Name: dissection of the drosophila pupal retina for immunohistochemistry, western analysis, and rna isolation
Uploaded: 2019-03-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation at JoVE.com

हम जैक ड्रम और पांडुलिपि पर सहायक टिप्पणियों के लिए हमारे समीक्षक धंयवाद । इस काम को R15GM114729 ने सपोर्ट किया था ।

1. ऊतक तैयारी
<ol><li>drosophila की स्थापना को पार (पहले20वर्णित के रूप में) या संस्कृति विशिष्ट drosophila उपभेदों वांछित जीनोटाइप के प्यूपे प्राप्त करने के लिए । यह सुनिश्चित करने के लिए कि प्यूपे की एक ब?...

<ol>
	<li>Cagan, R. L., Ready, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+order+in+the+Drosophila+pupal+retina.">The emergence of order in the Drosophila pupal retina.</a> Developmental biology. 136 (2), 346-362 (1989).</li><li>Wolff, T., Ready, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The development of Drosophila melanogaster. , 1277-1325 (1993).</li><li>Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+formation+in+the+Drosophila+eye.">Pattern formation in the Drosophila eye.</a> Current opinion in genetics &amp; development. 17 (4), 309-313 (2007).</li><li>Kumar, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+an+ommatidium+one+cell+at+a+time.">Building an ommatidium one cell at a time.</a> Developmental Dynamics. 241 (1), 136-149 (2012).</li><li>Hayashi, T., Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+mechanics+mediate+pattern+formation+in+the+developing+retina.">Surface mechanics mediate pattern formation in the developing retina.</a> Nature. 431, 647 (2004).</li><li>Bao, S., Cagan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+Adhesion+Mediated+by+Hibris+and+Roughest+Regulates+Morphogenesis+and+Patterning+in+the+Drosophila+Eye.">Preferential Adhesion Mediated by Hibris and Roughest Regulates Morphogenesis and Patterning in the Drosophila Eye.</a> Developmental Cell. 8 (6), 925-935 (2016).</li><li>Cordero, J. B., Larson, D. E., Craig, C. R., Hays, R., Cagan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Decapentaplegic+signaling+regulates+patterning+and+adhesion+in+the+Drosophila+pupal+retina.">Dynamic Decapentaplegic signaling regulates patterning and adhesion in the Drosophila pupal retina.</a> Development (Cambridge, England). 134 (10), 1861-1871 (2007).</li><li>Larson, D. E., Liberman, Z., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+behavior+in+the+developing+Drosophila+pupal+retina.">Cellular behavior in the developing Drosophila pupal retina.</a> Mechanisms of development. 125 (3-4), 223-232 (2008).</li><li>Mart&#237;n-Bermudo, M. D., Bardet, P. L., Bella&#239;che, Y., Malartre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vav+oncogene+antagonises+EGFR+signalling+and+regulates+adherens+junction+dynamics+during+Drosophila+eye+development.">The vav oncogene antagonises EGFR signalling and regulates adherens junction dynamics during Drosophila eye development.</a> Development. 142 (8), 1492-1501 (2015).</li><li>Chan, E. H., Chavadimane Shivakumar, P., Cl&#233;ment, R., Laugier, E., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterned+cortical+tension+mediated+by+N-cadherin+controls+cell+geometric+order+in+the+Drosophila+eye.">Patterned cortical tension mediated by N-cadherin controls cell geometric order in the Drosophila eye.</a> eLife. 6, e22796 (2017).</li><li>Lin, H. V., Rogulja, A., Cadigan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wingless+eliminates+ommatidia+from+the+edge+of+the+developing+eye+through+activation+of+apoptosis.">Wingless eliminates ommatidia from the edge of the developing eye through activation of apoptosis.</a> Development. 131 (10), 2409-2418 (2004).</li><li>Cordero, J., Jassim, O., Bao, S., Cagan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+wingless+in+an+early+pupal+cell+death+event+that+contributes+to+patterning+the+Drosophila+eye.">A role for wingless in an early pupal cell death event that contributes to patterning the Drosophila eye.</a> Mechanisms of development. 121 (12), 1523-1530 (2004).</li><li>Mendes, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+c&#8208;d+regulates+developmental+apoptosis+in+the+Drosophila+retina.">Cytochrome c&#8208;d regulates developmental apoptosis in the Drosophila retina.</a> EMBO reports. 7 (9), 933-939 (2006).</li><li>Monserrate, J., Brachmann, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+death+zone:+a+spatially+restricted+region+for+programmed+cell+death+that+sculpts+the+fly+eye.">Identification of the death zone: a spatially restricted region for programmed cell death that sculpts the fly eye.</a> Cell Death &amp; Differentiation. 14 (2), 209-217 (2007).</li><li>Bushnell, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JNK+is+antagonized+to+ensure+the+correct+number+of+interommatidial+cells+pattern+the+Drosophila+retina.">JNK is antagonized to ensure the correct number of interommatidial cells pattern the Drosophila retina.</a> Developmental Biology. 433 (1), 94-107 (2018).</li><li>Wolff, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+techniques+for+pupal+and+larval+Drosophila+eyes.">Dissection techniques for pupal and larval Drosophila eyes.</a> CSH Protoc. 2007, (2007).</li><li>Hsiao, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+Immunohistochemistry+of+Larval,+Pupal+and+Adult+Drosophila+Retinas.">Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (69), e4347 (2012).</li><li>Tea, J. S., Cespedes, A., Dawson, D., Banerjee, U., Call, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+Mounting+of+Drosophila+Pupal+Eye+Discs.">Dissection and Mounting of Drosophila Pupal Eye Discs.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (93), e52315 (2014).</li><li>Johnson, R. I., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Quantitative+Method+to+Analyze+Drosophila+Pupal+Eye+Patterning.">A Quantitative Method to Analyze Drosophila Pupal Eye Patterning.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7008 (2009).</li><li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fly pushing : the theory and practice of Drosophila genetics. , (2004).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Ellis, M. C., O'Neill, E. M., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Drosophila+glass+protein+and+evidence+for+negative+regulation+of+its+activity+in+non-neuronal+cells+by+another+DNA-binding+protein.">Expression of Drosophila glass protein and evidence for negative regulation of its activity in non-neuronal cells by another DNA-binding protein.</a> Development. 119 (3), 855-865 (1993).</li><li>Duffy, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GAL4+system+in+drosophila:+A+fly+geneticist's+swiss+army+knife.">GAL4 system in drosophila: A fly geneticist's swiss army knife.</a> genesis. 34 (1-2), 1-15 (2002).</li><li>Li, W. Z., Li, S. L., Zheng, H. Y., Zhang, S. P., Xue, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+broad+expression+profile+of+the+GMR-GAL4+driver+in+Drosophila+melanogaster.">A broad expression profile of the GMR-GAL4 driver in Drosophila melanogaster.</a> Genet Mol Res. 11 (3), 1997-2002 (2012).</li><li>Song, Z., McCall, K., Steller, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DCP-1,+a+Drosophila+Cell+Death+Protease+Essential+for+Development.">DCP-1, a Drosophila Cell Death Protease Essential for Development.</a> Science. 275 (5299), 536-540 (1997).</li><li>Hay, B. A., Wassarman, D. A., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+homologs+of+baculovirus+inhibitor+of+apoptosis+proteins+function+to+block+cell+death.">Drosophila homologs of baculovirus inhibitor of apoptosis proteins function to block cell death.</a> Cell. 83 (7), 1253-1262 (1995).</li></ol>

