Name: generation of 3d skin organoid from cord blood-derived induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2019-04-18T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch einen Zuschuss aus Korea Healthcare Technology R & D Projekt, Ministerium für Gesundheit, Wohlfahrt und Familienangelegenheiten, Republik Korea (H16C2177, H18C1178) unterstützt.

Alle Verfahren, die Tiere wurden in Übereinstimmung mit dem Labor Tiere Welfare Act, der Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren, durchgeführt und die Richtlinien und Richtlinien für Nager Experimente zur Verfügung gestellt von der institutionellen Animal Care und Ausschuss (IACUC) von der medizinischen Fakultät der katholischen Universität von Korea zu verwenden. Das Studienprotokoll wurde von Institutional Review Board of The Catholic University of Korea (CUMC-2018-0191-01) genehmigt. Die IACUC u...

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Structure and function of a new class of epidermal cell envelope proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 266 (10), 6626-6636 (1991).</li><li>Bern, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Original+and+modified+technique+of+tie-over+dressing:+Method+and+application+in+burn+patients.">Original and modified technique of tie-over dressing: Method and application in burn patients.</a> Burns. 44 (5), 1357-1360 (2018).</li><li>Joyce, C. W., Joyce, K. M., Kennedy, A. M., Kelly, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Running+Barbed+Tie-over+Dressing.">The Running Barbed Tie-over Dressing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery - Global Open. 2 (4), 137 (2014).</li><li>Wang, C. K., Nelson, C. F., Brinkman, A. M., Miller, A. C., Hoeffler, W. 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Menschlichen iPSCs haben als eine neue Alternative für personalisierte regenerative Medizin17vorgeschlagen worden. Personalisierte iPSCs Patienten abgeleitet reflektieren Patienten-Charakteristika, die für die Krankheit Modellierung, Drogen-Screening und autologe Transplantation18,19verwendet werden können. Die Verwendung von Patienten abgeleitet iPSCs kann auch Probleme in Bezug auf primäre Zellen, ein Mangel an ausreichenden Zellzahl...

