Name: an automated method to perform the in vitro micronucleus assay using multispectral imaging flow cytometry
Uploaded: 2019-05-13T12:30:00
Duration: 12 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Automated Method to Perform The In Vitro Micronucleus Assay using Multispectral Imaging Flow Cytometry at JoVE.com

लेखक धन्यवाद क्रिस्टीन Probst (Luminex निगम) डेटा विश्लेषण टेम्पलेट के पिछले रूपों के विकास में उसके प्रयासों के लिए, साथ ही डॉ हैली Pugsley (Luminex निगम) और डॉ फिल Morrissey (Luminex निगम) की समीक्षा करने और संपादन के लिए पांडुलिपि.

लेखक Luminex निगम, ImageStream multispectral इमेजिंग प्रवाह cytometer है कि इस काम में इस्तेमाल किया गया था के निर्माता द्वारा कार्यरत है.

इन विट्रो माइक्रोन्यूक्लियस (MN) परख एक आमतौर पर इस्तेमाल किया परीक्षण के लिए इस तरह के रासायनिक और दवा के विकास के रूप में अध्ययन के कई क्षेत्रों में एक स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में cytotoxicity और जीनोटॉक्सिसिटी का आकलन करने के लिए के रूप में के रूप में अच्छी तरह से विभिन्न व्यक्तियों के संपर्क में मानव biomonitoring है पर्यावरण, व्यावसायिक या जीवन शैली कारक1,2,3. एम.एन. में कोशिका विभाजन के दौरान उत्पन्न गुणसूत्र के टुकड़े या संपूर्ण गुणसूत्र होते हैं जो दो मुख्य पुत्री नाभिकों में से किसी एक में समाविष् ट नहीं होते हैं। टेलोफेज के बाद, यह गुणसूत्र सामग्री कोशिका द्रव्य के अंदर एक व्यक्ति, गोल शरीर में होती है जो मुख्य नाभिक2में से किसी से अलग होती है। इसलिए, MN डीएनए क्षति के प्रतिनिधि हैं और जीनोटॉक्सिसिटी परीक्षण4में एक समापन बिंदु के रूप में कई वर्षों के लिए इस्तेमाल किया गया है। MN को मापने के लिए सबसे उपयुक्त विधि साइटोकिनेसिस-ब्लॉक माइक्रोन्यूक्लियस (सीबीएमएन) परख है। CBMN परख का उपयोग करना, binucleated कोशिकाओं में MN की आवृत्ति (BNCs) नमूने में Cytochalasin बी (Cyt-B) को शामिल करके रन बनाए जा सकते हैं. Cyt-B परमाणु विभाजन की अनुमति देता है, लेकिन सेलुलर विभाजन को रोकता है और इस प्रकार, MN के स्कोरिंग BNCs है कि केवल एक बार5विभाजित किया है करने के लिए प्रतिबंधित करता है.
माइक्रोस्कोपी और फ्लो साइटोमेट्री दोनों का उपयोग करने वाले प्रोटोकॉल विकसित किए गए हैं और उन्हें मान्य किया गया है और इन विट्रो एम एन परख6,7,8,9 ,10, 11,12,13,14. माइक्रोस्कोपी लाभ नेत्रहीन पुष्टि करने में सक्षम होने से कि MN वैध हैं, लेकिन समय लगता है और स्कोरर15के बीच परिवर्तनशीलता के लिए प्रवण है. इसका समाधान करने के लिए, स्लाइडकोस्कैन को स्कैन करने और नाभिक ों की छवियों को कैप्चर करने के लिए स्वचालित माइक्रोस्कोपी विधियों को विकसित किया गया था ,17,18,19, लेकिन कोशिकाद्रव्य की कल्पना नहीं की जा सकती है, जिससे इसे बनाया जा सकता है यह निर्धारित करना कठिन है कि क्या कोई MN वास्तव में किसी विशिष्ट कक्ष से संबद्ध है. इसके अलावा, इन विधियों में पॉलीन्यूक्लिएट (पाली) कोशिकाओं (त्रि-तथा चतुष्कोणीय कोशिकाओं सहित) की पहचान करने में कठिनाई होती है जो साइट-बी9का उपयोग करते समय साइटोटॉक्सिसिटी की गणना के लिए आवश्यक होती हैं। एम एन परख करने के लिए विकसित प्रवाह साइटोमेट्री विधियों में फ्लोरोसेंट के साथ-साथ आगे और साइड स्कैटर तीव्रता को रोजगार दिया जाता है ताकि न्यूक्लियस और एमएन दोनों की आबादी की पहचान की जा सके जिन्हें लाइसिस20,21 के बाद सेल से मुक्त किया गया है। ,22. यह डेटा कुछ ही मिनटों में कई हजार कोशिकाओं से प्राप्त किया जा करने के लिए अनुमति देता है और स्वचालित विश्लेषण23परमिट; हालांकि, कोशिकाओं कल्पना करने में असमर्थता यह असंभव है कि रन बनाए घटनाओं वास्तविक हैं की पुष्टि करने के लिए बनाता है. इसके अतिरिक्त, कोशिका झिल्ली lysing Cyt-B के उपयोग को रोकता है और साथ ही एक निलंबन है कि इस तरह के गुणसूत्र समुच्चय या apoptotic निकायों के रूप में अन्य मलबे शामिल है बनाने और MN24से इन अंतर करने के लिए कोई रास्ता नहीं है.
