Name: identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods
Uploaded: 2019-06-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Bu çalışmada Fondi ricerca di Ateneo (FRA) 2015-2016, Sannio Üniversitesi tarafından desteklenmektedir.

1. immünoperoksidaz Protokolü
Not: zebra balığı tarafından elde edildi Prof. Omid Safari (balıkçılık bölümü, doğal kaynaklar ve Çevre Fakültesi, Ferdowsi meşhad Üniversitesi, meşhad, Iran)10.
<ol><li>Doku diseksiyonu
	<ol>
<li>Buz suyunda (5 parça buz/1 parça su, 4 °C) dalgıç ile zebrafi feda etmek; hipoksi tarafından ölüm sağlamak için tüm hareketin durdurulması kadar onları bırakın.</li>
		<li>Hızlı bir şekilde a...

Numune hazırlama
Örnek hazırlama, ıHC 'deki ilk kritik adımdır. Güvenilir bir protokol hücre morfoloji, doku mimarisi ve antigenicity bakımı için izin verir. Bu adım, doğru doku toplama, sabitleme ve bölüm22,23gerektirir. Sabitleme amacı doku korumak ve doku enzimleri veya mikroorganizmaların eylem azaltmak etmektir. Özellikle, sabitleme adım hücresel bileşenleri ve biomolecules korur, otoli...

