Name: using en face immunofluorescence staining to observe vascular endothelial cells directly
Uploaded: 2019-08-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using En Face Immunofluorescence Staining to Observe Vascular Endothelial Cells Directly at JoVE.com

इस अध्ययन चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (ग्रेंट नंबर 81670451, 81770430), शंघाई राइजिंग स्टार कार्यक्रम (ग्रेंट नंबर 17QA1403000) और शंघाई नगर सरकार की विज्ञान प्रौद्योगिकी समिति (ग्रेंट नं. 14441903002, 15411963700).

सभी पशु प्रयोगों शंघाई Jiao टोंग विश्वविद्यालय के पशु संसाधन पर समिति द्वारा अनुमोदित प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के अनुसार आयोजित किया गया.
1. माउस ओर्टा का भ्रम
<ol><li>संक्षेप में, 12 सप्ताह पुराने C57BL/6 ?...

<ol>
	<li>Gimbrone, M. A., Garcia-Cardena, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Cell+Dysfunction+and+the+Pathobiology+of+Atherosclerosis.">Endothelial Cell Dysfunction and the Pathobiology of Atherosclerosis.</a> Circulation Research. 118 (4), 620-636 (2016).</li><li>Zhou, J., Li, Y. S., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress-initiated+signaling+and+its+regulation+of+endothelial+function.">Shear stress-initiated signaling and its regulation of endothelial function.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 34 (10), 2191-2198 (2014).</li><li>Tarbell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress+and+the+endothelial+transport+barrier.">Shear stress and the endothelial transport barrier.</a> Cardiovascular Research. 87 (2), 320-330 (2010).</li><li>Warren, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+production+of+&amp;#34;en+face&amp;#34;+preparations+one+cell+in+thickness.">A method for the production of &amp;#34;en face&amp;#34; preparations one cell in thickness.</a> Journal of Microscopy. 85 (4), 407-413 (1965).</li><li>Azuma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+En+face+method+is+useful+to+quantitate+endothelial+damage+in+vivo.">A new En face method is useful to quantitate endothelial damage in vivo.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 309 (2), 384-390 (2003).</li><li>Son, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+atypical+mechanosensitive+microRNA-712+derived+from+pre-ribosomal+RNA+induces+endothelial+inflammation+and+atherosclerosis.">The atypical mechanosensitive microRNA-712 derived from pre-ribosomal RNA induces endothelial inflammation and atherosclerosis.</a> Nature Communications. 4, 3000 (2013).</li><li>Go, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbed+flow+enhances+inflammatory+signaling+and+atherogenesis+by+increasing+thioredoxin-1+level+in+endothelial+cell+nuclei.">Disturbed flow enhances inflammatory signaling and atherogenesis by increasing thioredoxin-1 level in endothelial cell nuclei.</a> PLOS ONE. 9 (9), e108346 (2014).</li><li>Kundumani-Sridharan, V., Dyukova, E., Hansen, D. E., Rao, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=12/15-Lipoxygenase+mediates+high-fat+diet-induced+endothelial+tight+junction+disruption+and+monocyte+transmigration:+a+new+role+for+15(S)-hydroxyeicosatetraenoic+acid+in+endothelial+cell+dysfunction.">12/15-Lipoxygenase mediates high-fat diet-induced endothelial tight junction disruption and monocyte transmigration: a new role for 15(S)-hydroxyeicosatetraenoic acid in endothelial cell dysfunction.</a> The Journal of Biological Chemistry. 288 (22), 15830-15842 (2013).</li><li>Liu, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1q/TNF-related+protein+1+promotes+endothelial+barrier+dysfunction+under+disturbed+flow.">C1q/TNF-related protein 1 promotes endothelial barrier dysfunction under disturbed flow.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 490 (2), 580-586 (2017).</li><li>Wang, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thioredoxin+interacting+protein+promotes+endothelial+cell+inflammation+in+response+to+disturbed+flow+by+increasing+leukocyte+adhesion+and+repressing+Kruppel-like+factor+2.">Thioredoxin interacting protein promotes endothelial cell inflammation in response to disturbed flow by increasing leukocyte adhesion and repressing Kruppel-like factor 2.</a> Circulation Research. 110 (4), 560-568 (2012).</li><li>Mitra, S., Deshmukh, A., Sachdeva, R., Lu, J., Mehta, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidized+low-density+lipoprotein+and+atherosclerosis+implications+in+antioxidant+therapy.">Oxidized low-density lipoprotein and atherosclerosis implications in antioxidant therapy.</a> The American Journal of the Medical Sciences. 342 (2), 135-142 (2011).</li><li>Stancel, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+CRP,+Atherogenic+LDL,+and+LOX-1+and+Its+Potential+Role+in+the+Pathogenesis+of+Atherosclerosis.">Interplay between CRP, Atherogenic LDL, and LOX-1 and Its Potential Role in the Pathogenesis of Atherosclerosis.</a> Clinical Chemistry. 62 (2), 320-327 (2016).</li><li>Nerem, R. M., Levesque, M. J., Cornhill, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Endothelial+Morphology+as+an+Indicator+of+the+Pattern+of+Blood+Flow.">Vascular Endothelial Morphology as an Indicator of the Pattern of Blood Flow.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 103 (3), 172-176 (1981).</li></ol>

