Name: post-differentiation replating of human pluripotent stem cell-derived neurons for high-content screening of neuritogenesis and synapse maturation
Uploaded: 2019-08-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Post-differentiation Replating of Human Pluripotent Stem Cell-derived Neurons for High-content Screening of Neuritogenesis and Synapse Maturation at JoVE.com

עבודה זו היא מרכיב של קבוצות המחקר הלאומי הקואופרטיב תא שיתופיות (NCRCRG) ללמוד מחלות נפש נתמך על ידי NIH מענק U19MH1 2015-0644. העבודה הראשונית נתמכת גם על ידי NIH מענק NS070297. אנו מודים לד"ר קרול בלטו ופרד Gage, מכון סאלק, שסיפק את שורת ה-WT 126 של תאי הקדמון העצביים, ואת ד"ר יוג'ין יו ו לורנס גולדשטיין, UC בסן דייגו על מתן קו CVB WT24 של תאים מחולל קדמון עצבי. אנו מודים לדבורה Pre במעבדה של ד ר אן באנג, המכון לגילוי רפואי של סנפורד ברנהם, לדיונים שימושיים.

1. תקופת הבידול לפני ציפוי מחדש
<ol><li>להבדיל נוירונים על 10 ס מ מנות, באמצעות פרוטוקול של בחירה7,8 עד נוירונים יצרו רשת עבה עם התהליכים שלהם ומבטאים לא רק סמנים עצביים מוקדם כגון MAP2 או TuJ1, אלא גם סמנים מאוחר כגון neun.</li>
	<li>
שינוי חצי בינוני של הבחירה כל 4 ימים ב...

<ol>
	<li>Engel, M., Do-Ha, D., Munoz, S. S., Ooi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+pitfalls+of+stem+cell+differentiation:+a+guide+to+improving+protocols+for+neurodegenerative+disease+models+and+research.">Common pitfalls of stem cell differentiation: a guide to improving protocols for neurodegenerative disease models and research.</a> Cell and Molecular Life Sciences. 73 (19), 3693-3709 (2016).</li><li>Kim, D. S., Ross, P. J., Zaslavsky, K., Ellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+neuronal+differentiation+from+induced+pluripotent+stem+cells+to+model+ASD.">Optimizing neuronal differentiation from induced pluripotent stem cells to model ASD.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, 109 (2014).</li><li>Amin, N. D., Pa&#351;ca, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+Models+of+Brain+Disorders+with+Three-Dimensional+Organoids.">Building Models of Brain Disorders with Three-Dimensional Organoids.</a> Neuron. 100 (2), 389-405 (2018).</li><li>Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology.+Passaging+Cells.">Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. Passaging Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Langdon, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Cell Culture. , (2010).</li><li>Picot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human Cell Culture Protocols. 107, (2005).</li><li>Marchetto, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+neural+development+and+treatment+of+Rett+syndrome+using+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A model for neural development and treatment of Rett syndrome using human induced pluripotent stem cells.</a> Cell. 143 (4), 527-539 (2010).</li><li>Shi, Y., Kirwan, P., Livesey, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+cerebral+cortex+neurons+and+neural+networks.">Directed differentiation of human pluripotent stem cells to cerebral cortex neurons and neural networks.</a> Nature Protocols. 7 (10), 1836-1846 (2012).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developments+in+neuronal+cell+culture.">Developments in neuronal cell culture.</a> Nature. 336 (6195), 185-186 (1988).</li><li>Calabrese, B., Halpain, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+for+the+PKC+target+MARCKS+in+maintaining+dendritic+spine+morphology.">Essential role for the PKC target MARCKS in maintaining dendritic spine morphology.</a> Neuron. 48 (1), 77-90 (2005).</li><li>Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NeuN,+a+neuronal+specific+nuclear+protein+in+vertebrates.">NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates.</a> Development. 116 (1), 201-211 (1992).</li><li>Calabrese, B., Saffin, J. M., Halpain, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+shrinkage+and+growth+involve+downregulation+of+cofilin+via+distinct+mechanisms.">Activity-dependent dendritic spine shrinkage and growth involve downregulation of cofilin via distinct mechanisms.</a> PLOS One. 9 (4), 94787 (2014).</li><li>Carpenter, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellProfiler:+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes.">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biology. 7 (10), 100 (2006).</li><li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deriving+Dorsal+Spinal+Sensory+Interneurons+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Deriving Dorsal Spinal Sensory Interneurons from Human Pluripotent Stem Cells.</a> Stem Cell Reports. 10 (2), 390-405 (2018).</li><li>Ogura, T., Sakaguchi, H., Miyamoto, S., Takahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+induction+of+dorsal,+intermediate+and+ventral+spinal+cord+tissues+from+human+pluripotent+stem+cells.">Three-dimensional induction of dorsal, intermediate and ventral spinal cord tissues from human pluripotent stem cells.</a> Development. 145, (2018).</li><li>Playne, R., Jones, K., Connor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+dopamine+neuronal-like+cells+from+induced+neural+precursors+derived+from+adult+human+cells+by+non-viral+expression+of+lineage+factors.">Generation of dopamine neuronal-like cells from induced neural precursors derived from adult human cells by non-viral expression of lineage factors.</a> Journal of Stem Cells and Regenerative Medicine. 14 (1), 34-44 (2018).</li><li>Rao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illustrating+the+potency+of+current+Good+Manufacturing+Practice-compliant+induced+pluripotent+stem+cell+lines+as+a+source+of+multiple+cell+lineages+using+standardized+protocols.">Illustrating the potency of current Good Manufacturing Practice-compliant induced pluripotent stem cell lines as a source of multiple cell lineages using standardized protocols.</a> Cytotherapy. 20 (6), 861-872 (2018).</li><li>Suga, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+pluripotent+stem+cells+into+hypothalamic+and+pituitary+cells.">Differentiation of pluripotent stem cells into hypothalamic and pituitary cells.</a> Neuroendocrinology. 101 (1), 18-24 (2015).</li><li>Endaya, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+dividing+neural+and+brain+tumour+cells+for+gene+expression+profiling.">Isolating dividing neural and brain tumour cells for gene expression profiling.</a> Journal of Neuroscience Methods. 257, 121-133 (2016).</li><li>Sergent-Tanguy, S., Chagneau, C., Neveu, I., Naveilhan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+activated+cell+sorting+(FACS):+a+rapid+and+reliable+method+to+estimate+the+number+of+neurons+in+a+mixed+population.">Fluorescent activated cell sorting (FACS): a rapid and reliable method to estimate the number of neurons in a mixed population.</a> Journal of Neuroscience Methods. 129 (1), 73-79 (2003).</li><li>Frega, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Neuronal+Differentiation+of+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+for+Measuring+Network+Activity+on+Micro-electrode+Arrays.">Rapid Neuronal Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells for Measuring Network Activity on Micro-electrode Arrays.</a> Journal of Visualized Experiments. (119), e54900 (2017).</li><li>Grainger, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+Models+for+Seizure-Liability+Testing+Using+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">In vitro Models for Seizure-Liability Testing Using Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 590 (2018).</li><li>Daub, A., Sharma, P., Finkbeiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-content+screening+of+primary+neurons:+ready+for+prime+time.">High-content screening of primary neurons: ready for prime time.</a> Current Opinion in Neurobiology. 19 (5), 537-543 (2009).</li></ol>

