Name: colorimetric analysis of alkaline phosphatase activity in s. aureus biofilm
Uploaded: 2019-04-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm at JoVE.com

Vi takker William Rainey Harper College og University of Illinois i Chicago for anlegget å gjennomføre disse eksperimentene. Vi takker også McGraw Hill Foundation for deres generøse støtte.

1. middels forberedelse
<ol><li>Forberede 1 L av Tryptic soya kjøttkraft (TSB): I 1 L destillert vann, legge til 15 g bukspyttkjertelen Sammendrag av kasein, 5 g av papaic Sammendrag av Soyabønne måltid, 3 g av natriumklorid, 2.5 g druesukker og 2.5 g dipotassium fosfat. Sterilisere før bruk.</li>
	<li>For Tryptic soya Agar (TSA), legge til 15 g agar 1 L TSB, autoclave. Så la den avkjøles til romtemperatur. Deretter hell i forholdet 20 mL per Petriskål (100 mm x 15 mm).</li>
	<li>Biofilm kultur medium: legge til...

<ol>
	<li>Coleman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+alkaline+phosphatase.">Structure and mechanism of alkaline phosphatase.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 21, 441-483 (1992).</li><li>Sharma, U., Pal, D., Prasad, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+Phosphatase:+An+Overview.">Alkaline Phosphatase: An Overview.</a> Indian Journal of Clinical Biochemistry. 29 (3), 269-278 (2014).</li><li>Mitchell, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequencies+of+elevated+alkaline+phosphatase+activity+and+rickets+exist+in+extremely+low+birth+weight+infants+despite+current+nutritional+support.">High frequencies of elevated alkaline phosphatase activity and rickets exist in extremely low birth weight infants despite current nutritional support.</a> Boston Medical Center Pediatrics. 9, 47 (2009).</li><li>Fawley, J., Gourlay, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+alkaline+phosphatase:+A+summary+of+its+role+in+clinical+disease.">Intestinal alkaline phosphatase: A summary of its role in clinical disease.</a> Journal of Surgical Research. 202 (1), 225-234 (2016).</li><li>Derman, A. I., Beckwith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+Alkaline+Phosphatase+Localized+to+the+Cytoplasm+Slowly+Acquires+Enzymatic+Activity+in+Cells+Whose+Growth+Has+Been+Suspended:+a+Caution+for+Gene+Fusion+Studies.">Escherichia coli Alkaline Phosphatase Localized to the Cytoplasm Slowly Acquires Enzymatic Activity in Cells Whose Growth Has Been Suspended: a Caution for Gene Fusion Studies.</a> Journal of Bacteriology. 177 (13), 3764-3770 (1995).</li><li>Danikowski, K. M., Cheng, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+Phosphatase+Activity+of+Staphylococcus+aureus+grown+in+Biofilm+and+Suspension+Cultures.">Alkaline Phosphatase Activity of Staphylococcus aureus grown in Biofilm and Suspension Cultures.</a> Current Microbiology. 75, 1226-1230 (2018).</li><li>Okabayashi, K., Futai, M., Mizuno, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+Acid+and+Alkaline+Phosphatases+in+Staphylococcus+aureus.">Localization of Acid and Alkaline Phosphatases in Staphylococcus aureus.</a> Japanese Journal of Microbiology. 18 (4), 287-294 (1974).</li><li>Cheng, K. J., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+Phosphatase+Activity+of+Rumen+Bacteria.">Alkaline Phosphatase Activity of Rumen Bacteria.</a> Applied and Environmental Microbiology. , 586-590 (1997).</li><li>Berezhetskyy, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphatase+conductometric+biosensor+for+heavy-metal+ions+determination.">Phosphatase conductometric biosensor for heavy-metal ions determination.</a> Innovation and Research in Biomedical Engineering. 29 (2-3), 136-140 (2008).</li><li>Park, E. J., Kang, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+bacterial+alkaline+phosphatase+assay+for+rapid+monitoring+of+bacterial+counts+on+spinach.">The use of bacterial alkaline phosphatase assay for rapid monitoring of bacterial counts on spinach.</a> Journal of Food Science. 73 (5), M236-M238 (2008).</li><li>Barber, M., Kuper, S. W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Staphylococcus+pyogenes+by+the+phosphatase+reaction.">Identification of Staphylococcus pyogenes by the phosphatase reaction.