Name: generation of 3d skin organoid from cord blood-derived induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2019-04-18T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

وأيد هذا العمل بمنحه من كوريا الرعاية الصحية تكنولوجيا البحث والتطوير المشروع د، وزارة الصحة والرعاية الاجتماعية و "شؤون الأسرة"، جمهورية كوريا (H16C2177، H18C1178).

وأجريت جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات وفقا "قانون رعاية الحيوانات المختبرية"، دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، والمبادئ التوجيهية والسياسات المتعلقة "التجريب القوارض" التي تقدمها إلى "رعاية الحيوان المؤسسية" و استخدام اللجنة (إياكوك) من كلية الطب في الجامعة الكاثوليكي...

<ol>
	<li>Vincent, J. F., Bogatyreva, O. A., Bogatyrev, N. R., Bowyer, A., Pahl, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomimetics:+its+practice+and+theory.">Biomimetics: its practice and theory.</a> Journal of The Royal Society Interface. 3 (9), 471-482 (2006).</li><li>Madison, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barrier+function+of+the+skin:+"la+raison+d'etre"+of+the+epidermis.">Barrier function of the skin: "la raison d'etre" of the epidermis.</a> Journal of Investigative Dermatology. 121 (2), 231-241 (2003).</li><li>Chen, M., Przyborowski, M., Berthiaume, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+for+skin+tissue+engineering+and+wound+healing.">Stem cells for skin tissue engineering and wound healing.</a> Critical Reviews in Biomedical Engineering. 37 (4-5), 399-421 (2009).</li><li>Dixit, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+challenges+associated+with+artificial+skin+grafts:+available+solutions+and+stem+cells+in+future+design+of+synthetic+skin.">Immunological challenges associated with artificial skin grafts: available solutions and stem cells in future design of synthetic skin.</a> Journal of Biological Engineering. 11, 49 (2017).</li><li>Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells:+past,+present,+and+future.">Induced pluripotent stem cells: past, present, and future.</a> Cell Stem Cell. 10 (6), 678-684 (2012).</li><li>Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotency+and+nuclear+reprogramming.">Pluripotency and nuclear reprogramming.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 363 (1500), 2079-2087 (2008).</li><li>Scheiner, Z. S., Talib, S., Feigal, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+for+immunogenicity+of+autologous+induced+pluripotent+stem+cell-derived+therapies.">The potential for immunogenicity of autologous induced pluripotent stem cell-derived therapies.</a> Journal of Biological Chemistry. 289 (8), 4571-4577 (2014).</li><li>Zimmermann, A., Preynat-Seauve, O., Tiercy, J. M., Krause, K. H., Villard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haplotype-based+banking+of+human+pluripotent+stem+cells+for+transplantation:+potential+and+limitations.">Haplotype-based banking of human pluripotent stem cells for transplantation: potential and limitations.</a> Stem Cells and Development. 21 (13), 2364-2373 (2012).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+history+of+HLA.">A brief history of HLA.</a> Immunologic Research. 38 (1-3), 139-148 (2007).</li><li>Haase, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+cord+blood.">Generation of induced pluripotent stem cells from human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 5 (4), 434-441 (2009).</li><li>Rim, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+of+national+banking+project+on+homozygous+HLA-typed+induced+pluripotent+stem+cells+in+South+Korea.">Recent progress of national banking project on homozygous HLA-typed induced pluripotent stem cells in South Korea.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (3), 1531-1536 (2018).</li><li>Nakatsuji, N., Nakajima, F., Tokunaga, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-haplotype+banking+and+iPS+cells.">HLA-haplotype banking and iPS cells.</a> Nature Biotechnology. 26 (7), 739-740 (2008).</li><li>Pappas, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proceedings:+human+leukocyte+antigen+haplo-homozygous+induced+pluripotent+stem+cell+haplobank+modeled+after+the+california+population:+evaluating+matching+in+a+multiethnic+and+admixed+population.">Proceedings: human leukocyte antigen haplo-homozygous induced pluripotent stem cell haplobank modeled after the california population: evaluating matching in a multiethnic and admixed population.</a> Stem Cells Translational Medicine. 4 (5), 413-418 (2015).</li><li>Embryoid body formation from human pluripotent stem cells in chemically defined E8 media. StemBook Available from: <a target="_blank" href="https://www.stembook.org/node/6632">https://www.stembook.org/node/6632</a> (2008)</li><li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+complex+skin+structure+via+layered+co-culture+of+keratinocytes+and+fibroblasts+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Establishment of a complex skin structure via layered co-culture of keratinocytes and fibroblasts derived from induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 217 (2018).</li><li>Diecke, S., Jung, S. M., Lee, J., Ju, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+technological+updates+and+clinical+applications+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Recent technological updates and clinical applications of induced pluripotent stem cells.</a> The Korean Journal of Internal Medicine. 29 (5), 547-557 (2014).