Name: generation of 3d skin organoid from cord blood-derived induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2019-04-18T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Эта работа была поддержана грант от Кореи здравоохранения технологии R & D проекта, Министерство здравоохранения, благосостояния и делам семьи, Республика Корея (H16C2177, H18C1178).

Все процедуры с участием животных были выполнены в соответствии с Закон о социальном обеспечении лабораторных животных, руководство по уходу и использованию лабораторных животных, и руководящие принципы и политику для грызунов экспериментов институциональный уход животных и Исполь?...

<ol>
	<li>Vincent, J. F., Bogatyreva, O. A., Bogatyrev, N. R., Bowyer, A., Pahl, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomimetics:+its+practice+and+theory.">Biomimetics: its practice and theory.</a> Journal of The Royal Society Interface. 3 (9), 471-482 (2006).</li><li>Madison, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barrier+function+of+the+skin:+"la+raison+d'etre"+of+the+epidermis.">Barrier function of the skin: "la raison d'etre" of the epidermis.</a> Journal of Investigative Dermatology. 121 (2), 231-241 (2003).</li><li>Chen, M., Przyborowski, M., Berthiaume, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+for+skin+tissue+engineering+and+wound+healing.">Stem cells for skin tissue engineering and wound healing.</a> Critical Reviews in Biomedical Engineering. 37 (4-5), 399-421 (2009).</li><li>Dixit, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+challenges+associated+with+artificial+skin+grafts:+available+solutions+and+stem+cells+in+future+design+of+synthetic+skin.">Immunological challenges associated with artificial skin grafts: available solutions and stem cells in future design of synthetic skin.</a> Journal of Biological Engineering. 11, 49 (2017).</li><li>Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells:+past,+present,+and+future.">Induced pluripotent stem cells: past, present, and future.</a> Cell Stem Cell. 10 (6), 678-684 (2012).</li><li>Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotency+and+nuclear+reprogramming.">Pluripotency and nuclear reprogramming.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 363 (1500), 2079-2087 (2008).</li><li>Scheiner, Z. S., Talib, S., Feigal, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+for+immunogenicity+of+autologous+induced+pluripotent+stem+cell-derived+therapies.">The potential for immunogenicity of autologous induced pluripotent stem cell-derived therapies.</a> Journal of Biological Chemistry. 289 (8), 4571-4577 (2014).</li><li>Zimmermann, A., Preynat-Seauve, O., Tiercy, J. M., Krause, K. H., Villard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haplotype-based+banking+of+human+pluripotent+stem+cells+for+transplantation:+potential+and+limitations.">Haplotype-based banking of human pluripotent stem cells for transplantation: potential and limitations.</a> Stem Cells and Development. 21 (13), 2364-2373 (2012).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+history+of+HLA.">A brief history of HLA.</a> Immunologic Research. 38 (1-3), 139-148 (2007).</li><li>Haase, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+cord+blood.">Generation of induced pluripotent stem cells from human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 5 (4), 434-441 (2009).</li><li>Rim, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+of+national+banking+project+on+homozygous+HLA-typed+induced+pluripotent+stem+cells+in+South+Korea.">Recent progress of national banking project on homozygous HLA-typed induced pluripotent stem cells in South Korea.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (3), 1531-1536 (2018).</li><li>Nakatsuji, N., Nakajima, F., Tokunaga, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-haplotype+banking+and+iPS+cells.">HLA-haplotype banking and iPS cells.</a> Nature Biotechnology. 26 (7), 739-740 (2008).</li><li>Pappas, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proceedings:+human+leukocyte+antigen+haplo-homozygous+induced+pluripotent+stem+cell+haplobank+modeled+after+the+california+population:+evaluating+matching+in+a+multiethnic+and+admixed+population.">Proceedings: human leukocyte antigen haplo-homozygous induced pluripotent stem cell haplobank modeled after the california population: evaluating matching in a multiethnic and admixed population.</a> Stem Cells Translational Medicine. 4 (5), 413-418 (2015).</li><li>Embryoid body formation from human pluripotent stem cells in chemically defined E8 media. StemBook Available from: <a target="_blank" href="https://www.stembook.org/node/6632">https://www.stembook.org/node/6632</a> (2008)</li><li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+complex+skin+structure+via+layered+co-culture+of+keratinocytes+and+fibroblasts+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Establishment of a complex skin structure via layered co-culture of keratinocytes and fibroblasts derived from induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 217 (2018).</li><li>Diecke, S., Jung, S. M., Lee, J., Ju, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+technological+updates+and+clinical+applications+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Recent technological updates and clinical applications of induced pluripotent stem cells.</a> The Korean Journal of Internal Medicine. 29 (5), 547-557 (2014).