosarcoma.">Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma.</a> Human Pathology. 45, 2120-2129 (2014).</li><li>Bonuccelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+mesenchymal+stem+cells+in+osteosarcoma+and+metabolic+reprogramming+of+tumor+cells.">Role of mesenchymal stem cells in osteosarcoma and metabolic reprogramming of tumor cells.</a> Oncotarget. 5, 7575-7588 (2014).</li></ol>

In generale, OS possono essere classificati come osteoblastica, chondroblastic e ﬁbroblastic i sottotipi a seconda della sua dominante componente istologica. Relativa prognosi dipende non solo dai parametri istologici ma anche sul suo sito anatomico. Può verificarsi all'interno delle ossa (nel intramidollare o vano intracortical), sulle superfici delle ossa e in siti extraosseous19. L'emersione e l'eterogeneità del sistema operativo può essere delucidate come una coniugazione di eventi oncoge...

Osteosarcoma (OS) si presenta solitamente in zone, le metafisi delle ossa lunghe, in attiva crescita durante l'adolescenza. Più dell'80% dei siti colpiti da OS hanno preferenza per la metafisi della tibia prossimale e Omero prossimale, nonché sia distale e prossimale di femore, corrispondente alla posizione della crescita piastra1. OS comprende molteplici sottotipi di cellule con proprietà mesenchymal e considerevole diversità nelle caratteristiche istologiche e grado. Evidenze supportano le cellule staminali mesenchimali (MSCs), precursori impegnati osteoblasti e periciti come le cellule di origine2,3,4,5. Queste cellule possono accumularsi le alterazioni genetiche o epigenetiche e dar luogo a OS sotto l'influenza di determinati segnali microambiente osseo. Meccanismi sia intrinseci sia estrinseci causare l'instabilità genomica e l'eterogeneità del sistema operativo, con molteplici fenotipi morfologici e clinici6,7. Per terapie individualizzate o screening di nuovi farmaci, nuovi modelli devono essere generati per contro eterogeneità o altri disordini clinici.
OS è un tumore solido maligno intraosseo. La complessità e l'attività del microambiente elementi circostanti conferire differenze fenotipiche e funzionali sulle cellule OS in posizioni diverse di un tumore. Matrice ossea extracellulare (BEM) fornisce un'impalcatura strutturale e biochimica per deposizione minerale e rimodellamento osseo. La parte organica della matrice extracellulare (ECM) consiste principalmente di tipo I collagene secreto dalle cellule osteoblastic lignaggio, mentre la relativa parte mineralizzate è composto da fosfato di calcio sotto forma di idrossiapatite8. Il ruolo dinamico delle reti di ECM è di regolare adesione cellulare, differenziazione, cross-talk e tessuto funzione manutenzione9.
Demineralizzata idrogeli BEM ed ECM sono stati utilizzati con successo nella coltura delle cellule e possono migliorare la proliferazione delle cellule10,11. Sintetizzato osso-come ECM può regolare la dimensione del pool, le decisioni destino e progressione di lignaggio di MSCs12,13,14. Inoltre, risultati della prova relativa importanza clinica per fornire attività osteogenica di processi cellulari stimolanti durante osso formazione e rigenerazione15,16,17.
In questo articolo, il nostro gruppo costituisce un modello modificato e alternativa favorevole per tridimensionale coltura a lungo termine. Cellule di OS iniettate il BEM tessuto-derivato presentano un fenotipo eterogeneo mesenchymal prontamente rispetto alla plastica culture bidimensionale. BEM derivato da Visualizza site-specific del tessuto omologo relativo vantaggio drammatico come essendo una nicchia nativa per OS cellule in vitro e ha un grande potenziale nella ricerca teorica e clinica di OS. Questa piattaforma BEM caratterizzata è semplice ma efficiente per la ricerca in vitro e può essere prorogata nel modellare i cancri multipli.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1049px;" width="1049">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21">15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>227270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">6 cm cell culture dish</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>628160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">6-well plate</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Ampicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">C57-BL/6J mouse</td>
			<td>Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25">CO2 incubator</td>
			<td>SHEL LAB</td>
			<td>SCO5A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">Dibasic sodium phosphate</td>
			<td>Guangzhou Chemical Reagent Factory</td>
			<td>BE14-GR-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">DMEM/F12</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Fetal bovine serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30084.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Hemocytometer</td>
			<td>BLAU</td>
			<td>717805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Kanamycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">MG-63</td>
			<td>Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank</td>
			<td></td>
			<td>Human osteosarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">MNNG/HOS</td>
			<td>Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank</td>
			<td></td>
			<td>Human osteosarcoma cell line</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42">Phenol red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4633</td>
			<td>A solution of phenol red is used as a pH indicator: its color exhibits a gradual transition from yellow to red over the pH range 6.6 to 8.0.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Potassium chloride</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21">Sodium chloride</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501218</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional bone extracellular matrix model for osteosarcoma

