Name: colorimetric analysis of alkaline phosphatase activity in s. aureus biofilm
Uploaded: 2019-04-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm at JoVE.com

Vi tackar William Rainey Harper College och University of Illinois i Chicago för möjligheten att genomföra dessa experiment. Vi tackar också McGraw Hill Foundation för deras generösa stöd.

1. medium förberedelse
<ol><li>Förbereda 1 L av Tryptic Soy buljong (TSB): I 1 L destillerat vatten, tillsätt 15 g bukspottskörteln digest kasein, 5 g papaic sammandrag av sojamjöl, 3 g natriumklorid, 2,5 g dextros och 2,5 g dikaliumvätefosfat fosfat. Sterilisera före användning.</li>
	<li>För Tryptic Soy Agar (TSA), tillsätt 15 g agar till 1 L av TSB, autoklav. Sedan låt den svalna ner till rumstemperatur. Nästa, häll i förhållandet 20 mL per petriskål (100 x 15 mm).</li>
	<li>Biofilm odlingssubstratet...

<ol>
	<li>Coleman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+alkaline+phosphatase.">Structure and mechanism of alkaline phosphatase.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 21, 441-483 (1992).</li><li>Sharma, U., Pal, D., Prasad, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+Phosphatase:+An+Overview.">Alkaline Phosphatase: An Overview.</a> Indian Journal of Clinical Biochemistry. 29 (3), 269-278 (2014).</li><li>Mitchell, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequencies+of+elevated+alkaline+phosphatase+activity+and+rickets+exist+in+extremely+low+birth+weight+infants+despite+current+nutritional+support.">High frequencies of elevated alkaline phosphatase activity and rickets exist in extremely low birth weight infants despite current nutritional support.</a> Boston Medical Center Pediatrics. 9, 47 (2009).</li><li>Fawley, J., Gourlay, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+alkaline+phosphatase:+A+summary+of+its+role+in+clinical+disease.">Intestinal alkaline phosphatase: A summary of its role in clinical disease.</a> Journal of Surgical Research. 202 (1), 225-234 (2016).</li><li>Derman, A. I., Beckwith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+Alkaline+Phosphatase+Localized+to+the+Cytoplasm+Slowly+Acquires+Enzymatic+Activity+in+Cells+Whose+Growth+Has+Been+Suspended:+a+Caution+for+Gene+Fusion+Studies.">Escherichia coli Alkaline Phosphatase Localized to the Cytoplasm Slowly Acquires Enzymatic Activity in Cells Whose Growth Has Been Suspended: a Caution for Gene Fusion Studies.</a> Journal of Bacteriology. 177 (13), 3764-3770 (1995).</li><li>Danikowski, K. M., Cheng, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+Phosphatase+Activity+of+Staphylococcus+aureus+grown+in+Biofilm+and+Suspension+Cultures.">Alkaline Phosphatase Activity of Staphylococcus aureus grown in Biofilm and Suspension Cultures.</a> Current Microbiology. 75, 1226-1230 (2018).</li><li>Okabayashi, K., Futai, M., Mizuno, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+Acid+and+Alkaline+Phosphatases+in+Staphylococcus+aureus.">Localization of Acid and Alkaline Phosphatases in Staphylococcus aureus.</a> Japanese Journal of Microbiology. 18 (4), 287-294 (1974).</li><li>Cheng, K. J., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+Phosphatase+Activity+of+Rumen+Bacteria.">Alkaline Phosphatase Activity of Rumen Bacteria.</a> Applied and Environmental Microbiology. , 586-590 (1997).</li><li>Berezhetskyy, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphatase+conductometric+biosensor+for+heavy-metal+ions+determination.">Phosphatase conductometric biosensor for heavy-metal ions determination.</a> Innovation and Research in Biomedical Engineering. 29 (2-3), 136-140 (2008).</li><li>Park, E. J., Kang, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+bacterial+alkaline+phosphatase+assay+for+rapid+monitoring+of+bacterial+counts+on+spinach.">The use of bacterial alkaline phosphatase assay for rapid monitoring of bacterial counts on spinach.</a> Journal of Food Science. 73 (5), M236-M238 (2008).</li><li>Barber, M., Kuper, S. W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Staphylococcus+pyogenes+by+the+phosphatase+reaction.">Identification of Staphylococcus pyogenes by the phosphatase reaction.