</li><li>Shi, Y., Inoue, H., Wu, J. C., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+technology:+a+decade+of+progress.">Induced pluripotent stem cell technology: a decade of progress.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (2), 115-130 (2017).</li><li>Yoshida, Y., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+stem+cell+advances:+induced+pluripotent+stem+cells+for+disease+modeling+and+stem+cell-based+regeneration.">Recent stem cell advances: induced pluripotent stem cells for disease modeling and stem cell-based regeneration.</a> Circulation. 122 (1), 80-87 (2010).</li><li>Pham, T. L., Nguyen, T. T., Van Bui, A., Nguyen, M. T., Van Pham, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+heart+extract+facilitates+the+differentiation+of+human+umbilical+cord+blood-derived+mesenchymal+stem+cells+into+heart+muscle+precursor+cells.">Fetal heart extract facilitates the differentiation of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells into heart muscle precursor cells.</a> Cytotechnology. 68 (4), 645-658 (2016).</li><li>Stecklum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+differentiation+mediated+by+co-culture+of+human+umbilical+cord+blood+stem+cells+with+murine+hepatic+cells.">Cell differentiation mediated by co-culture of human umbilical cord blood stem cells with murine hepatic cells.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology - Animal. 51 (2), 183-191 (2015).</li><li>Nam, Y., Rim, Y. A., Ju, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondrogenic+Pellet+Formation+from+Cord+Blood-derived+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (124), e55988 (2017).</li><li>Rim, Y. A., Nam, Y., Ju, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+Cord+Blood+and+Cord+Blood-derived+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+for+Cartilage+Regeneration.">Application of Cord Blood and Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells for Cartilage Regeneration.</a> Cell Transplantation. , (2018).</li><li>Shevde, N. K., Mael, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+embryoid+body+formation+from+human+pluripotent+stem+cells.">Techniques in embryoid body formation from human pluripotent stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 946, 535-546 (2013).</li><li>Shamis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPSC-derived+fibroblasts+demonstrate+augmented+production+and+assembly+of+extracellular+matrix+proteins.">iPSC-derived fibroblasts demonstrate augmented production and assembly of extracellular matrix proteins.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology - Animal. 48 (2), 112-122 (2012).</li><li>Bikle, D. D., Xie, Z., Tu, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+regulation+of+keratinocyte+differentiation.">Calcium regulation of keratinocyte differentiation.</a> Expert Review of Endocrinology &amp; Metabolism. 7 (4), 461-472 (2012).</li><li>Bernstam, L. I., Vaughan, F. L., Bernstein, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+grown+at+the+air-liquid+interface.">Keratinocytes grown at the air-liquid interface.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology. 22 (12), 695-705 (1986).</li><li>Prunieras, M., Regnier, M., Woodley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+cultivation+of+keratinocytes+with+an+air-liquid+interface.">Methods for cultivation of keratinocytes with an air-liquid interface.</a> Journal of Investigative Dermatology. 81, 28-33 (1983).</li><li>Steven, A. C., Bisher, M. E., Roop, D. R., Steinert, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthetic+pathways+of+filaggrin+and+loricrin--two+major+proteins+expressed+by+terminally+differentiated+epidermal+keratinocytes.">Biosynthetic pathways of filaggrin and loricrin--two major proteins expressed by terminally differentiated epidermal keratinocytes.</a> Journal of Structural Biology. 104 (1-3), 150-162 (1990).</li><li>Hohl, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+loricrin.+Structure+and+function+of+a+new+class+of+epidermal+cell+envelope+proteins.">Characterization of human loricrin. Structure and function of a new class of epidermal cell envelope proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 266 (10), 6626-6636 (1991).</li><li>Bern, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Original+and+modified+technique+of+tie-over+dressing:+Method+and+application+in+burn+patients.">Original and modified technique of tie-over dressing: Method and application in burn patients.</a> Burns. 44 (5), 1357-1360 (2018).</li><li>Joyce, C. W., Joyce, K. M., Kennedy, A. M., Kelly, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Running+Barbed+Tie-over+Dressing.">The Running Barbed Tie-over Dressing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery - Global Open. 2 (4), 137 (2014).</li><li>Wang, C. K., Nelson, C. F., Brinkman, A. M., Miller, A. C., Hoeffler, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+cell+sorting+of+fibroblasts+and+keratinocytes+creates+an+organotypic+human+skin+equivalent.">Spontaneous cell sorting of fibroblasts and keratinocytes creates an organotypic human skin equivalent.</a> Journal of Investigative Dermatology. 114 (4), 674-680 (2000).</li><li>Yang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+folliculogenic+human+epithelial+stem+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of folliculogenic human epithelial stem cells from induced pluripotent stem cells.</a> Nature Communications. 5, 3071 (2014).</li></ol>

