Name: identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods
Uploaded: 2019-06-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Denne undersøgelse blev støttet af Fondi Ricerca di Ateneo (FRA) 2015-2016, University of Sannio.

1. immunoperoxidase-protokol
Bemærk: zebrafiskene blev fremstillet af Prof. Omid Safari (Department of Fisheries, Faculty of naturressourcer og miljø, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran)10.
<ol><li>Vævs dissektion
	<ol>
<li>Ofrer zebrafiskene ved nedsænkning i isvand (5 dele is/1 del vand, 4 °C); forlade dem, indtil ophør af alle bevægelser for at sikre døden ved hypoxi.</li>
		<li>Fjern hurtigt tarmen og hjernen med følgende disse...

Forberedelse af prøver
Prøveforberedelse er det første kritiske trin i IHC. En pålidelig protokol giver mulighed for vedligeholdelse af cellernes morfologi, vævs arkitektur og antigenicitet. Dette trin kræver korrekt vævs indsamling, fikse ring og skæring22,23. Formålet med fiksering er at bevare væv og reducere virkningen af vævs enzymer eller mikroorganismer. Fikserings trinnet bevarer især cellul?...

Immunohistochemistry (IHC) er en veletableret klassisk teknik, der anvendes til at identificere cellulære eller vævs komponenter (antigener) ved antigen-antistof interaktion1,2. Det kan bruges til at identificere lokalisering og distribution af målbiomolekyler i et væv. IHC anvender immunologiske og kemiske reaktioner til påvisning af antigener i vævs afsnit3. De vigtigste markører, der anvendes til visualisering af antigen-antistof interaktioner omfatter fluorescerende farvestoffer (immunofluorescens) og enzym-substrat farve reaktioner (immunoperoxidase), både konjugeret til antistoffer4. Brug af mikroskopisk observation er muligt at bestemme lokalisering af mærkede væv, som omtrent svarer til lokalisering af målantigen i vævet.
Der findes to metoder til fluorescerende eller kromogeniske reaktioner til påvisning af protein: den direkte påvisningsmetode, hvor det specifikke primære antistof er direkte mærket; og den indirekte detektionsmetode, hvor det primære antistof er ukonjugeret, mens det sekundære antistof bærer etiketten5,6,7. Den indirekte metode har nogle fordele, som primært er dens signal forstærkning. Desuden, i modsætning til andre molekylære og cellulære teknikker, med immunofluorescens, er det muligt at visualisere fordelingen, lokalisering, og coexpression af to eller flere proteiner differentielt udtrykt i celler og væv7. Valget af den detekterings metode, der anvendes, afhænger af eksperimentelle detaljer.
Til dato, IHC er meget udbredt i grundforskning som et kraftfuldt og vigtigt redskab til at forstå fordelingen og lokalisering af biomarkører og den generelle profilering af forskellige proteiner i biologisk væv fra humane til hvirvelløse dyr8, 9 ud af , 10 stk. , 11. teknikken hjælper med at vise et kort over protein ekspression i et stort antal normale og ændrede dyreorganer og forskellige vævstyper, der viser mulig ned-eller op-regulering af udtryk induceret af fysiologiske og patologiske ændringer. IHC er en meget følsom teknik, der kræver nøjagtighed og det korrekte valg af metoder for at opnå optimale resultater12. Først og fremmest kan mange forskellige faktorer, såsom fiksering, Cross-reaktivitet, antigen hentning, og følsomhed af antistoffer føre til falsk positive og falsk negative signaler13. Udvælgelsen af antistoffer er et af de vigtigste trin i IHC og afhænger af antigen specificiteten og dens affinitet til det protein og de arter, der er omfattet af undersøgelsen7.
For nylig har vi optimeret IHC teknik til at detektere medlemmer af orexin/hypocretin og endocannabinoide systemer i voksne: zebrafisk væv. Vi har primært fokuseret på fiksering, vævs integrering ved hjælp af to forskellige tilgange, skæring og montage (hvilket kan påvirke opløsningen og detaljerne under mikroskopisk analyse) og blokering (for at forhindre falsk positiver og reducere baggrunden)14. Andre vigtige karakteristika er antistof specificitet og selektivitet og reproducerbarhed af individuelle IHC-protokoller. Nøglen til at give antistof specificitet er brugen af negative kontroller (herunder ingen primære antistoffer eller væv, der vides ikke at udtrykke målproteinerne) samt positive kontroller (herunder væv, der er kendt for at udtrykke målproteinerne)15 . Udvælgelsen af antistoffer mod IHC sker på grundlag af deres Arts specificitet (sandsynligheden for, at de reagerer med det antigen, der er af interesse), og de antigen-antistof-bindings detektionssystemer, der anvendes4,5,6 ,7. I tilfælde af immunoperoxidase bestemmes reaktions farven ved valg af det udfællende kromogen, sædvanligvis diaminobenzidin (brun)16. På den anden side, jegmmunofluorescence udnytter antistoffer konjugeret med en fluorophor at visualisere protein udtryk i frosne væv sektioner og giver mulighed for nem analyse af flere proteiner i forhold til det kromogene detekteringssystem 5 ) i , 7. der er