</a> The Journal of Pathology and Bacteriology. 63, 65-68 (1951).</li><li>Wolf, P. L., Von der Muehll, E., Ludwick, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+test+to+differentiate+Serratia+from+Enterobacter.">A new test to differentiate Serratia from Enterobacter.</a> American Journal of Clinical Pathology. 56, 241-243 (1972).</li><li>Rangam, C. M., Katdare, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphatase+activity+of+Staphylococci+as+an+indication+of+their+pathogenicity.">Phosphatase activity of Staphylococci as an indication of their pathogenicity.</a> Indian Journal of Medical Science. 8, 610-613 (1954).</li><li>Flemming, H. -. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+an+emergent+form+of+bacterial+life.">Biofilms: an emergent form of bacterial life.</a> Nature Reviews Microbiology. 14, 563-575 (2016).</li><li>Hoiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+resistance+of+bacterial+biofilms.">Antibiotic resistance of bacterial biofilms.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 35, 322-332 (2010).</li><li>Ito, A., Taniuchi, A., May, T., Kawata, K., Okabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+antibiotic+resistance+of+Escherichia+coli+in+mature+biofilms.">Increased antibiotic resistance of Escherichia coli in mature biofilms.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75, 4093-4100 (2009).</li><li>Witherow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ten-Week+Biochemistry+Lab+Project+Studying+Wild-Type+and+Mutant+Bacterial+Alkaline+Phosphatase.">A Ten-Week Biochemistry Lab Project Studying Wild-Type and Mutant Bacterial Alkaline Phosphatase.</a> Biochemistry and Molecular Biology Education. 44 (6), (2016).</li><li>Henthorn, P., Zervos, P., Raducha, M., Harris, H., Kadesch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+human+placental+alkaline+phosphatase+gene+in+transfected+cells:+Use+as+a+reporter+for+studies+of+gene+expression.">Expression of a human placental alkaline phosphatase gene in transfected cells: Use as a reporter for studies of gene expression.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 85, 6324-6346 (1988).</li><li>Horney, B. S., Farmer, A. J., Honor, D. J., MacKenzie, A., Burton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agarose+gel+electrophoresis+of+alkaline+phosphatase+isoenzymes+in+the+serum+of+hyperthyroid+cats.">Agarose gel electrophoresis of alkaline phosphatase isoenzymes in the serum of hyperthyroid cats.</a> Veterinary Clinical Pathology. 23 (3), 98-102 (1994).</li><li>Farley, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Skeletal+Alkaline+Phosphatase+in+Osteoporotic+Serum+by+Wheat+Germ+Agglutinin+Precipitation,+Heat+Inactivation,+and+a+Two-Site+Immunoradiometric+Assay.">Quantification of Skeletal Alkaline Phosphatase in Osteoporotic Serum by Wheat Germ Agglutinin Precipitation, Heat Inactivation, and a Two-Site Immunoradiometric Assay.</a> Clinical Chemistry. 40 (9), 1749-1756 (1994).</li><li>O&#8217;Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtiter+Dish+Biofilm+Formation+Assay.">Microtiter Dish Biofilm Formation Assay.</a> Journal of Visualized Experience. , (2011).</li><li>Nomoto, M., Ohsawa, M., Wang, H. L., Chen, C. C., Yeh, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+Characterization+of+Extracellular+Alkaline+Phosphatase+from+an+Alkalophilic+Bacterium.">Purification and Characterization of Extracellular Alkaline Phosphatase from an Alkalophilic Bacterium.</a> Agricultural and Biological Chemistry. 52 (7), 1643-1647 (1988).</li></ol>

I vår analys använde vi pNPP som ALP substratet. Detta är en fungerande lösning utformad för ELISA och ingen utspädning behövs. Efter hydrolys av ALP, en gul produkt utvecklar och kan mätas vid 405 nm. I slutet av den enzymatiska reaktionen, vi kortfattat centrifugeras 96 väl plattan och överförs supernatanten till en färsk 96 väl platta att mäta absorbansen med plattan läsaren. Vi fann att detta extra centrifugering steg är kritisk, eftersom den ökar konsekvensen av absorbansen vid 405 nm, förmodligen ...