Как новая альтернатива для персональной восстановительной медицины17было предложено человека iPSCs. Пациент производные персонализированные iPSCs отражают пациента характеристики, которые могут использоваться для моделирования заболевания, наркотиков скрининг и аутологич?...

Кожа покрывает внешней поверхности тела и защищает внутренние органы. Кожа имеет различные функции, в том числе защиты от патогенов, поглощая и хранения воды, регулирование температуры тела и выделяют тела отходов2. Пересадке кожи могут быть классифицированы в зависимости от источника кожи; графтов, использование кожи от другого донора называются аллотрансплантантов, и трансплантатов, используя кожи пациента являются аутотрансплантантов. Хотя аутотрансплантатом является предпочтительным лечения из-за его низкой неприятие риска, биопсия кожи, трудно выполнить на пациентов с серьезными повреждениями или недостаточное количество клеток кожи. У больных с ожогами в три раза количество клеток кожи необходимы для покрытия больших территорий. В ситуациях, когда необходима трансплантация аллогенных приводит ограниченное количество клеток кожи от тела пациента. Аллотрансплантата используется временно, до аутологичной трансплантации может быть выполнена, поскольку обычно оно отклоняется иммунной системой хозяина, после примерно 1 неделю3. Чтобы преодолеть неприятие иммунной системой пациента, графтов должна исходить от источника с тем же идентификатором иммунитета пациента4.
Человеческого iPSCs являются источником новых клеток для клеточной терапии5. Человеческого iPSCs генерируются из соматических клеток, используя перепрограммирования факторов, таких как OCT4, SOX2, Klf4 и c-Myc6. С помощью человеческого iPSCs преодолевает этические и иммунологические аспекты эмбриональных стволовых клеток (ЭСК)7,8. Человеческого iPSCs имеют плюрипотентности и могут дифференцироваться в три зародышевых9. Наличие HLA, решающим фактором в регенеративной медицине, определяет иммунный ответ и возможность отказа10. Использование пациента производные iPSCs решает проблемы отказа ограничения и иммунной системы клетки источник. CBMCs также стали источником альтернативной ячейки для регенеративной медицины11. Обязательное HLA набрав, которая происходит во время СВМС банковской, легко может использоваться для исследования и трансплантации. Кроме того, гомозиготных HLA-типа iPSCs может широко применяют для различных пациентов12. СВМС iPSC банк — Роман и эффективную стратегию для клеточной терапии и аллогенных регенеративной медицины12,,1314. В этом исследовании мы используем СВМС iPSCs, дифференцированные в кератиноцитов и фибробластов и генерировать слои стратифицированной 3D кожи. Результаты этого исследования свидетельствуют о СВМС iPSC производные 3D кожи органоид Роман инструмент для в vitro и in vivo дерматологические исследования.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:965px;" width="964">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:301px;">Adenine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">A2786</td>
			<td style="width:401px;">Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AggreWell Medium (EB formation medium)</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>05893</td>
			<td>EB formation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Fibronectin antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab23750</td>
			<td>Fibroblast marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-KRT14 antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab7800</td>
			<td>Keratinocyte marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Loricrin antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab85679</td>
			<td>Stratum corneum marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-p63 antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab124762</td>
			<td>Keratinocyte marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anti-Vimentin antibody</td>
			<td>Santa cruz</td>
			<td>sc-7558</td>
			<td>Fibroblast marker</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BAND AID FLEXIBLE FABRIC</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>-</td>
			<td>Bandage</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Basement membrane matrix (Matrigel)</td>
			<td>BD</td>
			<td>354277</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BLACK SILK suture</td>
			<td>AILEEE</td>
			<td>SK617</td>
			<td>Skin graft</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5670</td>
			<td>Component of epithelial medium for 3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagen type I</td>
			<td>BD</td>
			<td>354236</td>
			<td>3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagen type IV</td>
			<td>Santa-cruz</td>
			<td>sc-29010</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Defined keratinocyte-Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10744-019</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11995065</td>
			<td>Component of differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM/F12 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330-032</td>
			<td>Component of differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Essential 8 medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1517001</td>
			<td>iPSC medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">FBS, Qualified</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-015-CV</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast and keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glutamax Supplement&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Insulin</td>
			<td>Invtrogen</td>
			<td>12585-014</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast and keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Iris standard curved scissor</td>
			<td>Professional</td>
			<td>PC-02.10</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Keratinocyte Serum Free Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17005-042</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">L-ascorbic acid 2-phosphata sesquimagnesium salt hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MEM Non-Essential Amino Acid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1140050</td>
			<td>Component of differentiation medium for fibroblast</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Meriam Forceps Thumb 16 cm</td>
			<td>HIROSE</td>
			<td>HC 2265-1</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">NOD.CB17-Prkdc SCID/J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>001303</td>
			<td>Mice strain for skin graft</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Petri dish 90 mm</td>
			<td>Hyundai Micro</td>
			<td>H10090</td>
			<td>Plastic ware</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Recombinant Human BMP-4</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>314-BP</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Recombinant human EGF protein</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>236-EG</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Retinoic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Component of differentiation medium for keratinocyte</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">T/C Petridish 100 mm, 240/bx</td>
			<td>TPP</td>
			<td>93100</td>
			<td>Plastic ware</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T3705</td>
			<td>Component of epithelial medium for 3D skin organoid</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Transwell-COL collagen-coated membrane inserts&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3492</td>
			<td>Plastic ware for 3D skin organoid&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Vitronectin</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>A14700</td>
			<td>iPSC culture</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;">Y-27632 Dihydrochloride</td>
			<td>peprotech</td>
			<td>1293823</td>
			<td>iPSC culture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of 3d skin organoid from cord blood-derived induced pluripotent stem cells

