Name: identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods
Uploaded: 2019-06-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Denna studie stöddes av Fondi ricerca di Ateneo (FRA) 2015-2016, University of Sannio.

1. immunoperoxidasprotokoll
Obs: den zebra fiskar erhölls av prof. Omid Safari (Institutionen för fiske, fakulteten för naturresurser och miljö, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran)10.
<ol><li>Vävnad dissektion
	<ol>
<li>Offra zebra fiskar genom nedsänkning i isvatten (5 delar is/1 del vatten, 4 ° c); lämna dem tills alla rörelser har upphört för att säkerställa döden genom hypoxi.</li>
		<li>Snabbt ta bort tarmen och hjärnan ...

Prov beredning
Prov beredning är det första kritiska steget i IHC. Ett tillförlitligt protokoll möjliggör underhåll av Cellmorfologi, vävnads arkitektur och antigenicitet. Detta steg kräver korrekt vävnads uppsamling, fixering och snittning22,23. Syftet med fixering är att bevara vävnad och minska effekten av vävnads enzymer eller mikroorganismer. I synnerhet bevarar fixeringssteget cellulära kompon...

Immunhistokemi (IHC) är en väletablerad klassisk teknik som används för att identifiera cellulära eller vävnads komponenter (antigener) genom antigen-antikroppsinteraktion1,2. Den kan användas för att identifiera lokalisering och distribution av målbiomoleculer inom en vävnad. IHC använder immunologiska och kemiska reaktioner för att detektera antigener i vävnads avsnitt3. De viktigaste markörer som används för visualisering av antigen-antikroppinteraktioner inkluderar fluorescerande färg ämnen (immunofluorescens) och enzym-substrat färg reaktioner (immunoperoxidas), båda konjugerade till anti kroppar4. Med hjälp av mikroskopisk observation är möjligt att bestämma lokalisering av märkt vävnad, som ungefär motsvarar lokalisering av målet antigen i vävnaden.
Det finns två metoder för fluorescerande eller kromogena reaktioner för att detektera protein: den direkta detektions metoden, där den specifika primära anti kroppen är direkt märkt; och den indirekta detektions metoden, där den primära anti kroppen är okonjugerad medan den sekundära anti kroppen bär etiketten5,6,7. Den indirekta metoden har några fördelar, som är främst dess signalamplifiering. Dessutom, till skillnad från andra molekyl ära och cellulära tekniker, med immunofluorescens, är det möjligt att visualisera distribution, lokalisering och kouttryck av två eller flera proteiner differentially uttrycks i celler och vävnader7. Valet av vilken detektions metod som används beror på experimentella detaljer.
Hittills är IHC allmänt används i grund forskning som ett kraftfullt och viktigt verktyg för att förstå distribution och lokalisering av bio markörer och den allmänna profilering av olika proteiner i biologisk vävnad från människa till ryggradslösa djur8, 9 för att , 10 , 11. tekniken hjälper till att visa en karta över protein uttryck i ett stort antal normala och förändrade djur organ och olika vävnads typer, som visar möjlig ned-eller uppreglering av uttryck som induceras av fysiologiska och patologiska förändringar. IHC är en mycket känslig teknik som kräver noggrannhet och rätt val av metoder för att uppnå optimala resultat12. Först av allt, många olika faktorer såsom fixering, cross-reaktivitet, antigen hämtning, och känslighet av anti kroppar kan leda till falskt positiva och falska negativa signaler13. Val av anti kroppar är ett av de viktigaste stegen i IHC och beror på antigen specificitet och dess affinitet till proteinet och arten under utredning7.
Nyligen har vi optimerat IHC teknik för att upptäcka medlemmar av Orexin/hypokretin och endocannabinoida system i vuxen zebra fiskar vävnad. Vi har främst fokuserat på fixering, vävnad inbäddning med två olika metoder, snittning och montering (som kan påverka upplösning och Detaljer under Mikroskopisk analys), och blockering (för att förhindra falska positiva och minska bakgrunden)14. Andra viktiga egenskaper är anti kroppspecificiteten och selektiviteten och reproducerbarheten hos enskilda IHC-protokoll. Nyckeln till att ge anti kropps specificitet är användningen av negativa kontroller (inklusive inga primära anti kroppar eller vävnad som är kända för att inte uttrycka mål proteiner) samt positiva kontroller (inklusive vävnad som är kända för att uttrycka mål proteiner)15 . Valet av anti kroppar mot IHC görs på grund val av deras artspecificitet (sannolikheten för att de reagerar med antigen av intresse) och de antigen-antikroppbindningssystem som används4,5,6 ,7. När det gäller immunoperoxidas bestäms färgen på reaktionen genom selektion av den utfällande kromogenen, vanligt vis diaminobenzidin (brun)16. Å andra sidan, jagmmunofluorescence använder anti kroppar konjugerade med en fluorophor att visualisera protein uttryck i frysta vävnad sektioner och möjliggör enkel analys av flera proteiner med avseende på kromogena detektions systemet 5 den femte , och 7.