İmmünhistokimya (IHC), antijen-antikor etkileşimi1,2ile hücresel veya doku bileşenlerini (antigens) tanımlamak için kullanılan iyi kurulmuş bir klasik tekniktir. Bir doku içinde hedef biyomoleküllerin lokalizasyonu ve dağılımı tanımlamak için kullanılabilir. IHC doku bölümlerindeki antijenleri algılamak için immünolojik ve kimyasal reaksiyonlar kullanır3. Antijen-antikor etkileşimlerinin görselleştirme için kullanılan ana belirteçleri floresan boyalar (immünofluorescence) ve enzim-substrat renk reaksiyonları (immünoperoksidan), hem antikorlar4konjuate. Mikroskobik gözlem kullanarak etiket doku lokalizasyonu belirlemek mümkündür, hangi yaklaşık doku hedef antijen lokalizasyonu karşılık gelir.
Floresan veya kromojenik reaksiyonlar için protein algılamak için iki yöntem var: belirli birincil antikor doğrudan etiketli olduğu doğrudan algılama yöntemi; ve ikincil antikor etiket5,6,7taşır ederken primer antikor unconjuated olduğu dolaylı algılama yöntemi. Dolaylı Yöntem, çoğunlukla sinyal amplifikasyonu olan bazı avantajlara sahiptir. Dahası, diğer moleküler ve hücresel tekniklerin aksine, immünofluoresesans ile, hücreler ve dokular içinde ayırt edilen iki veya daha fazla proteinin dağılımı, lokalizasyonu ve koifadesini görselleştirmek mümkündür7. Kullanılan algılama yönteminin seçimi deneysel ayrıntılarına bağlıdır.
Bugüne kadar, ıHC yaygın olarak temel araştırmalarda biyomarkerlerin dağıtımını ve lokalizasyonunu ve insan biyolojik dokuda farklı proteinlerin genel profillerini omurgasızlar8' e kadar anlamak için güçlü ve temel bir araç olarak kullanılmaktadır. 9 , 10 ' dan fazla , 11. Teknik, normal ve değiştirilmiş hayvan organlarının ve farklı doku türlerinin çok sayıda protein ifadesinin bir haritasını görüntülemenize yardımcı olur ve fizyolojik ve patolojik değişikliklerle indüklenen ifadenin olası aşağı veya yukarı düzenlemesini gösterir. IHC en iyi sonuçları elde etmek için doğruluk ve doğru Yöntem seçimi gerektiren son derece hassas bir tekniktir12. Her şeyden önce, fiktasyon, çapraz reaktivite, antijen alımı ve antikorların duyarlılığı gibi birçok farklı faktör yanlış pozitif ve yanlış negatif sinyallere yol açabilir13. Antikor seçimi, ıHC 'deki en önemli adımlardan biridir ve antijen özgüllüğü ve soruşturma altında protein ve türe olan benzeşimine bağlıdır7.
Son zamanlarda, Yetişkin zebra balığı dokusunda orexin/ikiyüzretin ve endokannabinoid sistemlerinin üyelerini algılamak için ihc tekniği optimize edilmiştir. Biz temel olarak sabitleme, doku katıştırma iki farklı yaklaşımlar, bölümlenme ve montaj (hangi çözünürlüğü ve ayrıntı mikroskobik analiz sırasında etkileyebilir), ve engelleme (yanlış pozitireleri önlemek ve arka plan azaltmak için)14odaklı. Diğer önemli özellikler, bireysel ıHC protokollerinin antikor özgüllüğü ve seçicilik ve yeniden üretilebilirliği. Antikor özgüllüğü sağlamak için anahtar negatif kontroller (hiçbir primer antikorlar veya hedef proteinleri ifade değil bilinen doku dahil) kullanımı yanı sıra pozitif kontroller (hedef proteinleri ifade bilinen doku dahil)15 . IHC için antikorların seçimi kendi türlerine göre yapılır-özgüllük (onlar faiz antijeni ile reaksiyon olasılığı) ve kullanılan antijen-antikor bağlama algılama sistemleri4,5,6 ,7. İmmünoperoksidaz durumunda, reaksiyon rengi, genellikle diaminobenzidin (kahverengi)16, çökelme Kromojen seçimi ile belirlenir. Öte yandan, benmmunofluorescence, dondurulmuş doku bölümlerinde protein ifadesini görselleştiren ve kromojenik algılama sistemine göre çoklu proteinlerin kolay analizine olanak sağlayan bir fluorophor ile konjuke edilen antikorları kullanır 5 , 7' ye kadar.
İmmünoperoksidaz tekniği, ikincil antikor biotin, bir bağlayıcı molekül bir kromojenik muhabir molekül [avidin-biotin kompleksi (ABC)], boyama sinyalinin amplifikasyon lider işe yeteneğine konjugated olduğunu. ABC Reporter yöntemi ile, enzim peroksidaz, 3, 3 '-diaminobenzidin (DAB) ile tepki verir, enzim ikincil antikor bağlayan bir yoğun kahverengi renkli boyama üreten, daha sonra sıradan bir ışık mikroskobu ile analiz edilebilir. ABC boyama, biotin için avidin yüksek yakınlık nedeniyle, hızlı ve optimum reaksiyon üretir, primer antikor reaktivite siteye bağlı birkaç ikincil antikorlar ile. Bu kromojenik algılama yöntemi, sinyalin densitometrik analizini sağlar ve kahverengi sinyal düzeylerinin protein ifade seviyeleri18ile korelasyon temelinde yarı nicel veriler sunar.
İmmünofluoresesans teknikleri ile, farklı fluorokrotların benzersiz dalga boylarında ışık yayması yeteneği nedeniyle çoklu proteinlerin eşzamanlı olarak algılanması mümkündür, ancak spektral çakışmayı en aza indirmek için florokromlarla 'i dikkatle seçmek önemlidir 5. dahası, farklı ev sahibi türlerin primer antikorların kullanımı çapraz reaktivite ile ilgili zorlukları en aza indirir. Bu durumda, her türe özgü ikincil antikor primer antikor yalnızca bir tür tanır. Floresan gazeteciler, Alexa Fluor boyalar gibi ticari türevleri de dahil olmak üzere küçük organik moleküllerdir.
Birçok hayvan modelleri özellikle fizyolojik ve patolojik koşulları anlamak için kullanılır. Bugüne kadar, evrim boyunca birçok metabolik yol tarafından temin edilir. Bu nedenle, zebra balığı gibi model organizmalarda IHC çalışmaları, patolojik ve patolojik olmayan koşulların Yaratılış ve bakımı hakkında bilgi verebilir17. Bu raporun bir amacı, Yetişkin zebra balığı doku üzerinde gerçekleştirilebilecek IHC protokolleri göstermek ve dağılım ve lokalizasyonu Oxa, Ox-2R ve CB1R ayrıntılı görüntüleri elde etmek için kullanılan periferik ve merkezi düzeylerde. Ayrıca, Yetişkin zebrafish periferik ve merkezi dokularda iki büyük ıHC dolaylı yöntemlerin uygulanması için protokoller olduğunu bildirdi. Açıklanan dolaylı Yöntem, hangi ikincil bir antikor floresan boya (immünofluorescence yöntemi) veya enzim muhabiri (immünoperoksidan yöntemi) konjuli durumlarda sinyal amplifikasyon için izin verir. Hem kromojenik ve floresan algılama yöntemleri avantajları ve dezavantajları sahip. Bu protokolde bildirilen ıHC kullanımı, özellikle immünofluorescence, Yetişkin zebrafish, yaygın olarak farklı fizyolojik ve patolojik koşullar arasında gelişen evrimsel sistemleri incelemek için kullanılan bir hayvan modeli.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti CB1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab23703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti OX-2R</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-OXA</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc8070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquatex</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1,085,620,050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated rabbit anti-goat</td>
			<td>Vector Lab</td>
			<td>BA-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>251275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse Ti2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DFC320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera for confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DS-Qi2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 488-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit Alexa fluor 594-conjugated secondary antibodies</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A21207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,821,330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen section compound</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>FSC 22 Frozen Section Media</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20,252,290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>SK4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>DMI6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Biosystem</td>
			<td>RM2125RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Rabbit Serum</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>S-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraffin wax</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>46793801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraphormaldeyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W302600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fluka Analytical</td>
			<td>93420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaStain Elite ABC Kit</td>
			<td>Vector lab</td>
			<td>PK6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene Pure</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>392603</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods

İmmunohistokimya (ıHC), etiketli antikorlar içeren doku bölümlerinde hedef antijenlerin saptanması ile ilgili son derece hassas ve spesifik bir tekniktir. Bu, her adımın optimizasyonunun optimum spesifik sinyali elde etmek için çok önemli olduğu çok adımlı bir süreçtir. IHC aracılığıyla, belirli biyomarkerlerin dağıtımı ve lokalizasyonu, evrimsel koruma hakkında bilgi açığa çıkarılabilir. Dahası, ıHC, obezite gibi patolojik koşullarda biyomarkerlerin ifade ve dağıtım değişikliklerinin anlaşılması için izin verir. IFC, ağırlıklı olarak immünofluorescence tekniği, Yetişkin zebra balığı 'de, fizik olarak kullanılan moleküllerin organizasyonunu ve dağıtımını algılamak için kullanılabilir, ancak standart bir IFC Protokolü estasblished değildir. Orexin ve Endokanabinoid, gıda alımı ve obezite patolojisinin kontrolünde yer alan iki yüksek oranda tüketmeli sistemlerdir. Burada bildirilen protokolleri oreksin peptid (Oxa), oreksin reseptör (Ox-2R) ve kanabinoid reseptör (CB1R) lokalizasyonu ve bağırsak ve beyin normal ve diyet kaynaklı obez (dıo) Yetişkin zebra balığı modellerinin içinde dağıtım hakkında bilgi almak için kullanılır. Ayrıca, immünoperoksidaz ve çift immünofluorescence için yöntemler, reaktifler, fiktasyon, parafin-katıştırma ve zebra balığı dokusunun cryoprotection hazırlanması ve endojen aktivite engelleme adım ve arka plan için hazırlama yöntemleri vardır karşı boyama. Parametrelerin tam kümesi önceki IHC deneylerinden elde edilir, hangi aracılığıyla biz immünofluorescence Oxs, Ox-2R ve CB1R dağılımı, yerelleştirme ve yetişkin zebra balığı ifade korunması anlayışı ile yardımcı olabilir göstermiştir Doku. Yüksek spesifik sinyal yoğunluğu ile ortaya çıkan görüntüler zebra balığı dağıtım, lokalizasyon ve spesifik biyokütörler evrimsel koruma, immünhistokimyasal çalışmalar için uygun hayvan modelleri olduğunu teyit yol açtı fizyolojik ve patolojik koşullar. Burada sunulan protokoller yetişkin zebrafish ıFC deneyler için tavsiye edilir.