Drosophila प्यूपल नेत्र विच्छेदन की विधि यहां वर्णित 10 से 15 मिनट के भीतर 6 से 10 नेत्र मस्तिष्क परिसरों के अलगाव के लिए अनुमति देता है । हालांकि, धैर्य और अभ्यास विच्छेदन तकनीक में महारत हासिल करने के लिए और व?...

Drosophila रेटिना एक छत्ते जाली1,2,3,4में व्यवस्थित वर्णक कोशिकाओं से घिरा लगभग ७५० ommatidia से बना है । प्रत्येक नेत्रांशक में आठ फोटोरिसेप्टर ंयूरॉंस, चार लेंस स्राटिंग शंकु कोशिकाओं, और दो प्राथमिक वर्णक कोशिकाओं शामिल हैं । प्रत्येक नेत्रांशक आसपास वर्णक-जाली कोशिकाओं और संवेदी बाल खड़े समूहों का उत्पादन कर रहे हैं । अपनी पोस्ट-मिटिक प्रकृति और बाहुबली हेक्सागोनल व्यवस्था के कारण, ड्रोसोफिला प्यूपल रेटिना कोशिका आसंजन5,6सहित संरचनाविकासी प्रक्रियाओं के अध्ययन के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल प्रणाली प्रदान करता है, 7,8,9,10 और अपोप्टोसिस11,12,13,14,15।
कई प्रकाशित प्रोटोकॉल हवा के दबाव का उपयोग करने के लिए आंख निकालने drosophila प्यूपा16,17,18से मस्तिष्क परिसरों । प्रोटोकॉल यहां वर्णित बजाय microdissection उपकरण का इस्तेमाल करने के लिए ध्यान से और ठीक आंख को अलग-अक्षतिग्रस्त रेटिना ऊतक प्राप्त करने के लक्ष्य के साथ मस्तिष्क परिसरों । यह महत्वपूर्ण है अगर retinas को morphological, प्रोटीन, या जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए उपयोग किया जा रहा है के बाद से रेटिना को नुकसान सेलुलर तनाव या मौत है, जो सेलुलर phenotype या जीन अभिव्यक्ति को संशोधित कर सकते में परिणाम हो सकता है । इसके अतिरिक्त, अभ्यास के बाद, 6 से 10 आंख मस्तिष्क परिसरों 10 से 15 मिनट में अलग किया जा सकता है, उम्र में परिवर्तनशीलता को ंयूनतम करने के लक्ष्य को सुविधाजनक बनाने और विच्छेद नेत्र ऊतक के विकासात्मक चरण ।
निर्धारण, immunostaining, और पूरे-माउंट प्रोटोकॉल नीचे वर्णित फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी के लिए Drosophila आंखों की तैयारी के लिए उपयुक्त है । Retinas एंटीबॉडी के साथ इंयूबेटेड किया जा सकता है ब्याज के प्रोटीन लक्ष्यीकरण । उदाहरण के लिए, संधि घटकों का पालन करने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग कोशिकाओं की अंतिम परिधि की कल्पना करने के लिए किया जा सकता है ताकि कोशिका प्रकार, आकृति और व्यवस्थासहित विशेषताओं का मूल्यांकन किया जा सके । निर्धारण करने से पहले, आंखों के बजाय qRT-पीसीआर या आरएनए अनुक्रमण में उपयोग के लिए पश्चिमी विश्लेषण, या आरएनए के लिए प्रोटीन निकालने के उद्देश्य के लिए मस्तिष्क से cleaved किया जा सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:655px;" width="655">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Adobe Photoshop</td>
			<td style="width:131px;">Adobe</td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">Image processing software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Bamboo splints, 6&#34;&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Ted Pella Inc</td>
			<td style="width:95px;">116</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Beta mercaptoethanol</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">M3148</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Beta-glycerol phosphate</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">50020</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="90">
			<td height="90" style="height:91px;width:145px;">Black dissecting dish</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">Glass petri dish filled to rim with SYLG170 or SYLG184 (colored black with finely ground charcoal powder). Leave at room temperature for 24-48 h to polymerize.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Blade holder</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:95px;">10053</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">A7906</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:85px;width:145px;">cOmplete, EDTA-free protease inhibitor cocktail tablets</td>
			<td style="width:131px;">Roche</td>
			<td style="width:95px;">4693132001</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Confocal microscope (Zeiss LSM 501)</td>
			<td style="width:131px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">or similar microscope</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Diethyl Pyrocarbonate (DEPC)</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">40718</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Double-sided tape</td>
			<td style="width:131px;">3M</td>
			<td style="width:95px;">665</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:145px;">Drosophila food media, nutrient-rich&#160;</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">7.5% sucrose, 15% glucose, 2.5% agar, 20% brewers yeast, 5% peptone, 0.125% MgSO4.7H2O, 0.125% CaCl2.2H20</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:85px;width:145px;">Drosophila food media, standard</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">Bloomington Drosophila Stock center cornmeal recipe.&#160; (https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.html)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Ethylenediaminetetraacetic acid</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">E6758</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Fixative solution</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">4% formadehyde in PBS, pH 7.4.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Fluorescence microscope (TCS SP5 DM microscope)</td>
			<td style="width:131px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">or similar microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Forceps&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:95px;">91150-20</td>
			<td style="width:285px;">Forceps should be sharpened frequently.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Formaldehyde</td>
			<td style="width:131px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:95px;">28908</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Glass 9-well dishes&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Corning</td>
			<td style="width:95px;">7220-85</td>
			<td style="width:285px;">Also known as 9-well dishes&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Glass coverslips (22 x 22 mm)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:95px;">12-542-B</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Glass microscope slides (25 x 75 x 1 mm)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:95px;">12-550-413</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Glass petri dish</td>
			<td style="width:131px;">Corning</td>
			<td style="width:95px;">3160-100BO</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Glycerol</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">G5516</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Image Studio software version 5.2.5</td>
			<td style="width:131px;">LI-COR Biosciences</td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">Image processing software for quantitation of Western blots.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Laemmli sample buffer</td>
			<td style="width:131px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:95px;">161-0737</td>
			<td style="width:285px;">2X concentrated protein sample buffer, supplement with beta mercaptoethanol as per manufacturer&#39;s instructions.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Lane marker reducing sample buffer&#160;</td>
			<td style="width:131px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:95px;">39000</td>
			<td style="width:285px;">5X concentrated protein sample buffer.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Microcentrigure tubes&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Axygen</td>
