Name: identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods
Uploaded: 2019-06-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Denne studien ble støttet av Fondi Ricerca di Ateneo (FRA) 2015-2016, Universitetet i Sannio.

1. Immunoperoxidase protokoll
Merk: sebrafisk ble innhentet av Prof Omid Safari (Department of Fisheries, Fakultet for naturressurser og miljø, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran)10.
<ol><li>Vev disseksjon
	<ol>
<li>Ofre sebrafisk ved å bli i isvann (5 deler is/1 del vann, 4 ° c); forlate dem til opphør av all bevegelse for å sikre død ved hypoksi.</li>
		<li>Fjern raskt tarmen og hjernen med følgende disseksjon metode:<ol>
<li>Tørk...

Eksempel på tilberedning
Forberedelse av prøver er det første kritiske trinnet i IHC. En pålitelig protokoll tillater vedlikehold av celle morfologi, vevs arkitektur og antigenisiteten. Dette trinnet krever riktig vevs oppsamling, fiksering og snitting22,23. Formålet med fiksering er å bevare vev og redusere virkningen av vev enzymer eller mikroorganismer. Spesielt bevarer fikserings trinnet cellulære kom...

Immunhistokjemi (IHC) er en veletablert klassisk teknikk som brukes for å identifisere cellulære eller vevs komponenter (antigener) ved antigen-antistoff interaksjon1,2. Den kan brukes til å identifisere lokalisering og distribusjon av målet biomolekyler innenfor en vev. IHC bruker immunologiske og kjemiske reaksjoner for å detektere antigener i vevs seksjoner3. De viktigste markører som brukes for visualisering av antigen-antistoff interaksjoner inkluderer fluorescerende fargestoffer (immunofluorescence) og enzym-substrat farge reaksjoner (immunoperoxidase), begge bøyd til antistoffer4. Ved hjelp av mikroskopisk observasjon er mulig å bestemme lokalisering av merket vev, som omtrent tilsvarer lokalisering av målet antigen i vevet.
Det finnes to metoder for fluorescerende eller kromogen reaksjoner for å påvise protein: direkte deteksjons metoden, der det spesifikke primære antistoff er direkte merket; og den indirekte deteksjons metoden, der det primære antistoff er unconjugated mens det sekundære antistoff bærer etiketten5,6,7. Den indirekte metoden har noen fordeler, som er hovedsakelig dens signal forsterkning. Videre, i motsetning til andre molekylære og cellulære teknikker, med immunofluorescence, er det mulig å visualisere fordelingen, lokalisering og coexpression av to eller flere proteiner differensielt uttrykt i celler og vev7. Valget av deteksjons metoden som brukes avhenger av eksperimentelle detaljer.
Hittil er IHC mye brukt i grunnleggende forskning som et kraftig og viktig verktøy for å forstå distribusjon og lokalisering av biomarkører og den generelle profilering av ulike proteiner i biologisk vev fra menneske til virvelløse dyr8, 9 andre priser , 10 andre , 11. teknikken bidrar til å vise et kart over protein uttrykk i et stort antall normale og endrede dyre organer og ulike vevstyper, viser mulig ned-eller opp-regulering av uttrykk indusert av fysiologiske og patologiske forandringer. IHC er en svært følsom teknikk som krever nøyaktighet og riktig valg av metoder for å oppnå optimale resultater12. Først av alt, mange forskjellige faktorer som fiksering, Cross-reaktivitet, antigen gjenfinning, og følsomhet for antistoffer kan føre til falske positive og falske negative signaler13. Valg av antistoffer er en av de viktigste trinnene i IHC og avhenger av antigen spesifisitet og dens affinitet til protein og arter under etterforskning7.
Nylig har vi optimalisert IHC teknikk for å oppdage medlemmer av orexin/hypocretin og endocannabinoid systemer i voksen sebrafisk vev. Vi har hovedsakelig fokusert på fiksering, vevs innebygging med to ulike tilnærminger, snitting og montering (som kan påvirke oppløsning og detaljer under mikroskopisk analyse), og blokkering (for å forhindre falske positiver og redusere bakgrunnen)14. Andre viktige egenskaper er antistoff spesifisitet og selektivitet og reproduserbarhet for individuelle IHC protokoller. Nøkkelen til å gi antistoff spesifisitet er bruken av negative kontroller (inkludert ingen primære antistoffer eller vev som er kjent for å ikke uttrykke målet proteiner) så vel som positive kontroller (inkludert vev som er kjent for å uttrykke målet proteiner)15 . Valget av antistoffer for IHC er gjort basert på deres arter-spesifisitet (sannsynligheten som de reagerer med antigen av interesse) og antigen-antistoff binding Detection systemer som brukes4,5,6 ,7. I tilfelle av immunoperoxidase, er fargen på reaksjonen bestemmes av valg av fremskynde kromogen, vanligvis diaminobenzidine (brun)16. På den andre side, jegmmunofluorescence utnytter Antistoffene bøyd med en fluorophor å visualisere protein gjengivelsen inne frosset tissue avdelinger og innrømmer for lett analyse av mangfoldig protein med hensyn til det kromogen oppdagelsen system 5 andre priser , 7i.