</a> The Journal of Pathology and Bacteriology. 63, 65-68 (1951).</li><li>Wolf, P. L., Von der Muehll, E., Ludwick, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+test+to+differentiate+Serratia+from+Enterobacter.">A new test to differentiate Serratia from Enterobacter.</a> American Journal of Clinical Pathology. 56, 241-243 (1972).</li><li>Rangam, C. M., Katdare, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphatase+activity+of+Staphylococci+as+an+indication+of+their+pathogenicity.">Phosphatase activity of Staphylococci as an indication of their pathogenicity.</a> Indian Journal of Medical Science. 8, 610-613 (1954).</li><li>Flemming, H. -. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+an+emergent+form+of+bacterial+life.">Biofilms: an emergent form of bacterial life.</a> Nature Reviews Microbiology. 14, 563-575 (2016).</li><li>Hoiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+resistance+of+bacterial+biofilms.">Antibiotic resistance of bacterial biofilms.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 35, 322-332 (2010).</li><li>Ito, A., Taniuchi, A., May, T., Kawata, K., Okabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+antibiotic+resistance+of+Escherichia+coli+in+mature+biofilms.">Increased antibiotic resistance of Escherichia coli in mature biofilms.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75, 4093-4100 (2009).</li><li>Witherow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ten-Week+Biochemistry+Lab+Project+Studying+Wild-Type+and+Mutant+Bacterial+Alkaline+Phosphatase.">A Ten-Week Biochemistry Lab Project Studying Wild-Type and Mutant Bacterial Alkaline Phosphatase.</a> Biochemistry and Molecular Biology Education. 44 (6), (2016).</li><li>Henthorn, P., Zervos, P., Raducha, M., Harris, H., Kadesch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+human+placental+alkaline+phosphatase+gene+in+transfected+cells:+Use+as+a+reporter+for+studies+of+gene+expression.">Expression of a human placental alkaline phosphatase gene in transfected cells: Use as a reporter for studies of gene expression.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 85, 6324-6346 (1988).</li><li>Horney, B. S., Farmer, A. J., Honor, D. J., MacKenzie, A., Burton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agarose+gel+electrophoresis+of+alkaline+phosphatase+isoenzymes+in+the+serum+of+hyperthyroid+cats.">Agarose gel electrophoresis of alkaline phosphatase isoenzymes in the serum of hyperthyroid cats.</a> Veterinary Clinical Pathology. 23 (3), 98-102 (1994).</li><li>Farley, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Skeletal+Alkaline+Phosphatase+in+Osteoporotic+Serum+by+Wheat+Germ+Agglutinin+Precipitation,+Heat+Inactivation,+and+a+Two-Site+Immunoradiometric+Assay.">Quantification of Skeletal Alkaline Phosphatase in Osteoporotic Serum by Wheat Germ Agglutinin Precipitation, Heat Inactivation, and a Two-Site Immunoradiometric Assay.</a> Clinical Chemistry. 40 (9), 1749-1756 (1994).</li><li>O&#8217;Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtiter+Dish+Biofilm+Formation+Assay.">Microtiter Dish Biofilm Formation Assay.</a> Journal of Visualized Experience. , (2011).</li><li>Nomoto, M., Ohsawa, M., Wang, H. L., Chen, C. C., Yeh, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+Characterization+of+Extracellular+Alkaline+Phosphatase+from+an+Alkalophilic+Bacterium.">Purification and Characterization of Extracellular Alkaline Phosphatase from an Alkalophilic Bacterium.</a> Agricultural and Biological Chemistry. 52 (7), 1643-1647 (1988).</li></ol>

I analysen vår brukte vi pNPP som ALP underlaget. Dette er en fungerende løsning designet for ELISA og ingen utvanning er nødvendig. Etter hydrolyse av ALP, en gul produkt utvikler og kan måles ved 405 nm. På slutten av den enzymatiske reaksjonen, vi kort sentrifugeres 96 godt platen og overført nedbryting til en frisk 96 godt plate å måle absorbansen likner plate. Vi fant at dette ekstra sentrifugering trinnet er kritisk, siden det øker konsistensen av absorbans ved 405 nm, sannsynligvis ved å eliminere mulige...