I immunoperoxidaseteknikken er det sekundære antistof konjugeret til biotin, et linker-molekyle, der kan rekruttere et kromogen reporter molekyle [Avidin-biotin Complex (ABC)], hvilket fører til forstærkning af farvnings signalet. Med ABC reporter-metoden reagerer enzymet peroxidase med 3, 3 '-diaminobenzidin (DAB), hvilket producerer en intenst brunfarvet farvning, hvor enzymet binder sig til det sekundære antistof, som derefter kan analyseres med et almindeligt lysmikroskop. ABC farvning, på grund af den høje affinitet af begærlighed for biotin, producerer en hurtig og optimal reaktion, med få sekundære antistoffer knyttet til stedet for den primære antistof reaktivitet. Denne kromogene detektionsmetode giver mulighed for en densitometrisk analyse af signalet, der giver semi-kvantitative data baseret på korrelationen af brune signal niveauer med protein Expression niveauer18.
Med immunofluorescens teknikker er samtidig påvisning af flere proteiner mulig på grund af forskellige fluorchrominers evne til at udsende lys ved unikke bølgelængder, men det er vigtigt at vælge fluorokromer omhyggeligt for at minimere spektral overlap 5. Desuden minimerer brugen af primære antistoffer i forskellige værtsarter vanskeligheder med hensyn til kryds reaktivitet. I dette tilfælde genkender hvert artsspecifikt sekundært antistof kun én type primær antistof. Fluorescerende reportere er små organiske molekyler, herunder kommercielle derivater, såsom Alexa fluor farvestoffer.
Mange dyremodeller bruges til at forstå særlige fysiologiske og patologiske tilstande. Til dato er det fastslået, at mange metaboliske veje er bevaret i løbet af udviklingen. Derfor kan IHC-studier i modelorganismer såsom zebrafisk give indsigt i tilblivelsen og vedligeholdelsen af patologiske og ikke-patologiske tilstande17. Det er et formål med denne rapport at illustrere IHC protokoller, der kan udføres på voksne zebrafiske væv og anvendes til at opnå detaljerede billeder af distributionen og lokalisering af OXA, OX-2R, og CB1R på perifert og centralt niveau. Også rapporteret er protokoller for anvendelse af to store IHC indirekte metoder i perifert og centralt væv af voksne zebrafish. Beskrevet er den indirekte metode, som giver mulighed for signal forstærkning i tilfælde, hvor et sekundært antistof konjugeres til et fluorescerende farvestof (immunofluorescens metode) eller enzym reporter (immunoperoxidasemetode). Både kromogeniske og fluorescerende detekteringsmetoder besidder fordele og ulemper. Rapporteret i denne protokol er brugen af IHC, hovedsagelig immunofluorescens, i voksne zebrafisk, en dyremodel udbredte til at studere systemer, der er evolutionære bevaret på tværs af forskellige fysiologiske og patologiske betingelser.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti CB1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab23703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti OX-2R</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-OXA</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc8070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquatex</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1,085,620,050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated rabbit anti-goat</td>
			<td>Vector Lab</td>
			<td>BA-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>251275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse Ti2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DFC320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera for confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DS-Qi2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,821,330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen section compound</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>FSC 22 Frozen Section Media</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,252,290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>SK4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DMI6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>RM2125RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Rabbit Serum</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>S-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraffin wax</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>46793801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraphormaldeyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W302600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fluka Analytical</td>
			<td>93420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaStain Elite ABC Kit</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>PK6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene Pure</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>392603</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods

Immun histokemi (IHC) er en meget følsom og specifik teknik, der er involveret i påvisning af Target antigener i vævs sektioner med mærkede antistoffer. Det er en MultiStep proces, hvor optimering af hvert trin er afgørende for at opnå det optimale specifikke signal. Gennem IHC kan der påvises distribution og lokalisering af specifikke biomarkører, som afslører oplysninger om evolutionær bevaring. Desuden giver IHC mulighed for at forstå udtryks-og distributions ændringer af biomarkører under patologiske forhold, såsom fedme. IHC, hovedsagelig immunofluorescens teknik, kan anvendes i voksne zebrafisk til at detektere organiseringen og distributionen af phylogenerede molekyler, men en standard IHC-protokol er ikke estasblished. Orexin og endocannabinoide er to meget velbevaret systemer, der er involveret i kontrol af fødeindtagelse og fedme patologi. Rapporteret her er protokoller, der anvendes til at få oplysninger om orexin peptid (oxa), orexin receptor (Ox-2R), og cannabinoid receptor (CB1R) lokalisering og distribution i tarmen og hjernen af normale og kost-induceret fede (Dio) voksne: zebrafisk modeller. Også beskrevet er metoder til immunoperoxydaseteknik og dobbelt immunofluorescens, samt forberedelse af reagenser, fiksering, paraffin-indlejring, og kryoprotektion af zebrafiske væv og forberedelse til en endogen aktivitet-Blokering trin og baggrund modfarvning. Det komplette sæt af parametre er opnået fra tidligere IHC eksperimenter, hvorigennem vi har vist, hvordan immunofluorescens kan hjælpe med forståelsen af oxs, Ox-2R, og CB1R distribution, lokalisering, og bevaring af udtrykket i voksne: zebrafisk Væv. De resulterende billeder med meget specifik signalintensitet førte til bekræftelsen af, at zebrafisk er egnede dyremodeller til immunohistokemiske studier af distribution, lokalisering og evolutionær bevaring af specifikke biomarkører i fysiologiske og patologiske tilstande. De protokoller, der præsenteres her, anbefales til IHC-eksperimenter i voksne zebrafisk.

Repræsentative data for immunoperoxidasefarvningen er vist i figur 1 og figur 2. Immunohistokemisk analyse af Ox-a-og OX-2R-distributionen i tarmen hos voksne zebrafisk viste forskellige lokaliseringssteder for Ox-a og OX-2R og deres stigning i ekspression i tarmcellerne i Dio: zebrafisk. En intens brunfarvning for OX-A blev observeret i cellerne i den mediale og forreste tarm (figur 1a, A1). Den immunoexpression af OX-A...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods

Identifikation af orexin og Endocannabinoide receptorer hos voksne zebrafisk ved hjælp af Immunoperoxidase og immunofluorescens metoder

Præsenteret her er protokoller for immunhistokemiske karakterisering og lokalisering af orexin peptid, orexin receptorer, og endocannabinoide receptorer i tarmen og hjernen af normale og kost-induceret fedme (Dio) voksne: zebrafisk modeller ved hjælp af immunoperixidase og dobbelte immunofluorescens metoder.

Immunohistochemistry (IHC) is a highly sensitive and specific technique involved in the detection of target antigens in tissue sections with labeled ...