I immunoperoxidase teknikk, den sekundære antistoff er bøyd til biotin, en linker molekyl stand til å rekruttere en kromogen reporter molekyl [avidin-biotin kompleks (ABC)], som fører til forsterkning av fargesignalet. Med ABC reporter-metoden, reagerer enzymet peroksidase med 3, 3 '-diaminobenzidine (DAB), produserer en intenst brun-farget flekker der enzymet binder seg til den sekundære antistoff, som deretter kan analyseres med en vanlig lys mikroskop. ABC farging, på grunn av den høye affinitet av avidin for biotin, produserer en rask og optimal reaksjon, med få sekundære antistoffer knyttet til stedet for den primære antistoff reaktivitet. Denne kromogen gjenkjennings metoden tillater densitometric analyse av signalet, og gir semi-kvantitative data basert på korrelasjon av brune signal nivåer med protein uttrykk nivåer18.
Med immunofluorescence teknikker, er samtidig påvisning av flere proteiner mulig på grunn av evnen til forskjellige fluorokromer å avgi lys på unike bølgelengder, men er viktig å velge fluorokromer nøye for å minimere Spectral overlapping 5. i tillegg minimerer bruken av primære antistoffer i forskjellige verts arter vanskeligheter vedrørende kryss reaktivitet. I dette tilfellet gjenkjenner hvert Arts spesifikt sekundært antistoff bare én type primær antistoff. Fluorescerende journalister er små organiske molekyler, inkludert kommersielle derivater, for eksempel Alexa fluor fargestoffer.
Mange dyremodeller brukes til å forstå spesielle fysiologiske og patologiske tilstander. Hittil er det fastslått at mange metabolske trasé er bevart i løpet av utviklingen. Derfor kan IHC studier i modell organismer som sebrafisk gi innsikt i Genesis og vedlikehold av patologiske og ikke-patologiske tilstander17. Det er et mål for denne rapporten å illustrere IHC protokoller som kan utføres på voksen sebrafisk vev og brukes til å få detaljerte bilder av distribusjon og lokalisering av OXA, okse-2R, og CB1R på perifere og sentrale nivåer. Også rapportert er protokoller for anvendelse av to store IHC indirekte metoder i perifere og sentrale vev av voksne sebrafisk. Beskrevet er den indirekte metoden, som gir mulighet for signal forsterkning i tilfeller der et sekundært antistoff blir bøyd til et fluorescerende fargestoff (immunofluorescence metode) eller enzym reporter (immunoperoxidase metode). Både kromogen og fluorescerende deteksjonsmetoder besitter fordeler og ulemper. Rapportert i denne protokollen er bruk av IHC, hovedsakelig immunofluorescence, i voksen sebrafisk, en dyr modell mye brukt til å studere systemer som er evolusjonære bevart på tvers av ulike fysiologiske og patologiske forhold.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti CB1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab23703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti OX-2R</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-OXA</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc8070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquatex</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1,085,620,050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated rabbit anti-goat</td>
			<td>Vector Lab</td>
			<td>BA-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>251275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse Ti2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DFC320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera for confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DS-Qi2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,821,330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen section compound</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>FSC 22 Frozen Section Media</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,252,290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>SK4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DMI6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>RM2125RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Rabbit Serum</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>S-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraffin wax</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>46793801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraphormaldeyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W302600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fluka Analytical</td>
			<td>93420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaStain Elite ABC Kit</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>PK6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene Pure</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>392603</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods

Immunhistokjemi (IHC) er en svært følsom og spesifikk teknikk som er involvert i påvisning av mål antigener i vevs seksjoner med merket antistoffer. Det er en flertrinnsprosess der optimaliseringen av hvert trinn er avgjørende for å oppnå optimal bestemt signal. Gjennom IHC, distribusjon og lokalisering av spesifikke biomarkører kan oppdages, avslørende informasjon om evolusjonære bevaring. Videre tillater IHC for forståelsen av uttrykk og distribusjon endringer av biomarkører i patologiske tilstander, som fedme. IHC, hovedsakelig immunofluorescence teknikk, kan brukes i voksen sebrafisk for å oppdage organisering og distribusjon av phylogenetically bevarte molekyler, men en standard IHC protokoll er ikke estasblished. Orexin og endocannabinoid er to svært bevarte systemer involvert i kontroll av matinntak og fedme patologi. Rapportert her er protokoller som brukes til å innhente informasjon om orexin peptid (OXA), orexin reseptor (okse-2R), og cannabinoid reseptor (CB1R) lokalisering og distribusjon i tarmen og hjernen av normal og diett-indusert overvektige (DIO) voksen sebrafisk modeller. Også beskrevet er metoder for immunoperoxidase og dobbel immunofluorescence, samt utarbeidelse av reagenser, fiksering, parafin-embedding, og cryoprotection av sebrafisk vev og forberedelse til en endogene aktivitet-blokkering trinn og bakgrunn counterstaining. Det komplette sett av parametre er innhentet fra tidligere IHC eksperimenter, der vi har vist hvordan immunofluorescence kan hjelpe med forståelsen av OXs, okse-2R, og CB1R distribusjon, lokalisering og bevaring av uttrykk i voksen sebrafisk Vev. Det resulterer profilen med høylig spesifikk signal intensiteten smal avsats å bekreftelsen det sebrafisk er passende dyr modeller for immunhistokjemiske studier av distribusjon, lokaliseringen, og evolusjonær bevaring av spesifikk biomarkører inne fysiologiske og patologiske tilstander. Protokollene som presenteres her anbefales for IHC eksperimenter i voksen sebrafisk.

Representative data for immunoperoxidase flekker er vist i figur 1 og figur 2. Immunhistokjemiske analyse av OX-A og okse-2R distribusjon i tarmen av voksen sebrafisk viste ulike lokalisering steder av OX-A og okse-2R og deres øker i uttrykket i tarm celler av DIO sebrafisk. En intens brun farging for OX-A ble observert i cellene i midtre og fremre tarmen (figur 1a, A1). Immunoexpression av okse-A ga klare signaler i de ...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods

Identifisering av orexin og Endocannabinoid reseptorer i Adult sebrafisk bruke Immunoperoxidase og Immunofluorescence metoder

Presentert her er protokoller for immunhistokjemiske karakterisering og lokalisering av orexin peptid, orexin reseptorer, og endocannabinoid reseptorer i tarmen og hjernen av normal og diett-indusert fedme (DIO) voksen sebrafisk modeller ved hjelp immunoperixidase og doble immunofluorescence metoder.

Immunohistochemistry (IHC) is a highly sensitive and specific technique involved in the detection of target antigens in tissue sections with labeled ...