Alkalisk fosfatase (ALP) uttrykkes overalt i begge prokaryotic og eukaryotic celler1. Det kan katalysere hydrolyse av monofosfat fra ulike molekyler som nukleotider, proteiner, alkaloider, fosfat estere og anhydrider i form av fosforsyre. Hos mennesker finnes eukaryote ALP i mange vev inkludert lever, bein, tarmen og morkaken2. Det spiller en viktig rolle i protein fosforylering, cellevekst, apoptose, Stamcelle prosesser samt normal mineralisering. Eukaryote ALP er også en nøkkel serum indikator for tilstedeværelsen av sykdommer i bein, leveren og andre vev/organer når opphøyet3,4.
Prokaryote ALP ble oppdaget i en rekke bakterielle celler, inkludert E. coli5, S. aureus6,7 og noen vanlige rumen bakterier i jord8. Bakteriell ALP aktivitet har blitt brukt som en biosensor i deteksjon av plantevernmidler og tungmetaller9 bakteriell forurensning10. Grunnleggende uttrykk for ALP har blitt brukt til å identifisere stafylokokker11 og skille Serratia fra Enterobacter12. Videre er det foreslått at konstituerende ALP produksjon er korrelert med virusets i stafylokokker13. Selv om ALP har vært studert i forskjellige innstillinger3,4, men lite er rapportert for aktiviteten og funksjon i biofilm kulturer.
En biofilm er dokumentert for å ha et annerledes fungerende bakteriell liv mot sin frittlevende bakteriell celle motpart14. I S. aureus, har dannelsen av biofilm blitt identifisert i en rekke klinisk betingelser og kontoer for antibiotikaresistens og kronisk betennelse15,16. Mange molekyler hadde blitt rapportert i en biofilm matrise som polysakkarider, proteiner, atomer syren og lipider, men mekanismen av biofilm formasjon er ikke fullt ut forstått14. For å forstå rollen ALP i biofilm formasjon, vi kulturperler S. aureus biofilm i 96 godt vev kultur plater og målt ALP aktiviteten bruker para-nitrophenylphosphate (pNPP).
Molekyl-pNPP er en klar-å-bruke substrat for ALP og har vært mye brukt til å måle ALP aktivitet6,17,18. Denne kolorimetrisk analysen er basert på konverteringen av para-nitrophenyl fosfat (pNPP) til para-nitrophenol resulterer i en farget produktet ved 405 nm. Sammenlignet med andre konvensjonelle ALP analysen, som agarose gel geleelektroforese19, hvetespirer agglutinin (WGA) nedbør, og WGA-HPLC20, denne analysen er svært spesifikke, lar følsom, lett å reprodusere, og aller viktigst, for høy gjennomstrømming.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9002-18-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Centrifuge</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>5810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gluose</td>
			<td>VWR</td>
			<td>50-99-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH pellets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>SS0550-500GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Para-nitrophenylphosphate (pNPP)&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7998-100ML</td>
			<td>Typical concentrations of pNPP liquid substrates, often used in enzyme-linked immunesorbent assays (ELISA), range between 10 to 50 mM. Similar to most ready-to-use pNPP liquid substrates like the one used here, the exact pNPP concentration is not disclosed due to its proprietary nature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X PBS, pH7.4. 
			173 mM NaCl, 
			2.7 mM KCl, 
			8 mM Na2HPO4, 
			2 mM KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3288-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>ELx808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC25923</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Agar&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 15g / L TSB</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9002-18-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Broth:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; g/L 
			Pancreatic Digest of Casein............ 15.0 
			Papaic Digest of Soyben Meal.........5.00 
			Sodium chloride.............................. 3.00 
			Dextrose........................................&#160; 2.50 
			Dipotassium phosphate..................2.50</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90006-098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well tissue culture plates</td>
			<td>BD</td>
			<td>6902D09</td>
			<td>U shaped bottom</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

colorimetric analysis of alkaline phosphatase activity in s. aureus biofilm

Alkalisk fosfatase (ALP) er en vanlig enzym uttrykt i både prokaryotic og eukaryotic celler. Det gir hydrolyse av fosfat monoesters fra mange molekyler på grunnleggende pH og spiller en uunnværlige rolle i fosfat metabolisme. Hos mennesker er eukaryote ALP en av de mest brukte enzymatisk signalene diagnostisere ulike sykdommer, som cholestasis og rakitt. I S. aureus, ALP oppdages på cellemembranen; Det er også uttrykt som en sekretoriske form også. Likevel, lite er kjent om dens funksjon biofilm formasjon.
Hensikten med denne oppgaven er å utvikle en rask og pålitelig analysen for å måle ALP aktivitet i S. aureus biofilm som ikke krever protein isolasjon. Bruker p-nitrophenyl fosfat (pNPP) som et substrat, målt vi ALP aktivitet i S. aureus biofilm dannet i 96-brønnen vev kultur plater. Aktivitet basert på dannelsen av løselig reaksjon produktet målt ved 405 nm absorbance. Høy gjennomstrømning natur metoden 96 godt vev kultur plate inneholder en følsom og reproduserbar metode for ALP aktivitet analyser. Det samme eksperimentelle definere kan også utvides for å måle andre ekstracellulære molekylære markører knyttet til biofilm formasjon.