Кожа является крупнейшим органом органа и имеет множество функций. Кожа действует как физический барьер и защитник тела и регулирует функции организма. Биомиметики это имитация моделей, систем и элементов природы с целью решения сложных проблем человека1. Биомиметики кожи является полезным инструментом для исследований в пробирке болезней и в естественных условиях восстановительной медицины. Человеческое индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSCs) имеют характеристику неограниченного распространения и способность дифференциации три зародышевых. Человеческого iPSCs генерируются из различных начальных клеток, таких как клетки крови, кератиноциты, фибробласты и многое другое. Среди них мононуклеарных клеток пуповинной крови (CBMCs) появились как источник альтернативной ячейки с точки зрения аллогенной регенеративной медицины. CBMCs являются полезными в регенеративной медицине, потому что человеческий лейкоцитарный антиген (HLA) ввод имеет важное значение для ячейки, банковской системы. Мы предоставляем метод дифференциации СВМС iPSCs в кератиноцитов и фибробластов и для поколения органоид 3D кожи. СВМС iPSC производные кератиноцитов и фибробласты имеют характеристики похож на главной ячейки строки. Organoids 3D кожи генерируются путем наложения эпидермального слоя на слой дермы. По пересадке этой 3D кожи органоид, формируется модель гуманизированные мышей. Это исследование показывает, что органоид 3D человеческого iPSC производные кожи может быть роман, альтернативные инструментом дерматологических исследований в vitro и in vivo.

Кожа состоит, по большей части, из эпидермиса и дермы. Кератиноциты тип основных клеток эпидермиса, и фибробласты тип основной ячейки дермы. Схема дифференциации кератиноцитов показана на рисунке 1A. СВМС iPCSc были сохранены в блюдо vitronectin покрытием (ри...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Поколение 3D кожи органоид из пуповинной крови производные индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

Мы предлагаем протокол, который показывает, как для дифференциации кератиноцитов индуцированных плюрипотентных стволовых клеток и фибробластов и создания 3D кожи органоид, используя эти кератиноцитов и фибробластов. Этот протокол содержит дополнительный шаг генерации модели гуманизированные мышей. Техника, представленная здесь будет улучшить дерматологические исследования.