For tiden brukes immunohistokjemi med økende frekvens for å identifisere tilstedeværelsen av spesifikke molekylære markører og deres endringer i tilfelle patologier, noe som gir rot til muligheten til å utføre kvantitativ analyse. Immunohistochemistry, hovedsakelig immunofluorescence teknikken, brukes i larval og voksen sebrafisk dyr modell, men lite er kjent om en god standard immunohistochemistry protokoll for sebrafisk. Her beskriver og illustrerer vi en protokoll som kan brukes til å studere evolusjonær bevaring av viktige proteiner hos voksne sebrafisk.En god protokoll for immunohistochemistry hos voksen sebrafisk kan bidra til å til trosse nytten av denne dyremodellen for å studere morfologiske uttrykk og distribusjon av høyt bevarte biomolekyler. Denne metoden kan også bidra til å analysere mulige endringer av disse biomolekylene på grunn av patologiske forhold som er korrelert med menneskelig fysipatologi. Å demonstrere prosedyren vil være Dr.Lea Tunisi, en ph.d.-student fra laboratoriet mitt.For å begynne denne prosedyren, overfør de forberedte frosne vevsblokkene til en kryostat ved minus 20 grader Celsius. Klipp blokken i koronale eller sagittal seksjoner på 10 mikrometer. Deretter samler vevet i alternative serielle seksjoner på klebende glasssklier egnet for immunohistochemistry, og lagrer dem på minus 20 grader Celsius til de er klare til å fortsette.Bruk først en løsningsmiddelbestandig penn til å avgrense vevsområdet på lysbildet. Skyll seksjonene tre ganger i fem minutter hver ved hjelp av 0,1-molarfosfatbuffer. Oppløs deretter 0,3 milliliter Triton X-100 i 100 milliliter 0,1-molarfosfatbuffer for å forberede Triton X-100 0,3%Oppløs 0,1 % normalt eselserum i fosfatbuffer som inneholder 0,3 %Triton X-100 for å klargjøre blokkeringsløsningen.Inkuber seksjonene med løsningen av normalt eselserum oppløst i permeabiliseringsbuffer PB-Triton X-100 0,3% i 30 minutter ved romtemperatur for å gjennomsyre cellemembranen og blokkere de ikke-spesifikke bindingsstedene. Skyll først seksjonene tre ganger i fem minutter hver med 0,1-molarfosfatbuffer. Tilsett blandingen av primære antistoffer fortynnet i PB-T, og inkuber seksjonene over natten i en fuktig boks ved romtemperatur.Dagen etter, skyll seksjonene tre ganger i fem minutter hver med 0,1-molarfosfatbuffer. Inkuber seksjoner ved romtemperatur i to timer i en passende blanding av sekundære antistoffer fortynnet i PB-T. For å begynne, skyll seksjonene tre ganger i fem minutter hver med 0, 1-molarfosfatbuffer.Oppløs 1,5 mikroliter DAPI i tre milliliter fosfatbuffer for å forberede kjernefargen DAPI. Motvirke seksjonene i fargestoffet. Deretter bruker du monteringsmediet til å deksle lysbildene for å stabilisere vevet og flekken for langvarig bruk.Fluorescerende prøver kan lagres i mørket ved fire grader Celsius. Gjenta immunofluorescence protokollen, og enten utelate den primære eller sekundære antistoff, eller erstatte den primære eller sekundære antiserum med fosfat buffer for å forberede den negative kontrollen. Deretter gjentar du immunofluorescence-protokollen, og forhåndsabsorberer hvert primære antistoff med et overskudd av det relative peptidet.Gjenta immunofluorescence protokollen på skiver av mus hjernen for å forberede den positive kontrollen. Ved hjelp av et konfokal mikroskop utstyrt med et X-Y-Z motorisert stadium, et digitalt kamera og oppkjøps- og analyseprogramvare, observere og analysere de immunostede seksjonene. Skaff deg digitale bilder med målene 5x, 20x og 40x.Ta bilder av hver seksjon ved lav forstørrelse i hver av de tilgjengelige kanalene for å komponere en montasje med lav forstørrelse. Normaliser fluorescensbildene til maksimal kontrast og overlegg. Gjennom interesseområdet samler du serielle Z-stabler med bilder gjennom seks fokale fly med fokustrinn på ett til 1,8 mikrometer.Utfør denne samlingen for hver kanal separat. Etter dette bruker du bildebehandlingsprogramvaren til å dekonvolve bilder ved bruk av 10 iterasjoner, og skjul de serielle Z-plan-bildene til et enkelt maksimalt projeksjonsbilde. Bruk en passende bilderedigeringsprogramvare til å justere mikrografene for lys og kontrast.Immunohistokjemisk analyse av OX-A og OX-2R-distribusjon i tarmen av voksen sebrafisk viser forskjellige lokaliseringssteder for OX-A og OX-2R og deres økning i uttrykk i tarmcellene til DIO sebrafisk. En intens brun farging for OX-A observeres i cellene i mediale og fremre tarmen. Immunouttrykket av OX-A gir klare signaler i de forskjellige tarmrommene, og avtar fra fremre mot medial tarmen.Lignende resultater observeres for OX-2R immunuttrykk i tarmen av DIO og kontroll diett sebrafisk. Et økt OX-A-signal i DIO voksen sebrafisk er ledsaget av overuttrykk av OX-2R i andre tarmrom. Nøyaktig analyse av immunofluorescerende bilder viser økningen av OX-2R/CB1R colocalization i tarmen av DIO voksen sebrafisk sammenlignet med kontroll diett sebrafisk.En lignende situasjon observeres i forskjellige hjerneregioner, for eksempel den dorsale telencephalon, hypothalamus, optisk tectum, torus lateralis og diffus kjerne av den dårligere loben. Ved dobbel immunstaining med orexin-A og CB1R colocalization, er det observert at det var en økning av colocalization i orexinergiske nevroner av hypothalamus, ledsaget av en økning av orexin-A fluorescerende signal. Disse resultatene viser hvordan dobbel immunofluorescence kan bidra til å identifisere fysiologisk bevart proteinuttrykk, colocalization av målproteiner, og deres fordeling og / eller uttrykk endres i forskjellige patologiske forhold.Ved hjelp av immunofluorescence kan vi bedre forstå kodistribusjon og samtidiguttrykk av biomolekyler, deres mulige interaksjoner, og vi kan også ha et synlig bilde av deres endringer i tilfelle forskjellige patologier. Videre kan den nevroanatomiske fordelingen av metabolsk enzymuttrykk eller reseptorer ytterligere avsløre rollen som proteinsignalering i vev. Det nåværende tekniske arbeidet introduserte immunofluorescence tilnærming til å studere to svært konservert system, orexin og endocannabinoids, ved hjelp av en voksen sebrafisk modell.Ved hjelp av denne protokollen beskrevet her for første gang i hjernen til voksen sebrafisk, er den anatomiske fordelingen og sameksresjonen av orexin-2 reseptorer og endocannabinoid-CB1-reseptorene ikke bestemt. Vi anbefaler protokollene som er beskrevet her for immunohistokjemieksperimenter og å oppdage romlig distribusjon og organisering av reseptorer i peptider hos voksne sebrafisk for å bedre forstå deres funksjoner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifisering av fettsyrer i<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Identification of Plant Ice-binding Proteins Through Assessment of Ice-recrystallization Inhibition and Isolation Using Ice-affinity Purification