</li><li>Shi, Y., Inoue, H., Wu, J. C., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+technology:+a+decade+of+progress.">Induced pluripotent stem cell technology: a decade of progress.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (2), 115-130 (2017).</li><li>Yoshida, Y., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+stem+cell+advances:+induced+pluripotent+stem+cells+for+disease+modeling+and+stem+cell-based+regeneration.">Recent stem cell advances: induced pluripotent stem cells for disease modeling and stem cell-based regeneration.</a> Circulation. 122 (1), 80-87 (2010).</li><li>Pham, T. L., Nguyen, T. T., Van Bui, A., Nguyen, M. T., Van Pham, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+heart+extract+facilitates+the+differentiation+of+human+umbilical+cord+blood-derived+mesenchymal+stem+cells+into+heart+muscle+precursor+cells.">Fetal heart extract facilitates the differentiation of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells into heart muscle precursor cells.</a> Cytotechnology. 68 (4), 645-658 (2016).</li><li>Stecklum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+differentiation+mediated+by+co-culture+of+human+umbilical+cord+blood+stem+cells+with+murine+hepatic+cells.">Cell differentiation mediated by co-culture of human umbilical cord blood stem cells with murine hepatic cells.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology - Animal. 51 (2), 183-191 (2015).</li><li>Nam, Y., Rim, Y. A., Ju, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondrogenic+Pellet+Formation+from+Cord+Blood-derived+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (124), e55988 (2017).</li><li>Rim, Y. A., Nam, Y., Ju, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+Cord+Blood+and+Cord+Blood-derived+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+for+Cartilage+Regeneration.">Application of Cord Blood and Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells for Cartilage Regeneration.</a> Cell Transplantation. , (2018).</li><li>Shevde, N. K., Mael, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+embryoid+body+formation+from+human+pluripotent+stem+cells.">Techniques in embryoid body formation from human pluripotent stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 946, 535-546 (2013).</li><li>Shamis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPSC-derived+fibroblasts+demonstrate+augmented+production+and+assembly+of+extracellular+matrix+proteins.">iPSC-derived fibroblasts demonstrate augmented production and assembly of extracellular matrix proteins.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology - Animal. 48 (2), 112-122 (2012).</li><li>Bikle, D. D., Xie, Z., Tu, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+regulation+of+keratinocyte+differentiation.">Calcium regulation of keratinocyte differentiation.</a> Expert Review of Endocrinology &amp; Metabolism. 7 (4), 461-472 (2012).</li><li>Bernstam, L. I., Vaughan, F. L., Bernstein, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+grown+at+the+air-liquid+interface.">Keratinocytes grown at the air-liquid interface.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology. 22 (12), 695-705 (1986).</li><li>Prunieras, M., Regnier, M., Woodley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+cultivation+of+keratinocytes+with+an+air-liquid+interface.">Methods for cultivation of keratinocytes with an air-liquid interface.</a> Journal of Investigative Dermatology. 81, 28-33 (1983).</li><li>Steven, A. C., Bisher, M. E., Roop, D. R., Steinert, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthetic+pathways+of+filaggrin+and+loricrin--two+major+proteins+expressed+by+terminally+differentiated+epidermal+keratinocytes.">Biosynthetic pathways of filaggrin and loricrin--two major proteins expressed by terminally differentiated epidermal keratinocytes.</a> Journal of Structural Biology. 104 (1-3), 150-162 (1990).</li><li>Hohl, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+loricrin.+Structure+and+function+of+a+new+class+of+epidermal+cell+envelope+proteins.">Characterization of human loricrin. Structure and function of a new class of epidermal cell envelope proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 266 (10), 6626-6636 (1991).</li><li>Bern, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Original+and+modified+technique+of+tie-over+dressing:+Method+and+application+in+burn+patients.">Original and modified technique of tie-over dressing: Method and application in burn patients.</a> Burns. 44 (5), 1357-1360 (2018).</li><li>Joyce, C. W., Joyce, K. M., Kennedy, A. M., Kelly, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Running+Barbed+Tie-over+Dressing.">The Running Barbed Tie-over Dressing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery - Global Open. 2 (4), 137 (2014).</li><li>Wang, C. K., Nelson, C. F., Brinkman, A. M., Miller, A. C., Hoeffler, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+cell+sorting+of+fibroblasts+and+keratinocytes+creates+an+organotypic+human+skin+equivalent.">Spontaneous cell sorting of fibroblasts and keratinocytes creates an organotypic human skin equivalent.</a> Journal of Investigative Dermatology. 114 (4), 674-680 (2000).</li><li>Yang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+folliculogenic+human+epithelial+stem+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of folliculogenic human epithelial stem cells from induced pluripotent stem cells.</a> Nature Communications. 5, 3071 (2014).</li></ol>