इन सीमाओं के प्रकाश में, Multispectral इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री (MIFC) MN परख प्रदर्शन करने के लिए एक आदर्श प्रणाली है क्योंकि यह सांख्यिकीय मजबूती और पारंपरिक प्रवाह साइटोमेट्री की गति के साथ माइक्रोस्कोपी के उच्च संकल्प फ्लोरोसेंट कल्पना को जोड़ती है. MIFC में, सभी कोशिकाओं को एक fluidics प्रणाली में पेश कर रहे हैं और फिर hydrodynamicly एक प्रवाह सेल cuvette के केंद्र में ध्यान केंद्रित कर रहे हैं. सभी कोशिकाओं के Orthogonal रोशनी एक brightfield के उपयोग के माध्यम से पूरा किया है (BF) प्रकाश उत्सर्जक डायोड (एलईडी), एक पक्ष तितर बितर लेजर और (कम से कम) एक फ्लोरोसेंट लेजर. फ्लोरोसेंट फोटॉनों तीन में से एक (20x, 40x या 60x) उच्च संख्यात्मक एपर्चर उद्देश्य लेंस द्वारा कब्जा कर रहे हैं और फिर एक वर्णक्रमीय अपघटन तत्व के माध्यम से गुजरती हैं. फोटॉनों तो प्रवाह सेल के माध्यम से पारित है कि सभी कोशिकाओं के उच्च संकल्प छवियों को प्राप्त करने के लिए एक चार्ज-युग्मित डिवाइस (सीसीडी) कैमरे पर ध्यान केंद्रित कर रहे हैं। धुंधला या लकीर से बचने के लिए, सीसीडी समय देरी एकीकरण (TDI) मोड जो पंक्ति से पिक्सेल सामग्री को प्रवाह में सेल के वेग के साथ सिंक्रोनी में सीसीडी नीचे पंक्ति को स्थानांतरित करके पटरियों में चल रही है. पिक्सेल जानकारी तो पिक्सेल की अंतिम पंक्ति से एकत्र की है. TDI इमेजिंग वर्णक्रमीय अपघटन के साथ संयुक्त अप करने के लिए अनुमति देता है 12 छवियों (2 BF, 10 फ्लोरोसेंट) प्रवाह सेल के माध्यम से गुजर सभी कोशिकाओं से एक साथ कब्जा कर लिया. सभी पर कब्जा कर लिया इमेजरी नमूना-विशिष्ट डेटा फ़ाइलों में संग्रहीत की जाती है, जिससे एमआईएफसी डेटा विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके किसी भी समय विश्लेषण करने की अनुमति दी जाती है. अंत में, डेटा फ़ाइलें सभी द्विचर भूखंडों पर सेलुलर छवियों और डॉट्स के बीच लिंक बनाए रखने. इसका मतलब यह है कि एक पारंपरिक द्विचर साजिश पर किसी भी डॉट पर प्रकाश डाला जा सकता है और इसकी इसी BF और फ्लोरोसेंट कल्पना25प्रदर्शित किया जाएगा .
हाल ही में, MIFC आधारित तरीकों दोनों triage विकिरण biodosimetry26,27,28,29,30,31 और आनुवंशिक के लिए MN परख प्रदर्शन करने के लिए विकसित किया गया है विष विज्ञान32,33 परीक्षण. इस कार्य से यह पता चला है कि मुख्य नाभिक, एम एन और कोशिकाद्रव्य की कोशिकीय छवियों को अन्य विधियोंकीतुलना में अधिक थ्रूपुट के साथ छविित किया जा सकता है। विश्लेषण के लिए आवश्यक सभी सेल प्रकार, MONO कोशिकाओं सहित, BNCs (के साथ और MN के बिना), और POLY कोशिकाओं, स्वचालित रूप से MIFC डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर में पहचाना जा सकता है, और Fenech एट अल द्वारा विकसित स्कोरिंग मापदंड के कार्यान्वयन के माध्यम से पूरा किया है विभिन्न गणितीय एल्गोरिदम6,34का उपयोग करें। बायोडोसिमेट्री के परिणामों से पता चला है कि खुराक अनुक्रिया अंशांकन वक्र साहित्य में अन्य स्वचालित विधियों से प्राप्त किए गए वक्रों के परिमाण में समान थे जब बी एन सी29प्रति एम एन की दर की मात्रा निर्धारित की गई थी . इसके अतिरिक्त, toxicology में हाल ही में काम से पता चला है कि MONO कोशिकाओं की छवियों, BNCs (के साथ और MN के बिना) और POLY कोशिकाओं को स्वचालित रूप से कब्जा कर लिया जा सकता है, की पहचान की, वर्गीकृत और MIFC का उपयोग कर गणना. प्रोटोकॉल और डेटा विश्लेषण ने टी के 6 कोशिकाओं को कई क्लैस्टोजन और एन्युजेन्स32में उजागर करने के बाद साइटोटॉक्सिसिटी और जीनोटॉक्सिसिटी की गणना को सक्षम किया .
इस पत्र में प्रस्तुत प्रोटोकॉल MIFC का उपयोग करइन विट्रो MN परख करने के लिए एक विधि का वर्णन करता है। इस काम में इस्तेमाल नमूना प्रसंस्करण तकनीक एक एकल नमूना प्रक्रिया करने के लिए कम से कम 2 एच की आवश्यकता है और अपेक्षाकृत अन्य तरीकों की तुलना में प्रदर्शन करने के लिए आसान है। MIFC विश्लेषण सॉफ्टवेयर में डेटा विश्लेषण जटिल है, लेकिन विश्लेषण टेम्पलेट का निर्माण इस कागज में उल्लिखित चरणों का पालन कुछ ही घंटों में पूरा किया जा सकता है. इसके अलावा, एक बार टेम्पलेट बनाया गया है, यह स्वचालित रूप से किसी भी आगे के काम के बिना सभी एकत्र