Haut bedeckt die äußerste Oberfläche des Körpers und schützt innere Organe. Die Haut hat verschiedene Funktionen, einschließlich Schutz gegen Krankheitserreger, Aufnahme und Speicherung von Wasser, Regulierung der Körpertemperatur, und Körper Ausscheiden Abfälle2. Hauttransplantationen können je nach Haut Quelle eingestuft werden; Transplantate mit der Haut von einem anderen Spender sind Allografts bezeichnet, und mit der Haut des Patienten Transplantate sind Autotransplantate. Obwohl eine Autotransplantation die bevorzugte Behandlung wegen seiner niedrigen Ablehnung ist, sind Hautbiopsien schwer auf Patienten mit schweren Verletzungen oder eine unzureichende Anzahl von Hautzellen durchführen. Bei Patienten mit schweren Verbrennungen sind drei Mal die Zahl der Hautzellen notwendig, um große Flächen abdecken. Die begrenzte Verfügbarkeit von Hautzellen vom Körper des Patienten führt zu Situationen, wo allo-Transplantation erforderlich ist. Ein Allograft dient vorübergehend bis autologe Transplantation durchgeführt werden kann, da es in der Regel vom Immunsystem des Wirts nach ca. 1 Woche3abgelehnt wird. Ablehnung durch das Immunsystem zu überwinden, müssen die Transplantate aus einer Quelle mit der gleichen immun Identität als Patient4kommen.
Menschlichen iPSCs sind eine neue Quelle von Zellen für Stammzell-Therapie5. Menschlichen iPSCs entstehen aus Körperzellen, Neuprogrammierung Faktoren wie OCT4, SOX2, Klf4 und c-Myc-6. Mit menschlichen iPSCs überwindet die ethischen und immunologischen Fragen von embryonalen Stammzellen (WSR)7,8. Menschlichen iPSCs haben Pluripotenz und kann in drei Mikrobeschichten9unterscheiden. Das Vorhandensein von HLA, ein entscheidender Faktor in der regenerativen Medizin, bestimmt die Immunantwort und die Möglichkeit der Ablehnung10. Die Verwendung von Patienten abgeleitet iPSCs löst die Probleme der Zelle-Source Einschränkung und Immunsystem Ablehnung. CBMCs sind auch als alternative Zelle Quelle für regenerative Medizin11entstanden. Obligatorische HLA Typisierung, die während CBMC Banking auftritt, kann leicht für Forschung und Transplantation verwendet werden. Weitere, homozygot HLA-Typ iPSCs können weitgehend auf verschiedenen Patienten12anwenden. Eine CBMC iPSC-Bank ist eine neuartige und effiziente Strategie für Zelltherapie und allogenen regenerative Medizin12,13,14. In dieser Studie wir verwenden CBMC-iPSCs in Keratinozyten und Fibroblasten, differenzieren und geschichteten 3D Hautschichten zu generieren. Ergebnisse dieser Studie legen nahe, dass eine CBMC iPSC abgeleitete 3D Haut organoide ein neuartiges Werkzeug für in-vitro- und in-vivo dermatologische Forschung ist.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:965px;" width="964">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:301px;">Adenine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">A2786</td>
			<td style="width:401px;">Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AggreWell Medium (EB formation medium)</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>05893</td>
			<td>EB formation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Fibronectin antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab23750</td>
			<td>Fibroblast marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-KRT14 antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab7800</td>
			<td>Keratinocyte marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Loricrin antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab85679</td>
			<td>Stratum corneum marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-p63 antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab124762</td>
			<td>Keratinocyte marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Vimentin antibody</td>
			<td>Santa cruz</td>
			<td>sc-7558</td>
			<td>Fibroblast marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BAND AID FLEXIBLE FABRIC</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>-</td>
			<td>Bandage</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Basement membrane matrix (Matrigel)</td>
			<td>BD</td>
			<td>354277</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BLACK SILK suture</td>
			<td>AILEEE</td>
			<td>SK617</td>
			<td>Skin graft</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5670</td>
			<td>Component of epithelial medium for 3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagen type I</td>
			<td>BD</td>
			<td>354236</td>
			<td>3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagen type IV</td>
			<td>Santa-cruz</td>
			<td>sc-29010</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Defined keratinocyte-Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10744-019</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11995065</td>
			<td>Component of differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM/F12 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330-032</td>
			<td>Component of differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Essential 8 medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1517001</td>
			<td>iPSC medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">FBS, Qualified</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-015-CV</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast and keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glutamax Supplement&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Insulin</td>
			<td>Invtrogen</td>
			<td>12585-014</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast and keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Iris standard curved scissor</td>
			<td>Professional</td>
			<td>PC-02.10</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Keratinocyte Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17005-042</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">L-ascorbic acid 2-phosphata sesquimagnesium salt hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MEM Non-Essential Amino Acid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Meriam Forceps Thumb 16 cm</td>
			<td>HIROSE</td>
			<td>HC 2265-1</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">NOD.CB17-Prkdc SCID/J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>001303</td>
			<td>Mice strain for skin graft</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Petri dish 90 mm</td>
			<td>Hyundai Micro</td>
			<td>H10090</td>
			<td>Plastic ware</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Recombinant Human BMP-4</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>314-BP</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Recombinant human EGF protein</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>236-EG</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Retinoic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">T/C Petridish 100 mm, 240/bx</td>
			<td>TPP</td>
			<td>93100</td>
			<td>Plastic ware</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T3705</td>
			<td>Component of epithelial medium for 3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Transwell-COL collagen-coated membrane inserts&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3492</td>
			<td>Plastic ware for 3D skin organoid&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Vitronectin</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>A14700</td>
			<td>iPSC culture</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Y-27632 Dihydrochloride</td>
			<td>peprotech</td>
			<td>1293823</td>
			<td>iPSC culture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of 3d skin organoid from cord blood-derived induced pluripotent stem cells

Die Haut ist das größte Organ und hat viele Funktionen. Die Haut wirkt wie eine physikalische Barriere und Beschützer des Körpers und reguliert Körperfunktionen. Bionik ist die Nachahmung der Modelle, Systeme und Elemente der Natur zur Lösung komplexer Probleme1. Haut-Bionik ist ein nützliches Werkzeug für die Erforschung von Krankheiten in-vitro- und in-vivo regenerative Medizin. Menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) haben das Merkmal der unbegrenzten Verbreitung und die Fähigkeit der Differenzierung, drei Mikrobeschichten. Menschlichen iPSCs entstehen aus verschiedenen Primärzellen, wie Blutzellen, Keratinozyten und Fibroblasten. Unter ihnen sind Kabel mononukleären Blutzellen (CBMCs) als alternative Zelle Quelle aus der Perspektive der allogenen regenerative Medizin entstanden. CBMCs eignen sich in der regenerativen Medizin, weil human Leukocyte Antigen (HLA) Eingabe in die Zelle, die banking-System notwendig ist. Wir bieten eine Methode für die Differenzierung von CBMC iPSCs in Keratinozyten und Fibroblasten und zur Erzeugung von einem 3D Haut organoide. CBMC-iPSC-derived Keratinozyten und Fibroblasten haben ähnliche Merkmale auf, eine primäre Zelllinie. Die 3D Haut Organellen entstehen durch die Überlagerung einer epidermalen Schicht auf eine Hautschicht. Durch die Transplantation von diesem 3D Haut organoide, wird einen vermenschlichten Mäuse-Modell erstellt. Diese Studie zeigt, dass ein 3D iPSC-abgeleitete Menschenhaut organoide möglicherweise eine neuartige, alternative Tool für dermatologische Forschung in vitro und in vivo.