הדגמנו הליך ישר קדימה עבור השעיה מחדש של התרבויות הנוירואליות האנושית הממוטב הכדאיות, בידול הצלחה, והדמיה subcellular באופן תואם פלטפורמות ההקרנה תוכן גבוה, ושאר הגורמים הרלוונטיים לגילוי הסמים. איור 6 ממחיש את זרימת העבודה הכוללת ודוגמאות ליישומים כאלה.
למרות ש...

תא גזע האדם בעוצמה מרבית (היפנוטית)-הנוירונים הנגזרים רלוונטיים יותר ויותר בתחומים של מחקר בסיסי, פיתוח סמים, ורפואה משובי. זרימות עבודה ופרוצדורות כדי לייעל את התרבות שלהם ואת התחזוקה, ולשפר את היעילות של בידול לתוך תת נוירואליות ספציפיים, מתפתחים במהירות1,2. כדי לשפר את השירות ואת עלות האפקטיביות של תאי גזע האדם הנגזרים הנוירונים כמו מערכות מודל הקלה לניתוח תוכן גבוה בגילוי סמים ואימות היעד, זה שימושי כדי להקטין את זמן culturing הנדרש כדי ליצור בוגרת, פונקציונלי נוירונים, תוך שמירה על החוסן המקסימלי, התוכסות, ו-פנוטיפ. למרות תרבויות תלת ממדיות אורגנואיד הם הנהיגה פריצות דרך במחקר נוירופיתוח מחקר3, 2-מימדי התרבויות תואמות במיוחד עם יישומים מבוססי הדמיה אוטומטית בשל עובי רקמת מינימלי שלהם.
עם זאת, הסתגלות של שיטות הסינון המבוססות על הדמיה למודלים של מחלה נוירולוגית ונוירו-התפתחותית של האדם פרצופים אתגר גדול. מפרקי הזמן הארוכים שבהם מערכת העצבים האנושית מתבשלה בvivo מחייבת הארכה של התרבות כדי להכיל תוכניות טבעיות של ביטוי גנים ולהשיג התבגרות עצבית.
אחת ההשלכות המעשיות של התוכנית הארוכה בידול עצבי הוא כי התחזוקה של תרבויות מונאולאייה הנגזרות חייב להיות מתמשך במשך שבועות רבים כדי להשיג בגרות סינפסה נאותה. בתקופה זו, הושלתי העצביים שנותרו מובחן ממשיכים להתחלק. אלה יכולים להגדיל במהירות את התרבות ולגזול את התוכן התזונתי הנדרש כדי לשמור על הנוירונים קיימא postmitotic. במרץ מחלק את התאים העצביים (NPCs) יכול גם להתחרות עם נוירונים עבור המצע הצמיחה. זה יכול להפוך את התרבויות כגון בעיות של הדבקה גרועה, מצב בלתי מתאים עבור הדמיה מבוססי assays אומר. יתר על כן, חוקרים רבים מוצאים כי נפח התרבות קטן יותר, הקושי לשמור על אוכלוסיות בריאות של נוירונים הבדיל מספיק זמן כדי להתבונן בשלבים המאוחרים של בידול עצבי. במילים אחרות, בחני התבגרות סינפסה באמצעות הקרנת תוכן גבוה (hcs) גישות יכול להיות מאוד מאתגר עבור נוירונים אנושיים נגזר.
כדי לעקוף כמה בעיות אלה, הליך של השעיית מחדש וציפוי מחדש שונות בעבר נוירונים הנגזרים הנגזרות השתמשו. ראשית, זה מאפשר את המחקר של neurite מוצלח (או, מדויק יותר, neurite התחדשות) באוכלוסייה של נוירונים מחויבים לחלוטין. שנית, את הציפוי של הנוירונים הבדיל בעבר מתבנית נפח גדול (כמו 10 לוחות ס"מ או גדול יותר), למטה לתבניות נפח קטן (כמו hcs תואם 96-או 384-ובכן מיקרוטיטר צלחות) מאפשר הפחתה משמעותית בזמן הכולל culturing ב המצב הקטן של אמצעי האחסון. זה מקל על המחקר של הרכבה סינפסה והתבגרות במשך השבועות הבאים בתוך מבחנה.
עם זאת, הציפוי של נוירונים בוגרים שכבר הקימו neurites ארוך ורשת קישוריות מורכבת מציג אתגרים מספר, אחד מהם הוא שיעור גבוה לפעמים משתנה של מוות תאים. כאן, אנו מתארים הליך מחדש שתוצאתו הישרדות תא מעולה והתוכסות. בדרך כלל, נוירונים חשופים אנזימים פרוטטרמין לתקופות דגירה קצר (בדרך כלל ~ 3-10 דקות) על מנת לנתק את התאים מן המצע לפני trituration. הזמן הקצר פרוטפוליזיס זה נוהג להשתמש עבור השעיית מחדש והפסמות סוגים רבים של תאים מפרידים, כולל תאים נוירוונונאליות מובחן ושלתי4,5,6. עם זאת, עבור נוירונים הבדיל הנושאת ארוך, neurites מחוברים, זה חיוני לא רק לנתק תאים מן המצע אלא גם לשבש את הרשת הדנדריטים ו סיבי כדי לבודד תאים בודדים תוך מזעור נזק. אכן, משעבוד עבה של נוירונים בדרך כלל נוטה להתנתק מהמצע כסדין אחד, ולא כתאים בודדים. אם הטיפול לא נלקח כדי לשחרר את הרשת עבה של neurites, נוירונים לא רק להיות ניזוק הפוך במהלך trituration, אבל רבים מהם לא לעבור דרך המסנן המשמש להסרת הגושים, וכתוצאה מכך התשואה התא המסכן. בהמשך אנו מתארים שינוי פשוט הליך הדגירה הנפוצה השימוש הפרוטאז לנגד הקשיים האלה.
בפרוטוקול המתואר להלן, הנוירונים מודבטים עבור 40-45 דקות עם פרוטאז קלה, כגון אנזים פרוטנוגד חרדה (למשל, Accutase). במהלך 5-10 הראשון מינימום לאחר הוספת האנזים, הרשת העצבית מרימה את המצע כגיליון. דגירה המשיכה הפרוטאז עבור 30-40 דקות נוספות לפני שתמשיך באמצעות נשחקו עדין וסינון. זמן דגירה נוסף זה מסייע להבטיח כי העיכול של החומר מרגיע את הרשת הבין-תאית, ובכך להבטיח כי הטריטורציה הבאה מייצרת השעיה של תאים בודדים. הליך זה מגדיל את אחידות התפלגות התאים בעת ציפוי מחדש תוך מזעור מוות התאים. החלתי בהצלחה את השיטה לציפוי מחדש לתרבויות הנוירואליות שנוצרו על ידי פרוטוקולי בידול שונים7,8 ומקווים שונים של hiPSCs. ההליך מתאים בעיקר לשימוש עם רוב או כל הקווים של תאי גזע נגזר הנגזרים. ראינו כי זמן דגירה מורחבת פרוטאז לא חיוני לחלוטין לציפוי תרבויות מלוחות בפורמט קטן (למשל, 35 מ"מ קוטר); עם זאת, כפי שאנו מראים כאן, הוא מספק יתרון משמעותי בעת ציפוי מחדש של צלחות בקוטר גדול (למשל, 10 ס"מ קוטר או גדול יותר), כנראה בגלל neurites בצלחות כאלה יכול להאריך תהליכים ארוכים מאוד וליצור מערך מחובר בצפיפות.