I immunoperoxidastekniken konjugeras den sekundära anti kroppen med biotin, en linkermolekyl som kan rekrytera en kromogen reporter molekyl [avidin-biotin Complex (ABC)], vilket leder till förstärkning av infärgnings signalen. Med ABC reporter metod, reagerar enzymet peroxidas med 3, 3 '-diaminobenzidine (DAB), producerar en intensivt brunfärgad färgning där enzymet binder till den sekundära anti kroppen, som sedan kan analyseras med en vanlig ljus Mikroskop. ABC-färgning, på grund av den höga affinitet av avidinen för Biotin, ger en snabb och optimal reaktion, med några sekundära anti kroppar som är knutna till platsen för den primära anti kropps reaktiviteten. Denna kromogena detektions metod möjliggör Densitometrisk analys av signalen, vilket ger semi-kvantitativa data baserat på sambandet mellan bruna signal nivåer och protein uttrycks nivåer18.
Med immunofluorescensteknik är samtidig detektion av multipla proteiner möjlig på grund av olika fluorchromes förmåga att avge ljus vid unika våg längder, men det är viktigt att noggrant välja fluorokromer för att minimera spektralöverlappning 5. Dessutom minimerar användningen av primära anti kroppar hos olika värd arter svårigheterna när det gäller kors reaktivitet. I detta fall identifierar varje artspecifik sekundär anti kropp endast en typ av primär anti kropp. Fluorescerande reportrar är små organiska molekyler, inklusive kommersiella derivat, såsom Alexa fluor färg ämnen.
Många djur modeller används för att förstå särskilda fysiologiska och sjukdoms tillstånd. Hittills är det fastställt att många metaboliska vägar bevaras under evolutionens gång. Därför kan IHC-studier i modellorganismer som zebra fisk ge insikt i uppkomsten och upprätthållandet av patologiska och icke-patologiska villkor17. Det är ett syfte med denna rapport att illustrera IHC protokoll som kan utföras på vuxna zebra fiskar vävnad och används för att få detaljerade bilder av distribution och lokalisering av Oxa, ox-2R, och CB1R på perifera och centrala nivåer. Också rapporter ATS är protokoll för tillämpning av två stora IHC indirekta metoder i perifera och centrala vävnader av vuxna Zebrafish. Beskrivs är den indirekta metoden, som möjliggör signalamplifiering i fall där en sekundär anti kropp konjugeras till ett fluorescerande färg ämne (immunofluorescens metod) eller enzym reporter (immunoperoxidasmetoden). Både kromogena och fluorescerande detektions metoder besitter fördelar och nack delar. Rapporterat i detta protokoll är användningen av IHC, främst immunofluorescens, i vuxen Zebrafish, en djur modell som ofta används för att studera system som är evolutionär bevaras över olika fysiologiska och patologiska förhållanden.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti CB1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab23703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti OX-2R</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-OXA</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc8070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquatex</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1,085,620,050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated rabbit anti-goat</td>
			<td>Vector Lab</td>
			<td>BA-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>251275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse Ti2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DFC320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera for confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DS-Qi2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,821,330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen section compound</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>FSC 22 Frozen Section Media</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,252,290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>SK4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DMI6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>RM2125RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Rabbit Serum</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>S-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraffin wax</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>46793801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraphormaldeyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W302600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fluka Analytical</td>
			<td>93420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaStain Elite ABC Kit</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>PK6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene Pure</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>392603</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods

Immunhistokemi (IHC) är en mycket känslig och specifik teknik som är involverad i upptäckten av mål antigener i vävnads sektioner med märkta anti kroppar. Det är en process i flera steg där optimeringen av varje steg är avgörande för att få den optimala specifika signalen. Genom IHC kan distributionen och lokaliseringen av specifika bio markörer upptäckas, vilket avslöjar information om evolutionärt bevarande. Dessutom möjliggör IHC förståelsen av förändringar i uttryck och distribution av bio markörer vid sjukdoms tillstånd, såsom fetma. IHC, främst immunofluorescens teknik, kan användas i vuxen zebra fiskar att upptäcka organisation och distribution av fylogenetiskt bevarade molekyler, men en standard IHC-protokollet är inte estasblished. Orexin och endocannabinoida är två mycket bevarade system som deltar i kontrollen av födo intag och fetma patologi. Rapporterade här är protokoll som används för att få information om Orexin peptid (OXA), Orexin receptor (OX-2R), och cannabinoid receptor (CB1R) lokalisering och distribution i tarmen och hjärnan av normal och diet-inducerad feta (DIO) vuxen zebra fisk modeller. Dessutom beskrivs metoder för immunoperoxidas och dubbel immunofluorescens, samt beredning av reagenser, fixering, paraffin-inbäddning, och krysskydd av zebra fiskar vävnad och förberedelse för ett endogent aktivitet-blockerande steg och bakgrund motfärgning. Den kompletta uppsättningen parametrar erhålls från tidigare IHC experiment, genom vilka vi har visat hur immunofluorescens kan hjälpa till med förståelsen av OXS, ox-2R, och CB1R distribution, lokalisering, och bevarande av uttryck i vuxen zebra fiskar Vävnader. De resulterande bilderna med mycket specifik signalintensitet ledde till bekräftelsen att zebra fiskar är lämpliga djur modeller för immunhistokemiska studier av distribution, lokalisering och evolutionärt bevarande av specifika bio markörer i fysiologiska och patologiska tillstånd. De protokoll som presenteras här rekommenderas för IHC experiment i vuxen Zebrafish.

Representativa data för immunoperoxidasfärgning visas i figur 1 och figur 2. Immunohistokemisk analys av ox-a och OX-2R distribution i tarmen av vuxna zebra fiskar visade olika lokaliserings platser av ox-a och OX-2R och deras ökningar i uttryck i tarm cellerna i Dio zebra fiskar. En intensiv brun färgning för OX-A observerades i cellerna i den mediala och främre tarmen (figur 1a, en1). Den immunoexpression av OX-A ...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods

Identifiering av Orexin och Endocannabinoid receptorer hos vuxna zebra fiskar med Immunoperoxidas och immunofluorescens metoder

Presenteras här är protokoll för immunhistokemisk karakterisering och lokalisering av Orexin peptid, Orexin receptorer, och endocannabinoida receptorer i tarmen och hjärnor normala och kost-inducerad fetma (DIO) vuxna zebra fisk modeller med immunoperixidas och dubbla immunofluorescens-metoder.

Immunohistochemistry (IHC) is a highly sensitive and specific technique involved in the detection of target antigens in tissue sections with labeled ...