İmmünoperoksidaz boyama için temsili veriler Şekil 1 ve Şekil 2' de gösterilir. Yetişkin zebra balığı bağırsaklarında Ox-a ve Ox-2R dağılımı immunohistokimyasal Analizi Ox-a ve Ox-2R farklı yerelleştirme siteleri ve DIO zebra balığı bağırsak hücrelerinde ifade artışlar gösterdi. Medial ve anterior bağırsak hücrelerinde OX-A için yoğun bir kahverengi boyama görüldü (Şekil 1a, A1). OX-A ...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods at JoVE.com

Identification of Orexin and Endocannabinoid Receptors in Adult Zebrafish Using Immunoperoxidase and Immunofluorescence Methods

Immunoperoksidan ve Immünofluoresesan yöntemlerini kullanarak yetişkin Zebrafisinde Orexin ve Endocannabinoid reseptörlerinin tanımlanması

Burada sunulan immunhistokimyasal karakterizasyon ve oreksin peptid lokalizasyonu için protokoller, oreksin reseptörleri, ve bağırsak ve normal ve diyet kaynaklı obezitenin beyni endokannabinoid reseptörleri (IO) Yetişkin zebra balığı modelleri kullanarak immunoperixidaz ve çift immünofluorescence yöntemleri.

Immunohistochemistry (IHC) is a highly sensitive and specific technique involved in the detection of target antigens in tissue sections with labeled ...