Haut besteht zum größten Teil aus der Epidermis und der Dermis. Keratinozyten sind die wichtigsten Zellen der Epidermis und Fibroblasten sind die wichtigsten Zelltyp der Dermis. Das Schema der Keratinozyten Differenzierung ist in Abbildung 1Agezeigt. CBMC-iPCSc wurden beibehalten, in einer Schale Vitronectin beschichtet (Abbildung 1B). In dieser Studie differenziert wir CBMC iPSCs in Keratinozyten und Fibroblasten mit EB Bildu...

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Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Generation von 3D Haut organoide aus Cord Blood-abgeleitete induzierte pluripotente Stammzellen

Wir schlagen eine Protokoll, die zeigt, wie man differenzieren induzierten pluripotenten Stammzellen abgeleitet Keratinozyten und Fibroblasten und generieren eine organoide 3D Haut mit diesen Keratinozyten und Fibroblasten. Dieses Protokoll enthält einen zusätzlichen Schritt einem humanisierten Mäuse-Modell zu erzeugen. Die hier vorgestellten Technik verbessert die dermatologische Forschung.

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

Cordblut mononukleäre Zellen, oder CBMC, haben sich als potenzielle Zellquelle für regenerative Medizin, weil menschliche Leukozyten-Antigen-Typisierung ist wesentlich für das Zellbanking-System. CBMC-induzierte pluripotente Stammzellen oder CMBC-iPSCs können in Keratinozyten und Fibroblasten unterschieden werden. Um 3D-Hautorganoid zu erzeugen, verwenden wir dermatologische Forschung.Beginnen Sie mit der Kultivierung von CBMC-iPSC auf vitronectinbeschichteten 100-Milliliter-Platten bei 37 Grad Celsius und 10% Kohlendioxid. Wenn die Zellen 80% Konfluenz erreicht haben, waschen Sie die Kulturen mit PBS und behandeln Sie sie mit einem Milliliter einMillimolar EDTA pro Platte für zwei Minuten bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid. Wenn sich die Zellen gelöst haben, stoppen Sie die Reaktion mit drei Millilitern E8 Medium pro Platte und sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation.Die Pellets in fünf MilliliterE8-Medium zum Zählen wieder aufhängen und ein-mal-10-zu-die-sechste Zellen in ein 15-Milliliter-Konikonrohr zur Zentrifugation übertragen. Setzen Sie die übertragenen Zellen mit 2,5 Milliliterembryonalen Körperbildungsmedium, ergänzt mit 10-Mikromolar-Rho-assoziierten Kinase, oder ROCK-Hemmer. Verwenden Sie eine Pipette, um 125-Mikroliter-Zelltröpfchen auf einen unbeschichteten Kulturplattendeckel zu übertragen.Wenn alle Tröpfchen platziert sind, drehen Sie die Schale um, damit die Tröpfchen 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid vom Deckel hängen können. Am nächsten Tag den Deckel mit frischem E8-Medium waschen und die embryonale Körperlösung in ein 50-Milliliter-Konusrohr übertragen. Lassen Sie die embryonalen Körper für eine Minute bei Raumtemperatur zu begleichen, bevor Sie den Überstand ansischmachen und die embryonalen Körper mit frischem E8-Medium für ihre Kultur in einer 90-Millimeter-Petrischale bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid bis zu ihrer Differenzierung wieder aussetzen.Für CBMC-iPSC Keratinozytendifferenzierung ersetzen Sie das E8-Medium aus der embryonalen Körperkultur durch frisches E8-Medium, ergänzt durch ein Nanogramm pro Milliliter Knochenmorphogenetisches Protein 4 für eine 24-Stunden-Inkubation bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid. Am nächsten Tag ernten Sie die embryonalen Körper in einem 50-Milliliter-Konusrohr, wie gezeigt, und lassen Sie die Körper für eine Minute bei Raumtemperatur zu begleichen. Als nächstes ersetzen Sie den Überstand durch sechs Milliliter Keratinozytendifferenzierungsmedium 1 oder KDM1, ergänzt durch 10 mikromolaren ROCK-Hemmer, und übertragen Sie die embryonalen Körper auf eine mit Typ IV kollagenbeschichtete 100-Millimeter-Schale.Ersetzen Sie an den Tagen null bis acht der Kultur das Medium jeden zweiten Tag durch frisches KDM1, ergänzt durch Dreimikromolare Retinsäure und 25 Nanogramm pro Milliliter knochenmorphogenetisches Protein 4 und epidermalen Wachstumsfaktor. Ersetzen Sie das Medium zwischen den Tagen neun bis zwölf jeden zweiten Tag durch KDM2, ergänzt durch Dreimikromolare Retinsäure, 25 Nanogramm pro Milliliter Knochenmorphogenetisches Protein 4 und 20 Nanogramm pro Milliliter epidermalen Wachstumsfaktors. Zwischen den Tagen 13 bis 30, ändern Sie das Medium jeden zweiten Tag auf KDM3, ergänzt mit 10 Nanogramm pro Milliliter Knochen morphogenetischem Protein 4, und 20 Nanogramm pro Milliliter epidermalen Wachstumsfaktor.Zur CBMC-iPSC-Fibroblastendifferenzierung