			<td style="width:95px;">MCT-175-C</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Microdissection scissors&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:95px;">15000-03</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Microwell trays (72 x 10 &#181;L wells)</td>
			<td style="width:131px;">Nunc</td>
			<td style="width:95px;">438733</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Mounting media</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">0.5% N-propylgallate and 80% glycerol in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">N-propylgallate</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">P3130</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:145px;">Nuclease-free PBS (PBS in 0.1% DEPC, pH 7.4)</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">Add appropriate volume of DEPC to PBS, mix well and incubate overnight at room temperature with constant stirring. Autoclave for at least 20 minutes. Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">PBS (phosphate buffered saline pH 7.4)</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">P5368</td>
			<td style="width:285px;">Prepare according to manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:85px;width:145px;">PBS+pi (PBS plus protease and phoshatase inhibitors)</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">10mM NaF, 1mM beta-glycerol phosphate and 1mM Na3VO4 in PBS, pH 7.4.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">PBT</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">0.15% TritonX and 0.5% bovine serum albumin in PBS, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Pin holder</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:95px;">26016-12</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Primary antibody: goat anti-GAPDH</td>
			<td style="width:131px;">Imgenex</td>
			<td style="width:95px;">IMG-3073</td>
			<td style="width:285px;">For Western blotting. Used at 1:3000</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Primary antibody: rabbit anti-cleaved Dcp-1</td>
			<td style="width:131px;">Cell signaling</td>
			<td style="width:95px;">9578S</td>
			<td style="width:285px;">For immunofluorescence. Used at 1:100</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Primary antibody: rat anti-DEcad</td>
			<td style="width:131px;">Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td style="width:95px;">DCAD2</td>
			<td style="width:285px;">For immunofluorescence. Used at 1:20</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Primary antibody: rat anti-DEcad</td>
			<td style="width:131px;">DOI: 10.1006/dbio.1994.1287</td>
			<td style="width:95px;">DCAD1</td>
			<td style="width:285px;">&#160;Gift from Tadashi Uemura. Used at 1:100.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">RNA extration kit: Relia Prep RNA tissue Miniprep kit&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Promega</td>
			<td style="width:95px;">Z6110</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:85px;width:145px;">Rnase decontamination reagent (RNase Away)</td>
			<td style="width:131px;">Molecular BioProducts</td>
			<td style="width:95px;">7002</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Scalpel blades</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:95px;">10050</td>
			<td style="width:285px;">Break off small piece of scapel blade and secure in blade holder.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:85px;width:145px;">Secondary antibody: 488-conjugated&#160; donkey anti-rat IgG (H+L)</td>
			<td style="width:131px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:95px;">712-545-153</td>
			<td style="width:285px;">For immunofluorescence. Used at 1:200</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Secondary antibody: cy3-conjugated goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td style="width:131px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:95px;">111-165-144</td>
			<td style="width:285px;">For immunofluorescence. Used at 1:100</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:85px;width:145px;">Secondary antibody: HRP-conjugated goat anti-rat IgG (H+L)</td>
			<td style="width:131px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:95px;">7077</td>
			<td style="width:285px;">For Western blotting. Used at 1:3000</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:85px;width:145px;">Secondary antibody: HRP-conjugated rabbit anti-goat IgG (H+L)</td>
			<td style="width:131px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:95px;">305-035-003</td>
			<td style="width:285px;">For Western blotting. Used at 1:3000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">S3014</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Sodium Fluoride</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">215309</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Sodium vanadate</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">50860</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Spectrophotometer (NanoDrop)</td>
			<td style="width:131px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:95px;">2000c&#160;</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:145px;">Stereo dissecting microscope (M60 or M80)</td>
			<td style="width:131px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">or similar microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Sylgard (black)</td>
			<td style="width:131px;">Dow Corning</td>
			<td style="width:95px;">SYLG170</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Sylgard (transparent)</td>
			<td style="width:131px;">Dow Corning</td>
			<td style="width:95px;">SYLG184</td>
			<td style="width:285px;">Color black with finely ground charcol powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">Tissue: Kimwipes</td>
			<td style="width:131px;">KIMTECH</td>
			<td style="width:95px;">34120</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:145px;">TritonX</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">T8787</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Trizma hydrochloride pH7.5</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:95px;">T5941</td>
			<td style="width:285px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Tungsten needle, fine</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:95px;">10130-10</td>
			<td style="width:285px;">Insert into pin holder</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:145px;">Tungsten needle, sturdy</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:95px;">10130-20</td>
			<td style="width:285px;">Insert into pin holder</td>
		</tr>
		<tr height="130">
			<td height="130" style="height:130px;width:145px;">WTLB (western tissue lysis buffer)</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">150mM NaCl, 1.5% Triton X-100, 1mM EDTA, 20% glycerol, 10mM NaF, 1mM beta-glycerol phosphate and 1mM Na3VO4 in 50mM Tris-HCl (pH 7.5). Supplement with one cOmplete protease cocktail table per 10 mL solution.</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:145px;">Yeast paste</td>
			<td style="width:131px;">(local supermarket)</td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:285px;">Approximately 2 tablespoons Fleischmann&#39;s ActiveDry Yeast (or similar) dissolved in ~20 mL distilled H2O</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of the drosophila pupal retina for immunohistochemistry, western analysis, and rna isolation