Alkaliskt fosfatas (ALP) uttrycks ubiquitously i både prokaryota och eukaryota celler1. Det kan katalyserar hydrolys av monofosfat från olika molekyler såsom nukleotider, proteiner, alkaloider, fosfatestrar och anhydrider av fosforsyra. Människor förekommer eukaryota ALP i många vävnader inklusive levern, skelettet, tarmen och moderkakan2. Det spelar viktiga roller i protein fosforylering, celltillväxt, apoptos, stamceller processer samt normal mineralisering av skelettet. Eukaryota ALP är också en nyckel serum indikator för förekomst av sjukdomar i skelettet, levern och andra vävnader/organ när förhöjda3,4.
Prokaryota ALP har upptäckts i en mängd olika bakterieceller, inklusive E. coli5, S. aureus6,7 och vissa gemensamma våmmen bakterier i jordar8. Bakteriella ALP aktivitet har använts som en biosensor för detektion av bekämpningsmedel, tungmetaller9 och bakteriell kontamination10. Det konstitutiva uttrycket för ALP har använts att identifiera stafylokocker11 och att skilja Serratia från Enterobacter12. Det föreslås vidare att konstituerande ALP produktion är korrelerad med patogenicitet stafylokocker13. Även om ALP har studerats i olika inställningar3,4, ännu rapporteras lite för dess aktivitet och funktion i biofilmer kulturer.
En biofilm har dokumenterats för att har ett olikt fungerande bakteriell liv jämfört med dess fri-uppehället bakteriecell motsvarighet14. I S. aureus, har bildandet av biofilm identifierats i en mängd olika kliniska tillstånd och konton för antibiotikaresistens och kronisk inflammation15,16. Många molekyler hade rapporterats i en biofilm matris såsom polysackarider, proteiner, nukleinsyror och lipider, men mekanismen av biofilm bildning är inte fullt ut förstått14. För att förstå rollen av ALP i biofilm bildning, vi odlade S. aureus biofilmer i 96 väl vävnadsodling plattor och mätt aktiviteten ALP med para-nitrophenylphosphate (pNPP).
Den molekyl pNPP är redo att använda substrat för ALP och har använts i stor utsträckning att mäta ALP aktivitet6,17,18. Denna kolorimetriska analys baseras på omvandlingen av para-nitrofenyl fosfat (pNPP) till para-nitrofenol resulterar i en färgad produkt vid 405 nm. Jämfört med andra konventionella ALP-analysen, som agaros gel elektrofores19, vetegroddar agglutinin (WGA) nederbörd, och WGA-HPLC20, denna analys är mycket specifika, möjliggör känslig, lätt att reproducera, och de flesta viktigare, hög genomströmning.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9002-18-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Centrifuge</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>5810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gluose</td>
			<td>VWR</td>
			<td>50-99-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH pellets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>SS0550-500GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Para-nitrophenylphosphate (pNPP)&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7998-100ML</td>
			<td>Typical concentrations of pNPP liquid substrates, often used in enzyme-linked immunesorbent assays (ELISA), range between 10 to 50 mM. Similar to most ready-to-use pNPP liquid substrates like the one used here, the exact pNPP concentration is not disclosed due to its proprietary nature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X PBS, pH7.4. 
			173 mM NaCl, 
			2.7 mM KCl, 
			8 mM Na2HPO4, 
			2 mM KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3288-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>ELx808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC25923</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Agar&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 15g / L TSB</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9002-18-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Broth:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; g/L 
			Pancreatic Digest of Casein............ 15.0 
			Papaic Digest of Soyben Meal.........5.00 
			Sodium chloride.............................. 3.00 
			Dextrose........................................&#160; 2.50 
			Dipotassium phosphate..................2.50</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90006-098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well tissue culture plates</td>
			<td>BD</td>
			<td>6902D09</td>
			<td>U shaped bottom</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

colorimetric analysis of alkaline phosphatase activity in s. aureus biofilm

Alkaliskt fosfatas (ALP) är en gemensam enzym uttrycks i både prokaryota och eukaryota celler. Det katalyserar hydrolys av fosfat monoesters från många molekyler vid grundläggande pH och en oumbärlig roll i metabolismen av fosfat. I människor är eukaryota ALP en av de vanligaste enzymatiska signalerna diagnostisera olika sjukdomar, såsom gallstas och rakitis. I S. aureus, ALP upptäcks uteslutande på cellmembranet; det uttrycks också som en sekretoriska form också. Men är lite känt om dess funktion i biofilm bildning.
Syftet med detta manuskript är att utveckla en snabb och tillförlitlig test för att mäta ALP aktivitet i S. aureus biofilm som inte kräver protein isolering. Använder p-nitrofenylfosfat fosfat (pNPP) som substrat, mätte vi ALP aktivitet i S. aureus biofilm bildas i 96 brunnar vävnadsodling plattor. Aktiviteten bygger på bildandet av lösliga reaktionsprodukten mäts av 405 nm absorbans. Hög genomströmning beskaffenhet metoden 96 väl vävnadsodling plattan ger en känslig och reproducerbar metod för ALP aktivitet analyser. Samma experimentell uppsättning kan även utökas för att mäta andra extracellulära molekylära markörer relaterade till biofilm bildning.