die embryonale Körperkultur in sechs Milliliter Fibroblasten-Differenzierungsmedium 1, ergänzt durch 10-Mikromolar-ROCK-Inhibitor, wieder aufsetzen und die embryonale Körpersuspension auf eine mit Einer Kellermembran matrixbeschichtete 100-Millimeter-Schale übertragen. Nach drei Tagen Inkubation die Kultur mit 0,5-Nanomolar-Knochenmorphogenetischem Protein 4 vier Tage lang behandeln, bevor das Medium-Fibroblasten-Differenzierungsmedium 2 geändert wird. Wechseln Sie am siebten Tag der Kultur das Medium für eine Woche jeden zweiten Tag auf FDM2.Am 14. Tag der Kultur, lösen Sie die Zellen mit einem Millimolar EDTA wie gezeigt, und sammeln Sie die Zellen in drei Milliliter Fibroblast Differenzierung Mittel 2 für Zentrifugation. Die Zellen in fünf Milliliter Fibroblasten differenzierungsmittel 1 zum Zählen wieder aufhängen und zweimal-10-zu-die-sechste Zellen auf eine unbeschichtete Schale übertragen. Übertragen Sie am 21. Tag der Kultur zweimal-10-zu-die-sechste Zellen von der Kultur auf eine 100-Millimeter-Schale vom Typ I, die mit Kollagen beschichtet ist, in frischem Fibroblasten-Differenzierungsmedium 1.Übertragen Sie am 28. Tag der Kultur zweimal 10 bis sechs der iPSC-abgeleiteten Fibroblasten auf eine neue, nicht beschichtete Schale. Für die dreidimensionale Hautorganoid-Generierung, ernten Sie die iPSC-abgeleiteten Fibroblasten aus der Kultur, und übertragen Sie zwei-mal-10-zu-die-fünfte Zellen auf eine 15-Milliliter-Konikonröhre für zentrifugation. Das Fibroblastenpellet in 1,5 Milliliter Fibroblastendifferenzierungsmedium 1 und 1,5 Milliliter neutralisierter Typ-I-Kollagenlösung wieder aufhängen.Inkubieren Sie die Zellen auf einem Einsatz in einer Sechs-Well-Mikroplatte für 30 Minuten bei Raumtemperatur. Wenn die Lösung verfestigt ist, fügen Sie zwei Milliliter Medium an der Oberseite des Einsatzes und drei Milliliter an der Unterseite des Brunnens hinzu. Legen Sie dann die Fibroblastenmatrix für fünf bis sieben Tage in den Inkubator, bis die Gelation abgeschlossen ist und die Matrix nicht mehr zusammenzieht.Am Ende der Inkubation die iPSC-abgeleiteten Keratinozyten ernten und ein-mal-10-zu-die-sechste-Zellen in ein 15-Milliliter-Konizerfürpfchen für die Zentrifugation übertragen. Setzen Sie das Pellet in 50 bis 100 Mikroliter n.F. niedrigem Calciumepithelmedium 1 wieder auf und ersetzen Sie das Medium über die Fibroblastenmatrix durch die Keratinozytenzelllösung. Nach 15 Minuten bei 37 Grad Celsius das Medium an der Oberseite des Einsatzes durch zwei Milliliter Epithelmedium 1 und das Medium im unteren Brunnen mit drei Millilitern desselben ersetzen und die Platte an den Inkubator zurückgeben.Nach zwei Tagen das Medium im Einsatz und den Brunnen durch das normale Calciumepithelmedium 2 für zwei weitere Kulturtage ersetzen. Entfernen Sie am vierten Tag der Kultur das gesamte Medium und fügen Sie drei Milliliter Verhornungsmedium nur zum Boden hinzu, um eine luft-flüssige Schnittstelle zu erzeugen. Dann geben Sie die Platte für bis zu 14 Tage an den Inkubator zurück, bevor Sie das 3D-Hautorganoid für die nachgelagerte Analyse ernten.CBMC-iPSC-abgeleitete Keratinozyten haben eine Morphologie ähnlich wie primäre Keratinozyten, und die Expression von Keratinozytenmarkern wird in diesen Zellen erhöht. CBMC-iPSC-abgeleitete Fibroblasten haben eine Morphologie, die primären Fibroblasten ähnelt, und die Expression des pluripotenten Stammzellmarkers Oct-4 ist down-reguliert, während Fibroblastenmarker hochreguliert sind. Die Dicke des 3D-Hautorganoids nimmt während der 3D-Kultur zu, was bestätigt, dass das 3D-Hautorganoid aus iPSC-abgeleiteten Keratinozyten und Fibroblasten erzeugt wird.Nach zwei Wochen wird ein transplantiertes 3D-Hautorganoidtransplantat effizient in eine Empfängermaushaut integriert, wie die HNE-Analyse bestätigt. Darüber hinaus werden Keratinozytenreifung und epidermale Differenzierungsmarker in den CBMC-iPSC-abgeleiteten 3D-Hautorganoiden exprimiert, was eine funktionelle Differenzierung, effiziente Transplantation und effektive Heilung der Hautdefekte der Maus demonstriert. Wir verwenden in der Vergangenheit mit dem hohen Kalziummedium, das geschichtete Schichten von 3D-Hautorganoid induziert, um in der Nähe der Haut zu imitieren.Analyse zeigt, dass die Haut geschichtet ist. CBMC-iPSCs sind eine potenzielle Zellquelle für Hauttransplantate, und CBMC-iPSC-abgeleitete 3D-Hautorganoide können in Studien im Zusammenhang mit Dermatologie, kosmetischem Screening und regenerativer Medizin verwendet werden.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