Osteosarcoma (OS) è il più comune e un tumore altamente aggressivo e primari dell'osso. È caratterizzato da variazioni anatomiche e istologiche assieme alle difficoltà diagnostica o prognostica. OS comprende cellule tumorali genotipico e fenotipico eterogenea. Elementi del microambiente dell'osso sono dimostrati di account per progressione di malattia e di eterogeneità del tumore. Matrice ossea extracellulare (BEM) conserva le matrici microstrutturali e componenti biochimici della matrice extracellulare nativa. Questa nicchia di tessuto-specifica fornisce un'impalcatura favorevole e a lungo termine per proliferazione e semina cellulare di OS. Questo articolo fornisce un protocollo per la preparazione del modello BEM e la sua ulteriore applicazione sperimentale. Le cellule OS possono crescere e differenziarsi in fenotipi più coerenti con la complessità istopatologica di campioni clinici di OS. Il modello consente inoltre la visualizzazione delle diverse morfologie e la loro associazione con alterazioni genetiche e meccanismi di regolazione sottostante. Come omologo umano OS, questo modello di BEM-OS possa essere sviluppato e applicato alla patologia e ricerca clinica del sistema operativo.

Dopo la demineralizzazione e decellularizzati, BEM sembra essere traslucido con maggiore resilienza e tenacia rispetto all'osso del mouse nativi. Un piccolo residuo di muscolo e lo spazio della cavità midollare può essere osservati chiaramente (Figura 1A, B). Per determinare l'effettiva decellularizzazione di BEM, BEM è inclusi in paraffina dopo la fissazione e quindi tagliata in 3 – 5 μm sezioni per la macchiatura dell'hematoxylin-eosina (H & E). La rimozione completa...

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Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

Il modello di matrice extracellulare (BEM) dell'osso per osteosarcoma (OS) è ben consolidata e mostrato qui. Può essere utilizzato come impalcatura adatta per che imita tumore primario crescita in vitro e fornendo un modello ideale per studiare l'eterogeneità istologica e cytogenic del sistema operativo.