Figur 1 viser et representativt resultat ALP aktivitet fra biofilm kulturer av S. aureus i 96 godt vev kultur plater. 75 μL kommersielt tilgjengelig pNPP løsning lagt til hver godt og inkubert ved romtemperatur. Etter inkubasjon for ulike tider (0 minutter, 15 min, 30 min, 45 min, 60 min og 75 min, henholdsvis) 75 μL 5 M NaOH ble lagt til stoppe reaksjonen. Produktet ble deretter målt i en 96 godt plate leser ved 405 nm. Hvert tidspunkt ble gjent...

Watch this Scientific Journal Video about Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm at JoVE.com

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

I dette manuskriptet etablert vi en høy gjennomstrømning metode for å kvantifisere alkalisk fosfatase aktivitet i S. aureus biofilm kultur fra 96-brønns vev kultur plate

Kolorimetrisk analyse av alkalisk fosfatase aktivitet i S. aureus Biofilm

Alkaline phosphatase (ALP) is a common enzyme expressed in both prokaryotic and eukaryotic cells. It catalyzes the hydrolysis of phosphate monoesters from ...

Denne protokollen presenterte en enkel og pålitelig metode for å måle alkalisert fosfataseaktivitet i S.aureus biofilmkultur. Det vil hjelpe oss å forstå funksjonen til ALP i biofilmdannelse. Den største fordelen med denne teknikken er høy gjennomstrømning.Det er veldig følsomt og lett å utføre. Viser prosedyren vil være Kevin Danikowski, en tidligere student fra Harper College. For å forberede TSB, tilsett bukspyttkjertelfordøye av casein, papaic digest av soyabønne måltid, natriumklorid, dekstrose og dipotassium fosfat i destillert vann.Dekk kolben med aluminiumsfolie og legg den i en autoklav for å sterilisere før bruk. For å forberede en TSA, legg agar til TSB og legg den i autoklaven for sterilisering. La det avkjøles til romtemperatur.Deretter helles den i petriskålen i et forhold på 20 milliliter per tallerken. For å forberede et biofilmkulturmedium, tilsett glukose til autoklavet TSB for å oppnå konsentrasjonen på 10 gram per liter. Bruk et vakuumfiltreringssett til å filtrere oppløsningen med et filter på 0,2 mikrometer.For å inokulere, bruk en sterilisert inokulasjonssløyfe for å velge en individuell koloni av Staph aureus fra petriskålen og legg den i kulturrøret fylt med 10 milliliter TSB. Sett røret i inkubatoren for å vokse over natten ved 37 grader Celsius. Med en mikropipette trekker du 100 mikroliter av overnattingskultur og overfører den til et kulturrør fylt med 10 milliliter TSB med glukose for en 1:100 volumforholdsfortynning.Vortex forsiktig for å blande for en konsekvent konsentrasjon. Bruk en mikropipette til å overføre 200 mikroliter fortynnet kultur til totalt 18 brønner fra en 96 brønnplate. Inkuber 96-brønnplaten ved 37 grader Celsius i 24 timer for biofilmdannelse.For den beste biofilmdannelsen av S.aureus er det bedre å velge en flat eller rund bunn 96 brønnplate. Etter det, litt vippe platen for å dekantere supernatant ved aspirasjon fra kanten av hver brønn. Vask hver brønn med 1X PBS.Sett platen i sentrifugen for å spinne i fem minutter ved 8000 omdreininger per minutt og dekantere det overnaturlige ved aspirasjon. Legg til 75 mikroliter bufret ALP-substrat bestående av kommersielt tilgjengelig PNPP til hver brønn og bruk en timer til å registrere hvert gangpunkt i triplicate. Etter hvert inkubasjonstidspunkt, tilsett 75 mikroliter med fem molarnatriumhydroksid til hver av tre brønner for å stoppe reaksjonen.Sentrifuger platen i fem minutter ved 800 omdreininger per minutt. Bruk en pipette til å overføre 100 mikroliter supernatant til en ny 96-brønnplate for kalorimetrisk måling. Bruk en 96 brønnplateleser til å måle absorbansen til hver brønn ved 405 nanometer.Bruk 30-minutters tidspunktbrønner til å kontrollere for bakgrunnsstøy. Gjenta hele eksperimentet i tre 96 brønnplater. Denne protokollen utvikler en rask og pålitelig analyse for å måle ALP-aktivitet i S.aureus biofilm som ikke krever proteinisolering.Det representative resultatet av ALP-aktiviteten viser en økt trend i opptil 75 minutter. Etter 75 minutter ble det ikke observert noen økning av ALP-aktiviteten. Det er svært viktig å etablere en god biofilmkultur, og det kan ta ganske mange forsøk å mestre.Du kan bekrefte biofilmdannelse ved å utføre krystallfiolett analyse som tidligere rapportert av oss og andre, eller du kan forhåndsbehandle platen med humant plasma for å lette biofilmdannelse. Etter utviklingen kan du screene potensielle ALP-hemmere som kan forstyrre biofilmdannelsen. Resultatet vil gi viktig informasjon til biofilmhåndtering innen medisinsk felt.Fem molar natriumhydroksid kan være farlig ved kontakt. Pass på at du bruker personlig verneutstyr ved håndtering.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