Identifisering av Plant is-bindende proteiner ved å bedømme is-rekrystallisasjon inhibering og isolering ved bruk av is-affinitetsrensing

Ice-binding proteins (IBPs) belong to a family of stress-induced proteins that are synthesized by certain organisms exposed to subzero temperatures. In ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Eksempel forberedelse til masse massespektrometri-baserte identifikasjon av RNA-bindende områder

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Identifikasjon av havet Lamprey feromoner bruker Bioassay-guidede fraksjoneres

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Fangst og identifikasjon av RNA-bindende proteiner ved hjelp av Klikk kjemi-assistert RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifikasjon av romanen CK2 Kinase underlag med en allsidig biokjemiske tilnærming

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

Nitropeptide profilering og identifisering illustrert av angiotensin II

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-bindende enheter (SUBEs) som verktøy for berikelse, isolasjon, identifisering og karakterisering av SUMO proteom i leverkreft

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Profiling Ubiquitin and Ubiquitin-like Dependent Post-translational Modifications and Identification of Significant Alterations

Profilering Ubiquitin og Ubiquitin-lignende avhengige post-translational modifikasjoner og identifisering av vesentlige endringer

Ubiquitin (ub) and ubiquitin-like (ubl) dependent post-translational modifications of proteins play fundamental biological regulatory roles within the ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

Visualisering av østrogenreseptorer i kolon av mus med TNBS-indusert Crohns sykdom ved hjelp av immunofluorescens

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...