כאן אנו מדגימים שיטה זו ולהמחיש בקצרה את היישום שלה ב-asuritogenesis מוקדם ועבור התבגרות סינפסה, אשר כרוכה באשכולות של חלבונים טרום וסינפטית לאורך הדנדריטים ואקסונים, ואחריו מאוחר יותר לוקליזציה באתרי סינפטית. הדוגמאות מדגישות את היתרונות שפרוטוקול זה מציע בשימור הכדאיות של התאים והתוכסות. ראשית, היא מאפשרת לחוקרים ללמוד צעדים מוקדמים של האדם neuritogenesis. ההגדרה הניסיונית דומה התרבויות הראשיות בשימוש נפוץ של קליפת המוח מכרסם או נוירונים היפוקמאל, איפה התאים מופקים מאוחר או מוקדם לאחר לידה מוחית הלידה, התיר על ידי נשחקו לאחר טיפול פרוטאז עדין, ומותר ל ליזום neurites או להתחדש neurites שנותקו בהליך9,10. בדומה לנוירונים כאלה הראשי מכרסם, הנוירונים הנגזרים הנגזרות להתחיל טופס או לחדש neurites שלהם בתוך שעות לאחר הציפוי, המאפשר הדמיה של גביעי צמיחה ומורפולוגיה neurite בסביבה אופטימלית עבור הדמיה גבוהה זמן רקתית עם פחות תאים מובחן המקיפים. הבחנו כי neurite מוצלח מסונכרן יותר לעומת עיכובים משתנים שונים שיעורי מוצלח לראות כאשר הנוירונים הראשונים מתחילים להבדיל מאוכלוסיית הקדמון. בנוסף, ציפוי מחדש מאפשר בחני של נוירונים המבטא סמנים בעלי משנה עצביים בדרך כלל מופיעים בשלב מאוחר יותר בהתפתחות העצבית, כגון שכבת קליפת הביצה 5/6 שעתוק מקדם CTIP2 (עוף אובלבומין הזרם המקדם של שעתוק מיזם חלבון מקדם אינטראקציה 2), או הסמן הפאן-עצבי NeuN11. תכונה שימושית במיוחד של הגישה החוזרת היא כי synaptogenesis ההכנסות בתוך מסגרת זמן תואם HCS.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1076px;" width="1076">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Post Replating Media</td>
			<td style="width:276px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:377px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">L-Ascorbic Acid</td>
			<td style="width:276px;">Sigma</td>
			<td>A4403</td>
			<td>Add 1ml of 200mM stock to 1L of N2B27 media</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">dibutyryl-cAMP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0627</td>
			<td>Add 1 &#181;M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Human BDNF</td>
			<td style="width:276px;">Peprotech</td>
			<td style="width:119px;">450-02</td>
			<td>10 ng/ml final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">B27 (50X)</td>
			<td style="width:276px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">17504044</td>
			<td>Add 20 ml to 1L N2B27 media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">DMEM/F12 with Glutamax</td>
			<td style="width:276px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td>31331093</td>
			<td>Add N2 and distribute in 50 mL conicals; parafilm wrap lids</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Human GDNF</td>
			<td style="width:276px;">Peprotech</td>
			<td>450-10</td>
			<td>10 ng/ml final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Glutamax</td>
			<td style="width:276px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td>35050038</td>
			<td>Add 10 ml to 1L N2B27 media; glutamine supplement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Mouse Laminin</td>
			<td style="width:276px;">Sigma</td>
			<td>P3655-10mg</td>
			<td>Add 100 &#181;l to 50 mL N2B27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">MEM Nonessential Amino Acids</td>
			<td style="width:276px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11140035</td>
			<td>Add 5ml to 1L N2B27 media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">N2 (100X) Supplement</td>
			<td style="width:276px;">Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td>Add 5ml to 500mL media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Neurobasal A Media</td>
			<td style="width:276px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td>10888022</td>
			<td>Combine with DMEM/F12 to generate N2B27 media for CVB wt cells; neural basal A media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Neurobasal Media</td>
			<td style="width:276px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td>21103049</td>
			<td>for WT126 cells; neural basal media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">SM1 Supplement</td>
			<td style="width:276px;">StemCell Technologies</td>
			<td>5711</td>
			<td>Add 1:50 to media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:276px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td>25080-094</td>
			<td>Add 10ml to 1L N2B27 media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Plate Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">10cm Tissue Culture Dishes</td>
			<td style="width:276px;">Fisher Scientific</td>
			<td>08772-E</td>
			<td>Plastic TC-treated dishes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">6-well Tissue Culture Dishes</td>
			<td style="width:276px;">Thomas Scientific</td>
			<td>1194Y80</td>
			<td>NEST plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Mouse Laminin</td>
			<td style="width:276px;">Life Technologies</td>
			<td>23017-015</td>
			<td>Add 1:400 on plastic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Poly-Ornithine</td>
			<td style="width:276px;">Sigma</td>
			<td>P3655-10mg</td>
			<td>Add 1:1000 on plastic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">UltraPure Distilled Water</td>
			<td style="width:276px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10977-015</td>
			<td>To dilute Poly-L-Ornithine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Replating Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">100mM Cell Strainer</td>