ड्रोसोफिला प्यूपल रेटिना विकास के दौरान मॉरफोजेनेटिक प्रक्रियाओं के अध्ययन के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल प्रणाली प्रदान करता है । इस पत्र में, हम नाजुक Drosophila प्यूपल रेटिना के विच्छेदन के लिए एक विश्वसनीय प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । हमारे शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण आसानी से उपलब्ध microdissection उपकरण का इस्तेमाल करने के लिए खुला प्यूपे और ठीक आंख मस्तिष्क परिसरों निकालने । ये तय किया जा सकता है, immunohistochemistry के अधीन है, और retinas तो माइक्रोस्कोप स्लाइड पर घुड़सवार और imaged अगर लक्ष्य सेलुलर या subcellular संरचनाओं का पता लगाने के लिए है । वैकल्पिक रूप से, अनिर्धारित retinas मस्तिष्क के ऊतकों से अलग किया जा सकता है, उचित बफ़र्स में लीजड ड और प्रोटीन जेल ट्रो या mrna निष्कर्षण के लिए उपयोग (प्रोटीन या जीन अभिव्यक्ति का आकलन करने के लिए, क्रमशः) । महत्वपूर्ण अभ्यास और धैर्य का वर्णन microdissection प्रोटोकॉल मास्टर करने के लिए आवश्यक हो सकता है, लेकिन एक बार महारत हासिल है, प्रोटोकॉल मुख्य रूप से अक्षतिग्रस्त retinas के अपेक्षाकृत जल्दी अलगाव सक्षम बनाता है ।