I øjeblikket anvendes immunohistokæmi med stigende hyppighed til at identificere tilstedeværelsen af specifikke molekylære markører og deres ændringer i tilfælde af patologier, hvilket giver rod til muligheden for at udføre kvantitativ analyse. Immunohistokæmi, hovedsagelig immunfluorescens teknik, anvendes i larve og den voksne zebrafisk dyremodel, men lidt er kendt om en god standard immunhistokistæmi protokol for zebrafisk. Her beskriver og illustrerer vi en protokol, der kan bruges til at studere den evolutionære bevarelse af vigtige proteiner i voksne zebrafisk.En god protokol for immunhistrookemi hos voksne zebrafisk kan bidrage til at ligge til grund for nytten af denne dyremodel til at studere det morfologiske udtryk og fordelingen af stærkt bevarede biomolekyler. Denne metode kan også bidrage til at analysere mulige ændringer af disse biomolekyler på grund af patologiske tilstande korreleret med human fysiopatologi. Demonstration af proceduren vil være Dr.Lea Tunisi, en ph.d.-studerende fra mit laboratorium.For at begynde denne procedure, overføre de forberedte frosne væv blokke til en kryostat på minus 20 grader Celsius. Skær blokken i koronale eller sagittale dele af 10 mikrometer. Derefter indsamles væv i alternative serielle sektioner på klæbende glasdias, der er egnet til immunhisekemi, og opbevar dem på minus 20 grader Celsius, indtil de er klar til at fortsætte.Brug først en opløsningsmiddelresistent pen til at afgrænse vævsområdet på diaset. Skyl sektionerne tre gange i fem minutter hver ved hjælp af 0,1-molar fosfat buffer. Dernæst opløses 0,3 milliliter Triton X-100 i 100 milliliter 0,1-molar fosfat buffer til at forberede Triton X-100 0,3% Opløse 0,1% normal æsel serum i fosfat buffer indeholder 0,3% Triton X-100 til at forberede blokerende opløsning.Inkuber sektionerne med opløsningen af normalt æselserum opløst i permeabiliseringsbuffer PB-Triton X-100 0,3% i 30 minutter ved stuetemperatur for at permeabilisere cellemembranen og blokere de uspecifikke bindingssteder. Skyl først sektionerne tre gange i fem minutter hver med 0,1-molar fosfatbuffer. Tilsæt blandingen af primære antistoffer fortyndet i PB-T, og inkubere sektionerne natten over i en fugtig kasse ved stuetemperatur.Dagen efter skylles sektionerne tre gange i fem minutter hver med 0,1-molar fosfat buffer. Inkuber sektioner ved stuetemperatur i to timer i en passende blanding af sekundære antistoffer fortyndet i PB-T. Til at begynde, skyl sektionerne tre gange i fem minutter hver med 0,1-molar fosfat buffer.1,5 mikroliter DAPI opløses i tre milliliter fosfatbuffer for at forberede det nukleare farvestof DAPI. Kontrastain sektionerne i farvestoffet. Brug derefter montering medium til coverslip dias til at stabilisere væv og pletten til langsigtet brug.Fluorescerende prøver kan opbevares i mørke ved fire grader Celsius. Gentag immunfluorescensprotokollen, og udelad enten det primære eller sekundære antistof, eller erstatning af det primære eller sekundære antiserum med fosfatbuffer for at forberede den negative kontrol. Gentag derefter immunfluorescensprotokollen, og forsorberes hvert primært antistof med et overskud af det relative peptid.Gentag immunfluorescensprotokollen på skiver af musehjernen for at forberede den positive kontrol. Ved hjælp af en konfokal mikroskop udstyret med en X-Y-Z motoriseret fase, et digitalt kamera, og erhvervelse og analyse software, observere og analysere immunstained sektioner. Ansk af digitale billeder med målene 5x, 20x og 40x.Tag billeder af hver sektion ved lav forstørrelse i hver af de tilgængelige kanaler for at komponere en montage med lav forstørrelse. Normaliser fluorescensbillederne til maksimal kontrast og overlejring. I hele interesseområdet skal du indsamle serielle Z-stakke af billeder gennem seks brændpunkter med fokale trin på en til 1,8 mikrometer.Udfør denne samling for hver kanal separat. Derefter skal du bruge billedbehandlingsdeconvolution-software til at dekonstruere billeder ved anvendelse af 10 gentagelser og skjule de serielle Z-planbilleder i et enkelt maksimalt projektionsbillede. Brug en passende billedredigeringssoftware til at justere mikrograferne for lys og kontrast.Immunohistokemisk analyse af OX-A og OX-2R fordeling i tarmen af voksne zebrafisk viser forskellige lokaliseringssteder af OX-A og OX-2R og deres stigninger i udtryk i tarmceller af DIO zebrafisk. En intens brun farvning for OX-A er observeret i cellerne i den mediale og forreste tarm. Immunekspressionen af OX-A giver klare signaler i de forskellige tarmrum, faldende fra den forreste mod den mediale tarm.Lignende resultater er observeret for OX-2R immunoexpression i tarmen af DIO og kontrol kost zebrafisk. Et øget OX-A signal i DIO voksen zebrafisk ledsages af overekspression af OX-2R i andre tarmrum. Nøjagtig analyse af immunfluorescerende billeder viser stigningen i OX-2R/CB1R colocalization i tarmen af DIO voksne zebrafisk i forhold til kontrol kost zebrafisk.En lignende situation er observeret i forskellige hjerneregioner, såsom dorsal telencephalon, hypothalamus, optisk tectum, torus lateralis, og diffus kerne af ringere lap. Ved dobbelt immunostaining med orexin-A og CB1R colocalization, bemærkes det, at der var en stigning i colocalization i orexinergic neuroner af hypothalamus, ledsaget af en stigning i orexin-A fluorescerende signal. Disse resultater viser, hvordan dobbelt immunfluorescens kan bidrage til at identificere fysiologisk bevaret proteinudtryk, colocalization af målproteiner og deres fordeling og/eller udtryksændringer i forskellige patologiske tilstande.Ved hjælp af immunfluorescens, kan vi bedre forstå codistribution og samekspression af biomolekyler, deres mulige interaktioner, og vi kan også have et synligt billede af deres ændringer i tilfælde af forskellige patologier. Desuden kan den neuroanatomiske fordeling af metaboliske enzymudtryk eller -receptorer yderligere afsløre proteinsignaleringens rolle i væv. Det nuværende tekniske arbejde introducerede immunfluorescenstilgangen for at studere to stærkt bevarede system, orexin og endocannabinoider, ved hjælp af en voksen zebrafiskmodel.Ved hjælp af denne protokol, der er beskrevet her for første gang i hjernen hos voksne zebrafisk, er den anatomiske fordeling og sameksistens af orexin-2-receptorer og endocannabinoide-CB1-receptorer ikke blevet bestemt. Vi anbefaler de protokoller, der er beskrevet her for immunhistrokemi eksperimenter og til at opdage rumlig distribution og organisering af receptorer i peptider i voksne zebrafisk til bedre at forstå deres funktioner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifikation af fedtsyrer i<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Identification of Plant Ice-binding Proteins Through Assessment of Ice-recrystallization Inhibition and Isolation Using Ice-affinity Purification