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

Моноядерные клетки пуповинной крови, или CBMC, стали потенциальным источником клеток для регенеративной медицины, потому что типирование антигена лейкоцитов человека имеет важное значение для клеточной банковской системы. КБМК-индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, или CMBC-iPSCs, могут быть дифференцированы в кератиноциты и фибробласты. Для создания органоидов 3D кожи мы используем дерматологические исследования.Начните с культивирования CBMC-iPSC на пробиркецин покрытием 100-миллилитровые пластины при 37 градусов по Цельсию и 10%углекислого газа. Когда клетки достигли 80%-ного слияния, мыть культуры с PBS, и лечить их с одним миллилитром одного миллимолярной ЭДТА на тарелку в течение двух минут при 37 градусов по Цельсию и 5%углекислого газа. Когда клетки отсоединились, остановить реакцию с тремя миллилитров E8 среды на тарелку, и собирать клетки центрифугации.Повторно приостанавливайте гранулы в пяти миллилитров E8 среды для подсчета, и передачи один раз-10-к-шестой клетки в 15-миллилитровой конической трубки для центрифугации. Повторно приостанавливать переданные клетки с 2,5-миллилитров эмбриональной среды формирования тела, дополняется 10-микромолярной родо-ассоциированной киназы, или ингибитором ROCK. Используйте пипетку для переноса 125-микролитровых капель клеток на крышку пластины с неокрашенной культурой.Когда все капли были помещены, перевернуть блюдо, чтобы капли висеть с крышки в течение 24 часов при 37 градусов по Цельсию и 5%углекислого газа. На следующий день промойте крышку свежей средой E8 и перенесите раствор эмбрионального тела в 50-миллилитровую коническую трубку. Позвольте эмбриональным телам поселиться в течение одной минуты при комнатной температуре, прежде чем аспирировать супернатант и вновь приостановить эмбриональные тела со свежей средой E8 для их культуры в 90-миллиметровой чашке Петри при температуре 37 градусов по Цельсию и 5%углекислом газе до их дифференциации.Для дифференциации кератиноцитов CBMC-iPSC замените среду E8 из эмбриональной культуры тела свежей средой E8, дополненной одним нанограммом на миллилитр костного морфогенетического белка 4 для 24-часовой инкубации при 37 градусах Цельсия и 5%углекислом газе. На следующий день, урожай эмбриональных тел в 50-миллилитровую коническую трубку, как попродемонстрировано, и позволить телам поселиться в течение одной минуты при комнатной температуре. Затем замените супернатант шестью миллилитров кератиноцитов дифференциации среднего 1, или KDM1, дополненный 10 микромолейным ингибитором ROCK, и перенесите эмбриональные тела в 100-миллиметровую тарелку с коллагеновым покрытием IV типа.В дни от нуля до восьми культуры, заменить средний через день со свежим KDM1, дополненный трехмимоларной ретинойной кислоты и 25 нанограмм на миллилитр каждого из костного морфогенетического белка 4 и эпидермального фактора роста. Между днями 9 до 12, заменить средний через день с KDM2, дополненный тремя микромолярной ретинойной кислотой, 25 нанограмм на миллилитр костного морфогенетического белка 4, и 20 нанограмм на миллилитр эпидермального фактора роста. Между днями с 13 по 30, изменить среду через день на KDM3, дополненный 10 нанограммов на миллилитр костного морфогенетического белка 4, и 20 нанограмм на миллилитр эпидермального фактора роста.Для дифференциации фибробластов CBMC-iPSC повторно приостанавливать эмбриональную культуру тела в шести миллилитров фибробластовой дифференциации среднего 1, дополненного 10-микромолярной ингибитором ROCK, и перенести эмбриональную подвеску тела в подвальные мембранные матрицы с покрытием 100-миллиметровой тарелки. После трех дней инкубации, лечить культуру с 0,5-наномолярной кости морфогенетического белка 4 в течение четырех дней, прежде чем изменить средний на фибробластов дифференциации среды 2. На седьмой день культуры, изменить средний FDM2 через день в течение одной недели.