Günümüzde immünohistokimya, spesifik moleküler belirteçlerin varlığını ve patoloji durumundaki değişikliklerini belirlemek için artan sıklıkta kullanılmakta ve kantitatif analiz yapma olasılığına kök katmaktadır. İmmünohistokimya, özellikle immünoreskence tekniği, larva ve yetişkin zebra balığı hayvan modelinde kullanılır, ancak zebra balığı için iyi bir standart immünohistokimya protokolü hakkında çok az şey bilinmektedir. Burada, yetişkin zebra balıklarında önemli proteinlerin evrimsel olarak korunmasını incelemek için kullanılabilecek bir protokolü tanımlıyor ve gösteriyoruz.Yetişkin zebra balıklarında immünohistokimya için iyi bir protokol, bu hayvan modelinin morfolojik ekspresyonunu ve yüksek oranda korunmuş biyomoleküllerin dağılımını incelemek için yararlılığının altını ortaya konmaya yardımcı olabilir. Bu yöntem aynı zamanda insan fizyopatolojisi ile ilişkili patolojik koşullar nedeniyle bu biyomoleküllerin olası değişikliklerinin analiz ine yardımcı olabilir. Prosedürü gösteren Dr.Lea Tunisi, benim laboratuvarımdan doktora öğrencisi olacak.Bu işlem başlamak için, eksi 20 santigrat derece bir kriyostat için hazırlanan dondurulmuş doku blokları aktarın. 10 mikrometre koronal veya sagital kesitblok kesin. Daha sonra, immünohistokimya için uygun yapışkan cam slaytlar üzerine alternatif seri bölümlerde dokuları toplamak ve devam etmeye hazır olana kadar eksi 20 santigrat derece saklayın.İlk olarak, slayt üzerindeki doku alanını ayırmak için solvente dayanıklı bir kalem kullanın. 0.1-molar fosfat tamponkullanarak beş dakika boyunca bölümleri üç kez durulayın. Daha sonra, 0.3 mililitre Triton X-100'ü 100 mililitre00 mililitre0 0,1-molar fosfat tamponunda çözün erek Triton X-100 0.3%0.3 normal eşek serumunu fosfat tamponunda %0.3 triton X-100 içeren normal eşek serumunu hazırlayın ve bloke çözeltisini hazırlayın.Hücre zarını permeabilize etmek ve spesifik olmayan bağlama alanlarını engellemek için oda sıcaklığında 30 dakika boyunca permeabilizasyon tamponu PB-Triton X-100%0.3 çözünmüş normal eşek serumçözeltisi ile bölümleri kuluçkaya yatırın. İlk olarak, 0.1-molar fosfat tampon ile beş dakika boyunca bölümleri üç kez durulayın. PB-T seyreltilmiş birincil antikorların karışımını ekleyin ve oda sıcaklığında nemli bir kutuda bir gecede bölümleri kuluçkaya yatırın.Ertesi gün, 0.1-molar fosfat tampon ile beş dakika boyunca bölümleri üç kez durulayın. PB-T seyreltilmiş ikincil antikorların uygun bir karışımında iki saat oda sıcaklığında kuluçka bölümleri. Başlamak için, 0.1-molar fosfat tampon ile beş dakika boyunca bölümleri üç kez durulayın.Nükleer boya DAPI hazırlamak için fosfat tampon üç mililitre DAPI 1.5 mikrolitre çözünür. Boyadaki bölümleri ters lekesi. Daha sonra, uzun süreli kullanım için doku ve leke stabilize etmek için slaytlar coverslip montaj ortamı kullanın.Floresan numuneler karanlıkta dört santigrat derecede saklanabilir. İmmünofloresan protokolünü tekrarlayın ve primer veya sekonder antikorları atlayın veya negatif kontrolü hazırlamak için primer veya sekonder antiserumu fosfat tamponuyla değiştirin. Daha sonra, immünoresans protokolünü tekrarlayın ve her primer antikora göreli peptid fazlalığı yla önceden emdirin.Pozitif kontrolü hazırlamak için fare beyninin dilimleri üzerinde immünofloresan protokolünü tekrarlayın. X-Y-Z motorize sahne, dijital kamera ve satın alma ve analiz yazılımı ile donatılmış bir konfokal mikroskop kullanarak, gözlemlemek ve immünolekeli bölümleri analiz. 5x, 20x ve 40x hedefleri ile dijital görüntüler edinin.Düşük büyütme montajı oluşturmak için kullanılabilir kanalların her birinde düşük büyütme de her bölümün görüntüleri alın. Floresan görüntülerini maksimum kontrast ve kaplamaya normalleştirin. İlgi alanı boyunca, 1 ila 1,8 mikrometre odak adımları ile altı odak düzlemleri aracılığıyla görüntü seri Z-yığınları toplamak.Her kanal için bu koleksiyonu ayrı ayrı gerçekleştirin. Bundan sonra, 10 yineleme uygulaması yla görüntüleri deconvolve görüntüleme deconvolution yazılımı kullanın ve tek bir maksimum projeksiyon görüntü içine seri Z-düzlem görüntüleri daraltmak. Işık ve kontrast için mikrografları ayarlamak için uygun bir görüntü düzenleme yazılımı kullanın.Erişkin zebra balıklarının bağırsaklarındaki OX-A ve OX-2R dağılımının immünohistokimyasal analizi, OX-A ve OX-2R'nin farklı lokalizasyon bölgelerini ve DIO zebra balığının bağırsak hücrelerinde ifade artışlarını göstermektedir. MEDIAL ve ön bağırsak hücrelerinde OX-A için yoğun bir kahverengi boyama gözlenir. OX-A'nın immünekspresyonu farklı bağırsak bölmelerinde net sinyaller verir ve anteriordan medial bağırsağa doğru azalır.Benzer sonuçlar DIO ve kontrol diyet zebra balığı bağırsakOX-2R immünekspresyon için gözlenmektedir. DIO yetişkin zebra balığında artmış OX-A sinyaline diğer bağırsak kompartmanlarında OX-2R aşırı ekspresyonu eşlik eder. İmmünofloresan görüntülerin doğru analizi, DIO yetişkin zebra balığının bağırsaklarında kontrol diyeti zebra balığına göre OX-2R/CB1R kolokalizasyonunun arttığını göstermektedir.Benzer bir durum dorsal telensefalon, hipotalamus, optik tectum, torus lateralis ve inferior lob diffüz çekirdeği gibi farklı beyin bölgelerinde gözlenmektedir. Oreksin-A ve CB1R kolokalizasyonu ile çift immünostaining ile hipotalamus oreksinerjik nöronlarda kolokalizasyon artışı olduğu, oreksin-A floresan sinyalinin artması ile birlikte gözlenmiştir. Bu sonuçlar, çift immünfloresansın fizyolojik olarak korunmuş protein ekspresyonunu, hedef proteinlerin kolokalizasyonunu ve farklı patolojik koşullarda dağılım ve/veya ekspresyon değişikliklerini belirlemeye nasıl yardımcı olabileceğini göstermektedir.İmmünofloresans kullanarak, biyomoleküllerin birlikte dağılımını ve ortak ekspresyonunu, olası etkileşimlerini daha iyi anlayabiliriz ve farklı patolojiler durumunda onların değişimlerinin görünür bir görüntüsünü de görebiliriz. Ayrıca, metabolik enzim ekspresyonu veya reseptörlerinin nöroanatomik dağılımı dokular içinde protein sinyalizasyon rolünü daha da ortaya çıkarabilir. Mevcut teknik çalışma, yetişkin bir zebra balığı modeli kullanarak, iki yüksek korunmuş sistem, oreksin ve endocannabinoidler çalışma immünororesans yaklaşım tanıttı.Burada ilk kez yetişkin zebra balığının beyninde açıklanan bu protokolü kullanarak oreksin-2 reseptörlerinin anatomik dağılımı ve koekspresyonu ve endofanabinoid-CB1 reseptörleri belirlenmemiştir. Burada immünohistokimya deneyleri için açıklanan protokolleri ve yetişkin zebra balıklarındaki peptidlerde bulunan reseptörlerin mekansal dağılımını ve organizasyonunu tespit etmek ve işlevlerini daha iyi anlamak için öneriyoruz.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Yağ Asitlerinin Tanımlanması içinde<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Identification of Plant Ice-binding Proteins Through Assessment of Ice-recrystallization Inhibition and Isolation Using Ice-affinity Purification