Identifikation af Plant Ice-bindende Proteiner Gennem Vurdering af Ice-omkrystallisation inhibering og isolering ved hjælp af is-affinitet Oprensning

Ice-binding proteins (IBPs) belong to a family of stress-induced proteins that are synthesized by certain organisms exposed to subzero temperatures. In ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Prøveforberedelse til massespektrometri-baseret identifikation af RNA-bindende regioner

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Identifikation af Havlampretten feromoner ved hjælp af Bioassay-styrede fraktionering

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Opsamling og identifikation af RNA-bindende proteiner ved hjælp af klik kemi-assisteret RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifikation af roman CK2 Kinase substrater ved hjælp af en alsidig biokemiske tilgang

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

Nitropeptid profilering og identifikation illustreret af angiotensin II

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-bindende enheder (SUBEs) som værktøjer til berigelse, isolation, identifikation og karakterisering af SUMO Proteome i leverkræft

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Profiling Ubiquitin and Ubiquitin-like Dependent Post-translational Modifications and Identification of Significant Alterations

Profilering af Ubiquitin og Ubiquitin-lignende afhængige posttranslationelle ændringer og identificering af væsentlige ændringer

Ubiquitin (ub) and ubiquitin-like (ubl) dependent post-translational modifications of proteins play fundamental biological regulatory roles within the ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

Visualisering af østrogenreceptorer i koloner af mus med TNBS-induceret Crohns sygdom ved hjælp af immunofluorescens

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...