			<td style="width:276px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">431752</td>
			<td>Sterile, individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">384-well plate, uncoated</td>
			<td style="width:276px;">PerkinElmer</td>
			<td>6007550</td>
			<td>Coat with PLO and Laminin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">DPBS</td>
			<td style="width:276px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">14190144</td>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Poly-D-Lysine-Precoated 384-well Plates</td>
			<td style="width:276px;">PerkinElmer</td>
			<td>6057500</td>
			<td>Rinse before coating with laminin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">StemPro Accutase</td>
			<td style="width:276px;">Life Technologies</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>Apply 1mL/10cm plate for 30-45 minutes; proteolytic enzyme</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Fixation Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">37% Formaldehyde</td>
			<td style="width:276px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F79-1</td>
			<td>Dissolved in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Sucrose</td>
			<td style="width:276px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S5-12</td>
			<td>0.8 g per 10 ml of fixative</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Immunostaining Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Alexa Fluor 488 Goat anti-mouse</td>
			<td style="width:276px;">Invitrogen</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Alexa Fluor 568 Goat anti-chicken</td>
			<td style="width:276px;">Invitrogen</td>
			<td>A-11041</td>
			<td>secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Alexa Fluor 647 Goat anti-chicken</td>
			<td style="width:276px;">Invitrogen</td>
			<td>A-21449</td>
			<td>secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Alexa Fluor 561 Goat anti-rat</td>
			<td style="width:276px;">Invitrogen</td>
			<td>A-11077</td>
			<td>secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">DAPI</td>
			<td style="width:276px;">Biotium</td>
			<td>40043</td>
			<td>visualizes DNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">mouse antibody against b3-tubulin (TuJ-1)</td>
			<td style="width:276px;">Neuromics</td>
			<td>MO15013</td>
			<td>early stage neuronal marker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">rat antibody against CTIP2</td>
			<td style="width:276px;">Abcam</td>
			<td>ab18465</td>
			<td>layer 5/6 cortical neurons</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">chicken antibody against MAP2</td>
			<td style="width:276px;">LifeSpan Biosciences</td>
			<td>LS-B290</td>
			<td>early stage neuronal marker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">chicken antibody against NeuN</td>
			<td style="width:276px;">Millipore</td>
			<td>ABN91</td>
			<td>late stage neuronal marker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">rabbit antibody against MAP2</td>
			<td style="width:276px;">Shelley Halpain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>early stage neuronal marker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">mouse antibody against PSD-95</td>
			<td style="width:276px;">Sigma</td>
			<td>P-246</td>
			<td>post-synaptic marker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">rabbit antibody against Synapsin 1</td>
			<td style="width:276px;">Millipore</td>
			<td>AB1543</td>
			<td>pre-synaptic marker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:276px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30574.02</td>
			<td>10% in PBS for blocking</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Titon X-100</td>
			<td style="width:276px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">9002931</td>
			<td>Dilute to 0.2% on PBS for permeabilization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Viability Markers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Vivafix 649/660</td>
			<td style="width:276px;">Biorad</td>
			<td style="width:119px;">135-1118</td>
			<td>cell death marker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Calcium Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:276px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AAV8-syn-jGCAMP7f-WPRE</td>
			<td>THE SALK INSTITUTE, GT3 Core Facility</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>calcium reporter in a viral delivery system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">hiPSC-derived NPCs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">WT 126 (Y2610)</td>
			<td style="width:276px;">Gage lab</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Marchetto et al., 2010</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">CVB WT24</td>
			<td style="width:276px;">Yeo and Goldstein labs</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>unpublished</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