प्यूपल नेत्र एक आसानी से सुलभ ऊतक है कि विकास की प्रक्रिया की जांच करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल के रूप में कार्य करता है कि morphogenesis ड्राइव । यहां, हम रेटिनाज़ dissected और इस्तेमाल किया इम्यूनोफ्लोरेसेंस का पता ?...

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Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

इस कागज immunohistochemistry, पश्चिमी विश्लेषण, और आरएनए निष्कर्षण के लिए ऊतक के प्रसंस्करण के लिए प्रोटोकॉल के साथ साथ Drosophila प्यूपल retinas विदारक के लिए एक शल्य चिकित्सा पद्धति प्रस्तुत करता है ।

Immunohistochemistry, पश्चिमी विश्लेषण, और आरएनए अलगाव के लिए Drosophila प्यूपल रेटिना का विच्छेदन

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह कई डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए ड्रोसोफिला प्यूपल आई टिश्यू के अलगाव के लिए एक कुशल तरीका है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह ऊतक को नुकसान पहुंचाए बिना बड़ी संख्या में प्यूपल आंखों के त्वरित विच्छेदन की अनुमति देता है। ड्रोसोफिला पुपल रेटिना का विच्छेदन नौसिखियों के लिए चुनौतीपूर्ण होगा।तकनीक का अभ्यास विच्छेदन की गति और परिणामों की गुणवत्ता में सुधार करने का सबसे अच्छा तरीका है। ड्रोसोफिला पिल्ले को काले विच्छेदन पकवान पर रखने के बाद, प्यूप से दूर विच्छेदन पकवान पर डबल-तरफा टेप का एक ताजा टुकड़ा बिछाएं, और पिल्ला पृष्ठीय पक्ष को ध्यान से टेप पर रखने के लिए संदंश की एक जोड़ी का उपयोग करें। एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे पकवान रखें, और प्रत्येक पिल्ला के ऑपरकुलम को हटाने के लिए संदंश का उपयोग करें।प्रत्येक प्यूपल मामले को टुकड़ा करने के लिए माइक्रोडिसेक्शन कैंची का उपयोग करें, जिससे यह सिर, छाती और पूर्वकाल पेट खंड को प्रकट करने के लिए खुला हो सकता है, और पुपल मामले के किनारों को दो तरफा टेप में सुरक्षित करता है। प्रत्येक पिल्ला के पेट को तेज संदंश के साथ छेदें, और अपने प्यूपल मामले से पिल्ला को हटा दें। टेप से दूर, विच्छेदन पकवान पर पिल्ला रखें, और बर्फ ठंडे PBS के ४०० माइक्रोलीटर के साथ पिल्ला को कवर ।पेट से हर एक को समझने के लिए संदंश का उपयोग करें, और छाती के माध्यम से एक साफ क्रॉस-सेक्शनल चीरा बनाने के लिए माइक्रोडिसेक्शन कैंची का उपयोग करें, पिल्ला को आधे में काटें। ठीक संदंश के दो जोड़े का उपयोग करना, प्रत्येक छाती एपिथेलियम के कट किनारों को समझें और धीरे-धीरे छाती और सिर कैप्सूल को खोलें, आंख-मस्तिष्क परिसर और आसपास के वसा ऊतक को उजागर करें। फिर, ऊतक को समझे बिना, सिर कैप्सूल के अवशेषों से दूर प्रत्येक पारदर्शी, ऑफ-व्हाइट, डम्बल के आकार के आंख-मस्तिष्क परिसर का मार्गदर्शन करने के लिए संदंश का उपयोग करें।