डेटा के लिए लागू किया जा सकता है। प्रोटोकॉल Clastogens और aneugens के लिए TK6 कोशिकाओं को बेनकाब करने के लिए आवश्यक सभी चरणों की रूपरेखा, संस्कृति, प्रक्रिया और कोशिकाओं को दाग करने के लिए कैसे का वर्णन करता है, और दर्शाता है कि कैसे उच्च संकल्प कल्पना MIFC का उपयोग कर प्राप्त करने के लिए. इसके अलावा, इस कागज MIFC सॉफ्टवेयर में डेटा का विश्लेषण करने के लिए स्वचालित रूप से पहचान और MONO कोशिकाओं, BNCs, और POLY कोशिकाओं दोनों cytotoxicity और जीनोटॉक्सिसिटी की गणना के प्रयोजनों के लिए स्कोर करने के लिए वर्तमान सर्वोत्तम प्रथाओं दिखाता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1012px;" width="1012">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">15 mL centrifuge tube</td>
			<td style="width:244px;">Falcon</td>
			<td style="width:161px;">352096</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:308px;">Cleanser - Coulter Clenz&#160;</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>8546931</td>
			<td style="width:299px;">Fill container with 200 mL of Cleanser.&#160; https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/page/itemDetails?itemNumber=8546931#2/10//0/25/1/0/asc/2/8546931///0/1//0/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Colchicine</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>64-86-8</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Corning bottle-top vacuum filter&#160;</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>CLS430769</td>
			<td style="width:299px;">0.22 um filter, 500 mL bottle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Cytochalasin B</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>14930-96-2</td>
			<td style="width:299px;">5 mg bottle</td>
		</tr>
		<tr height="120">
			<td height="120" style="height:120px;width:308px;">Debubbler - 70% Isopropanol</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.3704</td>
			<td style="width:299px;">Fill container with 200 mL of Debubbler.&#160; http://www.emdmillipore.com/US/en/product/2-Propanol-70%25-%28V%2FV%29-0.1-%C2%B5m-filtred,MDA_CHEM-137040?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline 1X</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>BSS-1006-B</td>
			<td style="width:299px;">PBS Ca++MG++ Free&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30071.03</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="240">
			<td height="240" style="height:240px;width:308px;">Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>04018</td>
			<td style="width:299px;">This is what is used for the 4% and 1% Formalin. CAUTION: Formalin/Formaldehyde toxic by inhalation and if swallowed.&#160; Irritating to the eyes, respiratory systems and skin.&#160; May cause sensitization by inhalation or skin contact. Risk of serious damage to eyes.&#160; Potential cancer hazard.&#160; http://www.polysciences.com/default/catalog-products/life-sciences/histology-microscopy/fixatives/formaldehydes/formaldehyde-10-methanol-free-pure/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Hoechst 33342</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>H3570</td>
			<td style="width:299px;">10 mg/mL solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mannitol</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>69-65-8</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">MEM Non-Essential Amino Acids 100X</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30238.01</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="200">
			<td height="200" style="height:200px;width:308px;">MIFC - ImageStreamX Mark II</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>100220</td>