إيبسكس البشرية وقد اقترحت كبديل جديد للطب التجديدي شخصية17. وتعكس المستمدة من المريض إيبسكس شخصية المريض من الخصائص التي يمكن استخدامها للنمذجة المرض وفحص المخدرات والزرع الذاتي18،19. كما يمكن استخدام إيبسكس المستمدة من المريض من التغلب على الم...

الجلد يغطي سطح الأبعد من الجسم، ويحمي الأعضاء الداخلية. الجلد وظائف مختلفة، بما في ذلك حماية ضد العوامل الممرضة وامتصاص وتخزين المياه، وتنظيم درجة حرارة الجسم، والتغوط الجسم النفايات2. ترقيع الجلد يمكن أن تصنف تبعاً لمصدر الجلد؛ وتسمى ترقيع الجلد من مانح آخر باستخدام اللوجرافتس، وترقيع الجلد للمريض باستخدام أوتوجرافتس. على الرغم من أن أوتوجرافت هو العلاج المفضل بسبب رفض منخفضة المخاطر، خزعات الجلد يصعب القيام به في المرضى الذين يعانون من آفات شديدة أو عدد غير كاف من خلايا الجلد. في المرضى الذين يعانون من حروق شديدة، ثلاث مرات عدد خلايا الجلد ضرورية لتغطية مساحات كبيرة. التوفر المحدود لخلايا الجلد من جسم المريض النتائج في الحالات التي يلزم فيها زرع اللوجينوس. Allograft يستخدم مؤقتاً حتى يمكن إجراء الزرع الذاتي حيث عادة ما رفضه من قبل النظام المناعي للمضيف بعد قرابة أسبوع واحد3. للتغلب على الرفض المناعي للمريض، يجب أن تأتي الطعوم من مصدر بنفس الهوية المناعية ك المريض4.
إيبسكس البشرية مصدرا ناشئة من الخلايا للخلايا الجذعية العلاج5. يتم إنشاء إيبسكس البشرية من خلايا جسدية، باستخدام عوامل إعادة برمجة مثل OCT4، SOX2، Klf4، وحركة ج6. استخدام إيبسكس البشرية ويتغلب على المسائل الأخلاقية والمناعية للخلايا الجذعية الجنينية (بتوليدا)،من78. وقد بلوريبوتينسي إيبسكس البشرية ويمكن أن تفرق في الطبقات الجرثومية الثلاث9. وجود هلا، عاملاً حاسما في الطب التجديدي، يحدد الاستجابة المناعية، وإمكانية رفض10. استخدام إيبسكس المستمدة من المريض يحل مشاكل رفض نظام المناعة والحد من الخلية المصدر. وظهرت أيضا كمصدر لخلايا بديلة للطب التجديدي11كبمكس. هلا إلزامية كتابة، الذي يحدث أثناء كبمك المصرفية، يمكن استخدامها بسهولة للبحوث، وزرع الأعضاء. يمكن تطبيق إيبسكس هلا من نوع متماثل، وكذلك على نطاق واسع لمختلف المرضى12. وهو مصرف كبمك-اللجنة التوجيهية الرواية واستراتيجية فعالة لعلاج الخلايا والطب التجديدي allogenic12،،من1314. في هذه الدراسة، ونحن نستخدم كبمك-إيبسكس، متباينة في الخلايا الكيراتينيه والليفية، وتكوين طبقات الجلد 3D طبقية. نتائج هذه الدراسة تشير إلى أن أورجانويد المستمدة من اللجنة التوجيهية كبمك 3D جلد أداة جديدة للبحوث في المختبر والمجراه في الجلد.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:965px;" width="964">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:301px;">Adenine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">A2786</td>
			<td style="width:401px;">Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AggreWell Medium (EB formation medium)</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>05893</td>
			<td>EB formation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Fibronectin antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab23750</td>
			<td>Fibroblast marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-KRT14 antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab7800</td>
			<td>Keratinocyte marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Loricrin antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab85679</td>
			<td>Stratum corneum marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-p63 antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab124762</td>
			<td>Keratinocyte marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Vimentin antibody</td>
			<td>Santa cruz</td>
			<td>sc-7558</td>
			<td>Fibroblast marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BAND AID FLEXIBLE FABRIC</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>-</td>
			<td>Bandage</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Basement membrane matrix (Matrigel)</td>
			<td>BD</td>
			<td>354277</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BLACK SILK suture</td>
			<td>AILEEE</td>
			<td>SK617</td>
			<td>Skin graft</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5670</td>
			<td>Component of epithelial medium for 3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagen type I</td>
			<td>BD</td>
			<td>354236</td>
			<td>3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagen type IV</td>
			<td>Santa-cruz</td>
			<td>sc-29010</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Defined keratinocyte-Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10744-019</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11995065</td>
			<td>Component of differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM/F12 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330-032</td>
			<td>Component of differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Essential 8 medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1517001</td>
			<td>iPSC medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">FBS, Qualified</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-015-CV</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast and keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glutamax Supplement&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Insulin</td>
			<td>Invtrogen</td>
			<td>12585-014</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast and keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Iris standard curved scissor</td>
			<td>Professional</td>
			<td>PC-02.10</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Keratinocyte Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17005-042</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">L-ascorbic acid 2-phosphata sesquimagnesium salt hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MEM Non-Essential Amino Acid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Meriam Forceps Thumb 16 cm</td>
			<td>HIROSE</td>
			<td>HC 2265-1</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">NOD.CB17-Prkdc SCID/J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>001303</td>
			<td>Mice strain for skin graft</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Petri dish 90 mm</td>
			<td>Hyundai Micro</td>
			<td>H10090</td>
			<td>Plastic ware</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Recombinant Human BMP-4</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>314-BP</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Recombinant human EGF protein</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>236-EG</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Retinoic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">T/C Petridish 100 mm, 240/bx</td>
			<td>TPP</td>
			<td>93100</td>
			<td>Plastic ware</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T3705</td>
			<td>Component of epithelial medium for 3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Transwell-COL collagen-coated membrane inserts&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3492</td>
			<td>Plastic ware for 3D skin organoid&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Vitronectin</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>A14700</td>
			<td>iPSC culture</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Y-27632 Dihydrochloride</td>
			<td>peprotech</td>
			<td>1293823</td>
			<td>iPSC culture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of 3d skin organoid from cord blood-derived induced pluripotent stem cells