छह से 10 पिल्ले को विच्छेदन करने के बाद, एक माइक्रोपिपेट टिप को एक साफ रेजर ब्लेड के साथ लगभग एक मिलीमीटर व्यास में काट लें, और पीबीएस और वसा के मिश्रण के साथ टिप को चिकनाई करें। बर्फ पर पीबीएस के ४०० माइक्रोलीटर युक्त नौ-अच्छी ग्लास डिश के एक कुएं में आंख-मस्तिष्क परिसरों को स्थानांतरित करने के लिए चिकनाई वाले पिपेट टिप का उपयोग करें, और फिर पीबीएस के 20 माइक्रोलीटर में ऊतक को बर्फ पर 35 मिनट के इनक्यूबेशन के लिए फिक्सेटिव के कम से कम 250 माइक्रोलीटर में स्थानांतरित करें। निर्धारण के अंत में, एक ही पिपेट टिप का उपयोग करने के लिए एक तिहाई अच्छी तरह से बर्फ पर पांच से 10 मिनट के लिए ताजा PBS के ४०० माइक्रोलीटर युक्त में ऊतक हस्तांतरण ।किसी भी गैर-विशिष्ट एंटीबॉडी बाइंडिंग को ब्लॉक करने के लिए, आंख-मस्तिष्क परिसरों को पीबीएस प्लस ट्राइटन एक्स के 400 माइक्रोलीटर में बर्फ पर 10 से 60 मिनट की इनक्यूबेशन के लिए स्थानांतरित करें। इनक्यूबेशन के अंत में, प्राथमिक एंटीबॉडी समाधान के 10 माइक्रोलीटर को 72-वेल माइक्रोवेल प्लेट के कुओं की आवश्यक संख्या में, और पीबीएस प्लस ट्राइटन एक्स के साथ एक संशोधित 0.5 मिलीमीटर टिप के साथ एक P10 एयर-विस्थापन माइक्रोपिपेट का उपयोग करें ताकि पांच से अधिक आंख-मस्तिष्क परिसरों को स्थानांतरित किया जा सके और पीबीएस के तीन माइक्रोलीटर से अधिक नहीं। चार डिग्री सेल्सियस पर एक रात इनक्यूबेशन के बाद, पांच से 10 मिनट प्रति धोने के लिए एक नौ अच्छी तरह से ग्लास डिश के एक कुएं में पीबीएस प्लस ट्राइटन एक्स के ४०० माइक्रोलीटर में दो बार नमूनों को धोएं ।तीसरे धोने के बाद, ऊतक को कमरे के तापमान पर दो घंटे के लिए एक उपयुक्त माध्यमिक एंटीबॉडी समाधान के 100 माइक्रोलीटर में स्थानांतरित करें, प्रकाश से संरक्षित, पीबीएस प्लस ट्राइटन एक्स के 400 माइक्रोलीटर में तीन पांच से 10 मिनट की वॉश और पीबीएस में एक वॉश के बाद। इसके बाद बढ़ते माध्यम के 200 माइक्रोलीटर में नमूनों को एक से दो घंटे तक बराबर कर दें। इनक्यूबेशन के अंत में, नमूनों को माइक्रोस्कोप स्लाइड में स्थानांतरित करें, और एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत स्लाइड करने के लिए एक आंख-मस्तिष्क परिसर को पिन करने के लिए एक मजबूत टंगस्टन सुई का उपयोग करें।फिर, प्रत्येक आंख को अपने संबद्ध ऑप्टिक पालि से दूर करने के लिए एक ठीक टंगस्टन सुई का उपयोग करें और प्रत्येक आंख को माइक्रोस्कोप स्लाइड की सतह पर पैंतरेबाज़ी करें ताकि आंख की बेसल सतह स्लाइड से सटी हो। फिर, नमूनों पर एक साफ कवरलिप लागू करें, और नेल पॉलिश के साथ कवरस्लिप को सील करें। पश्चिमी दाग विश्लेषण के लिए पुपल नेत्र ऊतक तैयार करने के लिए, पहले 10 से 16 पिल्ले को विच्छेदन करें जैसा कि पहले दो बैचों में प्रदर्शित किया गया था, पीबीएस में 10 से 15 मिनट के अलावा प्रोटीज और फॉस्फेट अवरोधकों के साथ पूरक।पीबीएस प्लस अवरोधकों के ४०० माइक्रोलीटर में बर्फ पर नौ अच्छी तरह से ग्लास डिश के व्यक्तिगत कुओं में दो बार अलग आंख मस्तिष्क परिसरों को संक्षेप में कुल्ला करने के बाद, आंख के सभी मस्तिष्क परिसरों को बर्फ के ४०० माइक्रोलीटर में स्थानांतरित करें-ठंडे पीबीएस प्लस अवरोधक एक साफ काले विच्छेदन पकवान पर डिकेंट । एक साफ विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, ऑप्टिक पालि से प्रत्येक आंख को साफ से काटने के लिए एक मजबूत टंगस्टन सुई और एक ठीक रेजर ब्लेड का उपयोग करें, और आंख-मस्तिष्क परिसरों को पीबीएस प्लस अवरोधकों के पांच माइक्रोलीटर में स्थानांतरित करने के लिए एक चिकनाई टिप का उपयोग करें बर्फ पर 500-माइक्रोलीटर माइक्रोसेंटर ट्यूब में। फिर, ट्यूब में पश्चिमी ऊतक लाइसिस बफर के पांच माइक्रोलीटर और 2X केंद्रित प्रोटीन नमूना बफर के 10 माइक्रोलीटर जोड़ें।