Quantification of Global Diastolic Function by Kinematic Modeling-based Analysis of Transmitral Flow via the Parametrized Diastolic Filling Formalism

Kvantifisering av Global diastolisk funksjon av Kinetisk modellering basert analyse av transmitral Flow via Parametrized diastolisk Fylling formalisme

Quantitative cardiac function assessment remains a challenge for physiologists and clinicians.&#160;Although historically invasive methods have comprised ...

Protocol for Biofilm Streamer Formation in a Microfluidic Device with Micro-pillars

Protokoll for Biofilm Streamer-formasjonen i en mikrofluid enhet med Micro-søyler

Several bacterial species possess the ability to attach to surfaces and colonize them in the form of thin films called biofilms. Biofilms that grow in ...

Real-time Visualization and Analysis of Chondrocyte Injury Due to Mechanical Loading in Fully Intact Murine Cartilage Explants

Sanntids visualisering og analyse av Chondrocyte personskader mekaniske belastninger i fullt intakt Murine brusk Explants

Homeostasis of articular cartilage depends on the viability of resident cells (chondrocytes). Unfortunately, mechanical trauma can induce widespread ...

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

En sebrafisk Embryo modell for In Vivo visualisering og Intravital analyse av biomateriale-assosiert Staphylococcus aureus infeksjoner

Biomaterial-associated infection (BAI) is a major cause of the failure of biomaterials/medical devices. Staphylococcus aureus is one of the major ...

High-resolution Patterned Biofilm Deposition Using pDawn-Ag43

Høyoppløselig mønstret Biofilm deponering bruker pDawn-Ag43

Spatial structure and patterning play an important role in bacterial biofilms. Here we demonstrate an accessible method for culturing E. coli biofilms ...

Measuring Global Cellular Matrix Metalloproteinase and Metabolic Activity in 3D Hydrogels

Måling av Global mobilnettet matrise Metalloproteinase og metabolsk aktivitet i 3D Hydrogels

Three-dimensional (3D) cell culture systems often more closely recapitulate in vivo cellular responses and functions than traditional two-dimensional (2D) ...

Home-Based Monitor for Gait and Activity Analysis

Hjemme BAS ert skjerm for gange og aktivitets analyse

Current outcomes in neuromuscular disorder clinical trials include motor function scales, timed tests, and strength measures performed by trained clinical ...

Substructure Analyzer: A User-Friendly Workflow for Rapid Exploration and Accurate Analysis of Cellular Bodies in Fluorescence Microscopy Images

Substructure Analyzer: En brukervennlig arbeidsflyt for rask utforskning og nøyaktig analyse av cellulære organer i fluorescensmikroskopibilder

The last decade has been characterized by breakthroughs in fluorescence microscopy techniques illustrated by spatial resolution improvement but also in ...

Electric and Magnetic Field Devices for Stimulation of Biological Tissues

Elektriske og magnetiske feltenheter for stimulering av biologisk vev

Electric fields (EFs) and magnetic fields (MFs) have been widely used by tissue engineering to improve cell dynamics such as proliferation, migration, ...