एंडोथेलियम लिपिड, सूजन मध्यस्थों, और तरल कतरनी तनाव1,11,12सहित कई proatherogenic कारकों के संपर्क में है. सीटू में एंडोथेलियल कोशिकाओं का प्रत्यक्ष अवलोकन चोट उत्तेजनाओं के प्र?...

वास्कुलेचर में प्रारंभिक परिवर्तन मुख्य रूप से एंडोथेलियम में आरंभ होता है, जो रक्त और पोत की दीवार के बीच एक चयनात्मक अवरोध के रूप में कार्य करता है जिसमें इसके अंतरकोशिकीय तंग जंक्शनल परिसर1होते हैं। पर्याप्त साक्ष्य अंत:प्रवर्तक फलन2में रक्त प्रवाह के यांत्रिक प्रभावों के लिए एक महत्वपूर्ण भूमिका की ओर संकेत करते हैं . द्रव कतरनी तनाव, रक्त प्रवाह द्वारा उत्पन्न एक घर्षण बल, अंतर आकार endothelial सेल आकृति विज्ञान और समारोह, विभिन्न संवहनी स्थलों पर विशिष्ट प्रवाह प्रतिमानों पर निर्भर करता है2,3. एथेरोस्क्लेरोटिक घाव परेशान रक्त प्रवाह (डी-प्रवाह) के स्थलों पर वरीयता से पाए जाते हैं, जैसे पोत वक्रता, प्रवाह डिवाइडर, और शाखा बिंदु, स्थिर प्रवाह (एस-प्रवाह) के क्षेत्रों की तुलना में, जैसे धमनी का सीधा खंड। इसलिए, endothelial आकारिकी और अणु अभिव्यक्ति पैटर्न के प्रत्यक्ष अवलोकन अलग प्रवाह प्रतिमानों के तहत endothelial कोशिकाओं के संरचनात्मक और कार्यात्मक phenotypes में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करना चाहिए.
संस्कृतिendothelial कोशिकाओं वास्तविक phenotype व्यक्त नहीं के रूप में वे आंशिक रूप से तरल पदार्थ कतरनी तनाव के प्रभाव के नुकसान के कारण विवो में कर सकते हैं, cytokines आसपास, और सेल सेल या सेल-extracellular मैट्रिक्स बातचीत. इस सहायता करने के लिए, बरकरार endothelial सेल मोनोलेयर शास्त्रीय इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग कर अनुप्रस्थ वर्गों पर अध्ययन किया जा सकता है। हालांकि, endothelial monolayer इतना पतली और नाजुक है कि यह आमतौर पर स्पष्ट रूप से नहीं देखा जा सकता है. En face immunohistochemistry endothelium की आंतरिक सतह का निरीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, लेकिन या तो जटिल या इसके परिणामों में अनिश्चित है क्योंकि endothelium आसानी से अंतर्निहित ऊतक से छीन लिया है, या चूहों या खरगोशों की धमनी दीवार का सिर्फ हिस्सा, जिसकी दीवारें मोटी हैं,4,5घुड़सवार हैं .
माउस मॉडल कई मामलों में अन्य जानवरों की अधिक से अधिक काफी लाभ है. यहाँ, हम C57BL/6 माउस में महाधमनी मेहराब और थोरैसिक महाधमनी की एंडोथेलियल कोशिकाओं का विश्लेषण करने के लिए एक संशोधित एन फेस इम्यूनोफ्लोरेसेंस तकनीक का उपयोग करते हैं। इस प्रकार की तकनीक का व्यापक रूप से विभिन्न प्रवाह पैटर्नों में एंडोथेलियल रोग विज्ञान का अध्ययन करने और एथेरोस्क्लेरोसिस6,7,8,9,10के विकास में व्यापक रूप से प्रयोग किया गया है . इस विधि वैज्ञानिकों endothelium की पूरी सतह स्पष्ट रूप से निरीक्षण करने के लिए और विभिन्न तरल पदार्थ कतरनी तनाव के तहत क्षेत्रों में एक दिया प्रोटीन की अभिव्यक्ति पैटर्न की तुलना करने के लिए अनुमति देता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:655px;" width="655">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Antifade mountant</td>
			<td style="width:126px;">Servicebio</td>
			<td style="width:134px;">G1401</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Delicate Forceps</td>
			<td style="width:126px;">RWD Life Science</td>
			<td style="width:134px;">F11001-11</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Delicate Scissors</td>
			<td style="width:126px;">RWD Life Science</td>
			<td style="width:134px;">S12003-09</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:126px;">RWD Life Science</td>
			<td style="width:134px;">F12005-10</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Mciro Spring Scissors</td>
			<td style="width:126px;">RWD Life Science</td>
			<td style="width:134px;">S11001-08</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Polyoxyethylene octyl phenyl ether (Triton X-100)</td>
			<td style="width:126px;">Amresco</td>
			<td style="width:134px;">M143</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Polysorbate 20 (Tween 20)</td>
			<td style="width:126px;">Amresco</td>
			<td style="width:134px;">0777</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">VCAM-1 antibody</td>
			<td style="width:126px;">Abcam</td>
			<td style="width:134px;">ab134047</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">VE-Cadherin antibody</td>
			<td style="width:126px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:134px;">555289</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Alexa Fluor 555 labeled anti-rabbit IgG</td>
			<td style="width:126px;">invitrogen</td>
			<td style="width:134px;">A-31572</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:223px;">Alexa Fluor 488 labeled anti-rat IgG</td>
			<td style="width:126px;">invitrogen</td>
			<td style="width:134px;">A-21208</td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Laser Scanning Microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td style="width:134px;"></td>
			<td style="width:174px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using en face immunofluorescence staining to observe vascular endothelial cells directly