För närvarande används immunohistokemi med ökande frekvens för att identifiera förekomsten av specifika molekylära markörer och deras förändringar vid patologier, vilket ger rot åt möjligheten att utföra kvantitativ analys. Immunohistokemi, främst immunofluorescens tekniken, används i larven och den vuxna zebrafisk djurmodell, men lite är känt om en bra standard immunohistokemi protokoll för zebrafish. Här beskriver och illustrerar vi ett protokoll som kan användas för att studera det evolutionära bevarandet av viktiga proteiner hos vuxna zebrafiskar.Ett bra protokoll för immunohistokemi i vuxna zebrafiskar kan bidra till att understiga nyttan av denna djurmodell för att studera morfologiska uttryck och fördelning av mycket bevarade biomolekyler. Denna metod kan också bidra till att analysera eventuella förändringar av dessa biomolekyler på grund av patologiska förhållanden korrelerade till human physiopathology. Demonstrera förfarandet kommer att Dr.Lea Tunisi, en doktorand från mitt laboratorium.För att påbörja detta förfarande, överför de beredda frysta vävnadsblocken till en kryostat vid minus 20 grader Celsius. Skär blocket i koronal eller sagittal sektioner av 10 mikrometer. Samla sedan vävnaderna i alternativa seriesektioner på självhäftande glasrutschbanor som lämpar sig för immunohistokemi och förvara dem på minus 20 grader Celsius tills de är redo att fortsätta.Använd först en lösningsmedelsresistent penna för att avgränsa vävnadsområdet på objektglaset. Skölj sektionerna tre gånger i fem minuter vardera med 0,1-molar fosfat buffert. Därefter lös 0,3 milliliter Triton X-100 i 100 milliliter 0,1-molar fosfatbuffert för att förbereda Triton X-100 0,3%Lös upp 0,1%normal åsneserum i fosfatbuffert som innehåller 0,3%Triton X-100 för att förbereda blockeringslösningen.Inkubera sektionerna med lösningen av normalt åsneserum upplöst i permeabiliseringsbuffert PB-Triton X-100 0,3%i 30 minuter vid rumstemperatur för att permeabilisera cellmembranet och blockera de ospecifika bindningsställena. Först skölj sektionerna tre gånger i fem minuter vardera med 0,1-molar fosfat buffert. Tillsätt blandningen av primära antikroppar utspädda i PB-T, och inkubera sektionerna över natten i en fuktig låda vid rumstemperatur.Dagen efter, skölj sektionerna tre gånger i fem minuter vardera med 0,1-molar fosfat buffert. Inkubera sektioner i rumstemperatur i två timmar i en lämplig blandning av sekundära antikroppar utspädda i PB-T. Till att börja skölj sektionerna tre gånger i fem minuter vardera med 0,1-molar fosfat buffert.Lös upp 1,5 mikroliter dapi i tre milliliter fosfatbuffert för att förbereda kärnfärgen DAPI. Counterstain sektionerna i färgämnet. Sedan, använd montering medium för att täckerlip bilderna för att stabilisera vävnaden och fläcken för långsiktig användning.Fluorescerande prover kan förvaras i mörker vid fyra grader Celsius. Upprepa immunofluorescensprotokollet, och utelämna antingen den primära eller sekundära antikroppen, eller ersätta det primära eller sekundära antiserumet med fosfatbuffert för att förbereda den negativa kontrollen. Därefter upprepa immunofluorescensprotokollet, och pre-absorbera varje primär antikropp med ett överskott av den relativa peptiden.Upprepa immunofluorescensprotokollet på skivor av mushjärnan för att förbereda den positiva kontrollen. Med hjälp av ett konfokalmikroskop utrustat med en X-Y-Z-motoriserad scen, en digitalkamera och förvärvs- och analysprogramvara, observerar och analyserar de immunstainerade sektionerna. Skaffa digitala bilder med 5x, 20x och 40x mål.Ta bilder av varje sektion vid låg förstoring i var och en av de tillgängliga kanalerna för att komponera ett montage med låg förstoring. Normalisera fluorescensbilderna till maximal kontrast och överlagring. Inom hela området av intresse, samla in seriella Z-högar av bilder genom sex fokalplan med fokala steg på en till 1,8 mikrometer.Utför den här samlingen för varje kanal separat. Efter detta, använda imaging deconvolution programvara för att deconvolve bilder genom tillämpning av 10 iterationer, och komprimera den seriella Z-plan bilder i en enda maximal projektion bild. Använd ett lämpligt bildredigeringsprogram för att justera mikrograferna för ljus och kontrast.Immunohistochemical analys av OX-A och OX-2R fördelning i tarmen av vuxna zebrafish visar olika lokalisering platser av OX-A och OX-2R och deras ökningar i uttryck i tarmcellerna av DIO zebrafish. En intensiv brun färgning för OX-A observeras i cellerna i den mediala och främre tarmen. Immunoexpressionen av OX-A ger tydliga signaler i de olika tarmfacken, som minskar från främre mot den mediala tarmen.Liknande resultat observeras för OX-2R-immunoexpression i tarmen av DIO och kontroll diet zebrafisk. En ökad OX-A signal i DIO vuxna zebrafisk åtföljs av överuttryck av OX-2R i andra tarmfack. Noggrann analys av immunofluorescerande bilder visar ökningen av OX-2R/CB1R colocalization i tarmen av DIO vuxna zebrafish jämfört med kontroll diet zebrafish.En liknande situation observeras i olika hjärnregioner, såsom den dorsala telencephalon, hypotalamus, optik tectum, torus lateralis, och diffusa kärnan i sämre lob. Genom dubbel immunostaining med orexin-A och CB1R colocalization, observeras att det fanns en ökning av colocalization i orexinergic nervcellerna i hypotalamus, åtföljs av en ökning av orexin-A fluorescerande signal. Dessa resultat visar hur dubbel immunofluorescens kan bidra till att identifiera fysiologiskt bevarade proteinuttryck, colocalization av målproteiner, och deras fördelning och/eller uttrycksförändringar i olika patologiska tillstånd.Med hjälp av immunofluorescens kan vi bättre förstå kodistribution och coexpression av biomolekyler, deras möjliga interaktioner, och vi kan också ha en synlig bild av deras förändringar vid olika patologier. Dessutom kan den neuroanatomiska fördelningen av metaboliska enzymuttryck eller receptorer ytterligare avslöja rollen av proteinsignalering inom vävnader. Det nuvarande tekniska arbetet introducerade immunofluorescens metoden att studera två mycket bevarade system, orexin och endocannabinoider, i att använda en vuxen zebrafish modell.Med hjälp av detta protokoll som beskrivs här för första gången i hjärnan hos vuxna zebrafiskar, anatomiska distribution och coexpression av orexin-2 receptorer och endocannabinoid-CB1 receptorer har inte fastställts. Vi rekommenderar de protokoll som beskrivs här för immunohistokemi experiment och att upptäcka rumsliga distribution och organisation av receptorer i peptider i vuxna zebrafish att bättre förstå deras funktioner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifiering av fettsyror i<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Identification of Plant Ice-binding Proteins Through Assessment of Ice-recrystallization Inhibition and Isolation Using Ice-affinity Purification