post-differentiation replating of human pluripotent stem cell-derived neurons for high-content screening of neuritogenesis and synapse maturation

נוירונים הבדיל בתרבות דו מימדית מפני הגזע האנושי האנטי-עוצמה הנגזר של התאים (NPCs) מייצגים מערכת מודל רבת עוצמה כדי לחקור מנגנוני מחלות ולבצע הקרנת תוכן גבוה (HCS) כדי לחקור תרכובת ספריות או לזהות פנוטיפים מוטציה של גנים. עם זאת, עם התאים האנושיים המעבר NPC כדי פונקציונלי, בוגרת תא העצב דורש מספר שבועות. הסינפסות בדרך כלל להתחיל להיווצר לאחר 3 שבועות של בידול בתרבות דופלקס, ומספר חלבונים ספציפיים לעצב, למשל מאוחר יותר המבטא פאן-עצבי סמן neun, או השכבה 5/6 מוחין תא העצב הקליפת המוח סמן CTIP2, להתחיל לבטא סביב 4-5 שבועות לאחר בידול. זמן זה בידול ארוך יכול להיות בלתי תואם עם תנאי התרבות האופטימלית המשמש נפח קטן, multi-היטב פלטפורמות HCS. בין האתגרים הרבים הינם הצורך בתאים מבוזרים ומפוזרים בצורה אחידה עם אשכולות תאים מינימליים, והליכי תרבות המאומצים על הכדאיות ארוכת הטווח וההבשלה הפונקציונלית של הסינפסה. גישה אחת היא להבדיל נוירונים בפורמט גדול נפח, ואז לשחזר אותם בשלב מאוחר יותר ב HCS תואם multi-בארות. כמה אתגרים עיקריים כאשר משתמשים בגישה זו ציפוי מחדש מודאג הכדאיות ויכולת התאים, בשל שיבוש מלחיץ של רשת הדנדריטים והאקונאליות. כאן אנו מדגימים הליך מפורט ואמין עבור השעיית האדם המושרה בצורה מבחינה אנזיבית (היפנוטית)-נגזר הנוירונים לאחר הבידול שלהם עבור 4-8 שבועות בפורמט גדול של נפח, העברת אותם 384-היטב microtiter צלחות, ו culturing אותם לעוד 1-3 שבועות עם הישרדות תא מעולה. זה ציפוי מחדש של נוירונים אנושיים לא רק מאפשר את המחקר של הרכבה סינפסה בתוך שבועיים מחדש, אבל גם מאפשר מחקרים של התחדשות neurite ומאפיינים חרוט הצמיחה. אנו מספקים דוגמאות של asuritogenesis ו synaptogenesis באמצעות פלטפורמת 384-היטב.