एंडोथेलियल फीनोटाइप और आकृति विज्ञान में एथेरोस्क्लेरोसिस के रोगजनन में प्रारंभिक घटनाओं के रूप में एबरेंट परिवर्तन माना जाता है। बरकरार endothelium के प्रत्यक्ष अवलोकन बेकार endothelial कोशिकाओं में सेलुलर और आणविक घटनाओं को समझने के लिए बहुमूल्य जानकारी प्रदान करेगा. यहाँ, हम एक संशोधित एन चेहरे इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला तकनीक का वर्णन करते हैं जो वैज्ञानिकों को बरकरार एंडोथेलियल सतह की स्पष्ट छवियों को प्राप्त करने और स्थिति में अणु अभिव्यक्ति पैटर्न का विश्लेषण करने में सक्षम बनाता है। विधि aorta के विभिन्न स्थलों पर पूरे endothelial मोनोलेयर देखने के लिए सरल और विश्वसनीय है. इस तकनीक atherosclerosis के pathophysiology को समझने के लिए एक आशाजनक उपकरण हो सकता है, विशेष रूप से एक प्रारंभिक चरण में.

एक 12 सप्ताह पुराने C57BL/6 माउस euthanized और सामान्य नमकीन युक्त 40 इकाइयों / माउस ओर्टा को एक विच्छेदन सूक्ष्मदर्शी के अंतर्गत उजागर किया गया था (चित्र 1), विच्छेदित, और खुले लंबे समय तक काट द?...

Watch this Scientific Journal Video about Using En Face Immunofluorescence Staining to Observe Vascular Endothelial Cells Directly at JoVE.com

Using En Face Immunofluorescence Staining to Observe Vascular Endothelial Cells Directly

यहाँ, हम सीधे माउस ओर्टा के एंडोथेलियल कोशिकाओं का निरीक्षण करने के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। यह तकनीक उपयोगी है जब विभिन्न प्रवाह पैटर्न में endothelial कोशिकाओं के सेलुलर और आणविक phenotype का अध्ययन और atherosclerosis के विकास में.