Erzeugung von induzierten pluripotenten Stammzellen aus Gefrorene Buffy Coats mit Non-Integration episomalen Plasmiden

Somatic cells can be reprogrammed into induced pluripotent stem cells (iPSCs) by forcing the expression of four transcription factors (Oct-4, Sox-2, ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Generation of Induced-pluripotent Stem Cells Using Fibroblast-like Synoviocytes Isolated from Joints of Rheumatoid Arthritis Patients

Die Erzeugung von Induced-pluripotenten Stammzellen Fibroblast-wie Synoviozyten Isoliert von Gelenken von Patienten mit rheumatoider Arthritis

Mature somatic cells can be reversed into a pluripotent stem cell-like state using a defined set of reprogramming factors. Numerous studies have generated ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Melanoma Tumor-infiltrating Lymphocytes

Die Erzeugung von induzierten pluripotenten Stammzellen aus menschlichen Melanom-Tumor-infiltrierenden Lymphozyten

Adoptive transfer of ex vivo expanded autologous tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) can mediate durable and complete responses in significant subsets ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

Induzierte pluripotente Stammzellen Erzeugung von Blutzellen mit Sendai-Virus und Zentrifugation

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Die Erzeugung von Integration freien induzierte pluripotente Stammzellen aus menschlichen peripheren einkernigen Blutzellen Mit Episomale Vektoren

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Unterscheidung von Chondrozyten aus periphere Blut-abgeleiteten menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Chondrogene Pelletbildung aus Cord Blut-induzierten induzierten pluripotenten Stammzellen

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generation von standardisierten und reproduzierbaren Vorderhirn-Typ zerebralen Organellen aus menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

In vitro-Generation der Somiten Derivate aus menschlichen induzierten Zellen pluripotenten Stammzellen

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...