			<td style="width:299px;">A 2 camera ImageStreamX Mark II eqiped with the 405nm, 488nm, and 642nm lasers was used. http://www.emdmillipore.com/US/en/life-science-research/cell-analysis/amnis-imaging-flow-cytometers/imagestreamx-Mark-ii-imaging-flow-cytometer/VaSb.qB.QokAAAFLzRop.zHe,nav?cid=BI-XX-BDS-P-GOOG-FLOW-B325-0006</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:308px;">MIFC analysis software - IDEAS</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>100220</td>
			<td style="width:299px;">The companion software to the MIFC (ImageStreamX MKII)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:308px;">MIFC software - INSPIRE</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>100220</td>
			<td style="width:299px;">This is the software that runs the MIFC (ImageStreamX MKII)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mitomycin C</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>50-07-7</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">NEAA Mixture 100X</td>
			<td>Lonza BioWhittaker</td>
			<td>13-114E</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:308px;">Penicllin/Streptomycin/Glutamine solution 100X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>P9541</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:308px;">Rinse - Ultrapure water or deionized water</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td style="width:299px;">You can use any ultrapure water or deionized water.&#160; Fill container with 900 mL of Rinse.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">RNase</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>9001-99-4</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">RPMI-1640 Medium 1X</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30027.01</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:308px;">Sheath - PBS</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>BSS-1006-B</td>
			<td style="width:299px;">This is the same as Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline 1X&#160; Ca++MG++ free.&#160; Fill container with 900mL of Sheath.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Sterile water</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30529.01</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:308px;">Sterilizer - 0.4-0.7% Hypochlorite</td>
			<td>VWR</td>
			<td>JT9416-1</td>
			<td style="width:299px;">This is assentually 10% Clorox bleach that can be made by deluting Clorox bleach with water.&#160; Fill container with 200 mL of Sterilzer.</td>
		</tr>
		<tr height="120">
			<td height="120" style="height:120px;width:308px;">System Calibration Reagent - SpeedBead</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>400041</td>
			<td style="width:299px;">Each tube holds ~10 mL.&#160; https://www.emdmillipore.com/US/en/life-science-research/cell-analysis/amnis-imaging-flow-cytometers/support-training/XDqb.qB.wQMAAAFLBDUp.zHu,nav&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">T25 flask</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353109</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">T75 flask</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353136</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">TK6 cells</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>95111735</td>
			<td style="width:299px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an automated method to perform the in vitro micronucleus assay using multispectral imaging flow cytometry