एन फेस इम्यूनोफ्लोरेसेंस दाग का उपयोग करने के लिए संवहनी Endothelial कोशिकाओं का सीधे निरीक्षण करने के लिए

Aberrant changes in endothelial phenotype and morphology are considered to be initial events in the pathogenesis of atherosclerosis. Direct observation of ...

यह प्रोटोकॉल लोगों को विभिन्न तरल कतरनी तनाव के तहत एंडोथेलियल सेल आकृति विज्ञान और क्षेत्रों में अणुओं की अभिव्यक्ति का विश्लेषण करने में मदद करता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह विभिन्न तरल पदार्थ कतरनी तनाव के तहत संवहनी एंडोथेलियल कोशिकाओं का सीधा आकलन प्रदान करता है। इस प्रक्रिया को करते समय, प्रमुख कदम हौसले से तैयार पैराफॉर्मल्डिहाइड का उपयोग करना और एक अच्छा परफ्यूजन करना है।पाठ प्रोटोकॉल में वर्णित 12 सप्ताह पुराने C57BL/6 माउस के एनेस्थेटाइजेशन के साथ इस प्रक्रिया को शुरू करें। पूंछ को धीरे-धीरे पिंच करके उचित एनेस्थेटाइजेशन की पुष्टि करें। चिपकने वाले टेप के साथ, कागज तौलिए के ढेर के लिए माउस के पंजे टेप।माउस की त्वचा को संदंश के साथ पकड़ें, और पेट से कैंची की एक जोड़ी के साथ त्वचा को छाती के शीर्ष पर काट लें। पेट की गुहा को खोलें, रिबकेज के नीचे, कैंची की एक तेज जोड़ी के साथ। संदंश के साथ उरोस्थि उठाएं, और डायाफ्राम काटें।फिर छाती गुहा का पर्दाफाश करने के लिए रिबकेज को काट दिया। कैंची से जिगर के ठीक ऊपर वेना कावा काट लें। दबाव पांच मिनट के लिए धमनी के पेड़ को छिद्रित करता है, पूर्व ठंडा सामान्य खारा के साथ, बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से, बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से, जब तक फेफड़े और यकृत पीला नहीं हो जाते हैं।फिर चार मिनट के लिए पीबीएस में पूर्व ठंडा 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड के साथ छिद्रित करें। महाधमनी के उजागर होने तक सभी मांसपेशियों, अंगों और वसा को हटा दें। माउस को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखें।नाजुक संदंश और नाजुक कैंची की एक जोड़ी का प्रयोग करने के लिए स्पष्ट रूप से एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत महाधमनी का पर्दाफाश, और महाधमनी के साथ संयोजी ऊतक को हटाने के रूप में साफ संभव के रूप में । नाजुक कैंची की एक जोड़ी के साथ सीलिएक ट्रंक के लिए दिल से छाती महाधमनी विच्छेदन। महाधमनी को पीबीएस के साथ छह सेंटीमीटर सेल कल्चर डिश में रखें।कट महाधमनी को कम वक्र के साथ पहले खोलें, और फिर सूक्ष्म कैंची का उपयोग करने के लिए महाधमनी आर्क की तीन शाखाओं को खोलने के लिए, इनोमिनेट सहित, आम कैरोटिड छोड़ दिया, और सीधे खंड के पूरा होने तक अधिक वक्र के साथ बाएं सबक्लेवियन धमनी। 10 मिनट के लिए पीबीएस में 1% पॉलीऑक्सीथीन ऑक्टाइल फिनाइल ईथर के साथ महाधमनी को पार करें। फिर 12 अच्छी तरह से सेल कल्चर प्लेट में कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए 2.5% पॉलीसॉर्बेट 20 युक्त ट्राइस-बफर खारा में 10% सामान्य बकरी सीरम के साथ महाधमनी को ब्लॉक करें।अगले अवरुद्ध बफर में महाधमनी को प्रति मिलीलीटर खरगोश विरोधी VCAM1 प्रति पांच ग्राम, और पांच ग्राम प्रति मिलीलीटर चूहा विरोधी VE-Cadherin, चार डिग्री सेल्सियस पर रात भर इनक्यूबेट । धोने के समाधान के साथ तीन बार नमूना धोने के बाद, फ्लोरेसेंस को कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए माध्यमिक एंटीबॉडी को संयोजित करें, एक अंधेरे जगह में रखते हुए। धोने के समाधान में एक और तीन बार कुल्ला।एक अंधेरे जगह में रखते हुए, 10 मिनट के लिए DAPI के साथ महाधमनी को काउंटरटैन करें। इसके बाद कपड़े धोने के घोल में तीन बार दाग महाधमनी को खंगाल डाला। एक कवर स्लिप पर महाधमनी को नीचे की ओर रखें, और इसे धीरे-धीरे बढ़ते समाधान को एंटीफैड करने के लिए ले जाएं जिसे पहले कवर स्लिप पर गिरा दिया गया है।नमूना फ्लैट रखने के लिए धीरे-धीरे महाधमनी को फैलाएं। कवर स्लिप को उलटकर ग्लास स्लाइड पर डाल दें। नमूना और गिलास के बीच किसी भी हवा के बुलबुले से बचने के लिए ध्यान रखें।एक लेजर स्कैनिंग कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के साथ महाधमनी की जांच करें। इमेज-प्रो प्लस सॉफ्टवेयर के साथ एन-फेस इमेज में वांछित क्षेत्र से विभिन्न चैनलों की रंग तीव्रता का विश्लेषण करें। माउस महाधमनी से संवहनी एंडोथेलियल कोशिकाओं की छवियों का सामना इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला दिखाया गया है।संवहनी कोशिका आसंजन प्रोटीन एक के चेहरे इम्यूनोफ्लोरेसेंस, और एक एंडोथेलियल मार्कर के रूप में वीई-कैडेरिन के साथ अभिव्यक्ति, माउस महाधमनी के विभिन्न क्षेत्रों से अलग प्रवाह पैटर्न के तहत दिखाया गया है। DAPI भी बेहतर दृश्य के लिए सेल नाभिक दिखाने के लिए दाग था । माइक्रोस्कोप के नीचे जेड स्टैक के माध्यम से देखते समय, एंडोथेलियल और चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं को आसानी से उनकी कोशिका नाभिक आकृति विज्ञान द्वारा प्रतिष्ठित किया जा सकता है।एंडोथेलियल सेल नाभिक अंडाकार आकार का होता है, और धुरी के आकार, चिकनी मांसपेशियों की कोशिका नाभिक से बड़ा होता है। वीसीएएम-1 की अभिव्यक्ति अशांत प्रवाह वाले क्षेत्रों में अधिक प्रचुर मात्रा में थी, महाधमनी आर्क की कम वक्रता पर, स्थिर प्रवाह वाले क्षेत्रों की तुलना में, महाधमनी आर्क की अधिक वक्रता पर, और छाती महाधमनी में। यहां माउस महाधमनी की कम वक्रता के क्षेत्रों को डी-फ्लो क्षेत्रों के रूप में इंगित किया जाता है, और अधिक वक्रता और वक्ष।सही संशोधन के साथ, इस तकनीक को संवहनी पारगम्यता के विश्लेषण और एंडोथेलियल सेल इंटिमा में मैक्रोमॉलिक्यूल्स की स्थिति पर भी लागू किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Valvular Endothelial Cells