Bitki Buz yakınlık Arıtma kullanma Buz yeniden kristalleşme İnhibisyon ve İzolasyonu Değerlendirilmesi sayesinde Proteinler Buz bağlayıcı tanımlanması

Ice-binding proteins (IBPs) belong to a family of stress-induced proteins that are synthesized by certain organisms exposed to subzero temperatures. In ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Kütle spektrometresi tabanlı kimlik RNA-bağlama bölgelerinin için numune hazırlama

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Bioassay-güdümlü ayırma kullanarak deniz taşemen Feromonlar tanımlaması

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Yakalama ve tıklama Kimya destekli RNA-interactome kullanarak RNA bağlanıcı proteinler tanımlaması (CARIC) strateji yakalama

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Kimliği roman CK2 kinaz yüzeylerde çok yönlü bir biyokimyasal yaklaşım kullanarak

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

Anjiyotensin II tarafından gösterilen nitropeptid profil oluşturma ve tanımlama

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

Karaciğer Kanserinde SUMO Proteomunun Zenginleştirilmesi, İzolasyon, Tanımlama ve Karakterizasyonu Için Araçlar Olarak SUMO Bağlayıcı Varlıklar (SUBEs)

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Profiling Ubiquitin and Ubiquitin-like Dependent Post-translational Modifications and Identification of Significant Alterations

Ubiquitin ve Ubiquitin benzeri Bağımlı Post-translational Modifikasyonlar ve Önemli Değişikliklerin Belirlenmesi Profilleme

Ubiquitin (ub) and ubiquitin-like (ubl) dependent post-translational modifications of proteins play fundamental biological regulatory roles within the ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

İmmünofluoresans kullanarak TNBS'ye Bağlı Crohn Hastalığı olan Farelerin Kolonlarında Östrojen Reseptörlerinin Görüntülenmesi

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...