Figur 1 visar representativa resultat av ALP aktivitet från biofilm kulturer av S. aureus i 96 väl vävnadsodling plattor. 75 μL av kommersiellt tillgängliga pNPP lösning lades till varje brunn och inkuberas vid rumstemperatur. Efter inkubation i olika tider (0 min, 15 min, 30 min, 45 min, 60 min och 75 min, respektive) 75 μl 5 M NaOH lades till för att stoppa reaktionen. Produkten mättes sedan i en 96 väl Plattläsare vid 405 nm. Varje tidp...

Watch this Scientific Journal Video about Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm at JoVE.com

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

I detta manuskript etablerade vi en hög genomströmning metod för att kvantifiera alkaliskt fosfatasaktiviteten i S. aureus biofilm kultur från 96 brunnar vävnadsodling plattan

Kolorimetriska analys av alkaliskt fosfatasaktiviteten i S. aureus Biofilm

Alkaline phosphatase (ALP) is a common enzyme expressed in both prokaryotic and eukaryotic cells. It catalyzes the hydrolysis of phosphate monoesters from ...

Detta protokoll presenteras en enkel och tillförlitlig metod för att mäta alkaliserade fosfatas aktivitet i S.aureus biofilm kultur. Det kommer att hjälpa oss att förstå funktionen av ALP i biofilm bildning. Den stora fördelen med denna teknik är hög genomströmning.Det är mycket känslig och lätt att utföra. Visar förfarandet kommer att Kevin Danikowski, en före detta student från Harper College. För att förbereda TSB, tillsätt bukspottskörteln smälta av casein, papaic digest av sojamjöl, natriumklorid, dextros, och dipotassium fosfat i destillerat vatten.Täck kolven med aluminiumfolie och lägg den i en autoklav för att sterilisera innan användning. För att förbereda en TSA, lägg till agar till TSB och lägg den i autoklaven för sterilisering. Låt det svalna till rumstemperatur.Därefter häller du den i petriskålen vid ett förhållande på 20 milliliter per fat. För att förbereda en biofilm kulturmedium, lägga glukos till autoklaverade TSB för att uppnå koncentrationen av 10 gram per liter. Med hjälp av en vakuumfiltreringssats, filtrera lösningen med ett 0,2 mikrometers porstorleksfilter.För att inokulera, använd en steriliserad inokulering slinga för att plocka en enskild koloni av Staph aureus från Petri skålen och placera den i odlingsröret fylld med 10 milliliter TSB. Sätt röret i inkubatorn att växa över natten på 37 grader Celsius. Med en mikropipette, rita 100 mikroliter av natten kultur och överföra den till en kultur röret fylld med 10 milliliter TSB med glukos för en 1:100 volymförhållande utspädning.Vortex försiktigt att blanda för en konsekvent koncentration. Använd en mikropipette för att överföra 200 mikroliter av utspädd odling till totalt 18 brunnar från en 96 brunnsplatta. Inkubera 96 brunnsplattan vid 37 grader Celsius i 24 timmar för biofilmbildning.För bästa biofilmbildning av S.aureus är det bättre att plocka en platt eller rund botten 96 brunnsplatta. Efter det, något luta plattan för att dekantera supernatanten genom strävan från kanten av varje brunn. Tvätta varje brunn med 1X PBS.Sätt plattan i centrifug att snurra i fem minuter på 8, 000 varv per minut och dekantera supernatanten genom aspiration. Tillsätt 75 mikroliter av buffrat ALP-substrat bestående av kommersiellt tillgänglig PNPP till varje brunn och använd en timer för att registrera varje tidspunkt i tre exemplar. Efter varje inkubationstidpunkt, tillsätt 75 mikroliter av fem molar natriumhydroxid till var och en av tre brunnar för att stoppa reaktionen.Centrifugera plattan i fem minuter vid 800 varv per minut. Använd en pipett för att överföra 100 mikroliter av supernatant till en ny 96 brunnsplatta för calorimetrisk mätning. Använd en 96 brunnsplåtsläsare för att mäta absorbansen för varje brunn vid 405 nanometer.Använd 30-minuters tidspunktsvälnorna för att kontrollera för bakgrundsljud. Upprepa hela experimentet i tre 96 brunnsplattor. Detta protokoll utvecklar en snabb och tillförlitlig analys för att mäta ALP aktivitet i S.aureus biofilm som inte kräver proteinisolering.Det representativa resultatet av ALP-aktivitet visar en ökad trend i upp till 75 minuter. Efter 75 minuter observerades ingen ökning av ALP-aktiviteten. Det är mycket viktigt att etablera en bra biofilm kultur och det kan ta en hel del försök att behärska.Du kan bekräfta biofilm bildning genom att utföra kristall violett assay som tidigare rapporterats av oss och andra eller så kan du pre-behandla plattan med mänskliga plasma för att underlätta biofilm bildas. Efter dess utveckling, du kan skärmen potentiella ALP-hämmare som kan störa biofilm bildning. Resultatet kommer att ge viktig information mot biofilmhantering inom medicinskt område.Fem molar natriumhydroxid kan vara farligt vid kontakt. Var noga med att bära personlig skyddsutrustning vid hantering.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Colorimetric Analysis of Alkaline Phosphatase Activity in S. aureus Biofilm