आरएनए निष्कर्षण के लिए आंख-मस्तिष्क परिसरों को संसाधित करने के लिए, दस्ताने पहने हुए, बेंचटॉप, माइक्रोस्कोप, विच्छेदन उपकरण, और 70% इथेनॉल और आरएनएज़ विसंदूषण अभिकर्मक के साथ काले विच्छेदन व्यंजन साफ करें। क्षेत्र को सूखने की अनुमति देने के बाद, छह से आठ के बैचों में कुल 30 से 40 प्यूप को विच्छेदन करें। आंखों के मस्तिष्क परिसरों के प्रत्येक बैच के विच्छेदन के बाद, नौ अच्छी तरह से पकवान से आंख मस्तिष्क परिसरों को एक साफ विच्छेदन पकवान पर ताजा, बर्फ-ठंड, नाभिक मुक्त PBS के ४०० माइक्रोलीटर में स्थानांतरित करें, और एक मजबूत टंगस्टन सुई और एक ठीक रेजर ब्लेड का उपयोग करें ताकि प्रत्येक आंख को ऑप्टिक लोब से साफ-सुथरी रूप से काटा जा सके ।जब एक बैच के लिए आंखों के सभी हटा दिया गया है, उंहें एक बाँझ, RNase मुक्त microcentrife ट्यूब में स्थानांतरित, और फ्लैश-अगले बैच के लिए आगे बढ़ने से पहले तरल नाइट्रोजन में नमूनों फ्रीज । प्यूपल आई एक आसानी से सुलभ ऊतक है जो विकास प्रक्रियाओं की जांच के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल के रूप में कार्य करता है, जिसमें मॉर्फोजेनेसिस ड्राइव करना शामिल है। प्यूपरियम गठन के लगभग 40 घंटे बाद, कोशिकाओं की अंतिम व्यवस्था प्राप्त की जाती है।यह एक आदर्श युग है जिस पर एक आनुवंशिक उत्परिवर्तन या संशोधित जीन अभिव्यक्ति के परिणामों का आकलन करने के लिए है । उदाहरण के लिए, डायप 1 की एक्टोपिक अभिव्यक्ति का पालन करना, एपोप्टोसिस का एक मुख्य अवरोधक, इसके परिणामस्वरूप जाली कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि की तुलना नियंत्रण रेटिना में देखी गई की जा सकती है। एपॉप्टोसिस का आकलन मृत्यु कैस्पे-1 को सक्रिय करने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करके या मरने वाली कोशिकाओं का पता लगाने के लिए अन्य दृष्टिकोणों का उपयोग करके भी अधिक सीधे मूल्यांकन किया जा सकता है।आंखों के लहते के पश्चिमी दाग विश्लेषणों का उपयोग प्रोटीन की उपस्थिति या सापेक्ष अभिव्यक्ति को निर्धारित करने या विभिन्न विकासात्मक समय बिंदुओं पर प्रोटीन अभिव्यक्ति की तुलना करने के लिए किया जा सकता है। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि पर्याप्त उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए को अलग-थलग करने के लिए प्रति जीनोटाइप या प्रायोगिक स्थिति 60 से अधिक आंखों को विच्छेदन करना इष्टतम है। याद रखने वाली सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि प्यूपल रेटिना बेहद नाजुक है, और इसकी अखंडता सुनिश्चित करने के लिए इसके विच्छेदन के दौरान बहुत सावधानी बरती जानी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