На 14-й день культуры отсоедините клетки с одномимолярной ЭДТА, как было продемонстрировано, и соберите клетки в три миллилитра фибробластовой дифференциации среды 2 для центрифугации. Повторно приостанавливать клетки в пяти миллилитров фибробластовой дифференциации среды 1 для подсчета, и передать два раза-10-к-шестой клетки, не покрытием блюдо. На 21-й день культуры, передача два раза-10-к-шестой клетки из культуры в тип I коллагена покрытием 100-миллиметровое блюдо в свежем фибробласта дифференциации среды 1.На 28-й день культуры перенесите два раза-10-к-шести из iPSC-производных фибробластов в новое блюдо без покрытия. Для трехмерного генерации органоидов кожи, урожай iPSC полученных фибробластов из культуры, и передать два раза-10-к-пятой клетки 15-миллилитровой конической трубки для центрифугации. Повторно приостанавливайте фибробласты гранулы в 1,5 миллилитров фибробластовой дифференциации среднего 1 и 1,5 миллилитров нейтрализованного раствора коллагена типа I.Инкубировать клетки на вставку в шесть хорошо микроплюрат в течение 30 минут при комнатной температуре. Когда раствор затвердеют, добавьте два миллилитров среднего к верхней части вставки, и три миллилитров в нижней части хорошо. Затем поместите фибробластовую матрицу в инкубатор на пять-семь дней, пока гелеобразование не завершится, и матрица больше не будет работать.В конце инкубации, урожай iPSC полученных кератиноцитов, и передачи один раз-10-к-шестой клетки 15-миллилитровой конической трубки для центрифугации. Повторно приостанавливайте гранулы в 50-100 микролитров эпителиальной среды с низким содержанием кальция 1 и заменяйте среду на фибробластовую матрицу раствором клеток кератиноцита. Через 15 минут при 37 градусах цельсия замените среду в верхней части вставки двумя миллилитров эпителиальной среды 1, а среду в нижней хорошо с тремя миллилитров же, и вернуть пластину в инкубатор.Через два дня замените среду в вставке и колодец нормальной эпителиальной средой кальция 2 в течение двух дополнительных дней культуры. На четвертый день культуры, удалить все среды, и добавить три миллилитров роговицы среды на дно только, для создания воздухо-жидкого интерфейса. Затем верните пластину в инкубатор на срок до 14 дней до сбора органоида 3D кожи для анализа ниже по течению.Кератиноциты, полученные CBMC-iPSC, имеют морфологию, похожую на первичные кератиноциты, и экспрессия маркеров кератиноцитов увеличивается в этих клетках. CBMC-iPSC полученных фибробластов имеют морфологию похож на первичные фибробласты, и выражение плюрипотентных маркеров стволовых клеток октября-4 является вниз регулируется, в то время как фибробласты маркеры до регулируется. Толщина органоида 3D кожи увеличивается во время 3D-культуры, подтверждая, что органоид 3D кожи генерируется из кератиноцитов и фибробластов, полученных iPSC.Через две недели пересаженый 3D органоидный трансплантат кожи эффективно включается в кожу мыши-реципиента, что подтверждается анализом HNE. Кроме того, кератиноцит созревания и эпидермальной дифференциации маркеры выражаются в CBMC-iPSC полученных 3D органоидов кожи, демонстрируя функциональную дифференциацию, эффективное прививки, и эффективное заживление дефектов кожи мыши. Мы используем в прошлом с высоким содержанием кальция среды, которая вызывает стратифицированных слоев органоида 3D кожи, чтобы имитировать вблизи кожи.анализ показывает, что кожа стратифицирована. CBMC-iPSCs являются потенциальным источником клеток для пересадки кожи, и CBMC-iPSC полученных 3D органоидов кожи могут быть использованы в исследованиях, связанных с дерматологией, косметический скрининг, и регенеративной медицины.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