इन विट्रो माइक्रोन्यूक्लियस (MN) परख अक्सर cytotoxicity और जीनोटॉक्सिसिटी का मूल्यांकन करने के लिए प्रयोग किया जाता है, लेकिन मैनुअल माइक्रोस्कोपी के माध्यम से परख स्कोरिंग कठिन है और स्कोरर के बीच परिवर्तनशीलता के कारण परिणामों में अनिश्चितता का परिचय. इसे ठीक करने के लिए, स्कोरर पूर्वाग्रह को दूर करने और थ्रूपुट में सुधार करने के प्रयास में स्वचालित स्लाइड-स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी के साथ-साथ पारंपरिक प्रवाह साइटोमेट्री विधियों को पेश किया गया है। हालांकि, इन विधियों की अपनी अंतर्निहित सीमाएं हैं जैसे सेल के कोशिकाद्रव्य की कल्पना करने में असमर्थता और प्रवाह साइटोमेट्री के साथ दृश्य MN सत्यापन या छवि डेटा संग्रहण की कमी। मल्टीस्पेक्ट्रल इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री (एमआईएफसी) में इन सीमाओं को दूर करने की क्षमता है। MIFC सांख्यिकीय मजबूती और पारंपरिक प्रवाह साइटोमेट्री की गति के साथ माइक्रोस्कोपी के उच्च संकल्प फ्लोरोसेंट कल्पना को जोड़ती है। इसके अतिरिक्त, सभी संग्रहीत इमेजरी को खुराक-विशिष्ट फ़ाइलों में संग्रहीत किया जा सकता है. यह काग़ज़ MIFC पर MN परख का एक पूरी तरह से स्वचालित संस्करण करने के लिए विकसित प्रोटोकॉल का वर्णन करता है। मानव लिम्फोब्लास्टोबाइड TK6 कोशिकाओं एक hypotonic समाधान (75 एमएम KCl) का उपयोग कर बढ़े थे, 4% formalin के साथ तय की और परमाणु सामग्री Hoechst 33342 के साथ दाग था. सभी नमूने MIFC पर निलंबन में चला रहे थे, परख के लिए आवश्यक सभी प्रमुख घटनाओं के उच्च संकल्प छवियों के अधिग्रहण की अनुमति (जैसे binucleated कोशिकाओं के साथ और एमएन के बिना के रूप में के रूप में अच्छी तरह से mononucleated और polynucleated कोशिकाओं). छवियाँ स्वचालित रूप से पहचान की गई, वर्गीकृत और MIFC डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर में गणना, दोनों cytotoxicity और genotoxicity के स्वचालित स्कोरिंग के लिए अनुमति देता है. परिणाम प्रदर्शित करता है कि MIFC का उपयोग करने में इन विट्रो MN परख प्रदर्शन करने के लिए सांख्यिकीय महत्वपूर्ण वृद्धि की अनुमति देता है MN आवृत्ति में cytotoxicity के कई विभिन्न स्तरों पर पता लगाया जा करने के लिए जब विलायक नियंत्रण TK6 कोशिकाओं के जोखिम के बाद की तुलना में Mitomycin सी और Colchicine, और है कि MN आवृत्ति में कोई महत्वपूर्ण वृद्धि मैनिटॉल के संपर्क के बाद मनाया जाता है.