الجلد هو أكبر جهاز في الجسم، والعديد من الوظائف. الجلد ويعمل كحاجز مادي والحامي للجسم وينظم وظائف الجسم. بيوميميتيقا هو تقليد النماذج والنظم، وعناصر الطبيعة تهدف إلى حل المشاكل الإنسانية المعقدة1. بيوميميتيقا الجلد أداة مفيدة للبحوث في مجال الأمراض في المختبر والمجراه في الطب التجديدي. وقد الخلايا الجذعية البشرية المستحثة pluripotent (إيبسكس) أن الخاصية غير محدود الانتشار وقدرة التمايز على الطبقات الجرثومية الثلاث. يتم إنشاء إيبسكس البشرية من الخلايا الأولية المختلفة، مثل خلايا الدم والخلايا الكيراتينيه والليفية وأكثر. فيما بينها، ظهرت الخلايا وحيدات النوى دم الحبل (كبمكس) كمصدر لخلايا بديلة من منظور الطب التجديدي متمكنة. كبمكس مفيدة في الطب التجديدي لكتابة (هلا) مستضد الكريات البيض البشرية ضروري للخلية النظام المصرفي. نحن نقدم طريقة للتفريق بين إيبسكس كبمك الكيراتينيه والليفية وجيل من أورجانويد الجلد 3D. المستمدة من اللجنة التوجيهية كبمك الكيراتينيه والليفية لها خصائص مماثلة لخط خلية الأولية. أورجانويدس 3D الجلد يتم إنشاؤها بواسطة تراكب طبقة البشرة على طبقة الجلد. بزرع أورجانويد الجلد ثلاثية الأبعاد هذه، يتم إنشاء نموذج فئران أنسنة. وتبين هذه الدراسة أن أورجانويد 3D جلد الإنسان المستمدة من اللجنة التوجيهية قد تكون أداة جديدة وبديلة لبحوث الجلد في المختبر والمجراه.