הציפוי החוזר של הנוירונים הנגזרים מhiPSCs שהיו מובחנים במשך שבועות מרובים מציע מספר יתרונות. עם זאת, ניתוק וציפוי מחדש של הנוירונים הבדיל, כי יש ארוך, דנדטים מחוברים הדדית ו אקסונים (איור 1א) יכול לגרום לחלקיק גבוה של נוירונים פגומים הפיך פגום.
כפי שמתו?...

Watch this Scientific Journal Video about Post-differentiation Replating of Human Pluripotent Stem Cell-derived Neurons for High-content Screening of Neuritogenesis and Synapse Maturation at JoVE.com

Post-differentiation Replating of Human Pluripotent Stem Cell-derived Neurons for High-content Screening of Neuritogenesis and Synapse Maturation

פרוטוקול זה מתאר הליך מפורט עבור השעיית מחדש ו culturing תא גזע אנושי נגזר שהיו הבדיל בעבר מושלתי עצביים בתוך מבחנה במשך שבועות מרובים. ההליך מאפשר הדמיה מבוססי מבוסס על neurites, סינפסות, וסמנים מאוחר ביטוי עצבי בפורמט תואם עם מיקרוסקופ אור והקרנת תוכן גבוה.

לאחר בידול מחדש של תא גזע האדם Pluriפוטנטי-הנוירונים הנגזרים עבור הקרנת תוכן גבוה של Neuritogenesis והתבגרות סינפסה

Neurons differentiated in two-dimensional culture from human pluripotent stem-cell-derived neural progenitor cells (NPCs) represent a powerful model ...

פרוטוקול זה מקל על השימוש בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים עבור יישומי סינון תוכן גבוה. זה מתאים במיוחד עבור לתעתע סינפסות, אשר בנוירונים אנושיים דורשים תקופות תרבות ארוכות. אנו מדגימים את ההחזרה של נוירונים ממנות בפורמט גדול לתוך בארות מרובות תואמות HCS באופן המשמר את הכדאיות שלהם.בניגוד אינטואיטיבי, אנו מראים כי הרחבת דגירה פרוטאז לפני resuspending ו replating מניב הישרדות עצבית משופרת. תאי עצב אנושיים המופקים מתאי גזע פלוריפוטנטיים רלוונטיים יותר ויותר בתחומים של מחקר בסיסי, פיתוח תרופות ורפואה ניוונית. ניתן להשתמש בשיטת טיטורציה עדינה זו כדי לעכל מחדש כל שכבה מונו-שכבתית גדולה של תאים שיש להם רשת עבה של תהליכים.בנוסף iPSCs אנושי, זה יכול לשמש כדי להתגמש תרבות של נוירונים ראשוניים או כדי resuspend אותם עבור מיון עובדות או רצף תא יחיד. חשוב לעקוב אחר שלבי הפרוטוקולים בזהירות ולעתים קרובות לפקח על הניתוק מתווך פרוטאז של הנוירונים מהצלחת. זמן הדגירה האופטימלי עשוי להשתנות, בהתאם לתרבות.הדגמה חזותית מאפשרת אפילו לחוקרים לא מנוסים לשחזר הליך זה. התחל על ידי שטיפה עדין את הצלחת של נוירונים מובחנים עם PBS. לפזר את PBS במורד הקיר של הצלחת ולא ישירות על התאים, כדי למנוע שיבוש אותם.שאף את ה- PBS מקצה המנה תוך כדי הטיה, תוך כדי שהוא דואג לא לגעת בתאים. יש למרוח לפחות מיליליטר אחד של אנזים פרוטאוליטי לכל צלחת של 10 ס"מ. ולהחזיר את התאים לאנקובטור במשך 40 עד 45 דקות.