Watch this Scientific Journal Video about An Automated Method to Perform The In Vitro Micronucleus Assay using Multispectral Imaging Flow Cytometry at JoVE.com

An Automated Method to Perform The In Vitro Micronucleus Assay using Multispectral Imaging Flow Cytometry

इन विट्रो माइक्रोन्यूक्लियस परख जीनोटॉक्सिसिटी और साइटोटॉक्सिसिटी का मूल्यांकन करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित विधि है, लेकिन मैनुअल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके परख स्कोरिंग कठिन है और विषयपरकता और अंतर-स्कोर परिवर्तनशीलता से ग्रस्त है। यह कागज बहुस्पेक्ट्रल इमेजिंग प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करके परख का एक पूर्ण स्वचालित संस्करण करने के लिए विकसित प्रोटोकॉल का वर्णन करता है।

मल्टीस्पेक्ट्रल इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके इन विट्रो माइक्रोन्यूक्लियस परख करने के लिए एक स्वचालित विधि

The in vitro micronucleus (MN) assay is often used to evaluate cytotoxicity and genotoxicity but scoring the assay via manual microscopy is laborious and ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry

मल्टी वर्णक्रमीय इमेजिंग फ्लो द्वारा नैनोकणों और जीवाणु के सेलुलर internalization का विश्लेषण

Nanoparticulate  systems have emerged as valuable tools in vaccine delivery through their  ability to efficiently deliver cargo, including proteins, to ...

Localization and Relative Quantification of Carbon Nanotubes in Cells with Multispectral Imaging Flow Cytometry

Carbon-based nanomaterials, like carbon nanotubes (CNTs), belong to this type of nanoparticles which are very difficult to discriminate from carbon-rich ...

An In Vitro Enzymatic Assay to Measure Transcription Inhibition by Gallium(III) and H3 5,10,15-tris(pentafluorophenyl)corroles

An In Vitro Enzymatic Assay to Measure Transcription Inhibition by GalliumIII and H3 5,10,15-trispentafluorophenylcorroles

एक<em&gt; इन विट्रो</em&gt; एंजाइमी परख गैलियम (तृतीय) और एच द्वारा ट्रांसक्रिप्शन निषेध उपाय<sub&gt; 3</sub&gt; 5,10,15-Tris (pentafluorophenyl) corroles

Chemotherapy often involves broad-spectrum cytotoxic agents with many side effects and limited targeting. Corroles are a class of tetrapyrrolic ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

खंगाला मानव कॉर्निया की तरह उपकला (RHCE) ऊतक मॉडल का उपयोग नेत्र परेशान रसायन का खतरा पहचान के लिए आंखों में जलन टेस्ट (ईआईटी)

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Microfluidic प्रवाह कक्षों पुनर्गठन रक्त का उपयोग Hemostasis और प्लेटलेट ट्रांसफ्यूजन मॉडल<em&gt; इन विट्रो</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

एक<em&gt; इन विट्रो</em&gt; अंग संस्कृति म्यूरीन intervertebral डिस्क के मॉडल

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Gene Expression Analysis of Endothelial Cells Exposed to Shear Stress Using Multiple Parallel-plate Flow Chambers

Endothelial कोशिकाओं की जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण एकाधिक समानांतर प्लेट फ्लो चैंबर का उपयोग कर कतरनी तनाव को उजागर

We describe a workflow for the analysis of gene expression from endothelial cells subject to a steady laminar flow using multiple monitored parallel-plate ...

Ovarian Cancer Detection Using Photoacoustic Flow Cytometry

फोटोध्वनिक फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके ओवेरियन कैंसर डिटेक्शन

Many studies suggest that the enumeration of circulating tumor cells (CTCs) may show promise as a prognostic tool for ovarian cancer. Current strategies ...

Simultaneous Quantification of Selected Kynurenines Analyzed by Liquid Chromatography-Mass Spectrometry in Medium Collected from Cancer Cell Cultures

कैंसर सेल संस्कृतियों से एकत्र मध्यम में तरल क्रोमेटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा विश्लेषण किए गए चुनिंदा किनुरेन्स का एक साथ मात्राकरण

The kynurenine pathway and the tryptophan catabolites called kynurenines have received increased attention for their involvement in immune regulation and ...

An Open Source Technology Platform to Manufacture Hydrogel-Based 3D Culture Models in an Automated and Standardized Fashion

एक स्वचालित और मानकीकृत फैशन में हाइड्रोजेल-आधारित 3 डी संस्कृति मॉडल के निर्माण के लिए एक ओपन सोर्स टेक्नोलॉजी प्लेटफॉर्म

Current mixing steps of viscous materials rely on repetitive and time-consuming tasks which are performed mainly manually in a low throughput mode. These ...