ويتألف الجلد، معظمها، من البشرة والأدمة. الكيراتينيه هي الخلية الرئيسية نوع البشرة والليفية نوع الخلية الرئيسية الأدمة. مخطط keratinocyte التمايز يظهر في الشكل 1ألف. وأبقى على إيبكسك كبمك في صحن فيترونيكتين المغلفة (الشكل 1ب). في هذه الدراسة، و?...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

جيل أورجانويد الجلد 3D من سلك المستمدة من الدم الناجم عن الخلايا الجذعية Pluripotent

ونحن نقترح بروتوكول يوضح كيفية التفريق بين الخلايا الكيراتينيه المستمدة من الخلايا الجذعية المستحثة pluripotent والليفية وتوليد أورجانويد جلد 3D، استخدام هذه الخلايا الكيراتينيه والليفية. ويتضمن هذا البروتوكول خطوة إضافية لتوليد نموذج فئران أنسنة. هذه التقنية المقدمة هنا سيحسن البحوث الجلد.

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

وقد برزت خلايا أحادية النوى في دم الحبل السري، أو CBMC، كمصدر محتمل للخلايا للطب التجديدي، لأن كتابة مستضد الكريات البيض البشرية أمر ضروري للنظام المصرفي للخلايا. يمكن تمييز الخلايا الجذعية المتعددة القدرات التي يستحثها CBMC ، أو CMBC-iPSCs ، إلى خلايا الكيراتينوس والالخلايا الليفية. لتوليد 3D الجلد organoid، ونحن نستخدم البحوث الجلدية.تبدأ من خلال زراعة CBMC-iPSC على الصفائح المغلفة فيلتر 100 ملليلتر في 37 درجة مئوية و 10٪ ثاني أكسيد الكربون. عندما وصلت الخلايا إلى 80٪ التقاء، وغسل الثقافات مع برنامج تلفزيوني، وعلاجها مع ملليلتر واحد من EDTA ملليمتر واحد لكل صفيحة لمدة دقيقتين في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. عندما تكون الخلايا منفصلة، ووقف رد فعل مع ثلاثة ملليلتر من E8 المتوسطة لكل لوحة، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي.إعادة تعليق الكريات في خمسة ملليلتر من E8 المتوسطة للعد، ونقل مرة واحدة-10-إلى-الخلايا السادسة إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر للطرد المركزي. إعادة تعليق الخلايا المنقولة مع 2.5 ملليلتر من تكوين الجسم الجنينية المتوسطة, تستكمل مع 10 ميكرومولار rho المرتبطة كيناز, أو مثبط روك. استخدم ماصة لنقل قطرات من الخلايا سعة 125 ميكرولتر إلى غطاء لوحة ثقافة غير مصقول.عندما تم وضع جميع القطرات، قم بتسليم الطبق للسماح للصقطرات بالشنق من الغطاء لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم التالي، اغسل الغطاء بوسيلة E8 جديدة، ونقل محلول الجسم الجنيني إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. السماح للأجسام الجنينية لتسوية لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة، قبل التعرق وإعادة تعليق الهيئات الجنينية مع E8 المتوسطة الطازجة لثقافتها في طبق بيتري 90 ملليمتر في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون حتى تمايزها.لتمايز الكيراتينوتيات CBMC-iPSC، استبدل وسيط E8 من ثقافة الجسم الجنينية بوسيطة E8 جديدة، مكمّلة بمليمتر نانوغرام واحد لكل ملليلتر من البروتين الموروجينيك العظمي 4 لاحتضان لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم التالي ، حصاد الهيئات الجنينية في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر كما هو موضح ، والسماح للأجسام لتسوية لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، استبدل الماظر بست ملليلترات من تمايز الكيراتينوسيت المتوسط 1، أو KDM1، المكملة بمثبط 10 ميكرومولار روك، ونقل الأجسام الجنينية إلى طبق من النوع IV الكولاجين المغلفة 100 ملليمتر.في الأيام صفر من خلال ثمانية من الثقافة، واستبدال المتوسطة كل يومين مع KDM1 الطازجة، وتستكمل مع حمض الريتينويك ثلاثة ميكرومولار و 25 نانوغرام لكل ملليلتر كل من البروتين مورمورفينتيك العظام 4 وعامل نمو البشرة. بين الأيام التسعة إلى الثانية عشرة، استبدل الوسط كل يوم بـ KDM2، المكمل بحمض الشبكية ثلاثية الميكروفوالار، و25 نانوغرام لكل ملليلتر من البروتين المورفوجينيك العظمي 4، و20 نانوغرام لكل ملليلتر من عامل نمو البشرة. بين أيام 13 إلى 30، تغيير المتوسطة كل يومين إلى KDM3، تستكمل مع 10 نانوغرام لكل ملليلتر من البروتين مورمورفينتيك العظام 4، و 20 نانوغرام لكل ملليلتر من عامل نمو البشرة.