Quantification of Global Diastolic Function by Kinematic Modeling-based Analysis of Transmitral Flow via the Parametrized Diastolic Filling Formalism

Kvantifiering av Global diastoliska funktionen av kinematisk modellering baserad Analys av Transmitral Flow via Parametrized diastoliska Filling Formalism

Quantitative cardiac function assessment remains a challenge for physiologists and clinicians.&#160;Although historically invasive methods have comprised ...

Protocol for Biofilm Streamer Formation in a Microfluidic Device with Micro-pillars

Protokoll för Biofilm Streamer Bildning i ett mikroflödessystem enhet med Micro-stolparna

Several bacterial species possess the ability to attach to surfaces and colonize them in the form of thin films called biofilms. Biofilms that grow in ...

Real-time Visualization and Analysis of Chondrocyte Injury Due to Mechanical Loading in Fully Intact Murine Cartilage Explants

Realtid visualisering och analys av Chondrocyte skada på grund av mekanisk belastning i helt intakt murina brosk bladsticklingar

Homeostasis of articular cartilage depends on the viability of resident cells (chondrocytes). Unfortunately, mechanical trauma can induce widespread ...

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection

Zebrafiskar Embryo modell för In Vivo visualisering och Intravital analys av Biomaterial-associerade Staphylococcus aureus infektion

Biomaterial-associated infection (BAI) is a major cause of the failure of biomaterials/medical devices. Staphylococcus aureus is one of the major ...

High-resolution Patterned Biofilm Deposition Using pDawn-Ag43

Högupplösta mönstrad Biofilm nedfall använder Misterrayban1-Ag43

Spatial structure and patterning play an important role in bacterial biofilms. Here we demonstrate an accessible method for culturing E. coli biofilms ...

Measuring Global Cellular Matrix Metalloproteinase and Metabolic Activity in 3D Hydrogels

Mätning av globala Cellular Matrix metalloproteinas och metabolisk aktivitet i 3D Hydrogels

Three-dimensional (3D) cell culture systems often more closely recapitulate in vivo cellular responses and functions than traditional two-dimensional (2D) ...

Home-Based Monitor for Gait and Activity Analysis

Hembaserad Monitor för gång-och aktivitetsanalys

Current outcomes in neuromuscular disorder clinical trials include motor function scales, timed tests, and strength measures performed by trained clinical ...

Substructure Analyzer: A User-Friendly Workflow for Rapid Exploration and Accurate Analysis of Cellular Bodies in Fluorescence Microscopy Images

Substructure Analyzer: Ett användarvänligt arbetsflöde för snabb utforskning och korrekt analys av cellulära organ i fluorescensmikroskopi bilder

The last decade has been characterized by breakthroughs in fluorescence microscopy techniques illustrated by spatial resolution improvement but also in ...

Electric and Magnetic Field Devices for Stimulation of Biological Tissues

Elektriska och magnetiska fältenheter för stimulering av biologiska vävnader

Electric fields (EFs) and magnetic fields (MFs) have been widely used by tissue engineering to improve cell dynamics such as proliferation, migration, ...