במהלך הדגירה, לבדוק נוירונים על מיקרוסקופ ניגודיות בשלבים ולהמשיך את הטיפול פרוטאז עד הרשת העצבית מתנתק לחלוטין מהצלחת ומתחיל להתפרק. כאשר הנוירונים התנתקו, להפסיק את העיכול על ידי הוספת חמישה מיליליטר של מדיה DEMEM טרי עבור כל מיליליטר אחד של פרוטאז. השתמש פיפטה סרולוגית בעדינות titrate התאים נגד הצלחת חמש עד שמונה פעמים, הקפדה לא להחיל יותר מדי לחץ.מסננים את התאים דרך רשת של 100 מיקרומטר לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר, טיפה אחר טיפה. ולשטוף את מסננת עם חמישה מיליליטר נוספים של מדיה DMEM טרי. השתמש בצנטריפוגה ספסל העליון לסובב את התאים למטה ב 1000 פעמים G במשך חמש דקות.לאחר צנטריפוגה, להחזיר את הצינור חרוט לארון biosafety ושואף את רוב התקשורת, עוזב 250 microliters כדי לשמור על התאים לחים. בעדינות resuspend התאים בשני מיליליטר של מדיה DMEM טרי ואז להעביר אותם דרך הסוף של פיפטה סרולוגית חמישה מיליליטר. לבסוף, להפוך את הצינור פעמיים עד שלוש פעמים.השתמש בהמוציטומטר וכחול טריפן כדי לספור את התאים קיימא. ואז DMEM לריכוז הרצוי. הוסף תוספי תזונה מתאימים לצינור, בהתאם לדרישות של קו התא הספציפי בעדינות לערבב את התאים על ידי הטיית הצינור חרוט פעמיים עד שלוש פעמים.שאפו ציפוי למינין מצלחת של 24 באר ושטוף אותו פעם אחת עם PBS. שאף PBS. ולהחיל פתרון תא על כל באר בתנועה איור שמונה כדי למנוע גושים.בסיום ציפוי התאים, החזירו את הלוחית לאנקובטור שנקבע על 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני. בקצרה מערבולת פתרון המניות של כתב מוות התא מוקדם ולהוסיף אותו ל בארות על פי הוראות כתב היד. חכה 20 דקות.ואז תדמיין את התאים החיים והמתים על בארות מרובות תחתיות זכוכית. הארכת הדגירה פרוטאז מאפשר התרופפות של הרשת העצבית בתוך גיליון הרים של תאים. התוצאה היא מוות תאי מופחת בזמן הדיסוציאציה, כמו גם תוצאות התאוששות יעילה יותר בימים הבאים.באמצעות הליך הדגירה המורחב של האנזים, התרבויות מציגות הכפלה משוערת של הכדאיות התאית בימים שלאחר ההתחדשות וצפיפות נמוכה יותר של תאים מתים או גוססים. שלב המעבר של הבידול העצבי מתרחש במשך מספר ימים, שבמהלכם התאים מבטאים בהדרגה סמנים עצביים בשלב מאוחר. סמנים אלה מזוהים מיד בתרבויות שהתרבו לאחר ארבעה שבועות של התברואה מוקדמת.פרוטוקול הפרוטאז המורחב גם משפר במתינות את הצמיחה של הנוירידים. הן אורך neuride הכולל ואת הצמיחה דנדריט משופרים. Replating שימושי גם ללימוד סינפסות.שבוע בלבד לאחר ההצבה, נצפו סמנים לחלבונים לפני ואחרי הסינפטיה. יתר על כן, פעילות חשמלית של דפולריזציה ספונטנית וארמים מונעים סינפטית ניתנת לגילוי באמצעות הדמיית סידן או מערכים רב-חשמליים. הליך חזור זה יכול להיות מותאם לסוגים רבים של יישומים.בנוסף סינון תוכן גבוה כדי לזהות תרכובות טיפוליות פוטנציאליות, זה יכול לשמש הדמיה קונוסים צמיחה או הקלטות מערך multielectrode. דיסוציאציה מכנית של נוירונים שכבר יצרו תהליכים ארוכים היא מלחיצה. דגירה אנזימטית מוארכת וגירוי עדין של תאים הם צעדים חיוניים להצלחת הליך זה.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