Transcriptional विश्लेषण के लिए बड़े पैमाने पर Zebrafish भ्रूण दिल विच्छेदन

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

का लाइव-इमेजिंग<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; पोटा संबंधी नेत्र

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Periventricular वयस्क चूहे के क्षेत्र और मानव रीढ़ की हड्डी से तंत्रिका स्टेम / पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के अलगाव

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

A Rapid and Efficient Method to Dissect Pupal Wings of Drosophila Suitable for Immunodetections or PCR Assays

A Rapid and Efficient Method to Dissect Pupal Wings of Drosophila Suitable for Immunodetections or PCR Assays

Immunodetections या पीसीआर की परख के लिए उपयुक्त Drosophila के ुपाल पंखों को टुकड़े करने के लिए एक तीव्र और कुशल विधि

Wing development in Drosophila melanogaster is an ideal model for studying morphogenesis at tissue level. These appendages develop from a group of cells ...

Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

Correlative सुपर संकल्प और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी Zebrafish रेटिना में प्रोटीन स्थानीयकरण को हल करने के लिए

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

वयस्क Drosophila melanogaster दिमाग में मशरूम शरीर और Photoreceptor न्यूरॉन्स के विच्छेदन और Immunofluorescent धुंधला

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Dissection and Staining of Drosophila Pupal Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Pupal Ovaries

विच्छेदन और Drosophila Pupal अंडाशय के दाग

Unlike adult Drosophila ovaries, pupal ovaries are relatively difficult to access and examine due to their small size, translucence, and encasing within a ...

Thawing, Culturing, and Cryopreserving Drosophila Cell Lines

Thawing, Culturing, and Cryopreserving Drosophila Cell Lines

गल, Culturing, और Cryopreserving Drosophila सेल लाइनों

There are currently over 160 distinct Drosophila cell lines distributed by the Drosophila Genomics Resource Center (DGRC). With genome engineering, the ...

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

प्यूपल चरणों के दौरान विकासशील ड्रोसोफिला एपिथेलिया में ऊतक अभिविन्यास और विकास गतिशीलता का इमेजिंग और विश्लेषण

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A ...

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

लाइव, बरकरार ऊतक में सेल डिवीजन के विश्लेषण के लिए ड्रोसोफिला लार्वा और पुपल टेस्ट की तैयारी

Experimental analysis of cells dividing in living, intact tissues and organs is essential to our understanding of how cell division integrates with ...