वाल्वुलर endothelial कोशिकाओं के अलगाव

Heart valves are solely responsible for maintaining unidirectional blood flow through the cardiovascular system.  These thin, fibrous tissues are ...

Transplantation of Cells Directly into the Kidney of Adult Zebrafish

कोशिकाओं के वयस्क Zebrafish की किडनी में सीधे प्रत्यारोपण

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic ...

Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells

अलगाव और भेदभाव Stromal संवहनी कोशिकाओं की Beige / Brite कोशिकाओं को

Brown adipocytes have the ability to uncouple the  respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat.  Development of UCP1-positive ...

Robust 3D DNA FISH Using Directly Labeled Probes

सीधे लेबल जांच का प्रयोग मजबूत 3 डी डीएनए मछली

3D DNA FISH has become a major tool for  analyzing three-dimensional organization of the nucleus, and several variations  of the technique have been ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

Murine वाल्व endothelial कोशिकाओं का अलगाव

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

अलगाव और माउस महाधमनी endothelial कोशिकाओं के प्राथमिक संस्कृति

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

माउस स्तन ग्रंथि के जमे हुए वर्गों पर अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

बरकरार धमनियों की endothelial परत में नाइट्रिक ऑक्साइड और Superoxide के एन चेहरा पहचान

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

संवहनी endothelial वृद्धि कारकों की मूल्यांकन के लिए एक सरल Bioassay

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

माउस ब्लड वेसल्स का एन फेस तैयार करना

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...