גזירת יעיל של אבות עצב נוירונים האדם מן האדם תאים pluripotent גזע עובריים עם אינדוקציה מולקולה קטנה

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

המפרט של נוירונים glutamatergic Telencephalic מתאי גזע pluripotent אדם

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

דגמי Zika בנגיף של ה בפיתוח המוח האנושי במבחנה באמצעות תאי גזע נגזר Organoids מוחי

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

פיתוח assay על כימות תוכן גבוהה של היווצרות צבירה של מוטציה בחלבון Sod1 בתאים חיים

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Method for High Speed Stretch Injury of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Neurons in a 96-well Format

שיטת עבור מהירות גבוהה מתיחה פציעתו של האדם המושרה נוירונים נגזר תאי גזע Pluripotent בתבנית 96-ובכן

Traumatic brain injury (TBI) is a major clinical challenge with high morbidity and mortality. Despite decades of pre-clinical research, no proven ...

Compartmentalization of Human Stem Cell-Derived Neurons within Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips

מידור של תאי גזע האדם הנגזרים בתוך שבבי מיקרופלואידיג פלסטיק מורכבים מראש

Use of microfluidic devices to compartmentalize cultured neurons has become a standard method in neuroscience. This protocol shows how to use a ...

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

המרה של האדם המושרה Pluripotent תאי גזע (iPSCs) לתוך השדרה פונקציונלי והגולגולת נוירונים מוטוריים באמצעות שימוש בווקטורים הגולגולתית

We describe here a method to obtain functional spinal and cranial motor neurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Direct conversion into ...

Migration, Chemo-Attraction, and Co-Culture Assays for Human Stem Cell-Derived Endothelial Cells and GABAergic Neurons

הגירה, כימותרפיה-אטרקציה, ושיתוף התרבות Assays בשביל הגזע האנושי תאים הנגזרת האנדותל והנוירונים

Role of brain vasculature in nervous system development and etiology of brain disorders is increasingly gaining attention. Our recent studies have ...

Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia

ניתוח הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה בתאי גזע בעלי השפעה של האדם המושרה בנוירונים

Neurons have intense demands for high energy in order to support their functions. Impaired mitochondrial transport along axons has been observed in human ...

Generation of Human Neurons and Oligodendrocytes from Pluripotent Stem Cells for Modeling Neuron-Oligodendrocyte Interactions

יצירת נוירונים אנושיים ואוליגודנדרוציטים מתאי גזע פלוריפוטנטיים למידול אינטראקציות נוירון-אוליגודנדרוציטים

In Alzheimer&#8217;s disease (AD) and other neurodegenerative disorders, oligodendroglial failure is a common early pathological feature, but how it ...