Генерация индуцированные плюрипотентные стволовые клетки из замороженных Баффи пальто с помощью неинтегрирующих Эписомные плазмиды

Somatic cells can be reprogrammed into induced pluripotent stem cells (iPSCs) by forcing the expression of four transcription factors (Oct-4, Sox-2, ...

Generation of Induced-pluripotent Stem Cells Using Fibroblast-like Synoviocytes Isolated from Joints of Rheumatoid Arthritis Patients

Генерация Индуцированные-плюрипотентных стволовых клеток с использованием фибробластоподобных синовиоциты Выделен из суставов больных ревматоидным артритом

Mature somatic cells can be reversed into a pluripotent stem cell-like state using a defined set of reprogramming factors. Numerous studies have generated ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Melanoma Tumor-infiltrating Lymphocytes

Генерация индуцированные плюрипотентные стволовые клетки от меланомы человека Опухоль-инфильтрации лимфоцитами

Adoptive transfer of ex vivo expanded autologous tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) can mediate durable and complete responses in significant subsets ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

Индуцированные плюрипотентные поколение стволовых клеток из клеток крови с помощью вируса Сендай и центрифугирование

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Генерация интеграции свободных индуцированные плюрипотентные стволовые клетки из человеческих мононуклеарных клеток периферической крови с помощью эписомальные векторы

Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) hold great promise for disease modeling and regenerative therapies. We previously reported the use of Episomal ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Дифференцирование хондроцитов из периферических кроветворных человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Хондрогенное образование гранул из индуцированных пуповинной клеткой флуоресцентных стволовых клеток

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Поколение стандартизированных и воспроизводимые переднего мозга тип мозгового Organoids от человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

В Vitro поколения Сомит производных от человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...