لCBMC-iPSC التمايز في الخلايا الليفية، وإعادة تعليق ثقافة الجسم الجنينية في ستة ملليلتر من التمايز الليفي المتوسطة 1، تستكمل مع مثبط الصخور 10 ميكرومولار، ونقل تعليق الجسم الجنينية إلى غشاء الطابق السفلي المغلفة مصفوفة 100 ملليمتر الطبق. بعد ثلاثة أيام من الحضانة، علاج الثقافة مع 0.5 نانومولار بروتين مورفوجينيك العظام 4 لمدة أربعة أيام، قبل تغيير المتوسطة إلى التمايز الليفي المتوسطة 2. في اليوم السابع من الثقافة، قم بتغيير الوسط إلى FDM2 كل يومين لمدة أسبوع واحد.في اليوم 14 من الثقافة، وفصل الخلايا مع EDTA واحد ملليمولار كما هو موضح، وجمع الخلايا في ثلاثة ملليلتر من التمايز الليفي المتوسط 2 للطرد المركزي. إعادة تعليق الخلايا في خمسة ملليلتر من التمايز الليفي المتوسط 1 للعد، ونقل مرتين-10-إلى-الخلايا السادسة إلى طبق غير المغلفة. في اليوم 21 من الثقافة، نقل مرتين-10-إلى-السادس الخلايا من الثقافة إلى طبق الكولاجين من النوع الأول المغلفة 100 ملليمتر في التمايز الليفي الطازج متوسط 1.في اليوم 28 من الثقافة، نقل مرتين من 10 إلى 6 من الخلايا الليفية المشتقة من iPSC إلى طبق جديد غير مغلف. لتوليد الجلد العضوي ثلاثي الأبعاد، حصاد الخلايا الليفية المشتقة من iPSC من الثقافة، ونقل مرتين-10-إلى-الخامس الخلايا إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر للطرد المركزي. إعادة تعليق بيليه في الخلايا الليفية في 1.5 ملليلتر من التمايز الليفي المتوسطة 1، و 1.5 ملليلتر من حل الكولاجين النوع الأول تحييد.احتضان الخلايا على إدراج في لوحة صغيرة من ستة بئر لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. عندما يكون الحل قد توطدت، إضافة ملليلترين من المتوسطة إلى أعلى إدراج، وثلاثة ملليلترات إلى أسفل البئر. ثم ضع المصفوفة الليفية في الحاضنة لمدة خمسة إلى سبعة أيام ، حتى يكتمل الجلاة ، ولم تعد المصفوفة تتقلص.في نهاية الحضانة، حصاد الخلايا الكيراتينوسية المشتقة من iPSC، ونقل مرة واحدة-10-إلى-السادسة الخلايا إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر للطرد المركزي. إعادة تعليق بيليه في 50 إلى 100 ميكرولترات من متوسطة ظهارية منخفضة الكالسيوم 1، واستبدال المتوسطة على مصفوفة الخلايا الليفية مع محلول خلية keratinocyte. بعد 15 دقيقة في 37 درجة مئوية، واستبدال المتوسطة في الجزء العلوي من إدراج مع مليلتر اثنين من المتوسطة الظهارية 1، والمتوسطة في أسفل جيدا مع ثلاثة ملليلتر من نفسه، والعودة لوحة إلى الحاضنة.بعد يومين، استبدال المتوسطة في إدراج وبيع من خلال متوسط ظهاري الكالسيوم العادي 2 لمدة يومين إضافيين من الثقافة. في اليوم الرابع من الثقافة، وإزالة كل من المتوسطة، وإضافة ثلاثة ملليلتر من متوسطة التحنين إلى أسفل جيدا فقط، لتوليد واجهة الهواء السائل. ثم ارجع إلى الحاضنة لمدة تصل إلى 14 يومًا قبل حصاد الجهاز العضوي ثلاثي الأبعاد للجلد لتحليل المصب.تحتوي خلايا الكيراتينوسيات المشتقة من CBMC-iPSC على مورفولوجيا مشابهة لـ keratinocytes الابتدائية، ويتم زيادة تعبير علامات الكيراتينوسيت في هذه الخلايا. تحتوي الخلايا الليفية المشتقة من CBMC-iPSC على مورفولوجيا مماثلة للخلايا الليفية الأولية ، والتعبير عن علامة الخلايا الجذعية متعددة القدرات Oct-4 منظمة لأسفل ، في حين أن علامات الخلايا الليفية هي منظمة. يزيد سمك الجهاز الجلد 3D خلال الثقافة 3D، مما يؤكد أن يتم إنشاء الجهازية الجلد 3D من keratinocytes المشتقة من iPSC والألواء الليفية.بعد أسبوعين، يتم دمج الكسب غير المشروع العضوي الجلدي ثلاثي الأبعاد المزروع بكفاءة في جلد فأرة المتلقي، كما أكد تحليل HNE. وعلاوة على ذلك، يتم التعبير عن نضوج الكيراتينوتيت وعلامات التمايز البشرة في تشوهات الجلد ثلاثية الأبعاد المشتقة من CBMC-iPSC، مما يدل على تمايز وظيفي، تطعيم فعال، وشفاء فعال لعيوب جلد الماوس. نستخدمها في الماضي مع متوسطة الكالسيوم العالية التي تحفز طبقات طبقية من الأعضاء الجلد 3D لتقليد بالقرب من الجلد.تحليل يبين أن الجلد هو طبقات. CBMC-iPSCs هي مصدر محتمل للخلايا لطعوم الجلد، ويمكن استخدام العضوية الجلدية ثلاثية الأبعاد المستمدة من CBMC-iPSC في الدراسات المتعلقة بالأمراض الجلدية والفحص التجميلي والطب التجديدي.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