Identifiering av växtisbindande proteiner genom bedömning av iskristallisationshämning och isolering med användning av isaffinitetsrening

Ice-binding proteins (IBPs) belong to a family of stress-induced proteins that are synthesized by certain organisms exposed to subzero temperatures. In ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Provberedning för Mass Spectrometry-baserade identifiering av RNA-bindande regioner

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Identifiering av havet nejonöga feromoner med hjälp av Bioassay-guidad fraktionering

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Fånga och identifiering av RNA-bindande proteiner med hjälp av klick kemi-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifiering av romanen CK2 Kinase substrat med en mångsidig biokemisk metod

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

Nitropeptid profilering och identifiering illustrerad av angiotensin II

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-bindande enheter (SUBEs) som verktyg för berikning, isolering, identifiering och karakterisering av SUMO Proteome i lever cancer

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Profiling Ubiquitin and Ubiquitin-like Dependent Post-translational Modifications and Identification of Significant Alterations

Profilering ubiquitin och ubiquitin-liknande beroende post-translationella modifieringar och identifiering av betydande förändringar

Ubiquitin (ub) and ubiquitin-like (ubl) dependent post-translational modifications of proteins play fundamental biological regulatory roles within the ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

Visualisering av östrogenreceptorer i kolon av möss med TNBS-inducerad Crohns sjukdom med immunfluorescens

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...