Modello di matrice extracellulare tridimensionale dell'osso per Osteosarcoma

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Questo metodo fornisce una strategia efficiente per la preparazione di impalcature funzionali per la ricerca sul tumore osseo. Decellularizzato la matrice extracelonnare ossea, ha mostrato una sierocompatibilità variabile per la sopravvivenza e le attività delle cellule osteosarcoma. Il principale vantaggio di questa tecnica è che la coltura delle cellule osteosarcoma nella matrice derivata dalle ossa mostra una morfologia altamente eterogenea simile a un'istopatologia clinica dell'osteosarcoma.Il metodo fornisce un modello ideale per indagare lo sviluppo, la progressione della sensibilità farmacologica dei tumori ossei, come l'osteosarcoma, il sarcoma di Ewing e le altre metastasi maligne dei tumori all'osso. Per iniziare, ottenere topi BALB / c di quattro o sei settimane, dopo aver eutanasiato un topo usando forbici chirurgiche sterili, tagliare fibule fresche, tibia e femore da un arto posteriore. Con l'aiuto di pinzette, staccare il tessuto epiteliale e quindi rimuovere il più possibile il tessuto molle.Risciacquare le ossa delle gambe con una soluzione PBS sterile da 10 mM due volte per rimuovere il sangue in un piatto di sei centimetri. Immergere le ossa in un piatto con 75%etanolo per tre minuti, quindi risciacquare con PBS due volte. Conservare le ossa pulite in un tubo di centrifuga sterile da 50 millilitri con tubo PBS sterile a 80 gradi Celsius.Scongelare le ossa congelate a temperatura ambiente e poi congelare di nuovo a 80 gradi Celsius per un'ora. Sottoposere le ossa a più di due cicli di congelamento-disgelo per la lisi cellulare e la rottura dei tessuti. Quindi, posizionare le ossa in un tubo di centrifuga sterile da 50 millilitri riempito con HCl normale 0,5 e incubare durante la notte a temperatura ambiente su uno shaker orbitale con tremori delicati per garantire una copertura completa e uniforme delle ossa.Dopo la decalcificazione, decantare completamente la soluzione di acido cloridrico e sciacquare le ossa sotto l'acqua corrente per un'ora. Quindi, utilizzare acqua distillata per lavare le ossa due volte per 15 minuti per lavaggio su uno shaker orbitale. Decantare completamente la soluzione.Per estrarre i lipidi in ossa demineralizzate, posizionare le ossa in un tubo di centrifuga da 50 millilitri con una miscela 1:1 di metanolo e cloroformio. Avvolgere il tubo con un foglio di stagno per evitare la luce per la prevenzione della decomposizione cloroformio. E metti il tubo su uno shaker orbitale per un'ora.Quindi, utilizzare una pinzetta per trasferire le ossa in un altro tubo di metanolo con lamina di stagno per 30 minuti. Rimuovere completamente il metanolo e lavare con acqua distillata due volte per 15 minuti su uno shaker orbitale. Decantare l'acqua di lavaggio finale e procedere in condizioni sterili.Risciacquare le ossa in un piatto di sei centimetri con PBS sterile per tre minuti. Aggiungere 40 millilitri di soluzione sterile 0,05%TE in un tubo di centrifuga da 50 millilitri e incubare le ossa per 23 ore in un incubatore di anidride carbonica a 37 gradi Celsius. Scartare la soluzione TE e risciacquare due volte con PBS sterile integrato con 90 g/mL di ampicillina e 90 g/mL di kanamicina per 15 minuti ciascuno sullo shaker orbitale.Dopo aver decantato completamente il lavaggio finale, reintegrare nuovamente con 40 millilitri di PBS sterile con antibiotici. Lavare accuratamente per 24 ore a temperatura ambiente con scuotimenti delicati per ottenere un'efficace sterilizzazione degli spazi porosi. Quindi, trasferire le ossa in un tubo di centrifuga da 50 millilitri riempito con PBS sterile con antibiotici.La matrice extracellulare ossea preparata può essere conservata a quattro gradi Celsius per due mesi. Immergere bem in 75% di etanolo in un piatto e agitare delicatamente il piatto a mano per 30 secondi. Quindi risciacquare con PBS per 30 secondi, due volte.Trasferire il BEM su una piastra di coltura cellulare pulita a sei pozzi. Aggiungere due millilitri di mezzo di coltura completo ad ogni pozzo. Incubare il BEM durante la notte in un incubatore di anidride carbonica a 37 gradi Celsius.Ottenere linee cellulari del sistema operativo umano in 100 microlitri di PBS prerifabburato contenenti rosso fenolo indicatore. Utilizzare una pipetta per sospendere le celle del sistema operativo con la concentrazione approssimativa di 1 per 10 al 5°. Dopo che il BEM è completamente imbevuto nel mezzo, dalle epifisi prossimali o distali, perforare l'ago alla cavità midollare di BEM e iniettare cellule del sistema operativo in BEM.Incubare il modello OS-BEM per un minimo di due ore in un'atmosfera umidificata del 5% di anidride carbonica a 37 gradi Celsius per garantire che le cellule iniettate aderiscano saldamente al BEM. Quindi, estrae il piatto dall'incubatrice. Aggiungere un mezzo di coltura millilitro sulla piastra e tenerlo nell'incubatrice durante la notte per rivestire completamente la superficie della coltura BEM.Trasferire delicatamente il modello OS-BEM in un nuovo pozzo di una piastra a sei pozzetti con una pinzetta sterile e rialimentare un mezzo di coltura fresco millilitro. Cultura il modello per 14 giorni nell'incubatore. Durante l'incubazione di 14 giorni, continuare a monitorare il colore medio.Se il mezzo si trasforma in arancione, o anche giallo, aggiornare immediatamente il mezzo scartando metà del vecchio mezzo e aggiungendo un nuovo mezzo per mantenere un ambiente sano per le cellule del sistema operativo. Mantenere lo stato delle cellule di monitoraggio al microscopio a fluorescenza invertita. Quando le celle del sistema operativo si espandono a piastra, trasferire delicatamente il modello OS-BEM in un altro nuovo pozzo con pinzette sterili.Dopo 14 giorni di coltura, sciacquare delicatamente il modello OS-BEM con PBS per rimuovere il mezzo di coltura. Quindi trasferire in un tubo di centrifuga da 15 millilitri e aggiungere la formalina tamponata al 10% da fissare per l'identificazione istologica. Dopo la demineralizzazione e la decellularizzazione, BEM sembra essere traslucido con una maggiore resilienza e tenacia rispetto all'osso nativo del topo.Un piccolo residuo muscolare nello spazio della cavità midollare può essere chiaramente osservato. L'imaging a campo brillante dell'osso nativo e del BEM decellularizzato, mostra la rimozione completa dei nuclei cellulari. La struttura porosa naturale nella disposizione della rete di collagene è ben tenuta nel BEM decellularizzato.Inoltre, la colorazione immunoistochimica per collagene I e collagene IV mostra che i principali componenti della matrice extracellulare sono conservati nella tibia del topo dopo la decellularizzazione. Durante la coltura di 14 giorni, sia il periostio che l'endosteo sono infiltrati dall'espansione delle cellule del sistema operativo. Le cellule del sistema operativo sul BEM decellularizzato mostrano una morfologia altamente eterogenea simile alle caratteristiche citopatologiche di una sezione del sistema operativo.L'analisi immunoistochimica dopo la coltivazione nel modello BEM per 14 giorni mostra grandi vantaggi nelle colture a lungo termine. Inoltre, cellule del sistema operativo e coltura BEM, glicoproteina a matrice ossea altamente espressa, che è specifica per la matrice osteoide. Il modello tridimensionale di questo in vitro è stato utilizzato per dimostrare con successo un'eterogeneità fenotipico e un meccanismo regolatore di differenziazione dell'osteosarcoma.

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