جيل من المستحثة متعددة القدرات الخلايا الجذعية من المجمدة بافي معاطف استخدام غير دمج-Episomal البلازميدات

Somatic cells can be reprogrammed into induced pluripotent stem cells (iPSCs) by forcing the expression of four transcription factors (Oct-4, Sox-2, ...

Generation of Induced-pluripotent Stem Cells Using Fibroblast-like Synoviocytes Isolated from Joints of Rheumatoid Arthritis Patients

جيل من الخلايا الجذعية المستحثة-المحفزة عن طريق Synoviocytes الخلايا الليفية مثل المعزولة من المفاصل من التهاب المفاصل الروماتويدي المرضى

Mature somatic cells can be reversed into a pluripotent stem cell-like state using a defined set of reprogramming factors. Numerous studies have generated ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Melanoma Tumor-infiltrating Lymphocytes

جيل من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات من سرطان الجلد البشري الخلايا اللمفاوية-التسلل الورم

Adoptive transfer of ex vivo expanded autologous tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) can mediate durable and complete responses in significant subsets ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

الناجم المحفزة الجيل الخلايا الجذعية من خلايا الدم عن طريق سينداي الفيروسات والطرد المركزي

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

جيل من التكامل خالية من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات من الخلايا الطرفية الإنسان الدم وحيدات النوى عن طريق Episomal المتجهات

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

تشوندروسيتيس التفريق من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة البشرية المستحثة من الدم

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

تشكيل بيليه غضروفي من الخلايا الجذعية المحفزة المستمدة من الدم الحبلية

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

جيل أورجانويدس الدماغي موحدة واستنساخه من نوع فوريبرين من الإنسان فعل الخلايا الجذعية Pluripotent

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

في المختبر توليد المشتقات سميط من البشرية التي يسببها الخلايا الجذعية Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...